检索结果-南通市图书馆

作者：常燕琴东北大学

学位级别：硕士

介孔碳纳米材料具有大的比表面积、有序可调的孔径、稳定的机械强度、良好的化学惰性和生物相容性等性能,可作为有效的药物传输载体,引起了人们的广泛关注。本论文通过软模板法合成了介孔碳球（MCNs）,用聚丙烯酸（PAA）壳层包封,负载... 详细信息

介孔碳纳米材料具有大的比表面积、有序可调的孔径、稳定的机械强度、良好的化学惰性和生物相容性等性能,可作为有效的药物传输载体,引起了人们的广泛关注。本论文通过软模板法合成了介孔碳球（MCNs）,用聚丙烯酸（PAA）壳层包封,负载盐酸阿霉素（DOX）之后,聚乙烯亚胺（PEI）覆盖在其表面以阻止DOX的泄露,随后固定MUC1适配体（Apt）以提供特异性识别癌细胞的能力,从而构建了一个高选择性和高效率的多功能纳米载药体系Apt@DP-DOX-MCN。双聚合物壳层赋予纳米载药体系谷胱甘肽（GSH）和pH双刺激响应性,并确保了介孔孔道和中空结构中药物分子的可控释放。MUCl适配体提高了对目标病变位点的靶向选择性,同时降低了对正常组织的细胞毒性。通过扫描电镜（SEM）、透射电镜（TEM）、傅里叶变换红外光谱（FT-IR）、拉曼光谱等对Apt@DP-DOX-MCN材料进行表征,并从结构、形貌、表面官能团等方面对其进行了分析和讨论,证明了该纳米载药体系的成功构建。对纳米载药体系的药物负载率、药物释放动力学性能、细胞毒性、和靶向性能等进行了实验探究。实验结果表明DOX浓度为1000 μg mL-1时,药物负载率可以达到27.2%;在生理条件pH 7.4时,药物泄露率仅有1.94%;不同pH值和GSH浓度条件下的体外药物释放实验说明该载药体系具有pH和GSH双重刺激响应释放性能,且有较高的药物释放率（60%）。采用MTT 比色法、激光扫描共聚焦显微镜成像法和荧光检测法等方法研究了 Apt@DP-DOX-MCN材料与细胞的相互作用。细胞毒性、激光扫描共聚焦荧光成像图和荧光光谱图说明该纳米药物控释载体具有良好的生物相容性,可以特异性识别和治疗MUCl-阳性表达的人类肺癌细胞（A549）和乳腺癌细胞（MCF-7）。

关键词：介孔碳阿霉素双聚合物壳层适配体可控释放

人尿液外泌体的蛋白质组及糖基化蛋白质组鉴定研究

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人尿液外泌体的蛋白质组及糖基化蛋白质组鉴定研究

作者：陈俊杰东北大学

学位级别：硕士

外泌体(Exosomes)是目前研究最热门也是较为深入的一种囊泡。外泌体广泛存在于多种体液之中,包括血液、尿液、唾液、羊水、乳液等。外泌体较易获取,可以选择性地富集其标记蛋白以及RNA,从而使得外泌体成为了一种非常具有吸引力的非侵入... 详细信息

