检索结果-南通市图书馆

作者：傅云扉仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

随着中国经济发展和人民生活水平的提高,市场消费结构发生变化,饲养宠物的家庭数量逐渐上升,人们对宠物医疗的需求和研究随之增多。犬猫脂溢性皮炎病是广东地区高发的皮肤病,致病机制不明,病因复杂。Omega-3和Omega-6脂肪酸是犬猫必须... 详细信息

随着中国经济发展和人民生活水平的提高,市场消费结构发生变化,饲养宠物的家庭数量逐渐上升,人们对宠物医疗的需求和研究随之增多。犬猫脂溢性皮炎病是广东地区高发的皮肤病,致病机制不明,病因复杂。Omega-3和Omega-6脂肪酸是犬猫必须脂肪酸,是宠物食品的重要成分,合理调节宠物摄入的Omega-6和Omega-3的比例可以调节宠物代谢状态。实验首次应用高脂饲料成功构建了大鼠脂溢性皮炎模型:将高纯度鱼油和亚油酸分别作为Omega-3和Omega-6的原材料,通过饲喂大鼠亚油酸和鱼油比例高达20:1,含量高达31.5%的高脂饲料4周,成功使大鼠长期稳定的保持脂溢性皮炎的症状。研究结果显示:与空白组大鼠对比,造模组大鼠皮肤出现不同程度的脱毛、鳞屑、红疹和丘疹的症状,且临床评分结果大于5分,即造模组大鼠出现明显的脂溢性皮炎症状;皮肤状态检测结果表明,造模组大鼠皮肤水分低于空白组大鼠,但油脂成分高于空白组大鼠,且皮肤弹性指数低于空白组,即造模组大鼠皮肤状态和油脂分泌情况出现异常;造模组大鼠血清中白介素4(IL-4)浓度(201.5ng/L)显著高于空白组大鼠(169.7ng/L,P<0.05);造模组大鼠血清中白介素6(IL-6)浓度(458.59ng/L)显著高于空白组大鼠(356.84ng/L,P<0.05);造模组大鼠血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)浓度(1005.68ng/L)显著低于空白组大鼠数(1325.81ng/L,P<0.05);造模组大鼠血清中甘油三酯(TG)浓度(0.195mmol/L)显著高于空白组大鼠(0.100mmol/L,P<0.05);真菌分离培养结果表明,与空白组对比,造模组大鼠皮肤真菌大量增殖;毛发镜检结果显示,造模组大鼠毛干、毛髓质、毛囊出现不同程度的损伤;皮肤病理切片结果显示与空白组相比,造模组大鼠皮肤真皮和表皮结构明显增厚且毛囊数量较多,且出现真皮层和表皮层增厚、炎性细胞浸润等病理现象。在大鼠出现脂溢性皮炎症状后随机分组,研究9种Omega-6和Omega-3含量和比例不同的治疗饲料,再次喂养4周后,分析检测结果表明:饲料中添加不同含量和比例的Omega-3、Omega-6可影响大鼠皮肤状态,并可以不同程度地缓解脂溢性皮炎的临床症状。通过皮损评分、皮肤切片、炎性因子含量、毛发镜检结果对比,饲料中Omega-6/Omega-3比例1:1;含量10%治疗效果最佳,在减轻炎性症状的同时,还有降血脂作用。毛发镜检结果还表明:侵入和附着在毛发的微生物并不会因皮肤状态改善而消失,还需配合含有抗菌抑菌成分的药浴治疗,膳食治疗可作为日常预防保健皮肤病的有效方式。结果显示,在饲料中添加不同含量或比例的Omega-3和Omega-6,大鼠的血清因子会随之出现相应变化。IL-4和IL-6浓度随Omega-3和Omega-6的含量的变化趋势相似:当Omega-3和Omega-6的添加量在1%-10%之间,IL-4和IL-6浓度随之增加;当Omega-3和Omega-6的添加量在10%-20%之间,IL-4和IL-6浓度开始降低。TNF-α浓度与Omega-3和Omega-6的添加量呈正比关系;TG与Omega-3和Omega-6的添加量无相关性。IL-4、TNF-α与Omega-3和Omega-6的比例无相关性;TG、IL-6浓度与Omega-3和Omega-6的添加比例成反比关系。研究结果表明Omega-6和Omega-3的摄入比例是脂溢性皮炎的重要原因,不合理的Omega-6和Omega-3的摄入比例改变了皮肤状态,皮肤油脂分泌过度,马拉色菌作为亲脂性真菌大量繁殖,其代谢物刺激大鼠体内炎性因子增加使大鼠出现炎性症状,并引起皮肤发生病变。

关键词：脂溢性皮炎不饱和脂肪酸 Omega-3 Omega-6 动物模型

OPN5与PRL在光照调控鹌鹑繁殖活性中的机理及相互关系

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OPN5与PRL在光照调控鹌鹑繁殖活性中的机理及相互关系

作者：周晓莉仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

光照是鸟类季节性繁殖的重要调控因子之一,其主要通过光信号介导通路,影响下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴实现对繁殖活动的调控。当光照时长改变时,作为深脑光感受器(DBPs)之一的OPN5传递光信号来调控TSHβ分泌,调控Gn RH水平,进而通过HPG轴... 详细信息

