检索结果-南通市图书馆

作者：李楠辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究肾虚骨质疏松症的病理机制与骨组织中BMP6、TIEG1以及26S蛋白酶体活性变化的相关性,探讨鹿茸牡蛎补肾中药对上述机制的影响,从而为临床防治骨质疏松症提供实验依据。方法:采用去卵巢法复制肾虚骨质疏松症大鼠模型,以鹿茸牡蛎... 详细信息

目的:研究肾虚骨质疏松症的病理机制与骨组织中BMP6、TIEG1以及26S蛋白酶体活性变化的相关性,探讨鹿茸牡蛎补肾中药对上述机制的影响,从而为临床防治骨质疏松症提供实验依据。方法:采用去卵巢法复制肾虚骨质疏松症大鼠模型,以鹿茸牡蛎补肾中药低、高剂量进行干预,以盖天力、骨疏康作阳性对照,并与补脾中药补中益气汤作比较,正常大鼠作标准对照,模型大鼠作空白对照,同时设立假手术组,12周后进行指标检测。应用双能X线骨密度分析仪检测大鼠离体股骨头骨密度(BMD);电子天平称取子宫湿重,计算子宫指数(子宫湿重/体重);酶联免疫吸附法(ELISA)对大鼠骨组织匀浆中BMP6、TIEG1以及26S蛋白酶体的活性进行测定;检测结果应用SPSS10.0统计软件进行分析。结果:(1)大鼠离体股骨头骨密度结果:与正常组比较,模型空白组明显降低(p<0.01),假手术组未见统计学差异;与模型空白组比较,除补脾组外,其余各给药组均有升高(p<0.05),其中以补肾中药高剂量组最为显著(p<0.01)。(2)大鼠子宫指数结果:与正常组比较,去卵巢各组均明显降低(p<0.01),假手术组未见统计学差异;与模型空白组比较,给药12周后各给药组均略有升高,以补肾中药高剂量组略为显著,但无统计学意义。(3)BMP6的ELISA检测结果:与正常组比较,模型空白组BMP6活性降低(p<0.05),假手术组未见统计学差异;与模型空白组比较,各给药组BMP6活性均有升高(p<0.05),以补肾中药低剂量组较为显著(p<0.05)(。4)TIEG1的ELISA检测结果:与正常组比较,模型空白组TIEG1活性降低(p<0.01),假手术组未见统计学差异;与模型空白组比较,各给药组TIEG1活性均有升高(p<0.05),以补肾中药低剂量组较为显著(p<0.01)。(5)26S蛋白酶体的ELISA检测结果:与正常组比较,模型空白组26S蛋白酶体活性升高(p<0.01),假手术组未见统计学差异;与模型空白组比较,各给药组均有降低(p<0.05),以补肾中药高剂量组和对照药盖天力组较为显著(p<0.05)。结论:采用去卵巢手术法可以成功地复制肾虚骨质疏松症大鼠模型体现在大鼠股骨头骨密度降低、子宫指数下降等方面。正常大鼠股骨干骺端组织匀浆中可检测到BMP6、TIEG1以及26S蛋白酶体,表明正常骨组织中存在BMP6、TIEG1以及26S蛋白酶体;骨组织中BMP6、TIEG1活性的降低以及26S蛋白酶体活性的升高,提示泛素-蛋白水解酶复合体通路(UPP)通过降解靶蛋白从而调节BMPs的信号转导出现异常变化,这可能是肾虚骨质疏松症的病理机制之一。鹿茸牡蛎补肾中药能够延缓模型大鼠骨量的丢失,减慢骨密度的降低,改善BMP6、TIEG1的活性降低以及26S蛋白酶体活性升高的变化,从而起到防治肾虚骨质疏松症的作用。

关键词：骨质疏松症肾虚骨形成蛋白-6 TGF-β诱导早期基因1 26s蛋白水解酶复合体

纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠BMP-4、Smad6 mRNA及蛋白表达影响的实验研究

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纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠BMP-4、Smad6 mRNA及蛋白表达...

