检索结果-南通市图书馆

检索条件"导师=齐晓岚"

共 8 条记录，以下是1-10 订阅

全选清除本页清除全部题录导出标记到"检索档案"

详细简洁

排序：

IKBKG在氟诱导肝细胞衰老中的作用及机制研究

IKBKG在氟诱导肝细胞衰老中的作用及机制研究

引用

作者：毛春燕贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨氟中毒患者外周血DNA甲基化模式及差异甲基化基因,研究氟化钠(Na F)是否会诱导大鼠肝细胞及人肝L02细胞衰老及衰老相关标志蛋白水平的改变,其机制是否与差异甲基化基因IKBKG异常表达有关,为氟化物诱导肝损伤的发病机制研究提... 详细信息

目的:探讨氟中毒患者外周血DNA甲基化模式及差异甲基化基因,研究氟化钠(Na F)是否会诱导大鼠肝细胞及人肝L02细胞衰老及衰老相关标志蛋白水平的改变,其机制是否与差异甲基化基因IKBKG异常表达有关,为氟化物诱导肝损伤的发病机制研究提供依据。方法:1.甲基化模式探讨:采集氟中毒患者及正常对照人群外周血DNA各4例,利用RRBS技术,分析全基因组DNA甲基化模式及DNA差异甲基化区域(differentially methylatedregion,DMR),结合DMR差异程度(logRatio值)和KEGG通路富集分析筛选差异甲基化基因;采用焦磷酸甲基化测序验证氟中毒患者外周血候选差异甲基化基因IKBKG的甲基化程度,实时荧光定量PCR检测候选差异甲基化基因的m RNA表达水平。2.实验对象及处理:SD(Sprague Dawley)大鼠随机分为4组,对照组饮用自来水,低、中、高氟组分别饮用含氟量5 mg/L、20 mg/L、50 mg/L氟化钠水溶液,6个月后,观察各组大鼠氟斑牙形成情况,氟离子选择电极法测定血氟、尿氟含量,同时构建干扰IKBKG基因的腺相关病毒(IKBKG-AAV)载体,经尾静脉注射高氟组大鼠干扰IKBKG的表达;采用不同浓度Na F处理L02人正常肝细胞,其中对照组、低、中、高氟组(0、1、4、7 mmol/L Na F)染氟48 h,构建针对IKBKG基因的短发卡RNA干扰(IKBKG-sh RNA)质粒,转染经高氟处理的L02细胞,干扰IKBKG基因的表达。3.测定方法:HE染色观察大鼠肝脏组织病理学形态变化;透射电镜观察大鼠肝组织线粒体形态结构变化情况;β-半乳糖苷酶染色检测大鼠肝脏组织及L02细胞的衰老情况;实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹检测p16、p21及IKBKG的m RNA及蛋白表达水平;ELISA检测大鼠肝脏匀浆及L02细胞培养液中IL-8的浓度;流式细胞术检测L02细胞周期变化情况。结果:1.筛选候选差异甲基化基因:甲基化模式分析结果显示,与对照组比较,病例组基因DNA的所有C碱基甲基化水平降低,CG、CHG、CHH位点甲基化水平均降低;病例组患者分布在不同常染色体上的DMR共有1000段,其中19号染色体最多。DMR相关基因978个,其中高甲基化基因265个、低甲基化基因713个;KEGG通路富集分析结果显示,差异甲基化基因主要参与细胞的新陈代谢、癌症发生、磷脂酰肌醇3激酶-蛋白激酶B(PI3K-AKT)等信号通路,结合DMR差异程度,以低甲基化的IKBKG(logRatio=-4.436)为候选基因;焦磷酸测序结果显示,与对照组人群相比,病例组外周血IKBKG基因甲基化程度降低,同时IKBKG m RNA表达水平升高;2.动物实验:染氟SD大鼠出现不同程度的氟斑牙,血氟、尿氟含量高于对照组;染氟SD大鼠肝脏组织出现不同程度的肝细胞肿胀,肝细胞排列紊乱,肝脏细胞中线粒体肿胀,线粒体脊紊乱现象,并有少量脂滴;与对照组相比,随着染氟浓度的增高,大鼠肝脏组织中衰老阳性细胞数逐渐增多,IL-8水平增高,p16、p21、IKBKG m RNA及蛋白的表达水平逐渐增高;与高氟组大鼠相比,注射IKBKG-AAV病毒的大鼠肝组织中IKBKG m RNA及蛋白的表达降低,同时p16、p21 m RNA及蛋白的表达水平降低,IL-8水平降低,衰老阳性细胞数减少,大鼠肝脏组织有肿胀细胞存在。3.细胞实验:与正常对照组相比,随着Na F处理浓度的增加,L02细胞中衰老阳性细胞数逐渐增多,IL-8水平增高,p16、p21、IKBKG、m RNA及蛋白的表达水平逐渐增高;流式细胞术检测细胞周期发现停滞在G2期的细胞数逐渐增多;与经Na F处理的L02细胞相比,IKBKG-sh RNA质粒转染染氟L02细胞中IKBKG m RNA及蛋白的表达降低,p16、p21 m RNA及蛋白的表达水平降低,IL-8水平降低,衰老阳性细胞数减少,且细胞周期停滞在G2期的细胞数降低。结论:1.氟中毒患者与对照人群基因组中存在大量的差异甲基化基因,其中低甲基化的IKBKG表达异常可能与氟化物的毒性作用有关。2.染氟大鼠肝组织和染氟肝L02细胞中衰老阳性细胞数增多,p16、p21 m RNA及蛋白的表达水平增高,提示氟中毒可能诱导肝细胞衰老。3.氟中毒诱导肝细胞衰老可能与其上调IKBKG表达有关。

