应用DNA提取改良和二次聚合酶链反应技术检测乌头及其炮制品

作     者：朱高倩 李双良 马莉 周培军 蒲星宇 王丽 符德欢 ZHU Gao-Qian;LI Shuang-Liang;MA Li;ZHOU Pei-Jun;PU Xing-Yu;WANG Li;FU De-Huan

作者机构：云南省药物研究所云南昆明650111 云南白药集团创新研发中心云南昆明650111 云南省中药和民族药新药创制企业重点实验室云南昆明650111 

出 版 物：《广州中医药大学学报》 (Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2021年第38卷第2期

页      面：385-391页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：云南省应用基础研究计划项目(编号:2017FD234) 云南省重大科技专项(农业)(编号:2017AB005) 

主　　题：乌头属 炮制 DNA提取 二次PCR ITS2 

摘      要：【目的】筛选适用于9种乌头属植物根茎炮制前后DNA提取的方法。【方法】采用基于十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、十二烷基硫酸钠(SDS)法的12种改良方法提取9种乌头属植物根茎炮制前后DNA,考察提取缓冲液种类、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)添加、水浴时间、DNA沉降方式对乌头属植物根茎炮制前后DNA提取的影响,以及二次聚合酶链反应(PCR)技术对乌头炮制品ITS2片段浓度提高的影响。【结果】不同缓冲液与水浴时间互作提取DNA效应不同,2×CTAB(含2.5 mol/L NaCl)水浴3 h提取的9种乌头生品DNA的ITS2扩增效果最佳,2×CTAB(含1.4 mol/L NaCl)水浴3 h提取的9种乌头炮制品DNA的ITS2扩增效果最佳。添加PVP或添加PVP+改变DNA沉降方式对生品DNA提取影响不大,但对炮制品有明显的抑制作用。经过二次PCR可显著提高炮制品ITS2的扩增效率。【结论】提取缓冲液和水浴时间的有效互作提取DNA以及二次PCR技术的应用可提高乌头属植物根茎ITS2片段制备效率,为DNA条形码技术广泛应用于乌头属药材提供必要的技术支持。