滚环扩增(RCA)技术放大信号实现17β-雌二醇(E2)的超灵敏检测

作     者：王伟亚 白家磊 彭媛 王玖 高志贤 

作者机构：滨州医学院公共卫生与管理学院烟台264033 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所 

出 版 物：《解放军预防医学杂志》 (Journal of Preventive Medicine of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2020年第38卷第12期

页      面：78-83页

学科分类：09[农学] 0903[农学-农业资源与环境] 

基　　金：军事医学研究院基金(No.2019GGRC03 2019CXTD03)。 

主　　题：滚环扩增(RCA) 适配体技术 分子信标 荧光共振能量转移 

摘      要：目的为实现食品中17β-雌二醇(E2)污染物的超灵敏检测,本研究将适配体、分子信标和滚环扩增(RCA)技术相结合,用于E2的荧光检测。方法E2能解旋由适配体和cDNA杂交生成的复合DNA,使cDNA游离并与环DNA特异性结合,在Phi29酶的作用下生成长单链DNA。长单链DNA与分子信标杂交后,解旋分子信标的发夹结构,使FAM荧光基团的荧光恢复,从而实现E2的超灵敏检测。结果经过条件优化,在0.001ng/mL-10ng/mL的浓度范围内E2浓度与荧光强度呈现良好的线性关系:y=594.17LgC+3868.87(R 2=0.9758),检出限为0.19 pg/mL。在牛奶和自来水中,加标回收率分别为81.33%-117.42%和89.25%-107.04%,相对标准偏差是2.02%-3.13%和1.09%-2.45%。结论在本研究中,我们基于适配体技术和等温扩增技术提出了一种E2的超灵敏荧光检测方法。该方法灵敏度高、特异性强、操作简单、实验仪器要求低。该策略为E2的检测提供了一种新的方法,也为其他污染物的检测提供了新的思路。