关键词：氟中毒 IKBKG 细胞衰老甲基化肝细胞L02

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

Nrf2调控星形胶质细胞氧化应激机制的研究

Nrf2调控星形胶质细胞氧化应激机制的研究

引用

作者：陈竹懿贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:氧化应激参与阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的发病机制,与AD发病期间神经毒性中的活性氧(reactive oxygen species,ROS)和脂质过氧化有关。主要的抗氧化反应元件核因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)在AD脑中的作用已被证实,但Nrf2调节AD中星形胶质细胞铁死亡的机制仍不明确。所以在本研究中,我们将AD患者和APP/PS1/tau三转基因AD模型(3×Tg)小鼠及小鼠星形胶质细胞作为研究对象,探讨沉默Nrf2在星形胶质细胞氧化损伤过程中对铁死亡关键蛋白的调控机制,旨在为深入理解阿尔茨海默疾病的发病机制提供依据。方法:以AD患者和3×Tg小鼠脑切片为研究对象,通过免疫荧光共定位染色,检测Nrf2与NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase 4,NOX4)在星形胶质细胞中表达的改变。利用慢病毒感染小鼠星形胶质细胞实现体外靶向沉默Nrf2的表达,通过免疫印迹实验检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中血红素加氧酶-1(Heme Oxygenase-1,HO-1)、谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione Peroxidase 4,GPX4)及胱氨酸/谷氨酸逆向转运系统的轻链亚基(x CT)蛋白的表达变化,通过流式细胞术检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中ROS的改变,通过免疫荧光染色检测沉默Nrf2后小鼠星形胶质细胞中线粒体结构、脂质过氧化程度、DNA损伤程度和酪氨酸硝化程度的改变。结果:AD患者和3×Tg小鼠大脑星形胶质细胞中Nrf2蛋白水平显著降低,氧化应激诱导的ROS标记物NADPH氧化酶4(NADPH Oxidase 4,NOX4)的水平也显著升高。慢病毒靶向沉默小鼠星形胶质细胞中Nrf2的表达后,能够降低HO-1和GPX4的水平,同时升高x CT的水平。沉默Nrf2还增加了小鼠星形胶质细胞ROS的生成和线粒体的碎片化,以及脂质过氧化、DNA氧化损伤及酪氨酸的硝化程度。结论:我们的研究表明,在AD患者和3×Tg AD小鼠模型中,Nrf2水平在受损的星形胶质细胞中显著降低。在AD患者和3×Tg AD小鼠受损星形胶质细胞中,NOX4水平明显升高。我们发现抑制Nrf2的表达可促进星形胶质细胞氧化应激诱导的ROS产生,线粒体损伤和脂质过氧化。此外在小鼠星形胶质细胞中抑制Nrf2的表达能够抑制调控铁死亡的关键蛋白GPX4的表达。我们的研究结果支持Nrf2在星形胶质细胞的氧化应激中起着关键的作用,介于氧化应激在AD的发生发展中扮演着重要的角色,通过靶向星形胶质细胞中Nrf2的激活或许能为AD的治疗提供一个新的思路。

