Galectin-3 shRNA载体的构建表达及其对大肠癌细胞lovo增殖率的影响
Construction and expression of galectin-3 shRNA recombinant vector and its effect on proliferation rate of colorectal cancer lovo cells作者机构：南方医科大学附属南方医院消化病研究所广东广州510515 南方医科大学附属南方医院检验医学中心广东广州510515
出 版 物：《第四军医大学学报》 (Journal of the Fourth Military Medical University)
年 卷 期：2007年第28卷第11期
页 面：1014-1017页
学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学]
摘 要：目的:构建galectin-3shRNA真核表达载体,观察该基因的抑制对大肠癌细胞系lovo细胞增殖率的影响.方法:以未转染lovo细胞作为阳性对照组,转染空质粒的lovo细胞作为阴性对照组,将针对人galectin-3基因的不同部位设计的长度约140bp的shRNA,插入到真核表达载体PRNAT-U6.1并转染人大肠癌细胞lovo,双酶切鉴定重组载体,免疫荧光检测转染效果,RT-PCR和Western-Blot检测其对该基因mRNA和蛋白水平的抑制,MTT测定干扰后对lovo细胞增殖率的影响.结果:双酶切出一条约120bp的DNA片断,与插入片断长度相符.PRNAT-U6.1/Galectin-3shRNA表达载体顺势转染lovo细胞72h后检测转染效率及Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达情况,免疫荧光检测转染效率为62%.转染PRNAT-U6.1/Galectin-3shRNA的lovo细胞Galectin-3的表达在mRNA和蛋白水平均明显下降,各组间比较F=2.214,148.566,P=0.000,0.000,阴性组和阳性对照组相比,P=0.448,0.263.干扰后细胞继续生长,与干扰前相比,生长明显减慢,F=20.830,P=0.000,组间比较F=149.710,P=0.000,shRNA干扰组与阴性组和阳性组比较,P=0.000,0.000.结论:成功构建Galectin-3shRNA表达载体,干扰后Galectin-3在mRNA和蛋白水平的表达明显降低,Galectin-3表达的抑制可能会导致大肠癌细胞lovo增殖率的降低.
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