光照是鸟类季节性繁殖的重要调控因子之一,其主要通过光信号介导通路,影响下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴实现对繁殖活动的调控。当光照时长改变时,作为深脑光感受器(DBPs)之一的OPN5传递光信号来调控TSHβ分泌,调控Gn RH水平,进而通过HPG轴调控鸟类季节性繁殖。在光照调控鸟类季节性繁殖的过程中,PRL作为禽类繁殖的重要调控因子,其表达同样会随着日照的变化而波动,并可以影响HPG轴调控鸟类繁殖活性。在光照调控禽类繁殖活动的过程中,OPN5、TSH-DIO2/DIO3和VIP-PRL均发挥重要介导作用,但其中的具体机理目前仍不清楚,尤其是OPN5与PRL在调控上的关系鲜有报道。本研究以季节性繁殖禽类鹌鹑为研究对象,研究不同光照时长对鹌鹑繁殖活性、OPN5和PRL的影响,并通过主动免疫激活OPN5和阻断内源性PRL,验证OPN5、TSHDIO2/DIO3和VIP-PRL在光照调控鹌鹑繁殖活动中的作用机制及其之间的关系,以期揭示OPN5与PRL介导光照调控鹌鹑繁殖活性的机理,为禽类繁殖研究及生产实践提供科学依据。试验一:不同光照时长对鹌鹑繁殖活性的影响。试验选取72只产蛋高峰期的鹌鹑随机分为LD组(16 L:8 D)和SD组(8 L:16 D),在16 L:8 D的光照下预饲15天。试验d 1将SD组的光照时长缩短至8 L:16 D,LD组则保持16 L:8D不变,在试验的d 1、d 11、d 22和d 36分别进行采样。结果显示,短光照显著降低鹌鹑产蛋率、GSI%、YF、WF,以及血清中P4、E2、LH、PRL水平,也显著下调Gn RHR、VIP、PRL、OPN5、DIO2和LHβ表达(P0.05)。结果表明,缩短光照通过降低OPN5、TSH-DIO2/DIO3和VIP-PRL水平,影响生殖轴关键因子表达,进而抑制卵泡发育和鹌鹑繁殖性能,长光照则作用相反,促进鹌鹑卵泡发育及繁殖性能。试验二:短光照处理下主动免疫OPN5对鹌鹑繁殖活性的影响。试验选取144只产蛋高峰期鹌鹑随机分为OPN5免疫组和对照组,于16 L:8 D光照条件下饲养15天。OPN5免疫组分别在d 1、d 15、d 30和d 60接种含OPN5蛋白的疫苗0.25 m L/只(分别含50μg、50μg、25μg和25μg的OPN5-KLH蛋白);对照组则注射同等剂量的未含OPN5的空白疫苗。试验d 35将两组光照时长缩短至8 L:16 D,于d 70延长两组光照时长至12 L:12 D,直到d 126结束试验。于d 1,d 30,d 60和d 126进行采样。结果显示在第8、9周(8 L:16 D)和第17、18周(12 L:12 D)时OPN5免疫组产蛋率显著高于对照组(P0.05)。OPN5免疫组DIO3水平于d 30显著低于对照组(P0.05)。结果表明,短光照处理下通过主动免疫OPN5可以激活并上调OPN5、TSH-DIO2/DIO3和VIP-PRL,影响生殖轴主要因子的表达,进而促进卵泡发育和鹌鹑繁殖性能。试验三:长光照处理下主动免疫PRL对鹌鹑繁殖活性的影响。选取144只鹌鹑随机分为PRL免疫组和对照组,在16 L:8 D的光照下预饲15天。PRL免疫组于d 1、d 15和d 30接种含PRL重组蛋白的疫苗0.25 m L/只(均含50μg的PRL重组蛋白);对照组接种同等剂量的未含PRL的空白疫苗。d 1延长两组光照至24 L:0 D直至试验结束。于d 1、d 30和d 56采样。结果显示,对照组产蛋率、GSI%、YF、WF、血清中LH和P4水平、下丘脑中Gn RH基因、DIO2和TSHβ基因与蛋白表达量显著低于PRL免疫组(P0.05)。结果表明,VIP-PRL和OPN5的分泌与光照时长呈正相关,高水平PRL影响生殖轴关键因子表达抑制卵泡发育。免疫PRL对OPN5无影响,但上调TSH-DIO2/DIO3效率,表明PRL处于OPN5下游调控区,但于TSH-DIO2/

关键词： OPN5 TSH-DIO2/DIO3 PRL 光照时长鹌鹑

CLOCK基因对马岗鹅睾丸退化及支持细胞的作用研究

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CLOCK基因对马岗鹅睾丸退化及支持细胞的作用研究

作者：林晓冰仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

鹅是典型的季节性繁殖动物,自然条件下其繁殖活动受季节与光照条件的影响,呈现周期性变化。CLOCK基因是生物节律调控的核心基因,在维持动物正常的生物节律与光照调控繁殖过程中起重要作用,但是目前CLOCK基因在光照调控公鹅繁殖性能过程... 详细信息