外泌体(Exosomes)是目前研究最热门也是较为深入的一种囊泡。外泌体广泛存在于多种体液之中,包括血液、尿液、唾液、羊水、乳液等。外泌体较易获取,可以选择性地富集其标记蛋白以及RNA,从而使得外泌体成为了一种非常具有吸引力的非侵入性疾病诊断手段。目前对外泌体的研究已经发现了多种疾病的生物标记物,对疾病的早期指导以及个体化治疗带来了新的希望。之前对尿液生物标记物的研究主要集中于尿液中的可溶性蛋白,尿液外泌体的发现和分离则将尿液生物标记物的研究推进了一个全新的研究阶段。但到目前为止,还没有统一的尿液外泌体分离方法,且尚未对尿液外泌体糖基化蛋白质组学的系统研究。本论文通过将基于超滤法分离尿液外泌体的方法与传统的尿液外泌体分离方法进行对比,体现了基于基于100 kDa超滤管提取尿液外泌体的优越性。并基于此方法,建立了稳定、高效的人尿液外泌体蛋白质糖基化分析策略,并对健康男女的尿液外泌体N-糖基化位点差异位点信息进行研究。本论文具体内容如下:第一章对外泌体,外泌体分离技术,尿液外泌体,蛋白质组学、N-糖基化修饰蛋白进行了简要综述。第二章通过对基于100 kDa超滤管分离尿液外泌体的方法与其它尿液外泌体分离方法包括试剂盒分离法、PEG6000沉淀分离法、PEG10000沉淀分离法进行评价。通过Western blot验证尿液外泌体自身标记物(TSG101,AQP2)的表达情况分析;通过TEM对尿液外泌体粒子的尺寸和形状进行分析;通过NTA测算和统计尿液外泌体的粒径分布范围;通过质谱鉴定技术对尿液外泌体蛋白质的表达谱进行鉴定分析;通过GO分析对尿液外泌体细胞成分进行分析。研究结果表明,通过超滤管法分离尿液外泌体是一种操作简便,经济有效,且可以处理大规模尿液样本的尿液外泌体分离方法。基于此分离方法成功从健康人尿液样本中分离富集到尿液外泌体,通过质谱鉴定共鉴定到1534个蛋白,并鉴定到ExoCarta数据库中100种外泌体标志蛋白质的97%。第三章基于100 kDa超滤管分离富集尿液外泌体蛋白,使用HILIC填料用于尿液外泌体N-糖基化蛋白的富集,并对健康男女的尿液外泌体N-糖基化位点的差异位点信息进行分析,建立了稳定、高效的人尿液外泌体蛋白质糖基化分析策略。该研究策略为:基于上述新方法分离出三男三女健康人尿液外泌体蛋白,对分离的尿液外泌体蛋白进行FASP酶切,然后使用HILIC填料用于尿液外泌体N-糖基化蛋白的富集。在该策略下,成功从健康男性尿液外泌体蛋白中鉴定到982个糖基化蛋白,从健康女性尿液外泌体蛋白中鉴定到1 189个糖基化蛋白,富集效率为78%。并通过火山图分析和热图分析对尿液外泌体N-糖基化蛋白数据的分析,从而得出健康男女的尿液外泌N-糖基化位点的差异位点信息。

关键词：尿液外泌体 N-糖基化蛋白蛋白质组学质谱鉴定

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金纳米簇的制备及其对汞离子检测的应用

金纳米簇的制备及其对汞离子检测的应用

作者：杨健宇东北大学

学位级别：硕士

金纳米簇(Au NCs)的直径通常低于3 nm,由几个到几十个金原子组成。与其他光学探针相比,它具有独特的光学特性,且具有毒性低、光稳定性好、水溶性好和生物相容性好等优点。因此,这种新型的荧光探针引起了研究者们的广泛兴趣。在本论文中... 详细信息