关键词： Nrf2 NOX4 铁死亡氧化应激星形胶质细胞阿尔茨海默病

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

星型胶质细胞衰老在APP/PS1/Tau转基因AD小鼠病理进程中的作用及机制研究

星型胶质细胞衰老在APP/PS1/Tau转基因AD小鼠病理进程中的作用及...

引用

作者：杨洁贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究以Pl3K/AKT/GSK3β信号通路调控tau蛋白诱导星型胶质细胞衰老为切入点,选用APP/PS1/Tau转基因小鼠、SD大鼠原代培养星形胶质细胞为研究对象,探讨星型胶质细胞衰老在阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)发病机制中的作用及... 详细信息

目的:本研究以Pl3K/AKT/GSK3β信号通路调控tau蛋白诱导星型胶质细胞衰老为切入点,选用APP/PS1/Tau转基因小鼠、SD大鼠原代培养星形胶质细胞为研究对象,探讨星型胶质细胞衰老在阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)发病机制中的作用及tau蛋白诱导星型胶质细胞衰老而发挥神经毒性及其机制;通过设计的细胞清除载体系统,探讨靶向清除脑组织衰老星形胶质细胞对AD病程的改善作用,为AD发病提供新的靶点与潜在的标志物。方法:本研究选用原代培养星形胶质细胞和APP/PS1/Tau转基因小鼠作为实验研究对象,细胞分别用10mM PI3K/AKT/GSK3β信号通路抑制剂LY294002和0.138mg/m L tau441蛋白单独或联合处理;动物主要检测APP/PS1/Tau小鼠脑细胞衰老情况;并且利用课题组前期构建的靶向清除星形胶质细胞载体系统包装成两个腺相关病毒(AAV p16-FKBP-2A-td Tomato和AAV-Aldh1l1-FRB-Cas8-2A-BSD)通过侧脑室注射至小鼠大脑海马区,再基于二聚体AP20187(B/B Homodimerizer)对FKBP(FK506-binding protein)的二聚化作用,以及雷帕霉素(Rapamycin)诱导FKBP12与FRB(FKBP and FKBP rapamycin binding domain)结构域的连接,先腹腔注射AP20187三周,再用Rapamycin处理一周,以诱导细胞凋亡达到靶向清除脑组织中衰老星形胶质细胞的目的,通过免疫荧光检测小鼠脑组织中红色荧光腺相关病毒分别与GFAP(星形胶质细胞)、Neu N(神经元)、Olig2(少突胶质细胞)和Iba1(小胶质细胞)的共定位情况以验证细胞衰老类型;通过β-半乳糖苷酶染色(Senescence Associatedβ-Galactosidase,SA-β-Gal)检测细胞及组织中衰老阳性细胞数;免疫组织化学方法检测Aβ、p-tau T231在小鼠大脑海马组织中的表达;Morris水迷宫检测小鼠行为学能力变化;酶联免疫吸附实验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞及组织中白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)含量;流式细胞术检测细胞周期变化情况;实时荧光定量PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测衰老相关分子p16、p21和p53 m RNA表达水平变化情况,蛋白免疫印迹(Western blot,WB)检测信号通路相关分子磷脂酰肌醇-3激酶(Phosphatidylinositol 3 kinase,PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(Serine/threonine-protein kinase B,PKB/AKT)、糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK3β)蛋白磷酸化、细胞衰老相关通路蛋白p16、p21、p53、磷酸化p-tau S396及T231蛋白表达情况。结果:1、Tau蛋白通过PI3K/AKT/GSK3β信号通路诱导原代培养星形胶质细胞衰老:与正常对照组相比,tau蛋白处理组中信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β表达水平有不同程度的升高、衰老阳性细胞数明显增加、IL-6含量增加、细胞周期停滞在G2、p16、p21、p53 m RNA及蛋白表达水平上调、p-tau S396、p-tau T231表达明显增加;与tau蛋白处理组相比,LY294002+tau处理组中信号通路相关蛋白p-PI3K、p-AKT、p-GSK3β显著下调、衰老阳性细胞数明显减少、IL-6含量降低、细胞在G2期的停滞有所减少、p16、p21、p53 m RNA及蛋白表达水平下调、p-tau S396、p-tau T231蛋白表达显著降低。2、APP/PS1/Tau小鼠随着月龄增加脑细胞衰老情况逐渐加重:小鼠脑组织内主要出现星形胶质细胞、以及少突胶质细胞和小胶质细胞衰老,而神经元没有出现衰老,并且与正常组小鼠相比,随着月龄的增加,APP/PS1/Tau小鼠脑内衰老阳性细胞数增加、IL-6、IL-8含量增加、脑组织中衰老相关蛋白p16、p21、p53表达水平均不同程度地增加、p-tau S396和T231蛋白表达增加、学习记忆能力减弱。3、载体系统靶向清除APP/PS1/Tau小鼠脑组织中衰老星形胶质细胞能够缓解AD病程:与阴性对照(NC)组和APP/PS1/Tau+AAV组(未经过AP20187+Rapamycin处理)相比