鹅是典型的季节性繁殖动物,自然条件下其繁殖活动受季节与光照条件的影响,呈现周期性变化。CLOCK基因是生物节律调控的核心基因,在维持动物正常的生物节律与光照调控繁殖过程中起重要作用,但是目前CLOCK基因在光照调控公鹅繁殖性能过程中的作用机制仍不清楚。本研究以800只(公:母=1:3)200日龄健康马岗鹅为研究对象,每天18 h光照处理至母鹅进入休产期。比较该过程中不同阶段马岗鹅睾丸中CLOCK基因及mi RNA的表达水平,在睾丸支持细胞中过表达与干扰CLOCK后,检测支持细胞的增殖、凋亡情况与繁殖相关基因的表达,进一步分析CLOCK基因对支持细胞的调控作用。结果表明:持续18 h长光照处理抑制了育成期马岗鹅睾丸的发育和精子生成,加速了睾丸的退化。在马岗鹅睾丸退化过程中,生物钟核心基因CLOCK、ARNTL、PRE2、CRY1的表达水平下降,有1365个mi RNA在睾丸组织中差异表达,有36个mi RNA被预测以CLOCK为靶标,表明CLOCK基因与mi RNA可能参与了马岗鹅睾丸发育与退化过程的调控。在支持细胞中发现,过表达CLOCK促进马岗鹅睾丸支持细胞的增殖,抑制了支持细胞的凋亡;而干扰CLOCK抑制了马岗鹅睾丸支持细胞的增殖,促进细胞凋亡。在基因表达水平上,CLOCK过表达提高了支持细胞中IGF1、FSHR、GDNF和BMP4的表达水平,降低了INHβA与INHβB的表达水平,干扰CLOCK后降低了TGF-β1、FSHR、GDNF、BMP4和BCL2的表达水平,提高了支持细胞中INHβA与INHβB的表达水平,表明了CLOCK基因对支持细胞的增殖与凋亡具有调控的作用。本研究揭示了CLOCK可能通过调控睾丸支持细胞的增殖与凋亡,进而参与长光照调控马岗鹅睾丸退化的过程,为公鹅繁殖调控技术开发提供参考。

关键词：马岗鹅 CLOCK 增殖凋亡睾丸支持细胞

穿孔素基因缺失重组T7噬菌体拯救及生物学特性研究

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穿孔素基因缺失重组T7噬菌体拯救及生物学特性研究

作者：鲍熹仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

T7噬菌体因其具有的结构简单,操作方便等特点,作为噬菌体表面展示技术的载体之一,能够快速方便的用于抗原、抗体的筛选,被广泛应用于兽医研究的各个领域。本研究以T7噬菌体裂解机理为基础,通过构建缺失裂解调控基因穿孔素(Holin)的重组T... 详细信息

T7噬菌体因其具有的结构简单,操作方便等特点,作为噬菌体表面展示技术的载体之一,能够快速方便的用于抗原、抗体的筛选,被广泛应用于兽医研究的各个领域。本研究以T7噬菌体裂解机理为基础,通过构建缺失裂解调控基因穿孔素(Holin)的重组T7噬菌体(T7-△Holin),来探究T7噬菌体裂解周期与子代病毒粒子产量之间的对应关系,通过建立荧光定量评价方法、优化培养过程工艺参数,最终确定Holin缺失株T7噬菌体高效培养方法,为大规模、低成本生产T7噬菌体奠定基础。实验一,通过PCR方法拼接缺失Holin基因的T7噬菌体基因组,并构建表达Holin蛋白的补偿宿主用于拯救缺失株T7-△Hilon重组噬菌体。PCR扩增Holin基因,分别在基因的5’端添加Xba I和RBS序列、3’端添加BamH I位点,然后插入pET-28载体构建重组质粒pET-Holin。将重组质粒化学转化法导入大肠杆菌BL-21(DE3),构建补偿宿主菌BL-Holin。IPTG诱导Holin蛋白表达,SDS-PAGE鉴定目的蛋白。分析T7噬菌体全基因组,选择Holin基因上游Sfi I位点以及下游非编码区作为分段位点。酶切回收Sfi I位点左侧基因组、SOE-PCR方法扩增缺失SfiI到非编码区基因片段、常规PCR扩增非编码区右侧基因组,包装蛋白包装三者的连接产物并在补偿宿主中拯救T7-△Holin重组噬菌体。结果显示,构建的补偿宿主能够正确表达Holin蛋白,并能在其中顺利拯救T7-△Holin重组噬菌体,测序结果表明Holin基因被正确敲除,缺失株噬菌体能够稳定传20代,显示出良好的遗传稳定性。实验二,由于传统斑计数法评价噬菌体颗粒数量存在效率低、通量小、结果不准确等缺点,为了更好的研究T7-△Holin的生物学特性,建立了基于qRT-PCR的噬菌体颗粒评价方法。首先通过梯度密度离心方法进行了T7噬菌体样品的纯化,将纯化T7噬菌体样品进行倍比稀释作为模板,通过qRT-PCR建立起标准曲线,得到CP值与T7-△Holin纯化样品浓度之间的关系方程。用相同样品倍比稀释后测定吸光度,通过已知的公式用吸光度值计算出样品中噬菌体的颗粒数,得到样品浓度与样品中颗粒数之间的关系。将其中浓度通过第一个方程换算成CP值,即可得到CP值与样品中颗粒数之间的关系方程,作图显示建立的CP值-颗粒数方程具有良好的线性关系。本实验建立的评价方法可以通过qRT-PCR快速准确高通量地对待测样品中噬菌体颗粒数进行评价。实验三,通过改变MOI及IPTG条件,并分时采样绘制生长曲线的方式比对了T7-△Holin与T7Select415-1b在生长速率、裂解时间及子代产量方面的区别。通过比对发现,在MOI>1的情况下,T7-△Holin的生长速率相对T7Select415-1B较慢,裂解时间推迟约半小时,而子代颗粒数比T7Select415-1b提高约5倍。当MOI<1时,T7-△Holin的裂解时间在随着MOI的降低而推迟,MOI为10时,T7Select415-1b培养4h后完全裂解,而T7-△Holin培养5h后没有明显裂解现象。低MOI下T7-△Holin的子代产量则与T7Select415-1b基本持平。同时研究结果还显示,改变IPTG的浓度及添加时间对T7-△Holin的生长和裂解时间没有影响。用RNase及DNase处理样品并对处理前后样品分别进行评价,结果显示核酸酶处理前后qRT-PCR评价结果会有所差异。T7Select415-1b处理前评价结果最高比处理后高两个滴度左右,而T7-△Holin前后相差最大为一个滴度左右。经过长时间培养的样品核酸酶处理前后评价结果则趋于一致,显示了T7噬菌体裂解过程中的子代颗粒不完全包装即被释放的情况。