金纳米簇(Au NCs)的直径通常低于3 nm,由几个到几十个金原子组成。与其他光学探针相比,它具有独特的光学特性,且具有毒性低、光稳定性好、水溶性好和生物相容性好等优点。因此,这种新型的荧光探针引起了研究者们的广泛兴趣。在本论文中,我们以叶酸为模板,通过微波辅助法快速地制备了水溶性的金纳米簇,并以其作为荧光探针,实现了汞离子的快速灵敏检测。具体内容如下:第一章简要综述了金纳米簇的性质、制备方法及其在传感、成像等领域的应用进展。第二章详细说明了微波辅助法制备叶酸包裹的金纳米簇(FA-Au NCs)的步骤,并对产物进行了表征。本实验以氯金酸为前驱体,叶酸为配体,硼氢化钠为还原剂,微波加热90 s制备了 FA-Au NCs。随后利用G-25葡聚糖凝胶对FA-Au NCs进行纯化,得到了绝对量子产率为27.2%的FA-Au NCs。采用傅里叶红外光谱(FT-IR)和Zeta电位分析仪对金纳米簇进行表征,证实了叶酸与金纳米簇通过Au-N共价键成功地结合在一起,且金簇的表面带有负电荷;透射电镜(TEM)结果表明所制备的FA-Au NCs分布均匀,是规则的球形颗粒,粒径大小为2.45 nm;X射线光电子能谱(XPS)结果显示FA-Au NCs含有金、碳、氮和氧四种元素,金纳米簇中同时存在Au+和Au0。第三章系统地探讨了 FA-Au NCs的光学性质,并将其应用于Hg2+的传感。FA-Au NCs的最大激发波长和最大发射波长分别为280 nm和445 nm,随激发波长的红移,最大发射波长基本不变,但荧光强度明显下降。紫外光谱表明制备的FA-Au NCs的粒径较小。此外,还考察了 FA-Au NCs的荧光稳定性,发现在pH 3-12范围内和离子强度高达0.3 mol L-1 NaCl以及氙灯照射2 h条件下,FA-Au NCs的荧光强度均保持相对稳定。基于Hg2+对FA-Au NCs的荧光猝灭作用,建立了一种快速灵敏的Hg2+传感分析方法,线性范围为0.1-5 μmol L-1。检出限为37 nmol L-1(3σ/k,n=11)。利用该荧光探针对湖水和雪水中的汞离子进行了分析测定和加标回收,结果令人满意,证明该方法具有一定的实用性。

关键词：金纳米簇叶酸汞离子微波荧光猝灭

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纳米3D石墨烯包裹氧化镧去除水体中磷酸盐

纳米3D石墨烯包裹氧化镧去除水体中磷酸盐

作者：霍春宝东北大学

学位级别：硕士

氧化石墨烯具有较大的比表面积和丰富的官能团,是一种具有优异的功能化性能,并有较好发展前景的碳纳米材料,氧化石墨烯近年来逐渐成为人们的研究热点。近年来,利用氧化石墨烯和金属氧化物制备而成的一系列三维材料走入人们的视线,通过... 详细信息

氧化石墨烯具有较大的比表面积和丰富的官能团,是一种具有优异的功能化性能,并有较好发展前景的碳纳米材料,氧化石墨烯近年来逐渐成为人们的研究热点。近年来,利用氧化石墨烯和金属氧化物制备而成的一系列三维材料走入人们的视线,通过这种方法氧化石墨烯的比表面积可进一步增大,为金属阳离子提供了更多的着位点,利用这种方法能制备出性能优异的电极材料。然而,还没有人利用石墨烯包裹金属氧化物纳米粒子合成的材料对水体中的污染物进行去除进行研究。本论文利用Hummers法合成的氧化石墨烯和3-氨基丙基三甲氧基硅烷修饰的氧化镧纳米粒子机械搅拌结合,离心处理后,将沉淀物在180℃C水热反应12 h后冷冻干燥处理,制备出了一种新型的3D graphene-La203复合材料,之后利用SEM、FT-IR、XRD等手段对材料进行了表征,在石墨烯表面附着丰富的氧化镧纳米粒子,可为磷酸根的去除提供极大的便利。对得到的纳米材料的应用性能进行了全面的研究后发现,当磷酸盐的浓度低于35 mg ·L-1时,投入材料5 min后即可将磷酸盐去除,当磷酸盐的浓度为142 mg L-1时,投入材料25 min后可将磷酸盐去除。材料对磷酸盐的吸附过程符合朗格缪尔吸附模型和准二级动力学吸附模型,得到的最大吸附容量为82.6 mg g-1,与实际测得吸附容量值相一致。同时也对去除磷酸盐过程中干扰离子的影响进行了全面研究,结果表明Cl-、NO3-、S042-和其他水中干扰离子对去除性能基本没有影响。通过对该新型三维材料对水体中磷酸盐去除的性能的全面研究,结果表明该材料能够对水体中磷酸盐进行快速有效的进行去除。

