三角帆蚌Dmrta2-2基因的鉴定与表达分析

作     者：葛静远 吴丛迪 夏思宇 郭鹏飞 汪桂玲 李家乐 Ge Jingyuan;Wu Congdi;Guo Pengfei;Wang Guiling;Li Jiale

作者机构：上海海洋大学农业部淡水水产种质资源重点实验室上海201306 上海海洋大学上海市水产养殖工程技术研究中心上海201306 上海海洋大学水产科学国家实验教学示范中心上海201306 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2020年第39卷第9期

页      面：3941-3949页

核心收录：

学科分类：0908[农学-水产] 09[农学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(31772835) 现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-49)共同资助 

主　　题：三角帆蚌(Hyriopsis cumingii) Hc Dmrta2-2 表达分析 原位杂交 

摘      要：为了研究DMRT基因家族中Dmrta2-2(Doble-sex and mab-3 relatated transcription factor a2-2)基因在淡水蚌的性腺发育和性别分化等过程在发挥的作用,本研究从本实验室已有的三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)cDNA库中筛选出Dmrta2-2(HcDmrta2-2)短片段,利用RACE技术扩增和鉴定出了Hc Dmrta2-2基因。获得核苷酸序列全长为1682 bp(登录号:MK372348),ORF(Open reading frame)区为1170 bp,编码389个氨基酸。NCBI在线预测该基因保守位点,发现存在一个超保守的DM和DMA区域,氨基酸序列比对及系统发育树表明三角帆蚌与池碟蚌(Hyriopsis schlegelii)亲缘关系高达90%,在进化树中聚为一小支。通过实时荧光定量(qRT-PCR)和原位杂交检测Hc Dmrta2-2基因在各组织和发育时期的表达水平,发现该基因在成熟蚌的鳃、肝、肾、外套膜、闭壳肌、斧足及性腺中均表达,除了肝,其它各组织中雌雄表达差异均显著(p0.05),雌性性腺表达明显高于雄性;早期表达显示在第3天和3月龄表达量显著高于其它时期,推测Hc Dmrta2-2参与了三角帆蚌早期胚胎和幼龄发育过程;1~3龄雌雄性腺定量显示在1龄表达水平最高且雌雄差异极显著,而后随着时间雌雄各表达量逐级递减。原位杂交结果显示雌性性腺中有明显信号产生,在雄性中较弱。研究推测三角帆蚌Hc Dmrta2-2基因可能参与了早期幼龄发育过程,且对卵巢的分化起到重要作用,同时可能对于精巢的维持发挥着一定作用。本研究结果为进一步开展三角帆蚌Hc Dmrta2-2基因的功能特性研究提供了基础。