关键词： T7噬菌体穿孔素基因缺失反向遗传拯救生物学特性

不同环境应激对肉鹅免疫力、肠道微生物及生长性能的影响

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不同环境应激对肉鹅免疫力、肠道微生物及生长性能的影响

作者：郑灶波仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

本论文以马岗鹅为研究对象,研究光色、内毒素和褪黑素对肉鹅生长性能、免疫力、肠道微生物的影响,以期揭示光色和内毒素对肉鹅机体性状及肠道微生物的调控效应,并探讨利用光色和褪黑素缓解内毒素危害来改善肉鹅生长的可行性,为养鹅生产... 详细信息

本论文以马岗鹅为研究对象,研究光色、内毒素和褪黑素对肉鹅生长性能、免疫力、肠道微生物的影响,以期揭示光色和内毒素对肉鹅机体性状及肠道微生物的调控效应,并探讨利用光色和褪黑素缓解内毒素危害来改善肉鹅生长的可行性,为养鹅生产提供参考和借鉴。实验一研究白光、红光和蓝光对肉鹅(0-63日龄)生长性能、饲料转化率、相关激素、抗氧化指标及肠道微生物的影响。结果显示,红光能一定程度促进生长性能,对饲料转化率则无影响,蓝光抑制生长性能和饲料转化率。红光和蓝光均降低GH、IGF-1、T3、ADR和CAR水平;在d 35升高在d63降低MDA和GR水平。试验期环境中总菌数、黄色葡萄球菌和大肠杆菌浓度以红光组最高,蓝光照最低。肠道微生物中,4个优势菌门中白光组的厚壁菌门占比最高,变形菌门、拟杆菌门和放线菌门占比最低,蓝光组则相反,红光组居中。4种优势菌属种中只有Terrisporobacter菌属不受光照影响,与生长阶段相关;Bacillus菌属和Lactococcus菌属受红光影响,不同生长阶段不同;Turicibacter菌属受白光影响,不同生长期有所不同。结果证明,红光可影响肉鹅相关激素、抗氧化指标,一定程度促进生长性能;蓝光可抑制血液激素和抗氧化指标,抑制生长性能和饲料转化率。两种光均对肠道微生物产生影响,以蓝色光最为显著。实验二研究了雏鹅期(16 d2 d),外源性内毒素和褪黑素对雏鹅生长性能、饲料转化率、激素、生化指标、免疫学指标、肠道微生物的影响。结果显示,内毒素会抑制生长和饲料转化率,导致T3、T4和皮质醇上升,使肾上腺素下降;导致肝脏及脾脏肿大,胸腺和法氏囊萎缩,显著降低总胆固醇、甘油三酯和碱性磷酸酶,升高谷丙转氨酶和谷草转氨酶;显著降低血清总蛋白、血清白蛋白和血清球蛋白及白蛋白/球蛋白。褪黑素对内毒素毒性负作用有一定缓解作用,升高T4和碱性磷酸酶指标,降低肾上腺素浓度。褪黑素和内毒素对肠道优势微生物菌群具有促进或抑制作用,能影响肠道微生物区系多样性。

关键词：鹅环境应激免疫力肠道微生物生长性能

猴耳环提取物对黄羽肉鸡生产性能及肠道健康的影响

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猴耳环提取物对黄羽肉鸡生产性能及肠道健康的影响

作者：杨明炜仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

猴耳环是我国南方重要的中药药材,相关研究表明猴耳环具有抗病毒、抗菌、抗炎和抗肿瘤等生物学活性。研究报道多种中药多糖,如黄芪多糖、白术多糖等具有调节机体免疫功能、促进动物生长发育和肠道健康的作用。因此,将植物多糖开发为绿... 详细信息