关键词：石墨烯磷酸盐去除氧化镧三维材料

基于激光剥蚀电感耦合等离子体质谱技术测定细胞中的铬

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基于激光剥蚀电感耦合等离子体质谱技术测定细胞中的铬

作者：周静静东北大学

学位级别：硕士

铬元素在生命体系中发挥着不可替代的作用,铬的过量或缺乏都会造成生命体内疾病的发生。生命体系中金属铬的探究有利于揭示其在生物体中的功能,研究其在生理或病理中的作用。本研究首先建立了基体匹配外标法-激光剥蚀电感耦合等离子体质... 详细信息

铬元素在生命体系中发挥着不可替代的作用,铬的过量或缺乏都会造成生命体内疾病的发生。生命体系中金属铬的探究有利于揭示其在生物体中的功能,研究其在生理或病理中的作用。本研究首先建立了基体匹配外标法-激光剥蚀电感耦合等离子体质谱(MES-LA-ICP-MS)用于定量凝胶中铬含量的方法。首先用12%丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液与一定量的重铬酸钾溶液混合,制备了一系列基体匹配标准品,并对该方法进行了评估。该方法的相对标准偏差小于16%(n=300),LA-ICP-MS定量校正曲线相关系数为0.9805,方法和仪器的检出限分别为2.22 μg g-1和2.72 μg g-1。实验探究了激光光斑尺寸在2-10μm范围内,信号强度随光斑尺寸和标准品中铬含量的增加而产生规律性的变化,用4 μm的光斑尺寸对凝胶样品进行剥蚀,其LA-ICP-MS成像图与凝胶形貌图吻合。为了更好地了解细胞内金属铬的转运和与蛋白质的结合能力,实验以乳腺癌(MCF-7)细胞为体外细胞模型,采用高通量的金属组学分析方法测定细胞中的金属铬。先用MTT法探究铬对MCF-7细胞增殖活性的影响,以确定Cr(Ⅵ)孵育MCF-7细胞的适宜浓度。通过冰浴振荡法提取铬孵育MCF-7细胞后的全蛋白,并采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法(变性和非变性电泳法)分离。电泳凝胶用考马斯亮蓝G250染色,氯化钠溶液脱色结束后将其制成干胶,最后采用LA-ICP-MS分别对两种电泳方法得到的电泳条带进行线扫描分析,在变性电泳条带中检测到一个含铬蛋白质条带,在非变性电泳条带中检测到两个含铬蛋白质条带。最后实验利用LA-ICP-MS分析技术对单个细胞中的铬元素进行测定与细胞元素成像。

关键词：基体匹配外标法铬激光剥蚀电感耦合等离子体质谱凝胶电泳

金属硫蛋白修饰的碳量子点复合材料选择性去除水体中镉

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金属硫蛋白修饰的碳量子点复合材料选择性去除水体中镉

作者：李铁坤东北大学

学位级别：硕士

镉(Cd)是一种剧毒的重金属元素,在自然界中过量的积蓄会对环境造成严重污染,并威胁着人类健康。因此,自然界水体中镉的去除对环境以及人类健康具有重要意义。金属硫蛋白(MTs)是一类广泛存在于生物体内的富含半胱氨酸的低分子量金属结合... 详细信息

