LncRNA PVT1对脑胶质瘤中GLUT3表达及细胞增殖、侵袭的影响
Influence of long non-coding RNA plasmacytoma variant translocation 1 in cell proliferation,invasion and glucose transporter 3 expression in glioma作者机构：海南医学院第一附属医院神经外科海口570102
出 版 物：《中华神经医学杂志》 (Chinese Journal of Neuromedicine)
年 卷 期：2021年第20卷第6期
页 面：541-549页
核心收录：
学科分类：0402[教育学-心理学(可授教育学、理学学位）] 0710[理学-生物学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 1009[医学-特种医学]
基 金：海南省财政科技计划资助项目(ZDYF2019129) 国家自然科学基金(82060456) 海南省研究生创新科研课题基金(Hys2019-312)。
摘 要：目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)浆细胞瘤变异易位1(PVT1)对脑胶质瘤中葡萄糖转运体3(GLUT3)表达及细胞增殖、侵袭能力的影响。方法(1)下载中国脑胶质瘤基因组图谱数据库中mRNAseq_325数据集,应用R语言分析222例原发性脑胶质瘤样本中PVT1与GLUT3基因表达的相关性以及二者对患者总生存期的影响。(2)收集海南医学院第一附属医院神经外科自2019年1月至2019年12月手术切除并经病理证实的8例低级别胶质瘤标本(低级别胶质瘤组)及7例胶质母细胞瘤标本(胶质母细胞瘤组),采用荧光原位杂交法检测PVT1的表达,免疫组化染色检测GLUT3蛋白的表达。(3)体外培养人星形胶质细胞NHA及胶质母细胞瘤细胞U87、LN229和U251(NHA组、U87组、LN229组、U251组),采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中PVT1、GLUT3 mRNA的表达,采用Western blotting实验检测GLUT3蛋白的表达。将U87、LN229细胞分别分为PVT1过表达质粒组与空白质粒组、PVT1短发夹RNA(shRNA)组与阴性对照shRNA组,分别构建慢病毒稳定转染过表达PVT1及其空白对照细胞系、敲低PVT1及其阴性对照细胞系,应用RT-qPCR和Western blotting实验检测各组细胞系中GLUT3 mRNA和蛋白的表达。(4)取PVT1 shRNA组与阴性对照shRNA组U87、LN229细胞,分别采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)实验、平板克隆形成实验检测细胞的增殖能力,采用Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。(5)将10只BALB/C-nu雌性裸鼠按随机数字表法分为实验组与对照组(n=5),分别移植PVT1 shRNA组与阴性对照shRNA组U87细胞以构建皮下移植瘤模型。移植4周后处死取瘤,称重及测量体积,并采用免疫组化染色检测肿瘤中Ki-67、GLUT3蛋白的表达。结果(1)mRNAseq_325数据集中222例原发性脑胶质瘤样本的PVT1与GLUT3基因表达呈正相关关系(r=0.514,P=0.000);与PVT1低表达组相比,PVT1高表达组的总生存期明显缩短,差异有统计学意义(P0.05);与GLUT3低表达组相比,GLUT3高表达组的总生存期明显缩短,差异有统计学意义(P0.05)。(2)与低级别胶质瘤组标本相比,胶质母细胞瘤组标本中PVT1、GLUT3蛋白的表达明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。(3)与NHA组细胞相比,U87、LN229、U251组细胞中PVT1、GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与空白质粒组相比,PVT1过表达质粒组U87、LN229细胞中GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);与阴性对照shRNA组相比,PVT1 shRNA组U87、LN229细胞中GLUT3 mRNA和蛋白的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(4)与阴性对照shRNA组U87、LN229细胞相比,PVT1 shRNA组U87、LN229细胞的吸光度值、集落形成数和侵袭细胞数均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。(5)与对照组裸鼠相比,实验组裸鼠的皮下移植瘤的体积明显减小、质量明显降低、Ki-67和GLUT3蛋白的表达也明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论下调PVT1可降低GLUT3的表达,从而抑制脑胶质瘤细胞的增殖、侵袭能力。
维普期刊数据库
同方期刊数据库