西尼罗河病毒RT-RPA检测方法的建立及初步应用

作     者：吴江 林彦星 贾鹏 黄超华 史卫军 曹琛福 曾少灵 孙洁 阮周曦 林永涛 花群义 WU Jiang;LIN Yan-xing;JIA Peng;HUANG Chao-hua;SHI Wei-jun;CAO Chen-fu;ZENG Shao-ling;SUN Jie;RUAN Zhou-xi;LIN Yong-tao;HUA Qun-yi

作者机构：深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2021年第57卷第2期

页      面：35-37,41,I0002,I0003页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 100705[医学-微生物与生化药学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：十三五国家重点研发项目(2017YFD0501805 2016YFD0500708 2018YFC0840401) 

主　　题：西尼罗河病毒 逆转录重组酶聚合酶扩增 等温扩增 

摘      要：为建立快速特异的西尼罗河病毒(WNV)检测方法,本研究根据WNV基因保守区域基因序列,采用Primer Explorer Version 4设计特异性的重组酶聚合酶扩增(RPA)引物和探针。经过引物筛选和条件优化,建立了在39℃恒温条件下15 min内即可完成的实时荧光RT-RPA方法。本方法能特异性检测出WNV,且与蓝舌病毒(BTV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、猪乙型脑炎病毒(JEV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)核酸检测没有交叉反应。本方法灵敏性强,最小检出量为5.25×10^(2)拷贝/μL。采用创建的RT-RPA方法检测72份牛或猪的临床样品,结果与实时荧光定量PCR方法相符。说明本试验创建的WNV RT-RPA方法操作简便、灵敏度和特异性高,适用于WNV监测、基层实验室或出入境口岸对WNV的现场快速检测。