镉(Cd)是一种剧毒的重金属元素,在自然界中过量的积蓄会对环境造成严重污染,并威胁着人类健康。因此,自然界水体中镉的去除对环境以及人类健康具有重要意义。金属硫蛋白(MTs)是一类广泛存在于生物体内的富含半胱氨酸的低分子量金属结合蛋白,它对于某些重金属具有特异性结合作用,可用于对重金属的富集、去除和回收。碳量子点作为一种性能优异的新型碳纳米材料,因其纳米级别的尺寸、稳定的机械性能和化学性能以及环境友好无毒害等特点,近年来逐渐成为人们的研究热点。利用金属硫蛋白和碳量子点制备而成的固相复合材料,为固相吸附提供了更大的比表面积,同时具有良好的吸附选择性。目前,关于碳量子点固载的金属硫蛋白复合材料应用于水体中重金属污染物去除的研究还未有报道。本文以柠檬酸为碳源与硅胶混合高温灼烧,一步法制备得到固载在硅胶微球上的碳量子点,再通过酰胺反应修饰金属硫蛋白,得到碳点固载的金属硫蛋白固相复合材料MT@C-dots@SiO2,并对该材料进行了红外(FT-IR)、扫描电子显微镜(SEM)、热重(TGA)等表征。金属硫蛋白(MTs)固载量为823μg g-1。对得到的MT@C-dots@SiO2复合材料的应用性能进行了全面的考察,结果表明,在pH 5.0-9.0之间材料对Cd2+均有较高的吸附效率,静态吸附遵循Langmuir吸附模型,其吸附动力学符合准二级动力学模型。材料静态吸附容量为303 μgg-1,动态吸附容量为233μg g-1,与未经修饰的二氧化硅相比,静态和动态吸附容量分别是其2倍和2.4倍。另外考察了水体中常见干扰离子对材料吸附过程的影响,结果表明常见金属离子对Cd2+去除效率基本没有干扰。通过对该新型复合材料去除水体中镉离子的性能进行了全面考察,结果表明该材料能够实现对水体中镉高效、高选择性的吸附去除。

关键词：金属硫蛋白碳量子点镉重金属去除

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银纳米簇用于活性氧传感和抑菌的研究

银纳米簇用于活性氧传感和抑菌的研究

作者：文慧东北大学

学位级别：硕士

金属纳米簇是指由几个到几十个贵金属原子聚集而形成的纳米材料,具有超小的尺寸、良好的光电性能、稳定性和生物相容性等优点,是纳米探针的一种,在分析传感、催化、生物成像或标记等多领域有广泛的应用。其中具有良好稳定性和较高成本... 详细信息

金属纳米簇是指由几个到几十个贵金属原子聚集而形成的纳米材料,具有超小的尺寸、良好的光电性能、稳定性和生物相容性等优点,是纳米探针的一种,在分析传感、催化、生物成像或标记等多领域有广泛的应用。其中具有良好稳定性和较高成本效益的银纳米簇成为了分析传感领域的研究热点,而银又是一种天然的抗菌金属,因此银纳米簇在抗菌领域也具有良好的发展前景。本文通过合成水溶性荧光银纳米簇,建立了高灵敏度和选择性的活性氧传感方法;利用银纳米簇表面丰富的银离子,将其应用于杀菌领域,表现出良好的效果。论文的第一章介绍了活性氧的种类、检测方法;银纳米簇的合成、应用以及纳米银材料抗菌剂的发展现状。第二章,以聚甲基丙烯酸钠和聚乙烯吡咯烷酮为模板和保护剂,通过水热法一步合成了具有红光荧光的水溶性银纳米簇,其具有良好的稳定性。研究发现银纳米簇对常见的活性氧ClO-、1O2、·OH具有良好的选择性,可用于实际样品中的检测,检出限分别为0.44 μmol L-1、0.64 μmol L-1、0.52 μmol L-1,利用该方法评价了护肤品的抗氧化能力,并检测了实际水样中ClO-的浓度。第三章,合成的水溶性银纳米簇表面具有丰富的银离子,在杀菌领域具有良好的应用前景。分别以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的代表菌,当银纳米簇投入量为150 ngmL-1时,对大肠杆菌作用10 min就可以实现100%的杀菌效果,当投入量为500 ng mL-1时,对金黄色葡萄球菌作用20 min就可以实现100%的杀菌效果。并考察了银纳米簇对多种细胞的毒性,结果表明银纳米簇对细胞没有毒性,因此银纳米簇可以作为一种新型抗菌纳米材料应用于细胞内的杀菌。

关键词：银纳米簇水溶性荧光活性氧抗菌剂

石墨炉原子吸收光谱法直接测定单细胞中镉的含量

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石墨炉原子吸收光谱法直接测定单细胞中镉的含量

作者：杨萌东北大学

学位级别：硕士

细胞作为生命活动的基本单位,是组成生命的基础,是生命体储存营养物质的场所和新陈代谢主体,也是生命的判定依据和生命体物质交换的单位,具有存储生命遗传物质的能力。因此建立一种准确、高敏度、快速地检测细胞中金属离子含量的分析方... 详细信息

