差速贴壁分离法:获得小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养的最佳贴壁时间

作     者：杨娜娜 焦鹏 李大伟 王孟赞 姚树桐 宗传龙 秦树存 

作者机构：泰山医学院动脉粥样硬化研究所泰安271000 泰山医学院附属聊城市人民医院心血管内科聊城252004 

出 版 物：《生理学报》 (Acta Physiologica Sinica)

年 卷 期：2011年第63卷第6期

页      面：574-580页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学] 

基　　金：supported by the National Natural Science Foundation of China(No.30971098) the Natural Science Foundation of Shandong Province China(No.Z2008C03) the Natural Science Funds of Taishan Medical University(No.30971098) the Taishan Scholar Program of Shandong Province China(No.200867) 

主　　题：内皮祖细胞 差速贴壁 小鼠 CD133 FLK-1 

摘      要：本文旨在比较差速贴壁方法分离的不同时间点贴壁的小鼠骨髓单个核细胞诱导分化为内皮祖细胞的生物学特性,探讨最适宜贴壁时间。Ficoll密度梯度离心分离小鼠骨髓单个核细胞,接种于预先铺有纤维连接蛋白的培养板上,定义为1d贴壁细胞组,取1d非贴壁细胞再接种为3d贴壁细胞组,继续培养2d取非贴壁细胞再接种为3d非贴壁细胞组,继续培养20d后,分别检测3组诱导分化内皮祖细胞亚群表面标志、粘附能力和成血管能力。结果显示,1d贴壁细胞中CD34+、FLK-1+、CD34+/FLK-1+细胞数明显多于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞(P0.01);1d贴壁细胞粘附能力、成血管能力均显著高于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞;1d贴壁细胞和3d贴壁细胞内皮型一氧化氮合酶(endothelial NO synthase,eNOS)表达量无显著差异,但均显著高于3d非贴壁细胞(P0.01);3d贴壁细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达水平显著高于1d贴壁细胞和3d非贴壁细胞(P0.01)。以上结果提示,小鼠骨髓单个核细胞1d贴壁诱导分化的内皮祖细胞生物学功能显著高于3d贴壁细胞和3d非贴壁细胞;3d贴壁细胞较1d贴壁细胞和3d非贴壁细胞表达较多的VEGF,1d贴壁细胞和3d贴壁细胞eNOS表达高于3d非贴壁细胞。小鼠骨髓内皮祖细胞诱导分化培养最适宜贴壁时间为1～3d。