检索结果-南通市图书馆

作者：徐天胜中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)为常用的有机溶剂之一,其具有高毒性,并且脂溶性很强,极易挥发到空气中,工人经呼吸道可迅速吸入高浓度的高毒性1,2-DCE。脑是1,2-DCE重要的作用靶器官,引起的临床中毒表现为中毒性脑病,... 详细信息

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)为常用的有机溶剂之一,其具有高毒性,并且脂溶性很强,极易挥发到空气中,工人经呼吸道可迅速吸入高浓度的高毒性1,2-DCE。脑是1,2-DCE重要的作用靶器官,引起的临床中毒表现为中毒性脑病,其主要的病理改变是脑水肿。1,2-DCE可经细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)代谢,生成中间代谢产物2-氯乙醇和氯乙醛,最终产生氯乙酸随尿液排出体外,在1,2-DCE代谢的过程中会产生大量活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS),大量的ROS会引起机体促氧化剂和抗氧化物质的不平衡,产生氧化损伤。最新研究资料表明,CYP2E1大部分表达于肝组织中但肝外组织如脑组织中也有CYP2E1表达。而1,2-DCE具有脂溶性,因此脑组织中的1,2-DCE可经CYP2E1代谢产生大量ROS,引起脑组织氧化损伤,对生物大分子,如脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)、膜脂质、蛋白质产生破坏。新近研究显示,当脑组织中大量ROS产生时,会使紧密连接蛋白的表达受到影响,使紧密连接受到破坏,使血脑屏障(blood brain barrier,BBB)的通透性增加,引起脑水肿。所以,本实验在1,2-DCE染毒前,通过体内实验给予脂溶性维生素E(vitamin E,VitE),研究维生素E对1,2-DCE引起的中毒性脑水肿的作用,为1,2-DCE防治提供实验基础和理论依据。研究方法:本研究将雌性SPF级小鼠适应性饲养后,采用随机法成6组,为溶剂对照组、VitE对照组、1,2-DCE单一染毒组及低剂量、中剂量和高剂量VitE染毒组。溶剂对照组和单染组的小鼠,每天灌胃给与0.2 ml玉米油;VitE对照组及低、中和高剂量干预组小鼠,每天灌胃分别给与200、50、100和200 mg/kg的VitE。将VitE溶于玉米油中。连续灌胃4 d后,单染组和各干预组的小鼠在每天灌胃后采取1,2-DCE染毒,其为浓度1.2 mg/L,静式染毒3.5 h,持续染毒3 d。于染毒次日取小鼠脑组织,检测脑含水量,检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(Catalase Assay Kit,CAT)活性,并且测其相关蛋白CYP2E1、Nrf2和HO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白和mRNA表达水平,病理切片观察脑组织病理改变。数据统计分析采用SPSS 20.0软件进行,其中检验水准为P<0.05。结果:1、与溶剂对照组相比,经HE染色法观察到1,2-DCE单染组的小鼠脑组织脑水肿病理改变明显,此外单染组小鼠的脑含水量、脑组织中MDA含量及、CYP2E1、Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达水平明显上升;而该小鼠的脑组织中GSH含量、SOD和CAT活性、Occludin蛋白和mRNA及Claudin-5蛋白表达水平明显下降(P<0.05)2、与单染组相比,各干预组小鼠的脑含水量、脑组织MDA含量、CYP2E1、Nrf2及HO-1蛋白和mRNA表达水平明显下降;而小鼠脑组织中各干预组GSH含量、Occludin蛋白和mRNA水平明显上升,中和高剂量干预组中SOD、CAT活性和Claudin-5蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。结论:1、1,2-DCE染毒浓度为1.2mg/L,每天染毒3.5 h,染毒三天可引起小鼠脑水肿。2、1,2-DCE染毒可使小鼠脑组织中CYP2E1的表达增强,从而引起小鼠脑组织氧化损伤,并降低Occludin和Claudin-5的表达,进而明显使脑组织中Nrf2和HO-1的表达增强,破坏紧密连接,引起脑水肿。3、VitE干预可降低1,2-DCE引起的氧化损伤,抑制CYP2E1的表达,降低脑组织中Nrf2和HO-1的表达和缓解对紧密连接蛋白的影响。

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星型胶质细胞和小胶质细胞间的信息交流在1,2-DCE中毒小鼠神经炎症及脑水肿形成中的作用研究

星型胶质细胞和小胶质细胞间的信息交流在1,2-DCE中毒小鼠神经炎...

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作者：杨金翰中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）是一种人工合成卤化烃,主要用作工业中聚氯乙烯的制造,但在亚急性暴露下可导致脑水肿。我们之前发现神经炎症可能与1,2-DCE中毒小鼠的脑内基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-... 详细信息

