长链非编码RNA-微小RNA-mRNA调控网络在晚期膀胱癌的发展中的作用

作     者：庞明睿 杜洋 喻希 王磊 袁静萍 刘雯 刘修恒 Pang Mingrui;Du Yang;Yu Xi;Wang Lei;Yuan Jingping;Liu Wen;Liu Xiuheng

作者机构：武汉大学人民医院泌尿外科430060 武汉大学人民医院病理科430060 

出 版 物：《中华实验外科杂志》 (Chinese Journal of Experimental Surgery)

年 卷 期：2021年第38卷第6期

页      面：1018-1022页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：武汉市应用与基础前沿项目(2018060401011321) 

主　　题：长链非编码RNA 微小RNA 膀胱癌 

摘      要：目的:探索晚期膀胱癌发展过程中与差预后相关的RNA,构建一个长链非编码RNA-微小RNA-mRNA(lncRNA-miRNA-mRNA)网络并加以实验验证,以研究其在晚期膀胱癌发展中的分子调控作用。方法:收集肿瘤基因组图谱(TCGA)和NCBI-GEO数据库431例和492例膀胱癌患者组织样本,Ⅲ、Ⅳ期、高级别、高级别≥病理亚分期2期(pT2期)为晚期膀胱癌,Ⅱ、Ⅰ期、低级别为早期膀胱癌;进行差异表达分析、权重基因共表达网络分析、功能富集分析、生存分析、miRNA靶向预测和Pearson相关分析。利用可视化软件构建网络。统计学方法使用t检验、Fisher精确检验、Pearson相关分析、Log-Rank检验比较组间差异,BH法计算错误发现率校正P值,以FDR0.05、P0.05为差异统计学意义。随后,收集22例膀胱癌患者组织样本,高级别肌层浸润性≥T2期、高级别或浸润性TaT1期为晚期膀胱癌,低级别非浸润性TaT1为早期膀胱癌;进行实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫印迹法和免疫组织化学实验。组间比较采用t检验。结果:获得相似表达模式的8个长链非编码RNA、28个mRNA和8个微小RNA,并以此构建出核心lncRNA-miRNA-mRNA调控网络,该网络与晚期膀胱癌的侵袭、进展、转移及差预后相关。晚期膀胱癌组织Ⅵ型胶原α1(COL6A1)、Ⅱ型钙粘附蛋白(CDH11)、金属蛋白酶和血小板反应蛋白模体Ⅰ型(ADAMTS12)、长链非编码RNA-01705(LINC01705)、长链非编码RNA-01929(LINC01929 RNA)相对内参表达倍数值高于早期膀胱癌组织(-1.213比-4.212,t=4.170,P0.01;-10.75比-14.64,t=4.602,P0.01;-7.594比-11.93,t=5.152,P0.01;-10.18比16.55,t=4.493,P0.01;-11.62比-15.08,t=2.869,P0.05),差异均有统计学意义。晚期膀胱癌组织COL6A1、CDH11、ADAMTS12蛋白平均吸光度值高于早期膀胱癌组织(0.2138比0.0909,t=2.302,P0.05;0.1839比0.0789,t=5.992,P0.01;0.2791比0.1478,t=4.527,P0.01),差异均有统计学意义。膀胱癌组织人-微小RNA-6875-5p(hsa-miR-6875-5p)、人-微小RNA-6784-5p(hsa-miR-6784-5p)、人-微小RNA-128-2(hsa-miR-128-2)RNA相对内参表达倍数值低于正常组织(-15.78比-12.41,t=4.995,P0.01;-15.53比-12.68,t=3.226,P0.05;-13.79比-11.43,t=3.400,P0.01),差异均有统计学意义。膀胱癌细胞系T24中COL6A1蛋白相对内参灰度比值低于正常膀胱上皮细胞系SV-HUV-1(0.677比1.000,t=7.584,P0.01),差异有统计学意义;膀胱癌细胞系T24、EJ CDH11蛋白相对内参灰度比值低于正常膀胱上皮细胞系SV-HUV-1(0.656比1.000,t=6.056,P0.01),差异有统计学意义。结论:LncRNA-miRNA-mRNA网络在晚期膀胱癌的发展中起关键作用。