棉花转基因“喷花法”应用条件优化的研究

作     者：聂新辉 尤春源 雷江荣 杨洋 李波 李晓东 吕军 冯国礼 孔杰 张大伟 

作者机构：新疆石河子农业科技开发研究中心/棉花研究所新疆石河子832000 新疆农业科学院核技术生物技术研究所新疆乌鲁木齐830091 新疆农业科学院经济作物研究所新疆乌鲁木齐830091 

出 版 物：《作物杂志》 (Crops)

年 卷 期：2013年第6期

页      面：31-35页

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：新疆兵团青年创新基金项目(2010JC26) 国家转基因重大专项(2011ZX08005-002) 

主　　题：棉花 转基因 “喷花法” 等渗液 转化条件 

摘      要：针对目前众多的棉花转基因方法存在转化过程复杂、成本高、效率较低等问题，实验对转基因方法一“喷花法进行优化，明确了在棉花育种科研中应用条件，达到快速、高效转化外源基因的目的。实验选用了5个陆地棉品种（系）和2个海岛棉品种为转化受体材料，转化了2个外源基因-抗虫（Bt＋CpTI）和增强纤维品质基因（NPTII-GhCAD6），并对转化时等渗液各成分的比例、转化的时间段、温度及湿度条件等因素对转化率的影响进行研究。结果表明，转化效率最高时等渗液各成分的含量：陆地棉为1／2MS＋10％蔗糖＋0．5g／LMES＋0．01mg／L6-BA＋200μl／／L表面活性剂，pH=6菌株浓度OD600=0．5；海岛棉为1／2MS＋15％蔗糖＋0．5g／LMES＋0．01mg／L6-BA＋200μl／L表面活性剂，pH=6菌株浓度OD600=0．5；转化效率最高时转化的时间段为11：00—13130，相应的温度为22～29℃、湿度为70％-85％；转化后的哟代受体材料，首先在田间进行抗生素检测，然后在获得的阳性植株中，转抗虫基因材料用金标BT-CryIAb／Ac试纸条定性检测，转纤维品质基因材料做PCR电泳检测，经检测最终获得了一批转基因阳性植株。最终建立一种应用在农业育种科研中大批量、高效快速、简易实用的转基因方法。