细胞作为生命活动的基本单位,是组成生命的基础,是生命体储存营养物质的场所和新陈代谢主体,也是生命的判定依据和生命体物质交换的单位,具有存储生命遗传物质的能力。因此建立一种准确、高敏度、快速地检测细胞中金属离子含量的分析方法是了解群体细胞行为的关键。然而传统的分析方法都是基于对大量的群体细胞中的金属含量的测定,而细胞即使是同一类细胞也具有异质性,因此基于传统的分析方法会掩盖细胞之间具有的某些差异,而单细胞分析的开发显得尤为重要。因此本文先建立了一个直接测群体细胞中金属含量的分析方法,再设计了一个单细胞捕获的微流控芯片将细胞捕获,最后将捕获的单细胞用上述分析方法直接检测得到单细胞中金属含量。本文第一章简要的介绍了镉的来源与危害、细胞内重金属元素的检测方法以及介绍了对单细胞的分析与分离。本文第二章介绍了以镉孵育的肝癌细胞(HepG2)为研究对象,对基体改进剂种类、细胞数密度以及石墨炉原子吸收光谱仪条件等相关参数进行了研究讨论,在此基础上建立了石墨炉原子吸收光谱直接定量细胞中镉含量的方法。该分析方法的最低检出限为1.8 ng/L,其中相对标准偏差的值为0.06%(n=9),可用于直接测定几百个(约400)细胞中的镉本方法还可以用于人全血样品中镉的直接测定,血液样品体积仅需10μL(血细胞约107个),加标回收法验证了方法的准确性,回收率在90%-107%之间。此检测方法灵敏度高、操作简便且样品用量少,为生命样品中痕量重金属元素的测定提供很好的应用前景。本文第三章介绍了根据流体力学与细胞尺寸效应而设计的微流控芯片实现对单细胞的捕获与释放。通过软件COMSOL的模拟和HepG2细胞模型进行实验,发现微流控芯片能够按预期的流体力学行为实现对单细胞的高效捕获与释放。本文第四章介绍了采用自己设计的单细胞取样器,捕获单细胞并直接用于石墨炉原子吸收光谱的分析方法对镉孵育的肝癌细胞中的镉进行了定量分析。平行测定了 70个单个HepG2细胞中镉的含量,研究表明单个细胞中Cd含量在20至1500 fg之间。通过此方法测得单细胞中金属含量与测消解后单细胞含量比较具有很好的一致性,此方法的简单操作为单细胞分析开辟了一种新方法,有利于更好的研究单细胞的行为。

关键词：石墨炉原子吸收细胞微流控芯片细胞捕获/释放镉

不同亚型的金属硫蛋白的选择性分离富集痕量镉

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不同亚型的金属硫蛋白的选择性分离富集痕量镉

作者：马林玉东北大学

学位级别：硕士

金属硫蛋白(MTs)是一类广泛存在于生物体中富含半胱氨酸的低分子量金属结合蛋白,可特异性地结合某些重金属,并用于它们的富集、去除和回收。镉(Cd)是仅次于汞(Hg)、铅(Pb)之后污染环境、威胁人类健康的第三种剧毒的重金属,过量摄入或过... 详细信息