目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）是一种人工合成卤化烃,主要用作工业中聚氯乙烯的制造,但在亚急性暴露下可导致脑水肿。我们之前发现神经炎症可能与1,2-DCE中毒小鼠的脑内基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9,MMP-9）表达水平增高、血脑屏障（blood-brain-barrier,BBB）完整性破坏和脑水肿形成过程中关系密切。有研究证明,神经炎症与许多脑部疾病的发病机制相关。根据目前研究结果发现小胶质细胞和星形胶质细胞之间的信息交流是触发神经炎症的基础。小胶质细胞和星形胶质细胞在脑损伤期间形成自分泌反馈模式和双向信息交流,通过释放不同的信号分子,实现紧密的相互调节。因此,小胶质细胞-星形胶质细胞对话对于调节小胶质细胞表型和星形胶质细胞功能非常重要,并且是神经炎症反应程度和持续时间的决定因素。本研究在亚急性1,2-DCE中毒性脑水肿实验动物模型基础上,预先给予小胶质细胞活化抑制剂米诺环素、星形胶质细胞活化抑制剂氟代柠檬酸及抗氧化药物褪黑素处理,探究小胶质细胞活化在神经炎症发生中的作用,并且进一步探讨星形胶质细胞和小胶质细胞之间的分子对话在1,2-DCE诱导的脑水肿中的作用机制,为揭示1,2-DCE神经毒性提供相关实验数据。研究方法:采用静式吸入染毒的方式建立亚急性1,2-DCE中毒性脑水肿的小鼠动物模型。雌性小鼠（昆明种,白化）,3-4周龄,适应性喂养一周后随机分组。本实验分为四个部分,第一部分:研究亚急性1,2-DCE中毒对小鼠脑内小胶质细胞和星形胶质细胞活化以及神经炎症发生的影响,方法如下:小鼠随机分为对照组以及1,2-DCE染毒1-3d组,每组10只。以浓度为1.2 mg/L 1,2-DCE静式染毒1-3d,分别于末次染毒后的次日取脑。染毒期间监测小鼠中毒状态和体重改变;干湿重法测定脑含水量;分别检测小胶质细胞活化指标Iba-1、CD11b和Arg-1,流式细胞术分析小胶质细胞极化表型;星形胶质细胞活化指标GFAP和S100B;炎症介质相关指标TNF-α、IL-6、iNOS、VCAM-1、ICAM-1和MMP-9;ELISA法测定脑组织中成熟型TNF-α和IL-6蛋白表达以及TLR4、MyD88和p-p65通路的表达水平。实验第二至四部分:研究亚急性1,2-DCE中毒小鼠脑内小胶质细胞活化、星形胶质细胞活化以及氧化应激对神经炎症发生、BBB完整性破坏以及脑水肿的影响,方法如下:分别给予小胶质细胞活化抑制剂米诺环素、星形胶质细胞活化抑制剂氟代柠檬酸和抗氧化剂褪黑素预处理1,2-DCE中毒小鼠,测定小胶质细胞和星形胶质细胞活化抑制后脑内炎症介质、紧密连接蛋白以及信号通路蛋白表达水平,随机分为空白对照组、抑制剂组（米诺环素、氟代柠檬酸和褪黑素）、1,2-DCE单纯染毒组以及抑制剂（米诺环素、氟代柠檬酸和褪黑素）+1,2-DCE干预组,每组10只。分别通过腹腔注射和侧脑室注射方式给予抑制剂米诺环素、褪黑素和氟代柠檬酸。其中染毒组和干预组小鼠给予1.2 mg/L 1,2-DCE 3.5h/d,共3天。对照组和抑制剂组的小鼠在不接触1,2-DCE的情况下给予相同的处理。除Western blot法检测TJs蛋白表达水平外,其余检测指标同上。结果:一、亚急性1,2-DCE中毒对小鼠脑内小胶质细胞活化、神经炎症发生以及信号通路激活的影响1、1,2-DCE中毒对脑内小胶质细胞和星形胶质细胞活化的影响:与空白对照组相比,1,2-DCE染毒2 d和3 d组小鼠脑内Iba-1和CD11b蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。染毒1 d和2 d组小鼠脑内Arg-1蛋白表达水平显著升高,而染毒3 d组小鼠脑内Arg-1蛋白水平与染毒2 d组显著降低（P＜0.05）。流式细胞仪结果与蛋白表达结果一致。染毒3 d组小鼠脑内GFAP和S100B蛋白表达水平与对照组相比显著升高（P＜0.05）。对照组小鼠脑内GFAP荧光强度较弱,随着1,2-DCE染毒天数的增加,小鼠脑内GFAP荧光强度逐渐增强。2、1,2-DCE中毒对脑内炎症因子表达及TLR4/MyD88/NFκB信号通路激活的影响:与对照组相比,1,2-DCE染毒小鼠脑内促炎介质TNF-α、IL-6、iNOS、VCAM-1、ICAM-1和MMP-9蛋白表达显著升高（P＜0.05）。ELISA测定脑组织中成熟型TNF-α和IL-6表达与Western blot检测结果一致。1,2-DCE染毒小鼠脑内信号通路蛋白TLR4、MyD88和p-p65表达也显著高于对照组（P＜0.05）。以上结果表明,亚急性1,2-DCE中毒可刺激小胶质细胞促炎表型极化和星形胶质细胞活化并诱导神经炎症的发生。二、小胶质细胞活化在亚急性1,2-DCE中

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外源性Met对砷暴露小鼠体内砷甲基代谢和脑Glu及NO代谢影响的研究

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作者：钟媛中国医科大学

学位级别：硕士

前言地方性饮水型砷中毒是我国主要的地方病之一。水砷是人群砷暴露的主要摄入途径,饮水中的砷形态主要是无机砷(inorganic arsenic,iAs)。iAs进入体内后,经过二次氧化甲基化和二次的还原过程,最终被催化生成五价二甲基砷(Dimethylarsi... 详细信息