作者：金珉廷辽宁中医学院

学位级别：硕士

目的:通过观察纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠下丘脑组织的BMP-4、Smad 6mRNA及蛋白表达的影响,探索骨质疏松的发病过程中补肾中药防治的分子生物学基础,研究纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠防治作用的机理,从而为临床防治肾虚骨... 详细信息

目的:通过观察纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠下丘脑组织的BMP-4、Smad 6mRNA及蛋白表达的影响,探索骨质疏松的发病过程中补肾中药防治的分子生物学基础,研究纳米钙补肾中药对肾虚骨质疏松大鼠防治作用的机理,从而为临床防治肾虚骨质疏松症合理用药提供科学的实验依据。方法:实验部分采用去双侧卵巢的方法,建立肾虚骨质疏松症模型。纳米钙补肾中药复方(大、中、小)剂量对实验大鼠治疗12周(应用反证的治法),以骨疏康颗粒剂、牡蛎钙组作为阳性对照组,并设正常对照组和模型空白组。使用XR-36型双能X线骨密度仪(美国NORLAND),测定大鼠左侧股骨骨密度;用生化方法对血清中抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和碱性磷酸酶(ALP)的指标进行检测;用RT-PCR法、Western印迹法检测肾虚骨质疏松症大鼠下丘脑组织中BMP-4、Smad6 mRNA和蛋白表达。结果;(1)实验动物子宫指数比较:与正常组比较,模型空白组等各组均明显降低。与模型空白组比较,纳米钙补肾中药复方各剂量组、骨疏康颗粒组及牡蛎钙组虽有所升高,但均无显著性差异。(2)实验动物左侧股骨骨密度BMD结果:通过12周用药后,各用药组(纳米钙补肾中药复方各剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎钙组)均可明显增加去卵巢实验大鼠股骨的骨密度值,其中纳米钙补肾中药复方中剂量组效果最优。纳米钙补肾中药复方小、中剂量组能达到正常大鼠的骨密度值;纳米钙补肾中药复方高剂量组与牡蛎钙组和骨疏康颗粒组效果相似。(3)血清骨代谢生化指标血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)结果:与模型空白组比较,纳米钙补肾中药复方小、中剂量组有显著性差异,但未达到正常组水平。与正常组比较各组有非常显著性差异,各治疗组间无显著性差异。(4)血清碱性磷酸酶含量结果:与模型空白组比较,纳米钙补肾中药复方小、中剂量组有显著性差异,能达到正常组水平。但纳米钙补肾中药复方高剂量组和骨疏抗颗粒组无显著性差异。(5)RT-PCR及Western方法检测,大鼠下丘脑组织中BMP-4mRNA及蛋白表达结果:模型空白组与正常组比较,大鼠下丘脑组织中的BMP-4 mRNA和蛋白表达水平明显的增强。(6)RT-PCR及Western方法检测,大鼠下丘脑组织中Smad6 mRNA及蛋白表达结果:模型空白组与正常组比较大鼠下丘脑组织中的mRNA和蛋白表达水平明显的降低。结论:纳米钙补肾中药能明显提高骨质疏松症大鼠的骨密度和骨形成及抑制骨吸收,但大鼠下丘脑组织中的BMP-4基因表达和蛋白表达,与正常组比较模型空白组表达增强。大鼠下丘脑组织中的Smad6基因表达和蛋白表达,与正常组比较模型空白组表达降低。

关键词：肾虚骨质疏松症 BMP-4 Smad6

肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织PPARγ2的mRNA及其蛋白表达

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肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织PPARγ2的mRNA及其蛋白表达

作者：燕燕辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织PPARγ2的mRNA和蛋白表达;分析并评价肾虚骨质疏松症病理机制与PPARγ2信号转导的相关性;探讨补肾壮骨益髓中药(本文简称补肾中药)防治骨质疏松症,其作用机制之一可能对PPARγ... 详细信息