猴耳环是我国南方重要的中药药材,相关研究表明猴耳环具有抗病毒、抗菌、抗炎和抗肿瘤等生物学活性。研究报道多种中药多糖,如黄芪多糖、白术多糖等具有调节机体免疫功能、促进动物生长发育和肠道健康的作用。因此,将植物多糖开发为绿色、天然的饲料添加剂是目前研究的热点。本研究拟探究猴耳环提取物对黄羽肉鸡生产性能和肠道健康的影响,为开发绿色天然的饲料添加剂选用猴耳环提取物提供理论依据。选用1日龄黄羽肉鸡240只,随机分为4个组,每组3个重复,每个重复20只,试验周期分为3个阶段:1-20天、21-40天、41-70天。从1日龄开始,A、B、C组分别在基础饲粮中添加0.5 g/kg、1.0 g/kg、2.0 g/kg猴耳环提取物;D组为空白对照组。分别于20天、40天和70天采集各组血清、肝脏、法氏囊、十二指肠、空肠以及盲肠内容物等样品,对各组生长性能、屠宰性状和肉品质进行分析,并对肠道组织相关指标进行测定和盲肠内容物16S r DNA测序。结果显示:1)饲粮中添加猴耳环提取物对黄羽肉鸡的生产性能和屠宰性能无显著影响(P>0.05),但添加2.0 g/kg猴耳环提取物可显著增加皮肤色度,改善黄羽肉鸡皮色(P<0.05);2)饲粮中添加0.5 g/kg、1.0 g/kg和2.0 g/kg猴耳环提取物与对照组相比可以显著提高黄羽肉鸡的总抗氧化能力(P<0.05),并且0.5 g/kg和1.0 g/kg两组肝脏中与抗应激相关蛋白HSP70和HSP90的基因表达水平显著升高(P<0.05);3)饲粮中添加猴耳环提取物可显著提高黄羽肉鸡胸肌中粗脂肪、部分脂肪酸(硬脂酸、油酸、亚油酸)及腿肌中肌苷酸等肌肉风味物质的含量(P<0.05);4)饲粮中添加猴耳环提取物可显著增加黄羽肉鸡十二指肠和空肠的绒隐比及空肠组织中紧密连接蛋白CLDN1和CLDN5的基因表达水平(P<0.05),同时降低空肠组织中IL-1β、IL-8和TNF-α等炎性因子及TLR4、My D88和NF-κB等炎性通路的基因表达水平(P<0.05);5)饲粮中添加猴耳环提取物可显著增加黄羽肉鸡盲肠中副拟杆菌属和普雷沃氏菌属等有益菌群的丰度,并显著降低盲肠中变形菌门等有害菌群的丰度(P<0.05)。综上,饲粮中添加猴耳环提取物可显著提高黄羽肉鸡的抗氧化和抗应激能力,改善皮肤色度和肌肉风味物质;并且显著改善黄羽肉鸡的肠道结构,减少肠道炎性损伤,并改善盲肠微生物菌群结构,促进肠道健康。为将猴耳环开发成为一种绿色、安全和有效的饲料添加剂提供科学依据。

关键词：猴耳环生长性能屠宰性能风味物质肠道健康微生物菌群

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丁酸梭菌对坏死性肠炎鸡肠道菌群的影响研究

丁酸梭菌对坏死性肠炎鸡肠道菌群的影响研究

作者：邱菲仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

本文研究了肉鸡日粮中添加丁酸梭菌对坏死性肠炎鸡的预防效果,分析其生长性能、免疫器官指数、肠道损伤及肠道菌群的组成变化,同时运用培养组学方法对肉鸡空肠和盲肠肠道内容物进行培养,发现了具有替抗潜能的益生菌。试验共设置6个分组... 详细信息