前言地方性饮水型砷中毒是我国主要的地方病之一。水砷是人群砷暴露的主要摄入途径,饮水中的砷形态主要是无机砷(inorganic arsenic,iAs)。iAs进入体内后,经过二次氧化甲基化和二次的还原过程,最终被催化生成五价二甲基砷(Dimethylarsinic acid,DMA)。S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)作为甲基供体,在砷的甲基化代谢中起重要作用,而蛋氨酸(Methionine,Met)在S-腺苷甲硫氨酸合酶的作用下可以被ATP激活生成SAM。谷氨酸(Glutamate,Glu)是中枢神经系统中兴奋性突触传递的主要神经递质,谷氨酰胺合成酶(Glutamine synthetase,GS)是Glu代谢的关键酶。一氧化氮(Nitricoxide,NO)是中枢神经系统中的重要信使分子和神经递质,由一氧化氮合酶(Nitricoxide synthase,NOS)催化L-精氨酸产生。我们前期的研究结果显示,亚慢性砷暴露可引起小鼠脑组织Glu和NO代谢的异常。本研究拟通过给予饮水砷暴露小鼠不同剂量的外源性Met,探讨Met对小鼠各组织器官中砷形态的影响,进而探讨Met对改善砷在不同组织中毒性作用的影响,为指导饮水型地方性砷中毒的防治工作提供实验依据。对象和方法 1、实验动物与染毒雌性健康昆明种小鼠40只,体重(25.0±2.0)克。适应性喂养一周后,将小鼠随机分为对照组(Con)、单纯染砷组(As)、低剂量蛋氨酸组(L-Met)、中剂量蛋氨酸组(M-Met)和高剂量蛋氨酸组(H-Met),每组8只。染毒期间各实验组小鼠以自由饮水方式饮用50mg/L亚砷酸钠溶液,对照组小鼠饮蒸馏水,染毒时间为4周。从染砷的第4周起同时腹腔内注射100mg/kg体重、200mg/kg体重或400mg/kg体重蛋氨酸溶液(用生理盐水配制),对照组和单纯染砷组腹腔注射生理盐水,共注射7天。末次注射后24h内处死小鼠,摘眼球取血,并快速取肝和脑组织,-40℃冰箱冷冻保存。 2、检测指标与方法 (1)血及肝/脑组织中不同砷形态测定:氢化物发生-超低温捕获-原子吸收分光光度法。 (2)谷氨酰胺合成酶活性测定:γ-谷氨酰转移酶的非生理学催化反应。 (3)谷氨酸含量测定:采用南京建成试剂盒测定。 (4)一氧化氮合酶活性测定:采用南京建成试剂盒测定。 (5)一氧化氮含量测定:采用南京建成试剂盒测定。 (6)组织蛋白含量测定:双缩脲法。 (7)血和肝组织中GSH含量测定:二硫双硝基苯甲酸(DTNB)法。 3、统计分析检测数据输入计算机,用SPSS13.0进行数据分析与处理。血和脑中各砷形态含量不呈正态分布,采用秩和检验(Kruskal-Wallis test),组间比较采用秩次代替原变量进行ANOVA及SNK参数分析。其它指标的统计分析采用ANOVA及SNK的参数分析。结果各染砷组小鼠肝、血和脑中iAs、MMA、DMA和TAs含量均显著高于对照组。与As组比较,给予Met的各组小鼠肝中iAs含量均显著下降,中、高剂量Met组的DMA含量显著升高;给予Met的各组小鼠血和脑中iAs、MMA、DMA和TAs含量均显著降低;各剂量Met组小鼠的肝和血中PMI和SMI均有升高,其中各剂量Met组小鼠肝中PMI与As组比较差异显著。与对照组比较,As组小鼠脑中GS、NOS活性和NO含量及血和肝中GSH含量均显著降低,脑中Glu含量显著升高。与As组比较,中、高剂量Met组小鼠脑中GS活性和NO含量显著升高;高剂量Met组小鼠脑中的Glu含量显著降低,NOS活性显著升高;高剂量Met组小鼠血中GSH含量显著升高;中、高剂量Met组小鼠肝中GSH含量显著升高。且均与对照组比较无显著差异。结论 1、外源性蛋氨酸可以促进肝中iAs的甲基化代谢,加速iAs转变成MMA和DMA。 2、外源性蛋氨酸通过促进iAs在肝中甲基化代谢过程,加速了体内砷的排泄,从而减少血中各砷形态的含量。 3、外源性蛋氨酸通过降低血中各砷形态的含量,减少了进入脑组织内各砷形态的含量,进而改善砷对脑组织Glu和NO代谢的影响。 4、外源性蛋氨酸通过其抗氧化作用,减轻了砷与GSH的结合,改善脑组织内的氧化应激状态。

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sGC-cGMP-PKG信号通路在外源性一氧化碳致PC12细胞毒性中的作用研究

sGC-cGMP-PKG信号通路在外源性一氧化碳致PC12细胞毒性中的作用研...

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作者：罗欣中国医科大学

学位级别：硕士

目的:一氧化碳(carbon monoxide,CO)是一种无色无味的窒息性气体,由含碳物质不完全燃烧产生。当人体吸入浓度超过0.05%的CO时就可发生中毒反应。急性CO中毒在生活环境和职业环境中都很常见,是严重危害劳动者身体健康的常见职业危害之一... 详细信息

目的:一氧化碳(carbon monoxide,CO)是一种无色无味的窒息性气体,由含碳物质不完全燃烧产生。当人体吸入浓度超过0.05%的CO时就可发生中毒反应。急性CO中毒在生活环境和职业环境中都很常见,是严重危害劳动者身体健康的常见职业危害之一,部分急性CO中毒患者苏醒后,经过2～60天的假愈期,会出现以痴呆、精神症状和锥体外系损伤症状为主的异常表现,称为急性一氧化碳中毒迟发性脑病(delayed encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning,DEACM P)。DEACMP的预后极差,患者即使经过高压氧治疗也会长期遗留认知和记忆功能障碍等后遗症。因此,如何防治DEACMP的发生是当前亟待解决的课题,本研究以PC12细胞模拟神经元为研究对象,通过探讨sGC-cGMP-PKG信号通路在CO诱导神经元兴奋性神经毒性中的作用,为揭示DEACMP的机制提供相关的实验参考数据。研究方法:以高分化的PC12细胞模拟神经元为研究对象,经不同浓度的CO暴露后,用MTS法检测细胞活力及细胞凋亡情况,确定合适的染毒浓度及染毒时间,经0、200、250、300μmol/L的CO暴露12 h后,收集细胞,检测PC12细胞内血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、可溶性鸟苷酸环化酶(soluble guanyla te cyclase,s GC)、c GMP依赖性蛋白激酶(protein kinase G,PKG)、甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)亚单位NR1、NR2A和NR2B、神经型一氧化碳合酶((neuronal nitric oxide synthase,n NOS)的蛋白表达,并检测P C12细胞内环鸟苷一磷酸(cyclic guanosine monophosphate,c GMP)、谷氨酸(gluta mate,Glu)、钙离子(calcium,Ca)浓度;用SGC抑制剂ODQ(5μmmol/L)预处理30 min后,再用300μmol/L CO暴露12 h,收集细胞。再次检测PC12细胞内s GC、PKG、NR2A、NR2B和n NOS的蛋白表达,以及胞内Glu、Ca浓度、c GM P含量和细胞凋亡率。结果:1、随着CO暴露浓度的增加,PC12细胞的活力呈剂量依赖性降低(P<0.05),细胞凋亡水平显著增高(P<0.05)。2、与对照组相比,250μmol/L和300μmol/L CO暴露组PC12细胞中HO-1、s GC、PKG、NR2A、NR2B和n NOS的蛋白表达水平、c GMP含量、Glu含量、Ca浓度均显著升高(P<0.05)。3、与单纯高浓度CO暴露组相比,ODQ预处理组的PC12细胞中Glu含量、NR2A和NR2B蛋白表达水平、Ca浓度及细胞凋亡水平显著降低(P<0.05)。结论:1、CO暴露可诱导PC12细胞内谷氨酸释放增多、钙离子超载、兴奋性毒性,进而导致细胞凋亡。2、sGC-cGMP-PKG信号通路在CO致PC12细胞兴奋性神经毒性的过程中发挥重要作用。

