小檗碱对牙髓干细胞MAPK/ERK信号通路及成牙本质向分化的影响研究

作     者：毕磊 刘辉 武燃 BI Lei;LIU Hui;WU Ran

作者机构：华北理工大学附属医院口腔科河北唐山063000 

出 版 物：《中国实用口腔科杂志》 (Chinese Journal of Practical Stomatology)

年 卷 期：2021年第14卷第1期

页      面：74-80页

学科分类：1003[医学-口腔医学] 10[医学] 

基　　金：河北省2019年度医学科学研究课题计划(20190109) 

主　　题：小檗碱 牙髓干细胞 成牙本质向分化 丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶信号通路 

摘      要：目的探讨小檗碱对牙髓干细胞(dental pulp stem cells,DPSCs)成牙本质向分化及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)信号通路的影响。方法采用酶消化法提取DPSCs,将培养鉴定的DPSCs传代培养至第3~5代,用于以下实验。实验分为对照组(正常培养DPSCs)、矿化液组(加入矿化液)、小檗碱组(加入10μmol/L小檗碱)、矿化液+MAPK抑制剂组(加入矿化液+10μmol/L MAPK抑制剂SB203580)、小檗碱+MAPK抑制剂组(10μmol/L小檗碱+10μmol/L MAPK抑制剂SB203580)。CCK-8法检测各组培养1、7、10、14 d时的细胞增殖情况。各组处理14 d,茜素红染色观察细胞矿化情况;实时荧光定量PCR检测细胞碱性磷酸酶(ALP)、牙本质涎磷蛋白(DSPP)、骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平;蛋白免疫印迹检测细胞p38 MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、ERK、磷酸化ERK(p-ERK)蛋白表达水平。结果 5组细胞处理1、7、10、14 d,对照组、矿化液组、小檗碱组光密度(OD)值差异无统计学意义(P 0.05),说明3组的细胞增殖能力相似;分别与对照组、矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组和小檗碱+MAPK抑制剂组的OD值升高(均P 0.05),说明其细胞增殖能力增强。与对照组相比,矿化液组和小檗碱组的DPSCs矿化结节形成能力增强,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值升高(P 0.05)。分别与矿化液组、小檗碱组相比,矿化液+MAPK抑制剂组、小檗碱+MAPK抑制剂组的DPSCs矿化结节形成能力减弱,细胞中ALP、DSPP、OPN的mRNA表达水平以及p-p38 MAPK/p38 MAPK、p-ERK/ERK蛋白表达水平比值降低(P 0.05)。结论小檗碱可促进DPSCs成牙本质向分化,可能是通过激活p38 MAPK/ERK信号通路实现的。