小肠结肠炎耶尔森氏菌可视化LAMP检测方法的建立

作     者：徐云明 朱孟玲 杨剑波 孙智远 卞蓉蓉 陈爱宁 郭丽娟 孙玉琴 王一伊 郑墁墁 仲思远 周弇扬 李叶辉 柳增善 任洪林 XU Yun-ming;ZHU Meng-ling;YANG Jian-bo;SUN Zhi-yuan;BIAN Rong-rong;CHEN Ai-ning;GUO Li-juan;SUN Yu-qin;WANG Yi-yi;ZHENG Man-man;ZHONG Si-yuan;ZHOU Yan-yang;LI Ye-hui;LIU Zeng-shan;REN Hong-lin

作者机构：江苏农林职业技术学院畜牧兽医学院江苏句容212400 句容市农业农村局江苏句容212400 吉林大学人兽共患病研究所吉林长春130062 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2021年第51卷第3期

页      面：281-288页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：吉林省科技发展计划项目(20200402059NC) 江苏省自然科学研究面上项目(18KJB230001) 江苏农林职业技术学院培育类项目(2019kj029,2016kj010) 

主　　题：小肠结肠炎耶尔森氏菌 LAMP 可视化检测 

摘      要：通过优化LAMP反应体系中镁离子、甜菜碱、dNTP等反应组成成分,而后进行特异性试验,并优化钙黄绿素与氯化锰的比例放入LAMP体系内,最后应用LAMP检测含有小肠结肠炎耶尔森氏菌(耶氏菌)的肉品,从而建立一种能够检测耶氏菌并通过肉眼观察和判断试验结果的LAMP方法。结果显示,优化的25μL反应体系如下:9 mmol/L Mg2+、1.8 mmol/L dNTPs、1.0 mol/L betaine、0.2μmol/L外引物、0.8μmol/L内引物、1μL Bst DNA polymerase(8 U/μL)、2.5μL 10×thermpol reaction buffer、228μmol/L钙黄绿素、324μmol/L氯化锰,反应温度65℃孵育60 min。LAMP检测耶氏菌基因组DNA的最低检测限是85.3×10^(-6)ng/μL,比文献PCR方法灵敏性高出2个数量级。LAMP方法对耶氏菌g DNA的最低检测限对应的基因拷贝数最低检测限是35,对应的CFU最低检测限是7×10^(2)CFU/m L。本试验建立的这种可视化的检测耶氏菌的LAMP方法,为耶氏菌的检测提供了一种新的参考。