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2006-2016年期间辽宁省人间布鲁氏菌病流行病学特征分析及流行预测研究

2006-2016年期间辽宁省人间布鲁氏菌病流行病学特征分析及流行预...

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作者：王子江中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1.收集辽宁省2006-2016年人间布鲁氏菌病监测数据,从人群分布和时空分布的角度描述辽宁省人间布病的流行病学特征;2.结合数据的时间趋势和季节趋势,构建ARIMA模型,探讨其在预测辽宁省布病发病方面的应用效果。方法:1.收集辽宁省200... 详细信息

目的:1.收集辽宁省2006-2016年人间布鲁氏菌病监测数据,从人群分布和时空分布的角度描述辽宁省人间布病的流行病学特征;2.结合数据的时间趋势和季节趋势,构建ARIMA模型,探讨其在预测辽宁省布病发病方面的应用效果。方法:1.收集辽宁省2006-2016年人间布病监测资料,按照性别、年龄、职业、地区、年份进行分类整理,使用SPSS 20.0对监测数据进行分析和制图,描述辽宁省人间布病监测数据分布特征;2.通过SPSS 20.0建立ARIMA模型。步骤包括:序列平稳化、模型识别、参数估计和模型诊断、预测。以2012年1月-2016年12月辽宁省人间布病数据建立时间序列,短期预测2017年1-6月的发病情况,与实际报告发病数进行比较,探讨预测效果。结果:1.2006-2016年间辽宁省共报告人间布病15314例,其中报告数最多的年份是2015年,共2948例,病例主要集中在41-50岁和51-60岁年龄组,报告发病男性较多,男女比例约为3.17:1,农民是主要人群,占全部报告病例的78.5%,其次为家务及待业人群(含离退休人员),发病地区集中于葫芦岛、锦州、沈阳、阜新以及朝阳市,疫情较其它城市突出。病例主要集中于每年的3-7月份,2月和8月次之,春夏两季,存在明显的季节性。2.经过对数转换,一次差分和一次季节差分后的布病月发病数序列图趋于平稳,经过粗筛选得到4种备选模型,均为白噪声序列,通过比较贝叶斯准则(BIC)值,最终确定ARIMA(0,1,0)(1,1,0)为预测模型。应用该模型对辽宁省2012-2016年人间布病月发病报告数进行拟合预测,结果显示2017年1-6月的观测值和拟合值都在预测值的95%可信区间内,绝对误差和相对误差整体较小,预测效果良好,精确度较高。结论:1.辽宁省2006-2016年间人间布病发病率总体呈波动上升趋势,且存在季节性,每年的3-7月为发病高峰,半农半牧地区的农民为高危险人群;2.葫芦岛、锦州、沈阳、阜新和朝阳市是辽宁省人间布病发病的高危地区,对研究布病危险因素及干预措施有重要意义;***模型对存在时间和季节性趋势的人间布病的短期预测应用效果较好。

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砷对星形胶质细胞的毒性作用及其机制研究

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作者：赵凤红中国医科大学

学位级别：硕士

前言环境砷污染是一个严重的公共卫生问题,长期经口摄取无机砷化物可造成全身多系统的损伤,包括神经系统、心血管系统以及典型的皮肤损伤。目前,我国的高砷暴露人口达300万,是世界上受砷中毒危害最严重的国家之一。近年来,砷对中枢神经... 详细信息