关键词：阿尔茨海默症 tau蛋白 APP/PS1/Tau转基因小鼠细胞衰老星形胶质细胞

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SH-SY5Y细胞中α7尼古丁受体拮抗或基因沉默对Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平的影响及其与p38 MAPK信号通路的关系

SH-SY5Y细胞中α7尼古丁受体拮抗或基因沉默对Tau蛋白S404和S214...

引用

作者：周飞贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:研究α7尼古丁受体(n ACh R)拮抗或基因沉默对SH-SY5Y细胞Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平的影响及其与p38 MAPK通路的关系,探讨α7 n ACh R调节Tau蛋白位点磷酸化的相关机制。方法:用α7 n ACh R拮抗剂MLA、p38 MAPK通路阻滞剂SB... 详细信息

目的:研究α7尼古丁受体(n ACh R)拮抗或基因沉默对SH-SY5Y细胞Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平的影响及其与p38 MAPK通路的关系,探讨α7 n ACh R调节Tau蛋白位点磷酸化的相关机制。方法:用α7 n ACh R拮抗剂MLA、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580及通路激动剂Anisomycin分别或联合处理SH-SY5Y细胞。用Real-time PCR法和Western blotting法分别测定沉默细胞中α7 n ACh R在m RNA和蛋白质表达水平的变化;Western blotting方法测定细胞Tau蛋白、p-Tau(S404)、p-Tau(S214)、p38 MAPK及p-p38 MAPK(Thr180/Tyr182)蛋白水平。结果:α7 n ACh R沉默组与空质粒组相比,α7 n ACh R m RNA和蛋白质水平分别降低了91%(P<0.01)和80%(P<0.01);p-Tau(S404)蛋白水平升高了71%(P<0.01),p-Tau(S214)蛋白水平升高了73%(P<0.01),p-p38蛋白水平升高了65%(P<0.01)。此外,Anisomycin与MLA、SB203580与MLA、单独MLA处理组共同检测Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平及通路蛋白表达情况,结果显示,MLA处理组和Anisomycin与MLA共同处理组均引起p-Tau(S404)、p-Tau(S214)及p-p38 MAPK蛋白水平明显升高(P<0.01),SB203580与MLA共同处理组引起p-Tau(S404)、p-Tau(S214)和p-p38 MAPK蛋白水平显著降低(P<0.01)。结论:α7 n ACh R基因沉默或受体拮抗可导致Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平升高并激活p38 MAPK信号通路;抑制p38 MAPK信号转导通路可使MLA诱导的Tau蛋白S404和S214位点磷酸化水平显著降低。

