自身反应性CD8^(+)中心记忆性T细胞对实验性自身免疫性脑脊髓炎致病作用

作     者：杨亭亭 姜红 向雅娟 何洋 刘喷飓 殷贺 高旭光 刘广志 YANG Tingting;JIANG Hong;XIANG Yajuan;HE Yang;LIU Penju;YIN He;GAO Xuguang;LIU Guangzhi

作者机构：首都医科大学附属北京安贞医院神经内科 北京大学人民医院神经内科 清华大学第一附属医院神经内科 

出 版 物：《中国神经免疫学和神经病学杂志》 (Chinese Journal of Neuroimmunology and Neurology)

年 卷 期：2021年第28卷第2期

页      面：93-102页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100204[医学-神经病学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(项目编号:81870951) 北京市自然科学基金-市教委联合资助项目(项目编号:KZ201910025030) 

主　　题：多发性硬化 实验性自身免疫性脑脊髓炎 CD8^(+)T细胞 中心记忆性T细胞 过继转移 

摘      要：目的探讨自身反应性CD8^(+)中心记忆性T细胞(TCM)在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)中的致病作用。方法用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55肽段/完全弗氏佐剂(CFA)乳化液于雌性C57BL/6(B6)小鼠背部4点皮下注射,在0 h(CFA乳化液注射当时)及48 h时间点分别予以百日咳毒素(PTX)腹腔注射,建立EAE模型。于发病高峰期后处死EAE小鼠获取脾脏和淋巴结的单个核细胞(MNC),利用免疫磁珠法经阴性选择纯化CD8^(+)T细胞;进一步采用流式细胞术分选TCM(CD8^(+)CCR7^(+)CD44^(high))。将EAE鼠CD8^(+)T细胞、健康鼠CD8^(+)T细胞分别过继转移(经鼠尾静脉注射)至雌性Rag-1^(-/-)小鼠体内(2×10^(6)/只,n=6),进行Kono评分及病理学检查,以确证CD8^(+)T细胞的致病性;进一步对EAE鼠CD8^(+)T细胞不同亚群进行致病性研究,分为CD8^(+)TCM常规剂量组(5×10^(5)/只,n=6)、CD8^(+)终末效应记忆性T细胞(Ter TEM,5×10^(5)/只,n=6)组、磷酸缓冲盐溶液(PBS,n=6)组及CD8^(+)TCM高剂量组(1.5×10^(6)/只,n=3),分别将不同剂量CD8^(+)TCM、Ter TEM以及PBS相应细胞/溶液注射于Rag-1^(-/-)小鼠;予以MOG35-55/CFA和PTX诱导,进行神经功能评分;于过继转移后第40 d处死小鼠,检测其病理学改变。结果将EAE鼠CD8^(+)T细胞过继转移至Rag-1^(-/-)小鼠体内,在27 d~29 d后出现双后肢瘫痪症状,病理学显示脑/脊髓内炎性细胞浸润和脱髓鞘改变,而健康鼠CD8^(+)T细胞过继转移后小鼠无瘫痪症状,病理学检查亦未见EAE相关病理学改变。EAE鼠CD8^(+)TCM常规剂量组及高剂量组、Ter TEM组、PBS组注射后持续观察40 d则均未出现发病症状,脑/脊髓亦未见及EAE相关的病理学改变。结论EAE自身反应性CD8^(+)T细胞的过继转移可诱导Rag-1^(-/-)小鼠发病,而自身反应性CD8^(+)TCM的过继转移则未能诱导出EAE病症及其相应的病理学改变,提示CD8^(+)TCM缺乏明显的EAE致病效应。