本文研究了肉鸡日粮中添加丁酸梭菌对坏死性肠炎鸡的预防效果,分析其生长性能、免疫器官指数、肠道损伤及肠道菌群的组成变化,同时运用培养组学方法对肉鸡空肠和盲肠肠道内容物进行培养,发现了具有替抗潜能的益生菌。试验共设置6个分组,空白组、模型组、抗生素组(添加0.5%恩拉霉素)、丁酸梭菌低剂量组(2×10～8CFU/kg)、丁酸梭菌中剂量组(1×10～9CFU/kg)、丁酸梭菌高剂量组(5×10～9CFU/kg),每组3个重复,每个重复11只肉鸡,共有198只1日龄胡须一号肉鸡。对1日龄肉鸡进行随机分组并记录体重,在10-13日龄每天连续灌胃1 m L产气荚膜梭菌(5×10～9CFU/m L)一次,于第14日龄、28日龄、42日龄进行采样。采样记录每组鸡重量、日粮采食量、处死鸡重量、剖检处死鸡、无菌厌氧采集空肠和盲肠肠段5 cm以上、观察十二指肠肠道病变、记录脾脏重量、法氏囊重量;对无菌厌氧采集的144个空肠和盲肠肠段进行高通量测序并运用18种不同的培养条件对36个空肠和盲肠肠道内容物进行培养。试验结果如下:(1)丁酸梭菌对患鸡生长性能、免疫器官指数和肠道损伤的影响:丁酸梭菌中剂量组肉鸡的料重比在14日龄显著低于空白组、抗生素组和模型组,在28日龄、42日龄与抗生素组28日龄、42日龄料重比持平并显著低于空白组和模型组;丁酸梭菌中剂量组脾脏器官指数和法氏囊器官指数与抗生素组没有显著性差异,且略高于模型组;并且丁酸梭菌中剂量组14日龄、28日龄肉鸡的肠道损伤程度与空白组14日龄、28日龄没有显著差异,且显著低于模型组和抗生素组同日龄时期。(2)高通量测序分析丁酸梭菌对肉鸡空肠、盲肠肠道菌群影响:1×10～9CFU/kg丁酸梭菌添加量可以有效抵御产气荚膜梭菌对空肠菌落丰富度和微生物多样性造成的影响,维持空肠的菌落丰富度和微生物多样性在正常水平,从而在一定程度上避免鸡坏死性肠炎的发生;可以有效提高盲肠菌落丰富度和微生物多样性,并维持盲肠的菌落丰富度和微生物多样性在较高水平,从而提升肉鸡的生产性能和胴体性状。(3)高通量测序预测肠道微生物功能:1×10～9CFU/kg丁酸梭菌添加显著提高了47个空肠肠道菌群功能,如:丁酸代谢、脂肪酸代谢、淀粉和蔗糖代谢、乙醛酸盐和二羧酸盐代谢、甘油酯代谢、TCA循环、脂肪酸代谢等,从而帮助肉鸡抵御产气荚膜梭菌所带来的影响;显著提高了29个盲肠肠道菌群功能如:丁酸代谢、苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的生物合成、药物代谢等。(4)培养组学获得肉鸡空肠和盲肠肠道菌群:有氧条件培养获得空肠菌株608株、盲肠菌株4194株,厌氧条件培养获得空肠菌株1318株、盲肠菌株7001株;发现了此前未被培养过(相似度<98%)的菌种27种,其中含有多种具有替抗潜能的益生菌,如:唾液乳杆菌、罗伊乳杆菌、敏捷乳杆菌、双歧杆菌等,并且有2株双歧杆菌相似度为78.53%和90.5%。在有氧培养中哥伦比亚血琼脂、脑心浸出液培养基、R2A培养基获得的菌株数目最多;在厌氧培养条件脑心浸出液培养基、MRS培养基、哥伦比亚血琼脂、Wilkins-Chalgren琼脂获得的菌株数目最多。结论:在肉鸡日粮添加1×10～9CFU/kg的丁酸梭菌可以显著提高坏死性肠炎患鸡的生产性能和免疫器官指数,减少患鸡的肠道损伤程度,对坏死性肠炎的预防效果较好,并且通过培养组学方法对肉鸡空肠和盲肠内容物进行培养,获得的菌株不仅丰富目前已知的微生物菌群库,还发现不少此前未被培养过的具有替抗潜力的益生菌。综上,推荐使用1×10～9CFU/kg丁酸梭菌日粮预防鸡坏死性肠炎的发生和提高肉鸡的生产性能。

关键词：丁酸梭菌坏死性肠炎肠道菌群益生菌

GnIH在鸡生殖发育及繁殖活动中的调控机制研究

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GnIH在鸡生殖发育及繁殖活动中的调控机制研究

作者：李家侨仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

促性腺激素抑制激素（GnIH）是下丘脑分泌的一种多肽类激素，能直接或间接通过GnRH抑制垂体促性腺激素的分泌成为抑制禽（鸟）类繁殖活性的关键因素，是目前生殖生物学领域研究的热点。本研究以粤黄鸡为研究对象，研究了GnIH在鸡生殖发... 详细信息

促性腺激素抑制激素（GnIH）是下丘脑分泌的一种多肽类激素，能直接或间接通过GnRH抑制垂体促性腺激素的分泌成为抑制禽（鸟）类繁殖活性的关键因素，是目前生殖生物学领域研究的热点。本研究以粤黄鸡为研究对象，研究了GnIH在鸡生殖发育和繁殖活动中的调控机制：试验一选60只健康公鸡随机平均分成免疫组和对照组，试验期为60-200日龄，分别在60、80和100日龄对公鸡主动免疫GnIH乳化剂（0.5mg/只）;在60、90、120、150和200日龄检查睾丸发育情况，并检测下丘脑GnRH、GnIH、VIP和垂体PRL和LH的基因表达水平，60、80、90、100、120、150、200日龄检测血液中LH和T的浓度;经训练后，从185日龄到200日龄，每隔3d检测一次公鸡的精液品质。结果显示，在公鸡60-120日龄的生殖发育过程中，主动免疫GnIH能一定程度抑制睾丸发育，升高血液T水平和GnIH mRNA水平，降低LH mRNA水平，对GnRH、VIP和PRL的mRNA水平无显著影响，血液LH则无法检测到。性成熟后，免疫组公鸡睾丸重量和体积继续增长，对照组的则下降;免疫组的精液体积虽比对照组少，但精子活力和密度均高于对照组;对照组的血液T水平升至高于免疫组，LH水平也高于免疫组;对照组的GnIHmRNA水平升至高于免疫组，LH mRNA水平下降至与免疫组相当，对GnRH、VIP和PRL的mRNA水平仍无显著影响。试验二选择190日龄的健康成年公鸡18只平均分成3组，第1组（P组）仅在d1给予30%PVP-K30溶解GnIH（1mg/只），第2组（G组）分别在d1、d4和d7给予生理盐水溶解GnIH（1mg/只），第3组（D组）用等量生理盐水。在d1、d4、d7和d10检测血液中LH和T的浓度和精液品质，并于d10检查睾丸发育情况和检测下丘脑GnRH、GnIH、VIP和垂体PRL和LH的基因表达水平。结果显示，给予公鸡外源性GnIH能明显抑制睾丸发育，降低血液中LH和T浓度和降低精液品质，包括精液体积、精子密度和精子活力;在不同的外源性GnIH给予方式上，G组的睾丸大小和体积明显大于P组，P组的精液体积和密度虽然略高于G组，但精子活力明显低于G组，血液LH和T的浓度在两组中无显著差异。在基因表达方面，外源性GnIH能一定程度提高GnRH和GnIH mRNA水平，降低VIP、LH和PRL mRNA水平。试验三选择190日龄的健康成年母鸡18只平均分成P组、G组和D组，实验方案同试验二。结果显示，给予母鸡外源性GnIH能明显抑制产蛋性能，使卵泡的发育受到抑制，D组的LWF数少于另外两组，LYF数高于G组和少于P组，SYF数则高于另外两组;D组的血液P4水平高于另外两组，血液E2和LH水平则在三组中无显著差异;在基因表达方面，外源性GnIH处理一定程度降低了GnIH、VIP和PRL mRNA水平，对GnRH和LH mRNA水平则无显著影响。