关键词：阿尔茨海默病 Tau α7 nAChR p38 MAPK SH-SY5Y细胞

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SH-SY5Y细胞α3尼古丁受体表达水平的改变对突触相关蛋白的影响

SH-SY5Y细胞α3尼古丁受体表达水平的改变对突触相关蛋白的影响

引用

作者：吕园园贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:研究人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α3尼古丁受体(а3 nicotinic аcetylcholine receptors,α3 nAChR)基因表达上调及下调后对细胞突触相关蛋白及钙信号通路相关蛋白的影响,从而探讨α3 nAChR在阿尔茨海默病(Alzheimer diseаse,AD... 详细信息

目的:研究人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α3尼古丁受体(а3 nicotinic аcetylcholine receptors,α3 nAChR)基因表达上调及下调后对细胞突触相关蛋白及钙信号通路相关蛋白的影响,从而探讨α3 nAChR在阿尔茨海默病(Alzheimer diseаse,AD)发病机制中的可能作用。方法:(1)采用逆转录PCR的方法获取人α3nAChR基因,用T4 DNA连接酶将其连接到pcDNA 3.1质粒,构建重组质粒α3nAChR-pcDNA3.1,电泳鉴定插入片段大小,双向测序鉴定插入碱基序列和方向;下调α3 nAChR水平选择商品化的α3 nAChR shRNA Plаsmid。(2)瞬时转染后,用Reаl-time PCR(qPCR)法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法鉴定得到α3 nAChR基因上调及下调的SH-SY5Y细胞。(3)用qPCR和WB方法分别检测SH-SY5Y细胞中突触素(synаptophysin,SYP)、突触后膜蛋白(PSD-95)、衔接蛋白180(аdаptor protein,AP180)、发动蛋白1(dynаmin 1,DYN1)、钙调蛋白(Cаlmodulin,CаM)、钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Cаlmodulin-binding protein kinаse II,CаMKII)环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP responsive element-binding protein,CREB)mRNA和蛋白及磷酸化CREB(pCREB)蛋白表达水平的变化。结果:(1)成功构建了使а3nAChR上调的重组质粒а3 nAChR-pcDNA3.1。(2)将а3 nAChR-pcDNA3.1质粒转到SH-SY5Y细胞中后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平分别增加了418%和116%(P<0.01);将α3 nAChR shRNA Plаsmid质粒转染到SH-SY5Y细胞中后,与空载质粒组及正常对照组相比,α3 nAChR mRNA及蛋白表达水平分别降低了76%和67%(P<0.01)。(3)α3 nAChR上调组的突触相关蛋白SYP、PSD-95、AP180、DYN1、CаM、CаMKII、CREB mRNA和蛋白及pCREB蛋白表达水平与对照组相比都有增加,而α3 nAChR下调组的突触相关蛋白SYP、PSD-95、DYN1、AP180、CаM、CаMKII、CREB mRNA和蛋白及pCREB蛋白表达水平与对照组相比都有降低(P<0.01,P<0.05)。结论:SH-SY5Y细胞α3 nAChR水平上调能够提高突触相关蛋白SYP、PSD-95、AP180、DYN1及钙信号通路相关蛋白CаM、CаMKII、CREB m RNA和蛋白以及pCREB蛋白的表达水平,而SH-SY5Y细胞α3 nAChR水平下调能够降低突触相关蛋白SYP、PSD-95、AP180、DYN1及钙信号通路相关蛋白CаM、CаMKII、CREB mRNA和蛋白以及pCREB蛋白的表达水平。这表明α3 nAChR与突触相关蛋白的表达密切相关,进一步说明α3 nAChR在AD的发病机制中可能起着重要的作用。