前言环境砷污染是一个严重的公共卫生问题,长期经口摄取无机砷化物可造成全身多系统的损伤,包括神经系统、心血管系统以及典型的皮肤损伤。目前,我国的高砷暴露人口达300万,是世界上受砷中毒危害最严重的国家之一。近年来,砷对中枢神经系统的毒性作用引起了人们的广泛关注。儿童是环境砷暴露的易感人群,国内外流行病学调查均发现长期砷暴露可影响儿童的智力发育。动物实验研究也表明,砷具有一定的智力发育毒性。但长期砷暴露对中枢神经系统损伤的机制如何,尚无明确的结论。星形胶质细胞(Astrocyte, AC)是脑组织中数量最多的细胞群体,其功能不仅仅是支持、保护和营养神经元,它还参与突触间隙神经递质的清除与代谢、促进突触形成与维护突触的正常功能。AC还是血脑屏障的结构基础,故在血管和神经元之间形成了一个屏障,将神经元与外界环境隔离。因此,砷中毒时血液中的砷透过毛细血管后应首先进入AC。此外,AC内具有谷氨酰胺合成酶(Glutamine Synthetase, GS),突触周围的AC突起上表达高亲和力的谷氨酸转运体GLAST(Glutamate/Aspartate transporter)和GLT-1 (Glutamate transporter-1)。因此,AC不仅能快速清除突触间隙的Glu,而且能对摄入的Glu进行代谢转化,形成谷氨酰胺(Glutamine, Gln)。综上所述,AC很可能是血液中无机砷进入脑组织后初始损伤的靶细胞。本研究以体外原代培养Wistar大鼠的AC为试验对象,探讨砷对AC的毒性作用及其机制,为阐明砷对中枢神经系统损伤的机制提供实验参考数据。材料与方法1、星形胶质细胞的分离、培养、纯化与鉴定取出生1-3天Wistar大鼠的仔鼠,消毒后,断头取大脑皮质,剪碎、胰酶消化结合机械吹打使细胞分散,筛网过滤,将细胞悬液接种在玻璃培养瓶中,培养30min后进行差速粘附处理去除成纤维细胞,将未粘附的细胞悬液接种在塑料培养瓶中,培养9-12d。待细胞基本长满单层,进行细胞传代,GFAP免疫组化染色鉴定培养细胞的纯度。2、染毒与分组以亚砷酸钠为染毒物。共分为5组,培养液中含砷浓度分别为0、5、10、20或30μmol／L,培养24h后检测如下指标。3、检测指标与方法(1)MTT法检测细胞活力。(2)倒置显微镜观察细胞形态及生长状态,并采集图像。(3)流式细胞仪法测定星形胶质细胞线粒体膜电位。(4)荧光显微镜观察细胞线粒体膜电位,并采集图像。(5)采用Western Blotting法测定GLAST、GLT-1及GS蛋白的表达。4、统计分析检测数据输入计算机,用SPSS13.0进行数据的统计分析与处理。用单因素方差分析(ANOVA)比较组间的统计学差异,两两组间比较用SNK检验(Student'sNewman-Kenls, SNK),以P<0.05作为判定统计学显著性差异的标准。结果MTT检测结果显示,随NaAs02染毒浓度的增加,细胞活力下降,且各组间比较均有统计学意义。细胞形态学观察,对照组细胞呈多角形,胞体较大,生长密集;5μmol／L染砷组的细胞形态与对照组比较未见明显改变;10μmol／L染砷组细胞形态明显变化,细胞胞体折光性增强,细胞间隙增大,有少量细胞圆缩肿胀或脱壁;随着染毒浓度的增加,20μmol／L和30μmol／L染砷组细胞损伤程度进一步加重,细胞数量明显减少。流式细胞仪检测显示,各染毒组细胞的线粒体膜电位随染砷浓度的增加而降低。其中,20μmol／L和30μmol／L染砷组与对照组比较有显著性差异。各染毒组细胞内GLAST、GLT-1及GS蛋白的表达随着染砷浓度的增加而降低。各染毒组细胞内GLAST蛋白含量与对照组比较均有显著性差异,其中5μmol／L染砷组与10μmol／L、20μmol／L或30μmol／L染砷组比较亦有显著性差异。20μmol／L和30μmol／L染砷组细胞内GLT-1蛋白含量与对照组比较有显著性差异,5μmol／L或10μmol／L染砷组与30μmol／L染砷组比较差异也有统计学意义。20μmol／L和30gmol／L染砷组细胞内GS蛋白含量与对照组、5μmol／L或10μmol／L染砷组比较差异有统计学意义,20μmol／L染砷组和30μmol／L染砷组比较差异也有统计学意义。结论1、亚砷酸钠对AC具有明显的毒性作用,在5-30μmol／L的浓度范围内其毒性作用随染砷浓度的增加而增强。2、亚砷酸钠能够破坏线粒体功能,导致AC内线粒体膜电位下降。

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1,2-DCE中毒性脑水肿形成过程中不同脑区CYP2E1表达水平及其对脑水肿形成的影响

1,2-DCE中毒性脑水肿形成过程中不同脑区CYP2E1表达水平及其对脑...

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作者：郭静静中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-Dichloroethane,1,2-DCE)是工业上常用的有机溶剂,属于卤代烃类化合物,在常温下是一种无色无味的油状液体,属高毒类化学物质,可用于粘合剂和氯代烃的生产。1,2-DCE极易挥发,在空气中形成较高浓度,经呼吸道、消化... 详细信息