关键词：促性腺激素抑制激素鸡生殖发育繁殖活动调控机制

GnIH在笼养抑制种公鹅繁殖性能中的作用机制研究

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GnIH在笼养抑制种公鹅繁殖性能中的作用机制研究

作者：劳永聪仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

应激对动物的生长发育和繁殖性能存在不利的影响。笼养应激抑制种鹅繁殖。促性腺激素抑制激素（gonadotropin inhibiting hormone,GnIH）可以通过作用于促性腺激素释放激素（gonadotropin releasing hormone,GnRH）和腺垂体,从而降低促... 详细信息

应激对动物的生长发育和繁殖性能存在不利的影响。笼养应激抑制种鹅繁殖。促性腺激素抑制激素（gonadotropin inhibiting hormone,GnIH）可以通过作用于促性腺激素释放激素（gonadotropin releasing hormone,GnRH）和腺垂体,从而降低促性腺激素的合成与分泌来抑制种鹅繁殖。笼养应激与GnIH的作用结果相似,这说明GnIH在笼养抑制种鹅繁殖性能中可能存在协同作用。实验一研究采用笼养与平养两种模式饲养种公鹅,比较两种模式下种公鹅繁殖性能的差异,重点研究GnIH在笼养抑制种公鹅繁殖性能中的作用机制。结果显示:与平养组相比,笼养组肝脏（P?0.05）和脾脏（P?0.05）重量下降,且肝脏和脾脏组织均受到不同程度的损伤,睾丸的体积变小（P?0.05）。笼养组球蛋白（GLB）显著升高（P＜0.05）;白蛋白（ALB）、超氧化歧化酶（SOD）、甘油三酯（TG）和碱性磷酸酶（AKP）显著降低（P＜0.05）。血清激素水平检测发现,笼养组中促肾上腺皮质激素（adrenocorticotropic hormone,ACTH）、睾酮（testosterone,T）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone,FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone,LH）和激活素（activin,ACT）含量均上升（P＜0.05）。荧光定量检测发现笼养组的睾丸GnIH表达显著上升（P?0.05）。结果表明,笼养能够抑制种公鹅的繁殖性能,可能通过GnIH介导应激抑制种公鹅的繁殖。实验二研究建立了睾丸间质细胞的体外培养方法,并通过在间质细胞中过表达GnIH（分别添加GnIH过表达质粒和不同浓度的外源性GnIH）,研究GnIH对其激素分泌与基因表达的影响。结果显示:GnIH过表达质粒和外源性GnIH都能极显著降低细胞T的分泌（P＜0.01）,升高细胞孕酮（progestrone,P4）、ACT和INH的分泌（P＜0.01）,且一致性很高。与空载体相比,GnIH过表达组GnIH及其受体的表达均下调（P＜0.01）,3β-羟基类固醇脱氢酶（3beta-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD）和CYP17A1也显著下调（P＜0.05）;细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶（CYP11A1、CYP19A1）、激活素Ⅱα型受体（activin receptorⅡα,ActRⅡα）、激活素Ⅱβ型受体（activin receptorⅡα,ActRⅡβ）、抑制素βA型（inhibinβA,INHβA）和抑制素βB型（inhibinβB,INHβB）水平升高（P＜0.01）。而200 ng/mL的GnIH极显著下调了GnIH及其受体的表达（P＜0.01）。结果表明,外源性的GnIH和机体自身的GnIH对间质细胞的作用有所不同,具体机制还需进一步研究。本研究表明,笼养能够抑制种公鹅的繁殖性能,且GnIH能够介导应激来对种公鹅繁殖性能产生影响;GnIH过表达和外源性GnIH都能显著抑制间质细胞睾酮的分泌。

关键词：种公鹅笼养 GnIH 繁殖性能

OPN5通过TSH-DIO2/DIO3通路介导光周期对山麻鸭繁殖调控机理的研究

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OPN5通过TSH-DIO2/DIO3通路介导光周期对山麻鸭繁殖调控机理的研究

作者：刘付穗仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

鸟类繁殖的神经内分泌变化是由光周期改变所造成的结果,受下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的调节。OPN5作为光感受器参与光信号传导,光照可通过OPN5的介导来调控TSHβ的分泌,再反馈到HPG轴引起相应激素的释放或抑制,进而参与调控动物性腺发育... 详细信息