目的:研究摘除卵巢致肾虚骨质疏松症大鼠骨、肾、下丘脑组织PPARγ2的mRNA和蛋白表达;分析并评价肾虚骨质疏松症病理机制与PPARγ2信号转导的相关性;探讨补肾壮骨益髓中药(本文简称补肾中药)防治骨质疏松症,其作用机制之一可能对PPARγ2信号转导有调控作用。材料与方法:实验采用摘除大鼠双侧卵巢的方法,建立肾虚骨质疏松症动物模型。随机分为正常组、假手术组、模型空白组(模空组)、补肾中药低剂量组、补肾中药高剂量组、补脾中药对照组(补中益气汤)、盖天力钙片对照组(牡蛎钙)、骨疏康颗粒对照组,术后一周开始给药,12周后进行取材及实验指标的检测。以RT-PCR法及Western印迹杂交法检测大鼠骨、肾、下丘脑组织PPARγ2的mRNA和蛋白表达。结果: ***-PCR法检测结果:正常组大鼠骨、肾、下丘脑组织存在PPARγ2的mRNA表达。与正常组比较,假手术组骨、肾、下丘脑组织PPARγ2 mRNA的表达水平无明显差异(P＞0.05);模空组骨、肾组织PPARγ2 mRNA的表达水平明显升高(P＜0.01),下丘脑组织PPARγ2 mRNA的表达水平明显降低(P＜0.01)。用药12周后,与模空组比较,各用药组均可明显下调骨、肾组织PPARγ2 mRNA表达水平(P＜0.01),明显上调下丘脑组织PPARγ2 mRNA表达水平(P＜0.01)。其中补肾中药高剂量组较优(P＜0.01)。 ***印迹杂交法检测结果:正常组大鼠骨、肾、下丘脑组织存在PPARγ2的蛋白表达。与正常组比较,假手术组骨、肾、下丘脑组织PPARγ2蛋白的表达水平无明显差异(P＞0.05);模空组骨、肾组织PPARγ2蛋白的表达水平明显升高(P＜0.01),下丘脑组织PPARγ2蛋白的表达水平明显降低(P＜0.01)。用药12周后,与模空组比较,各用药组均可明显下调骨、肾组织PPARγ2蛋白表达水平(P＜0.01),明显上调下丘脑组织PPARγ2蛋白表达水平(P＜0.01)。其中补肾中药高剂量组较优(P＜0.01)。结论: 1.采用去卵巢方法成功复制肾虚骨质疏松症模型。 2.正常大鼠骨、肾、下丘脑组织可以在基因、蛋白水平表达PPARγ2,表明正常大鼠骨、肾、下丘脑组织存在PPARγ2,其在调节骨代谢过程中,起着重要的调控作用。 3.模空组骨、肾组织PPARγ2的基因与蛋白表达水平升高,下丘脑组织PPARγ2的基因与蛋白表达水平降低,是肾虚骨质疏松症发生的重要病理机制之一。 4.补肾中药可以降低骨、肾组织PPARγ2的基因与蛋白表达水平,升高下丘脑组织PPARγ2的基因与蛋白表达水平。提示补肾中药能够明显抑制肾虚骨质疏松症的脂肪细胞分化,促进骨髓基质干细胞向成骨细胞分化,可望成为增加骨形成的新的、有效的途径,从而更为有效地防治肾虚骨质疏松症。

关键词：肾虚骨质疏松症补肾中药 PPARγ2

补肾中药对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠成脂分化及脂类代谢异常的调节作用

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补肾中药对糖皮质激素性骨质疏松症大鼠成脂分化及脂类代谢异常的...

作者：张国哲辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：探索糖皮质激素性骨质疏松症的分子机理之一可能由于成脂分化和脂类代谢异常所致,研究补肾中药复方（鹿茸、淫羊藿、牡蛎）对糖皮质激素性骨质疏松症的防治作用。材料与方法：采用肌肉注射地塞米松（2.5mg/kg）辅以喂食低钙... 详细信息

