Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体的构建及其转染人气道平滑肌细胞

作     者：苏瑾 尤长宣 蔡绍曦 马骊 王小宁 温茜 罗微 黄泳塔 Jin Su;Changxuan You;Shaoxi Cai;Li Ma;Xiaoning Wang;Qian Wen;Wei Luo;Yongta Huang

作者机构：南方医科大学南方医院呼吸科广州510515 南方医科大学生物技术学院分子免疫研究所广州510515 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2008年第24卷第5期

页      面：774-779页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家高技术研究发展计划(863)(No.2007AA02Z458)资助~~ 

主　　题：可溶性肿瘤坏死因子受体 腺病毒载体 人气道平滑肌细胞 支气管哮喘 

摘      要：TNF-α是一种具有广泛生物学活性的前炎症细胞因子,参与哮喘整个病理生理过程。可溶性肿瘤坏死因子受体(sTNFR)可以拮抗肿瘤坏死因子活性,已被用来治疗与TNF相关的炎性疾病。将sTNFRI-IgGFc基因插入腺病毒穿梭质粒pDC316,与辅助质粒pBHGloxΔE1,3Cre共转染HEK293细胞,重组产生Ad-sTNFRI-IgGFc,PCR鉴定毒种正确后,进行扩增、纯化和滴度测定,转染人气道平滑肌细胞,利用RT-PCR、免疫组化方法,流式细胞仪,ELISA检测转染后细胞中sTNFRI-IgGFc的转录和表达。实验结果证明成功构建了Ad-sTNFRI-IgGFc腺病毒载体,感染性滴度达3×1010TCID50/mL,200moi转染气道平滑肌细胞阳性率达99.32%,转染后气道平滑肌细胞在mRNA和蛋白水平均有sTNFRI-IgGFc表达。转染上清稀释64倍后仍对TNF有拮抗活性。为将表达sTNFRI-IgGFc腺病毒基因治疗哮喘的实验研究提供了基础。