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-Dichloroethane,1,2-DCE)是工业上常用的有机溶剂,属于卤代烃类化合物,在常温下是一种无色无味的油状液体,属高毒类化学物质,可用于粘合剂和氯代烃的生产。1,2-DCE极易挥发,在空气中形成较高浓度,经呼吸道、消化道和皮肤吸收。由于1,2-DCE属于非极性脂溶性小分子,所以进入体内的1,2-DCE很容易通过血脑屏障(blood brain barrier,BBB)进入脑组织。因此,脑组织是1,2-DCE在人体内作用的主要靶器官。亚急性1,2-DCE中毒可引起中毒性脑病,其主要病理改变为脑水肿。研究资料显示,细胞色素P4502E1(cytochrome P4502E1,CYP2E1)是1,2-DCE在体内代谢的关键酶之一,1,2-DCE经CYP2E1代谢可生成化学性质更活跃的中间产物氯乙醛。CYP2E1在催化底物的代谢反应过程中易出现电子传递的解偶联现象,进而产生大量活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)。研究显示,ROS可破坏BBB的紧密连接,进而增加BBB的通透性,诱发脑水肿。故脑组织中CYP2E1的表达水平可影响1,2-DCE在脑组织内代谢,进而影响其活性中间代谢产物氯乙醛和ROS的产生及脑组织的损伤。研究证实,不同脑区的CYP2E1表达水平不同。本研究拟通过动物实验探讨1,2-DCE染毒过程中小鼠不同脑区CYP2E1的表达与脑组织损伤之间的联系,揭示CYP2E1在1,2-DCE中毒性脑水肿形成过程中的作用。研究方法:选择健康的雌性昆明种小鼠40只,随机分为空白对照组、染毒1 d、2 d和3 d组。将小鼠置于染毒柜,静式吸入染毒,每天染毒3.5 h,染毒浓度为1.2mg/L,分别染毒1 d、2 d和3 d,对照组不染毒,其他处理方式与染毒组相同。染毒结束后的第二天处死小鼠,快速取小脑和额叶皮质,检测不同脑区的含水量及CYP2E1、Occludin、claudin5和MMP-9的蛋白和mRNA表达水平,采用HE染色法进行组织病理学观察,采用试剂盒法检测不同脑区中丙二醛(malondialdehyde,MDA)和还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及过氧化氢酶(Catalase,CAT)活性。结果:1、与对照组相比,染毒3 d组小鼠小脑组织中CYP2E1蛋白含量和mRNA的相对表达水平明显升高(P<0.05),染毒3 d组小鼠的小脑中CYP2E1蛋白的表达水平也显著高于染毒1 d和2 d组,各组小鼠额叶皮质中CYP2E1蛋白和m RNA表达水平无显著差异。各染毒组小鼠小脑组织中脑含水量均高于对照组,各组小鼠额叶皮质中脑含水量无显著差异。此外,与对照组相比,组织病理学观察到染毒2 d组和染毒3 d组,脑组织出现明显的细胞肿胀、胞浆淡染等脑水肿改变,各组小鼠额叶皮质未见明显的脑水肿病理改变。2、与对照组相比,染毒2 d组和染毒3 d组小鼠小脑组织中MDA含量明显升高(P<0.05),各组小鼠额叶皮质中MDA含量无明显变化;各染毒组小鼠小脑组织中CAT活性和GSH含量明显低于对照组(P<0.05),各组小鼠额叶皮质中CAT活性和GSH含量无显著差异。3、染毒2 d组和3 d组小鼠的小脑组织中MMP-9的蛋白和mRNA的表达水平明显高于对照组(P<0.05)。各染毒组小鼠的小脑组织中Occludin和Claudin-5蛋白含量明显低于对照组(P<0.05),各组小鼠额叶皮质中Occludin和Claudin-5蛋白含量无显著差异。结论:1、1,2-DCE染毒可诱导小鼠的小脑组织中CYP2E1的表达,对额叶皮质中CYP2E1的表达无明显影响。2、1,2-DCE染毒可引起小鼠的小脑组织的氧化损伤和脑水肿,而其额叶皮质无明显损伤表现。3、CYP2E1介导的脑内1,2-DCE代谢在1,2-DCE染毒引起的脑损伤过程中发挥重要作用。

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辽宁省某石化企业职工职业紧张的影响因素及其健康效应的研究

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作者：任广超中国医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究将对石化企业职工进行问卷调查,描述石化企业职工的职业紧张水平和流行现状,并分析其影响因素以及职业紧张的健康效应,探讨石化企业职工的职业紧张来源,为减轻职业紧张、制定防控策略提供依据。方法:采用整群抽样的方法,对... 详细信息

目的:本研究将对石化企业职工进行问卷调查,描述石化企业职工的职业紧张水平和流行现状,并分析其影响因素以及职业紧张的健康效应,探讨石化企业职工的职业紧张来源,为减轻职业紧张、制定防控策略提供依据。方法:采用整群抽样的方法,对辽宁省某石化企业不同工作车间的1888名职工进行自填式问卷调查。采用付出-回报失衡问卷(ERI)、感知的工作环境问卷(PWE)、抑郁自评量表(CES-D)以及健康检查等对职工的职业紧张、职业环境、抑郁现状、高血压、糖尿病及血脂异常患病情况等相关因素进行调查。将职业紧张分为高水平和低水平组,分析职业紧张的影响因素及其健康效应。结果采用t检验、单因素方差分析、卡方检验、多因素Logistic回归分析以及交互作用分析等方法进行相关分析。结果:1、问卷调查结果:本研究共计发放并回收1888份调查问卷,其中有效问卷1521份,有效回收率为80.56%。全部调查对象中男性1284人(84.4%),女性237人(15.6%);平均年龄为(42.9±9.1)岁;石化企业职工职业紧张检出率为22.7%(346/1521);抑郁症状发生率为63.7%(969/1521);高血压患病率为33.5%(510/1521);糖尿病患病率为10.6%(161/1521);高胆固醇血症患病率为10.6%(161/1521);高甘油三酯血症患病率为22%(334/1521);低高密度脂蛋白血症患病率为25.1%(382/1521);低密度脂蛋白异常患病率为16.0%(244/1521)。2、信度效度检验结果:付出回报失衡问卷、感知的工作环境问卷以及抑郁自评量表的Cronbach’sα分别为0.854、0.803和0.935。付出回报失衡问卷三个维度的Cronbach’sα分别为0.756、0.875和0.787。且都具有良好的结构效度。3、单因素分析结果:1)付出回报比的影响因素包括:年龄、教育水平、BMI分类、每周工作时间、工种、夜班、固定班、睡眠质量及职业环境因素(P<0.05);2)内在投入得分的影响因素包括:教育水平、职务、每周工作时间、工种、夜班、睡眠质量及职业环境因素(P<0.05);3)职业紧张水平的影响因素包括:年龄、教育水平、BMI分类、每周工作时间、工龄、工种、夜班、固定班、体育锻炼、睡眠质量及职业环境因素(P<0.05);4)职业紧张分型的影响因素包括:婚姻状况、月收入、职务、每周工作时间、工种、夜班、固定班、睡眠质量及职业环境因素(P<0.05)。4、多因素分析Logistic结果:BMI分类(OR=1.966,95%CI=1.254～3.084)、职务(OR=0.630,95%CI=0.422～0.939)、每周工作时间(OR=1.404,95%CI=1.078～1.829)、工种(OR=1.952,95%CI=1.221～3.112)、夜班(OR=2.452,95%CI=1.642～3.662)、睡眠质量(OR=2.016,95%CI=1.487～2.731)、噪声暴露(OR=2.452,95%CI=1.565～3.814)、高温作业(OR=1.968,95%CI=1.285～3.013)和危险性作业(OR=2.522,95%CI=1.535～4.144)是石化企业职工高职业紧张的独立影响因素。5、交互作用分析结果:年龄<35岁和婚姻状况为已婚/同居之间存在交互作用(OR=1.616,95%CI=1.122～2.328);年龄<35岁和非固定班之间存在交互作用(OR=2.083,95%CI=1.494～2.906);年龄<35岁和强光线暴露之间存在交互作用(OR=2.847,95%CI=1.916～4.233);婚姻状况为已婚/同居和教育水平高中及以下之间存在交互作用(OR=0.759,95%CI=0.593～0.971);婚姻状况为已婚/同居和工龄小于10年之间存在交互作用(OR=1.572,95%CI=1.175～2.103);婚姻状况为已婚/同居和非固定班之间在交互作用(OR=1.452,95%CI=1.138～1.852);工龄小于10年和非固定班之间存在交互作用(OR=1.734,95%CI=1.260～2.387);强光线暴露和高粉尘暴露之间存在交互作用(OR=3.830,95%CI=2.631～5.576);高粉尘暴露和接触有毒有害物质之间存在交互作用(OR=2.875,95%CI=2.131～3.878)。6、职业紧张的健康效应分析结果:高水平职业紧张组职工的抑郁症状发生率、高血压患病率、血脂异常患病率均高于低水平职业紧张组。结论:1、体质指数(BMI)、职务、每周工作时间、工种、夜班、睡眠质量、噪声暴露、高温作业以及危险性作业是石化企业职工职业紧张的影响因素。2、石化企业职工职业紧张的影响因素中,

