单纯疱疹病毒1型糖蛋白gD的表达纯化及多克隆抗体的制备

作     者：邢效瑞 周正丽 信彩岩 杨闽楠 XING Xiao-rui;ZHOU Zheng-li;XIN Cai-yan;YANG Min-nan

作者机构：西南医科大学口腔医学研究所四川泸州646000 西南医科大学基础医学院 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2021年第16卷第1期

页      面：6-11页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：四川省科技厅面上项目(No.2017JY0165) 四川省教育厅重大培育项目(No.16CZ0020) 泸州市科技局-西南医大联合项目(No.2016LZXNYD-J23) 泸州市科技计划项目(No.2016-S-65(6/9))。 

主　　题：单纯疱疹病毒1型 gD糖蛋白 可溶性表达及纯化 多克隆抗体 

摘      要：目的表达及纯化单纯疱疹病毒1型(Herpes simplex virus type 1,HSV-1)糖蛋白D(glycoprotein D,gD)并制备多克隆抗体。方法双酶切pcDNA 3.1-HSV1-gD和pFastBacTM I质粒,gD基因克隆到pFastBacTM I载体,连接产物转化E.coli DH10Bac感受态细胞并鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD。将构建正确的重组杆粒转染Sf9细胞包装杆状病毒。杆状病毒经传代扩增后,诱导重组gD蛋白的表达,使用Ni-NTA亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组gD蛋白,进行15%SDS-PAGE电泳鉴定并采用肽指纹图谱分析纯化的gD蛋白。将纯化的gD蛋白进行热稳定性试验检测其在不同缓冲液条件下的稳定性。用重组gD蛋白免疫小鼠,利用ELISA法检测血清抗体滴度。结果成功构建重组质粒pFastBacTM I-gD,转化E.coli DH10Bac感受态细胞后,经蓝白斑筛选鉴定重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,鉴定正确的重组质粒感染Sf9细胞,包装出重组杆状病毒,获得滴度为8×108 pfu/ml的P3代杆状病毒。重组杆状病毒再次感染Sf9细胞能够表达高纯度可溶性的重组gD蛋白。不同缓冲液条件下重组gD蛋白稳定性良好。用gD蛋白免疫小鼠,获得ELISA效价为1×105的多克隆抗体。结论成功构建重组杆状病毒质粒Bacmid-gD,表达的HSV-1 gD蛋白稳定及免疫原性良好,制备的抗gD蛋白多克隆抗体滴度高,为HSV-1的亚单位疫苗的制备鉴定了基础。