柚皮素对甲状腺癌细胞凋亡、自噬的影响及其与AMPK/mTORC1通路的关系

作     者：张增岭 施杲旸 朱乃海 陈涛 ZHANG Zengling;SHI Gaoyang;ZHU Naihai;CHEN Tao

作者机构：江苏省人民医院浦口分院普通外科江苏南京211899 江苏省人民医院普通外科江苏南京210029 

出 版 物：《中国普通外科杂志》 (China Journal of General Surgery)

年 卷 期：2021年第30卷第5期

页      面：575-582页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：江苏省卫健委科研基金资助项目(H2019074)。 

主　　题：甲状腺肿瘤 柚皮素 自噬 细胞凋亡 AMP活化蛋白激酶类 雷帕霉素复合体1机制性靶标 

摘      要：背景与目的:柚皮素(NAR)是天然的黄酮类化合物,能够抑制宫颈癌、胃癌、舌鳞癌及肝癌细胞的生长,但其对甲状腺癌细胞的作用尚不明确。本实验探讨NAR对甲状腺细胞的影响,并初步研究其作用机制,以期为甲状腺癌的药物研发提供理论基础。方法:不同浓度的NAR处理甲状腺癌ACT-1细胞不同时间后,用MTT法检测细胞存活率,以观察NAR对ACT-1细胞的时间、浓度效应并计算IC_(50)值。在以上实验基础上,选择适合的浓度的NAR与适合的时间处理ACT-1细胞,然后分别采用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡;绿色荧光蛋白(GFP)标记质粒转染检测自噬小体变化;Western blot法检测自噬相关蛋白(LC3 I、LC3 II、p62)以及AMPK/mTORC1通路相关蛋白表达的变化,以及AMPK抑制剂对NAR作用的影响。结果:NAR能明显抑制ACT-1细胞的存活,呈时间与浓度依赖性(均P0.05),其12、24和48 h的IC_(50)值分别为85.65、50.12、38.94μg/mL。选用25、50、100μg/mL的NAR处理ACT-1细胞24 h后,细胞凋亡率、自噬小体数量、LC3 II/LC3 I和p-AMPK/AMPK蛋白表达明显升高,p62和p-mTORC1/mTORC1蛋白表达明显降低,均呈浓度依赖性(均P0.05)。用100μg/mL NAR同时加入25μmol/L AMPK抑制剂后处理ACT-1细胞后,NAR的以上作用以及升高凋亡效应蛋白caspase-3的作用被明显抑制(均P0.05)。结论:NAR能够抑制甲状腺癌ACT-1细胞增殖,诱导凋亡,这可能与其调控AMPK/mTORC1信号通路,增强自噬相关。