鸟类繁殖的神经内分泌变化是由光周期改变所造成的结果,受下丘脑-垂体-性腺(HPG)轴的调节。OPN5作为光感受器参与光信号传导,光照可通过OPN5的介导来调控TSHβ的分泌,再反馈到HPG轴引起相应激素的释放或抑制,进而参与调控动物性腺发育以及动物的繁殖调控过程。但是,目前OPN5调控TSHDIO2/DIO3通路的机制仍不清楚;且TSH-DIO2/DIO3通路与HPG轴之间的具体作用也需要进一步深入研究。本研究以山麻鸭为研究对象,预期将揭示OPN5在不同光照时间处理下的表达规律及生殖内分泌的调控机制,并验证主动免疫OPN5对蛋鸭繁殖活动的调控作用。以期揭示OPN5介导光照在蛋鸭繁殖过程中的调控机理,阐明OPN5与光照、繁殖的作用关系,为禽类繁殖研究提供科学依据。试验一:光周期是影响鸟类季节性繁殖行为的重要环境因素。鸟类通过脑深部光感受器(DBPs)将光周期信息转化为神经内分泌信号。OPN5被认为是参与鸟类季节性繁殖调控的DBPs之一。然而,关于OPN5对非季节性繁殖鸟类的影响知之甚少。因此,OPN5是否通过TSH-DIO2/DIO3通路介导不同光周期来调节非季节性繁殖鸟类卵泡发育仍然未知。山麻鸭作为非季节性繁殖鸟类,将120只山麻鸭随机分为三组,分别在不同的光周期下处理:S组(8 L:16 D)、C组(17 L:7 D)和L组(24 L:0 D)。三组鸭均为笼养、自由饮水和限饲(150g/只/天),并于d 0、d 5、d 8、d 20和d 35被采集样品(n=8)。24 h长光照条件下蛋鸭产蛋率最高,料蛋比最低,而8 h短光照下的蛋鸭产蛋率最低,料蛋比最高。24 h长光照条件下的蛋鸭卵巢指数和血清中的Gn RH、LH、E2、P4和PRL水平显著增加(P<0.05);8 h短光照条件下蛋鸭血清中的T水平增加。与8 h光照时间相比,17 h和24 h光照时间在d 35显著升高了长光照下丘脑中OPN5m RNA水平和蛋白表达水平(P<0.05)。Gn RH、TRH、TSHβ、DIO2、THRB、VIP、PRL的基因或蛋白表达规律与OPN5一致,呈正相关关系,而Gn IH和DIO3的基因或蛋白表达规律与OPN5呈反相关关系。结果表明,OPN5可通过TSHDIO2/DIO3通路介导光照参与调控蛋鸭卵泡发育,OPN5的表达量随光照时间的延长而增加,进而调控HPG轴来促进山麻鸭的卵泡发育。试验二:主动免疫OPN5对山麻鸭卵泡发育的影响及分子机制研究。试验一发现OPN5可介导光照调控蛋鸭卵泡发育,本研究通过主动免疫OPN5胞外区进一步验证OPN5对山麻鸭卵泡发育的影响,并探究OPN5介导光周期对鸭繁殖活性的具体调控机制。试验将120只山麻鸭随机分为三组,分别进行不同的处理:免疫OPN5组分别在d 0、d 15、d 30、d 40接种含OPN5蛋白的疫苗1 m L/只(以此含1、1、0.5、0.5 mg的OPN5-KLH蛋白),对照组(CS组和CL组)在相同时间注射同等剂量的未含OPN5的空白疫苗。CS组(900 lux)、OPN5组(600lux)、CL组(600 lux),分别在12 L:12 D光周期内持续40天;随后三组光照强度不变,延长CL组光照时间,即CS组、CL组和OPN5组分别接受12 L:12D、17 L:7 D和12 L:12 D光照处理33天。三组鸭均为笼养、自由饮水和限饲(150g/只/天),在d 40、d 62和d 73收集鸭血清和组织样品(n=12)。结果发现,OPN5组的蛋鸭产蛋率最高,料蛋比最低,而CL组的蛋鸭从d 0到d 40,产蛋率最低,料蛋比最高。OPN5组可提高蛋鸭的卵巢指数,免疫OPN5组和CL组(延长光照)都可以增加颗粒层的厚度,促进E2、P4、LH和PRL激素的分泌。与CS组相比,CL组和OPN5组在d 62天和d 73增加了下丘脑中OPN5m RNA和蛋白表达(P<0.05)。Gn RH、TRH、TSHβ、DIO2、THRβ、VIP和PRL的基因或蛋白表达规律与OPN5的呈正相关,而Gn IH和DIO3的基因表达规律与OPN5的呈负相关。结果显示,主动免疫OPN5可促进山麻鸭体内OPN5的表达,上调TSHβ、DIO2表达,进而调控HPG轴相关基因来促进山麻鸭卵泡的发育;另外,延长光照或增强光照强度也可促进OPN5的表达,促进卵泡发育,但效果不如主动免疫OPN5组显著。

关键词： OPN5 TSH-DIO2/DIO3通路光周期光照强度卵泡发育山麻鸭