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低浓度1,2-二氯乙烷亚慢性暴露对小鼠海马谷氨酸代谢的影响及其机制研究

低浓度1,2-二氯乙烷亚慢性暴露对小鼠海马谷氨酸代谢的影响及其机...

引用

作者：李坤阳中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）系卤代烃类化合物,为工业上常用的有机溶剂之一,1,2-dce属高毒性一类的中枢神经性化学毒物,,脑神经组织是1,2-DCE主要蓄积并损害的靶器官。目前有关低浓度1,2-DCE长期接触引起脑组织损... 详细信息

目的:1,2-二氯乙烷（1,2-dichloroethane,1,2-DCE）系卤代烃类化合物,为工业上常用的有机溶剂之一,1,2-dce属高毒性一类的中枢神经性化学毒物,,脑神经组织是1,2-DCE主要蓄积并损害的靶器官。目前有关低浓度1,2-DCE长期接触引起脑组织损伤的研究资料极少,需进行深入研究。谷氨酸（glutamate,Glu）是脑中含量最高的氨基酸。它与N-甲基-D-天门冬氨酸受体（N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR）结合参与长时程增强（long-term potentiation,LTP）的诱导与维持等高级脑活动。突触间隙中的Glu主要通过“谷氨酸-谷氨酰胺”循环来完成代谢与转化等过程。星形胶质细胞（astrocyte,AS）是神经突触间隙中Glu代谢和转运的关键场所,在谷氨酸能神经递质的信息传递中发挥重要作用。因此,如果1,2-DCE对AS内参与Glu代谢和转运等环节产生任何损伤,将严重干扰谷氨酸能神经突触的信息传递,进而影响脑组织的学习记忆功能。本研究以雌性昆明种小鼠为实验研究对象,通过探讨低浓度1,2-DCE亚慢性暴露对小鼠海马内Glu代谢与转运等相关环节的影响,为揭示低浓度1,2-DCE长期暴露所致智力损伤的机制提供实验参考数据。方法:本研究将健康、清洁级雌性昆明种小鼠适应性喂养后,随机分为对照组及0.225、0.45和0.9 g/m3的1,2-DCE染毒组。采用静式吸入方式染毒,每天染毒3.5 h,连续染毒8周。首先进行Morris水迷宫及穿梭箱试验检,然后麻醉小鼠,提取海马组织,检测小鼠海马组织中谷氨酰胺合成酶（glutamine synthetase,GS）和谷氨酰胺酶（phosphate-activated glutaminase,PAG）的活性、分布以及表达水平,检测小鼠海马中GS、PAG、谷氨酸/天冬氨酸转运体（glutamate/Aspartate transporter,GLAST）、谷氨酸转运体-1（glutamate transporter-1,GLT-1）、NMDAR亚单位GluN1、GluN2A和GluN2B的转录以及蛋白表达水平,病理切片观察海马组织病理改变,并使用钙离子特异性荧光探针来测定小鼠海马神经细胞内钙离子（calcium,Ca2+）含量。结果:在Morris水迷宫的定位巡航实验中,随着训练天数的增加,各组小鼠的寻找平台的逃避潜伏期不断缩短,但在相同的训练天数里,1,2-DCE染毒组小鼠的逃避潜伏期比对照组延长。而空间探索实验中小鼠的目标象限停留时间和穿梭目标次数也是随着染毒计量的增加而显著降低;在穿梭箱试验中,随着染毒剂量的增加,染毒组小鼠的主动逃避次数明显降低,而主动逃避的潜伏期明显延长。特别是高剂量染毒组,二项指标均有显著意义的改变;与对照组相比,染毒组小鼠海马内GLAST、GLT-1、GS和PAG的mRNA和蛋白表达水平都有不同程度的下降;GS和PAG的酶活力也都随着染毒剂量的增加而显著降低;而谷氨酸受体GluN1、GluN2A和GluN2B的mRNA以及蛋白表达水平随着染毒剂量的增加而增加;染毒组细胞内Ca2+浓度也显著高于对照组;与对照组相比,经HE染色法观察到染毒组的小鼠海马锥体细胞损伤明显。结论:1、较低浓度1,2-DCE亚慢性暴露可损伤小鼠的学习和记忆能力。2、1,2-DCE对小鼠学习记忆功能的损伤可能与其干扰小鼠海马内Glu-Gln循环,导致突触间隙Glu蓄积所引起的神经兴奋性毒性有关。

