燕麦SCoT分子标记体系的优化及引物筛选

作     者：李进 陈仕勇 LI Jin;CHEN Shi-yong

作者机构：西南民族大学青藏高原研究院四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 四川省抗逆牧草种质创新及生态修复工程实验室四川成都610041 

出 版 物：《西南农业学报》 (Southwest China Journal of Agricultural Sciences)

年 卷 期：2021年第34卷第5期

页      面：940-944页

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：国家重点研发计划课题(2017YFC0504806) 四川省应用基础项目(2019YJ0253) 西南民族大学中央高校基本科研业务费专项优秀学生培养工程项目(2020YYXS65) 

主　　题：燕麦 SCoT 体系优化 引物筛选 

摘      要：【目的】本研究对影响燕麦目标起始密码子多态性聚合酶链式反应(SCoT-PCR)的4个因素(模板DNA、引物、Mix混合液用量及退火温度)进行了优化,并通过最优体系进行了多态性引物的筛选。【方法】以4份燕麦品种DNA为模板,采用L_(9)(3^(3))正交试验确定模板DNA、引物、Mix混合液用量的最优反应体系,在48~54℃温度范围设置8个梯度进行退火温度筛选,并通过最优体系对80条引物进行了多态性筛选和验证。【结果】优化后的反应体系总体积为20μl,包含2μl模板DNA(10 ng·μl^(-1))、2μl引物(10μmol·L^(-1))、9μl Mix和7μl ddH_(2)O。筛选出了扩增效果和多态性较好的36条引物及各自的最佳退火温度。【结论】成功优化建立燕麦SCoT-PCR扩增体系,该体系的建立将为燕麦品种遗传多样性分析、品种指纹图谱构建以及分子标记辅助育种等提供重要的参考依据。