金属硫蛋白(MTs)是一类广泛存在于生物体中富含半胱氨酸的低分子量金属结合蛋白,可特异性地结合某些重金属,并用于它们的富集、去除和回收。镉(Cd)是仅次于汞(Hg)、铅(Pb)之后污染环境、威胁人类健康的第三种剧毒的重金属,过量摄入或过度接触都会严重危害人体和动物的健康。因此,发展痕量镉分离富集及检测方法对环境以及人类健康具有重要意义。本文将哺乳动物的金属硫蛋白(rMT,从兔肝中提取)和原核微生物的金属硫蛋白(SmtA,从重组蓝藻金属硫蛋白中分离)固定在球形二氧化硅颗粒表面,以评估其对Cd2+的吸附能力。结果表明,不同亚型的金属硫蛋白在pH 6.0-10.0之间对Cd2+均有较高的吸附效率,静态吸附遵循Langmuir吸附模型,其吸附动力学符合准二级动力学模型。从静态和动态吸附容量上看,固定化蓝藻金属硫蛋白(SmtA@SiO2)比固定化兔肝金属硫蛋白(rMT@Si02)具有更高的吸附性能。基于SmtA@SiO2对Cd2+优异的吸附性能,建立起固定化蓝藻金属硫蛋白填充柱在线分离富集石墨炉原子吸收法(GFAAS)测定Cd2+的方法。痕量Cd2+经填充柱富集后,用0.4%的硫脲(溶于0.1 mol L-1 HNO3溶液)定量洗脱,其浓度由GFAAS进行检测。在最佳实验条件下,进样体积和洗脱体积分别为1.0mL和50μL,本方法的检出限为1.4ngL-1,精密度为3.2%(n=7,50 ngL-1),线性范围为5-100ngL-1,富集倍数为13.8。为了验证本方法的准确性和可靠性,将本方法用于标准物质GBW08608(水中的痕量元素)中的痕量Cd2+的测定,测定值与标准值一致,证明了本方法准确可靠。此外,还对实际水样中的痕量Cd2+进行加标回收实验,结果令人满意。

关键词：金属硫蛋白硅胶分离富集镉原子吸收光谱法

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砷结合肽的生物淘选及其在砷传感中的应用

砷结合肽的生物淘选及其在砷传感中的应用

作者：张肖肖东北大学

学位级别：硕士

噬菌体随机肽库技术(Phage-Displayed Peptide Library)是一种用于淘选功能性多肽的强大工具,淘选到的多肽可以特异性结合某些重金属,并用于它们的传感检测。砷(As)是一种高度有毒的元素,广泛存在于人类生存环境之中,过度摄入或者长期... 详细信息

噬菌体随机肽库技术(Phage-Displayed Peptide Library)是一种用于淘选功能性多肽的强大工具,淘选到的多肽可以特异性结合某些重金属,并用于它们的传感检测。砷(As)是一种高度有毒的元素,广泛存在于人类生存环境之中,过度摄入或者长期接触都会严重威胁人类的健康。所以,建立痕量砷检测方法对环境及人类健康具有重大意义。本课题将噬菌体随机七肽库与负载不同金属离子的γ-Fe203-IDA亲和树脂柱进行联用,通过多轮负筛选和正筛选,去除对其他金属离子(Zn、Cd、Fe、Cu)有结合作用的噬菌体,进而筛选并富集到对As(ⅢI)具有较高亲和性的噬菌体。从亲砷噬菌体集合中随机挑取一定数量的噬菌体单克隆,通过DNA测序技术共得到5种As(Ⅲ)结合肽。随后,再将这五种As(Ⅲ)结合肽经过酶联免疫分析,从中选出一种对As(Ⅲ)具有高亲和力和选择性的多肽序列(TQSYKHG)。利用金纳米粒子比色方法,将该亲和性多肽作为目标识别元素,以未经修饰的金纳米粒子作为传感探针,从而建立了一种简单、快速,选择性地检测As(Ⅲ)的新方法。As(Ⅲ)结合肽(TQSYKHGC)可促进金纳米粒子的团聚,而As(Ⅲ)又可通过优先与八肽结合而阻止金纳米粒子的团聚,从而使体系外观呈现裸眼即可观察到的颜色变化,即由金纳米粒子原先的酒红色向蓝紫色发生不同程度的变化。通过体系颜色变化以及UV-Vis即可实现对As(Ⅲ)的检测。该方法具有较好的选择性及较快的响应速度,其检出限为0.0540μmol L-1,线性范围为 0.195-0.600 μmolL-1,精密度为:0.5%。

关键词： As(Ⅲ)亲和性多肽随机七肽库筛选砷纳米金比色法