两种方法制备模板DNA在PCR-SSCP中的应用研究

作     者：杨海兵 杨胜林 戴焰 徐龙鑫 李爱萍 丁磊磊 YANG Hai-bing;YANG Sheng-lin;DAI Yan;XU Long-xin;LI Ai-ping;DING Lei-lei

作者机构：贵州大学动物科学学院贵州贵阳550025 高原山地动物遗传育种与繁殖省部共建教育部重点实验室贵州贵阳550025 贵州省畜牧兽医研究所贵州贵阳550005 

出 版 物：《生物技术》 (Biotechnology)

年 卷 期：2012年第22卷第6期

页      面：45-47页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：教育部美大项目("影响奶牛产奶性状重要基因SNP检测及其关联性研究" 教外司美1595号) 贵州省国际合作项目("与牛乳蛋白和乳脂性状相关的重要基因多态性分析及其关联性研究" 黔科合外G字700108号和7005号) 浙江大学基本科研业务费专项资金(2011KYJD0446)资助 

主　　题：NaOH方法 FTA卡 提取DNA 血样保存 PCR-SSCP 

摘      要：目的:比较两种方法(DNA试剂盒提取法和FTA卡法)提取的DNA在PCR—SSCP反中的可靠性。方法:用DNA试剂盒从全血中提取DNA和用NaOH方法从FTA卡中提取DNA后,用分光光度计检测两种方法提取DNA的浓度及纯度,进行PCR反应之后,用2%的琼脂糖凝胶电泳检测其质量,接着进行SSCP检测,观测其效果。两种方法提取的样品相同,进行PCR反应和SSCP检测的条件完全一致。结果:用DNA试剂盒提取法和FTA卡法提取的DNA纯度分别为OD260/280=1.817,OD260/280=1.806。48份贵州荷斯坦奶牛DNA后续PCR反应和SSCP的检测结果表明,两种方法提取的DNA用于PCR反应和SSCP检测其效果没有明显差别,成功率为100%。结论:FTA卡结合DNA较稳定,用NaOH法提取DNA效果可靠且比试剂盒方法简便、快捷、经济,值得推广。