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p38 MAPK信号通路在2-氯乙醇暴露所致小胶质细胞活化中作用的研究

引用

作者：高怡中国医科大学

学位级别：硕士

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)系卤代烃类化合物,属于高毒类化学物质,具有脂溶性,主要用于合成聚氯乙烯单体,还可以作为有机溶剂用于粘合剂、脱脂剂和清洗剂等。职业性接触主要经呼吸道后快速分布到全身各组织器官,脑... 详细信息

目的:1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane,1,2-DCE)系卤代烃类化合物,属于高毒类化学物质,具有脂溶性,主要用于合成聚氯乙烯单体,还可以作为有机溶剂用于粘合剂、脱脂剂和清洗剂等。职业性接触主要经呼吸道后快速分布到全身各组织器官,脑组织是其主要蓄积和损害的靶器官。神经毒性是人类急性或亚急性1,2-DCE暴露后最常见的毒性作用,中毒性脑病为其主要临床表现,脑水肿为其主要病理过程。2-氯乙醇(2-chloroethanol,2-CE)作为中间代谢产物,具有比1,2-DCE更强的生物毒性,故2-CE很可能在1,2-DCE神经毒性作用中发挥重要作用。小胶质细胞(microglia,MG)是大脑中常驻的免疫细胞,有研究表明,MG活化后产生的炎症介质参与脑水肿的形成,但具体机制尚未阐明。因此,本研究中以BV2小胶质细胞系为研究对象,探究2-CE暴露对BV2细胞活化的影响以及p38丝裂活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)信号通路在2-CE暴露所致BV2细胞活化中的作用,研究结果对于揭示亚急性1,2-DCE中毒性脑水肿的机制具有重要科学意义。研究方法:1、BV2细胞2-CE暴露模型的建立:以小鼠小胶质细胞系BV2细胞为研究对象,使用含有40、60、80、100、120、140、160、180、200、220和240m M 2-CE暴露12 h,用MTS试剂盒检测BV2细胞活力,确定后续实验中2-CE暴露浓度。2、2-CE暴露对BV2细胞的影响:不同浓度2-CE暴露12 h后,用正倒置一体显微镜观察BV2细胞形态并拍照。收集细胞,采用Western blotting法检测BV2细胞中Iba1、CD11b、TNF-α、IL-6、IL-10、i NOS、p-p38、p38、p-p65和p65蛋白表达水平,采用q RT-PCR法检测BV2细胞中Iba1、CD11b、p38和p65 m RNA表达水平。收集培养基,采用ELISA法检测TNF-α、IL-6和IL-10的分泌水平。采用免疫荧光染色法检测BV2细胞核和胞质内p-p65荧光强度。3、p38 MAPK信号通路在2-CE暴露所致BV2细胞活化中的作用:采用p38 MAPK信号通路抑制剂SB202190对BV2细胞中p-p38进行抑制,将BV2细胞随机分为空白对照组、抑制剂对照组、2-CE暴露组和抑制剂干预组。空白对照组不予任何处理;抑制剂对照组给予10μM SB202190处理12 h;2-CE暴露组给予160 m M 2-CE暴露12 h;抑制剂干预组提前用10μM SB202190暴露1 h,干预结束后给予2-CE暴露12 h。后续各检测指标同上。结果:1、BV2细胞2-CE暴露模型的建立:MTS法检测结果显示,160、180、200、220和240 m M 2-CE暴露组的BV2细胞活力均显著低于对照组(P<0.05),故后续体外实验采用0、40、80和160 m M 2-CE为暴露浓度,12 h为暴露时间。2、2-CE暴露对BV2细胞活化的影响:2-CE暴露后,分枝状BV2细胞减少,细胞突起回缩,变大变圆,呈“阿米巴样”。2-CE暴露上调BV2细胞中Iba1和CD11b蛋白表达水平及m RNA表达水平(P<0.05),提示2-CE暴露致BV2细胞活化。3、2-CE暴露对BV2细胞中p38 MAPK信号通路的影响:2-CE暴露上调BV2细胞中p-p38和p-p65蛋白表达水平,而各浓度2-CE暴露组的BV2细胞中p38和p65蛋白表达水平及m RNA表达水平无统计学差异。分别检测BV2细胞核和胞浆蛋白中p65蛋白表达水平,结果显示,与对照组相比,各浓度2-CE暴露组的BV2细胞核中p65蛋白表达水平显著升高,而胞质中p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。此外,免疫荧光结果显示,随2-CE暴露浓度的增加,BV2细胞核内p-p65荧光强度越强,提示2-CE暴露可激活BV2细胞中p38 MAPK信号通路及其下游核转录因子NF-кB。4、2-CE暴露对BV2细胞炎症因子表达水平的影响:2-CE暴露上调TNF-α和IL-6在BV2细胞中的蛋白表达水平及培养基上清液中的分泌水平,上调BV2细胞中i NOS蛋白表达水平,降低IL-10在BV2细胞中的蛋白表达水平及培养基上清液中的分泌水平(P<0.05),提示2-CE暴露导致BV2细胞促炎症因子表达水平增加。5、p38 MAPK信号通路在2-CE暴露致BV2细胞活化中的作用:与160 m M 2-CE组相比,SB202190干预可降低BV2细胞中Iba1和CD11b蛋白表达水平及m RNA表达水平,降低BV2细胞中p-p38、p-p65、TNF-α、IL-6和

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