关键词： α3尼古丁受体阿尔茨海默病 SH-SY5Y细胞突触蛋白钙信号通路

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

慢性氟中毒患者及大鼠血液与肝组织DNA修复基因甲基化改变的研究

慢性氟中毒患者及大鼠血液与肝组织DNA修复基因甲基化改变的研究

引用

作者：王煜蘅贵阳医学院

学位级别：硕士

目的通过研究地氟病患者以及氟中毒大鼠模型DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因（MGMT）、错配修复基因（MLH1）启动子区甲基化水平检测其mRNA及蛋白水平改变，探讨DNA修复基因甲基化、基因表达与地方性氟中毒发生发展的关系... 详细信息

目的通过研究地氟病患者以及氟中毒大鼠模型DNA修复基因O6-甲基鸟嘌呤-DNA-甲基转移酶基因（MGMT）、错配修复基因（MLH1）启动子区甲基化水平检测其mRNA及蛋白水平改变，探讨DNA修复基因甲基化、基因表达与地方性氟中毒发生发展的关系。方法1.在贵州省毕节市典型燃煤型地氟病区进行抽样，选取八寨镇毛栗坪村45名村民为氟病组，根据患者氟斑牙和氟骨症的分度分组，依次分为轻度组、中度组和重度组，在非氟病区贵阳市沙文镇新寨村，选取年龄性别平衡均匹配的健康人群做为正常对照。酚氯仿法抽提全血DNA，甲基化特异性PCR（MSP）法检测DNA中MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取受检者血液RNA，实时荧光定量PCR法检测MGMT、MLH1基因mRNA表达水平变化。2.复制慢性氟中毒大鼠模型，20只/组，分为对照组和染氟组，对照组常规饲养，染氟组大鼠的饮用水中加入氟化钠50mg/L，饲养6个月之后采取股动脉放血方式处死。取其动脉血及肝组织，酚氯仿法抽提基因组DNA，MSP法检测血液样本及肝组织中MGMT、MLH1基因甲基化水平。提取总RNA，实时荧光定量PCR法检测各组MGMT、MLH1基因mRNA表达水平;裂解法提取肝组织蛋白，采用Western blot检测各组MGMT、 MLH1蛋白表达水平。结果（1）氟病区患者血液样本MGMT、MLH1基因明显出现甲基化，且甲基化阳性率随氟中毒程度加深而升高，差异有统计学意义（P<0.05）;（2）氟病区患者血液样本MGMT、MLH1基因mRNA表达水平较对照组相比降低，且表达水平与氟中毒程度成负相关，差异有统计学意义（P<0.05）;（3）染氟组大鼠血液MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组比升高，差异有统计学意义（P<0.05）。（4）染氟组大鼠血液MGMT、MLH1基因的mRNA表达水平低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。（5）染氟组大鼠肝组织MGMT、 MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显升高，差异有统计学意义（P<0.05）。（6）染氟组大鼠肝组织MGMT、MLH1基因mRNA表达水平较对照组降低，差异有统计学意义（P<0.05）。（7）染氟组大鼠肝组织MGMT、MLH1蛋白表达水平较对照组降低，差异有统计学意义（P<0.05）。结论氟病区患者血液样本MGMT、MLH1基因甲基化程度与地氟病严重程度有相关性，且随着氟中毒的加深而mRNA表达水平降低。染氟大鼠血液样本的MGMT、MLH1基因甲基化阳性率与对照组相比明显增高，且转录水平的表达有所降低，在人体和动物水平上都表现出修复基因的表达可能与氟有一定的关系，且甲基化的后果可能与基因转录水平的表达具有一定相关性。染氟大鼠的肝组织样本MGMT、MLH1基因的甲基化阳性率与对照组相比增高，转录水平与蛋白表达水平均降低，DNA修复基因的表达有可能与氟所造成的肝损伤有关。

关键词：氟中毒甲基化 O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶错配修复基因

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

SH-SY5Y细胞α7神经型尼古丁受体基因表达水平的改变对突触相关蛋白的影响

SH-SY5Y细胞α7神经型尼古丁受体基因表达水平的改变对突触相关蛋...

