特异性靶向PD-1分子的PD-15融合蛋白联合G15Ra-K562滋养细胞快速扩增NK/T细胞

作     者：李铁鹏 王瑶 张放 赵玲娣 杨勇豪 徐本玲 高全立 Li Tiepeng;Wang Yao;Zhang Fang;Zhao Lingdi;Yang Yonghao;Xu Benling;Gao Quanli

作者机构：郑州大学附属肿瘤医院免疫治疗科450008 

出 版 物：《中华微生物学和免疫学杂志》 (Chinese Journal of Microbiology and Immunology)

年 卷 期：2021年第41卷第6期

页      面：466-472页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81902902) 河南省医学科技攻关(SBGJ202002027) 河南省重点研发与推广专项(212102310750) 河南省自然科学基金(201701030) 河南省科技攻关项目(182300410344) 

主　　题：过继免疫细胞疗法 程序性死亡受体1 IL-15 IL-15Ra 肿瘤特异性T细胞 

摘      要：目的探讨anti-PD-1(scFv)/hIL-15(简称PD-15)融合蛋白体外特异性结合PD-1的能力及联合GF-hIL-15Ra-K562(简称G15Ra-K562)滋养细胞对自然杀伤细胞(NK)/T细胞增殖能力的影响。方法Overlap PCR构建G15Ra表达载体,电穿孔仪转染K562,极限稀释法获取G15Ra-K562滋养细胞单克隆株。酶切连接构建PD-15表达载体,Lipofectamine^(TM)2000瞬时转染HEK293T细胞并获取包含PD-15融合蛋白的条件培养液。密度梯度离心获取人外周血单个核细胞,CFSE染色标记活跃增殖细胞。流式细胞术检测PD-15特异性结合PD-1的能力和对人外周血单个核细胞的增殖及不同淋巴亚群比例的影响。结果成功构建高表达融合蛋白G15Ra的滋养细胞单克隆株G15Ra-K562。添加hIL-15能够将G15Ra-K562滋养细胞扩增人外周血淋巴细胞能力提升5倍以上(P0.05)。PD-15融合蛋白具有PD-1特异性结合能力(P0.001),联合G15Ra-K562滋养细胞能够在体外高效扩增人外周血来源的NK/T细胞(P0.05),扩增得到的细胞产品中以NK、CD8^(+)T和CD4^(+)T细胞为主。结论PD-15融合蛋白能够特异性靶向PD-1分子且在联合G15Ra-K562滋养细胞后具有强的人外周血来源的NK/T细胞扩增能力,建立了分步、靶向递送IL-15/IL-15Ra复合物至PD-1+细胞的细胞培养方案,为后续选择性扩增PD-1+细胞提供实验资料。