阿克苷对大鼠视网膜神经节细胞保护作用及其安全性研究

作     者：王双珠 曾勇 李燕 WANG Shuang-zhu;ZENG Yong;LI Yan

作者机构：昆明医科大学第一附属医院眼科650032 昆明医科大学第一附属医院精神科650032 

出 版 物：《中华眼底病杂志》 (Chinese Journal of Ocular Fundus Diseases)

年 卷 期：2013年第29卷第6期

页      面：593-599页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100212[医学-眼科学] 10[医学] 

基　　金：罔家自然科学基金(81060077) 

主　　题：多酚类 治疗应用 视网膜神经节细胞 药物作用 视网膜神经节细胞 病理学 GAP-43蛋白 

摘      要：目的观察大鼠玻璃体腔注射阿克苷的安全性及其对视网膜神经节细胞（RGC）保护作用。方法190～210g清洁级健康雌性SpragueDawley大鼠50只纳入研究。其中，15只大鼠用于阿克苷玻璃体腔注射安全性研究。随机分为实验1、2、3组、对照组和空白对照组，每组3只大鼠。其中。实验1、2、3组分别玻璃体腔注射1、2、5mg／ml的阿克苷溶液5μl；对照组玻璃体腔注射磷酸盐缓冲溶液（PBS）5μl；空白对照组不施加任何十预。1、2、3周后摘除眼球行冷冻切片，苏木精-伊红（HE）染色光学显微镜观察视网膜结构，1、3周行超薄切片透射电子显微镜观察视网膜超微结构。其余大鼠用于阿克苷对RGC保护作用研究。随机分为手术A、B组，假手术C、D组和空白对照组。其中，手术组及假手术组各组均为8只大鼠，空白对照组3只大鼠，共35只。手术组大鼠在暴露视神经后夹持视神经10S，假手术组大鼠仅暴露视神经。手术A、B组分别经玻璃体腔注射1mg／ml阿克苷5p1、PBS液5μl；假手术C、D组分别经玻璃体腔注射1mg／ml阿克苷5μl、PBS液5μl；空白对照组不施加任何干预。1、2、4周后摘除眼球行冷冻切片，部分切片HE染色后光学显微镜观察视网膜结构，计数RGC；部分切片行免疫组织化学二步法检测生长相关蛋白43（GAP-43）表达，原位切口末端标记（TUNEI。）法检测RGC凋亡情况，计数RGC及阳性细胞数，计算细胞凋亡率。采用St’SS13．0统计学软件进行统计学分析。结果阿克苷玻璃体腔安全性评价研究中，玻璃体腔注射后，大鼠角膜、前房、品状体、玻璃体腔及视网膜均未见异常。光学显微镜观察显示，第1、2、3周时视网膜各层结构排列整齐，未见明届细胞凋亡、坏死特征及炎性细胞浸润；RGC轻度水肿。透射电子显微镜观察显示，5、2mg／ml阿克苷玻璃体腔注射后大鼠视网膜微结构发生明佩改变，1mg／ml阿克骨注射后大鼠视网膜微结构轻微变化。阿克苷对RGC保护作用研究中，光学显微镜观察显示，手术组大鼠视网膜可见典型细胞凋亡表现，假手术组和空白对照组大鼠视网膜均未见明显改变。玻璃体腔注射后1周，手术组RGC数较似手术组和空白对照组少，第2周继续减少，手术A组RGC数多于手术B组，差异有统计学意义（F=26．206，P％0．05）。第4周手术组RGC继续减少，与第1、2周时手术组RGC数比较，差异有统计学意义（F=17．364，P％0．05），各时间点假手术组间和假手术组与空白对照组间RGC数比较，差异无统计学意义。GAP-43检测结果显示，玻璃体腔注射后1周，手术组大鼠视网膜积分吸光度（IA）值明显高于其他组，差异有统计学意义（F=33．466，P％0．05）；手术A、B组间JA值比较，差异无统计学意义。玻璃体腔注射后2周，手术组大鼠视网膜A值略下降，且高于其他组；手术A组jA值高于手术B组，差异有统计学意义（F=14．391，P〈0．05）。玻璃体腔注射后4周，手术组大鼠视网膜JA值进一步下降；手术A组与其他组JA值比较，差异有统计学意义（F=4．178，P〈O．05）。TUNEI，检测结果显示，玻璃体腔注射后1周，手术组大鼠RGC凋亡明湿增加，与其他组比较，细胞凋亡率差异有统计学意义（F=15．365，P％0．05）。玻璃体腔注射后2周，手术组RGC凋亡率均降低，手术A组大鼠细胞凋亡率低于手术B组，差异有统计学意义（F=12．767，P〈0．05）。玻璃体腔注射后4周，手术组大鼠细胞凋亡率明显下降，与其他组比较，差异无统计学意义（F=2．057，P〉0．05）。假手术组和空白对照组细胞凋亡率在各时间点、各组间比较，差异无统计学意义。结论阿克苷玻璃体腔注射具有可行性；1mg／ml阿克苷对大鼠视网膜影响小，为其安全剂量。玻璃体腔注射阿克苷可增加GAP-43表达，对视神经钳夹伤大鼠RGC凋亡具有一定抑制作用。