引用

作者：张淑丽贵州医科大学

学位级别：硕士

目的:研究神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α7神经型尼古丁受体基因(α7 n ACh R)表达增强及沉默后对细胞突触相关蛋白的影响,以及对Aβ引起的突触损伤的作用,探讨α7 n ACh R神经保护作用机制及在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的发病... 详细信息

目的:研究神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)α7神经型尼古丁受体基因(α7 n ACh R)表达增强及沉默后对细胞突触相关蛋白的影响,以及对Aβ引起的突触损伤的作用,探讨α7 n ACh R神经保护作用机制及在阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)的发病机制中的作用。方法:(1)采用逆转录PCR的方法获取人α7 n ACh R基因,用T4 DNA连接酶将其连接到pc DNA 3.1质粒,构建重组体质粒pc DNA3.1-?7 n ACh R,α7 n ACh R sh RNA Plasmid购自Santa Curz公司;(2)通过稳定转染方法,筛选出α7 n ACh R基因高表达及沉默的SH-SY5Y细胞株;(3)用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别测定细胞中囊泡相关蛋白(synaptophysin),突触前膜蛋白(SNAP-25)和突触后膜蛋白(PSD-95)m RNA和蛋白表达水平的变化;(4)用终浓度为1μmol/L的Aβ1-42寡聚体处理培养的SH-SY5Y细胞、空质粒组细胞、α7 n ACh R水平上调组和沉默组的细胞24 h,再用Real-time PCR法和蛋白免疫印迹(Western Blot)法分别测定细胞中囊泡相关蛋白synaptophysin,SNAP-25和PSD-95m RNA和蛋白表达水平的变化。结果:(1)成功构建pc DNA3.1-?7 n ACh R过表达质粒,转入SH-SY5Y细胞后,经G418筛选获得稳定转染细胞株,与对照组相比,α7 n ACh R m RNA及蛋白表达量分别增加了533%和110%;SH-SY5Y细胞转染α7 n ACh R sh RNA Plasmid之后经嘌呤霉素筛选,获得稳定转染α7 n ACh R sh RNA重组质粒的细胞株,与对照组相比,α7 n ACh R m RNA及蛋白表达量分别减少了95%和80%。(2)α7 n ACh R上调组的突触相关蛋白PSD-95、SNAP-25、SYP m RNA及蛋白表达都有明显的增加,而α7 n ACh R沉默组的突触相关蛋白PSD-95、SNAP-25、SYP的m RNA及蛋白表达明显的降低。(3)Aβ1-42寡聚体处理SH-SY5Y细胞和空质粒组细胞24小时后,PSD-95、SNAP-25、SYP m RNA及蛋白表达水平较正常对照组都有明显的降低(P<0.01)。α7 n ACh R上调组经Aβ处理后,PSD-95、SNAP-25、SYP与Aβ处理组相比,m RNA及蛋白表达水平有明显的升高,而α7 n ACh R沉默组经Aβ处理后,与Aβ处理组相比,PSD-95、SNAP-25、SYP m RNA及蛋白表达水平有明显的降低。结论:上调SH-SY5Y细胞α7 n ACh R水平能够使细胞突触相关蛋白水平升高,而降低SH-SY5Y细胞α7 n ACh R水平会抑制细胞突触蛋白水平;同时α7 n ACh R受体水平的增加能够对抗Aβ对突触的损伤,降低α7 n ACh R水平使Aβ对细胞突触的毒性作用增强及突触损伤情况更严重。这可能提示了α7 n ACh R与细胞突触密切相关,并且α7 n ACh R的增加可对Aβ诱导神经细胞的突触损伤有一定的保护作用,进一步说明α7n ACh R在阿尔茨海默病的发病中起着重要作用。

关键词： α7神经型尼古丁受体阿尔茨海默病 SH-SY5Y细胞 Aβ 突触损伤

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

磷酸化tauS214/T231/S356对线粒体损伤及认知功能障碍的机制研究

磷酸化tauS214/T231/S356对线粒体损伤及认知功能障碍的机制研究

引用

作者：郭敏贵州医科大学

学位级别：硕士

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

全选清除本页清除全部题录导出标记到“检索档案”

共1页 << < 1 > >>

回到顶部

执行限定条件

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：