目的：探索糖皮质激素性骨质疏松症的分子机理之一可能由于成脂分化和脂类代谢异常所致,研究补肾中药复方（鹿茸、淫羊藿、牡蛎）对糖皮质激素性骨质疏松症的防治作用。材料与方法：采用肌肉注射地塞米松（2.5mg/kg）辅以喂食低钙饲料的方法建立大鼠骨质疏松症模型。将清洁级Wistar大鼠（143只）随机分成六组,分别是：A组：正常组;B组：模型空白对照组;C组：补肾中药组;D组：补中益气颗粒对照组;E组：血府逐瘀胶囊对照组;F组：骨疏康颗粒对照组。连续给药9周后,双能X线骨密度仪测定其股骨骨密度;real-time PCR法测定骨组织脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（A-FABP） mRNA表达水平;Western blotting测定骨组织脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白（A-FABP）表达水平;自动生化分析仪测定各组大鼠血清总胆固醇（TC）、血清甘油三酯（TG）、血清高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和血清低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）含量。结果： 1.与正常组比较,模空组大鼠股骨骨密度显著降低（p＜0.01）,股骨A-FABP表达显著增强（p＜0.01）,血清TC含量和HDL-C均显著降低（p＜0.01）,而血清TG含量显著增加,LDL-C没有显著性差异。 2.与模空组比较,补肾中药组股骨骨密度显著增加（p＜0.01）,股骨A-FABP表达显著降低（p＜0.01）,血清HDL-C和TC含量均显著升高（p＜0.01）。结论： 1.肌肉注射地塞米松辅以喂食低钙饲料方法成功复制了糖皮质激素性骨质疏松症模型;2.糖皮质激素性骨质疏松症的病机之一与成脂分化异常及脂类代谢异常有关;3.补肾中药可以有效防治糖皮质激素性骨质疏松症,其作用机制与调整成脂分化及外周脂类代谢异常有关。

关键词：骨质疏松症糖皮质激素性骨质疏松症脂肪细胞型脂肪酸结合蛋白 A-FABP 补肾中药

肾虚骨质疏松症大鼠股骨、肾、下丘脑OPG/RANKL的mRNA及蛋白表达的实验研究

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肾虚骨质疏松症大鼠股骨、肾、下丘脑OPG/RANKL的mRNA及蛋白表达...

作者：王思程辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本论文研究肾虚骨质疏松症大鼠股骨、肾、下丘脑组织OPG/RANKL相关蛋白的活性变化,解析破骨细胞的分化、调节及信号传导,阐明肾虚骨质疏松症证候病机的分子生物学基础;补肾中药进行干预后,通过调控上述蛋白的活性变化,为临床防治... 详细信息

目的:本论文研究肾虚骨质疏松症大鼠股骨、肾、下丘脑组织OPG/RANKL相关蛋白的活性变化,解析破骨细胞的分化、调节及信号传导,阐明肾虚骨质疏松症证候病机的分子生物学基础;补肾中药进行干预后,通过调控上述蛋白的活性变化,为临床防治骨质疏松症的合理用药提供科学的实验依据。材料与方法:去卵巢方法建立肾虚骨质疏松症大鼠模型,应用补肾填精、壮骨益髓的中药复方进行干预,正常大鼠作为标准对照,模型大鼠作为空白对照,同时用骨疏康颗粒剂、盖天力片作为阳性对照,补脾中药作为相互对照。给药12周后,经无菌取材及实验指标检测:用RT-PCR法、Western blotting法检测股骨、肾、下丘脑组织OPG/RANKL的mRNA及蛋白表达。结果: ***-PCR法检测:股骨、肾、下丘脑存在OPG/RANKL的基因表达:测股骨上1/30PG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组股骨OPG基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、骨疏康组均可不同程度上调股骨OPG基因表达(P＜0.01),其中盖天力组(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05)模型空白组股骨RANKL基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调股骨OPG基因表达(P＜0.01)。测肾OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无明显差异(P＞0.05),模型空白组肾OPG基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组可上调OPG基因表达(P＜0.01),盖天力组、骨疏康组统计结果为(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组肾RANKL基因表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调肾RANKL基因表达(P＜0.01),有显著性差异。测下丘脑OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑OPG基因表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调下丘脑OPG基因表达(P＜0.01);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑RANKL基因表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调RANKL基因表达(P＜0.01)。 *** blotting法检测:股骨、肾、下丘脑存在OPG/RANKL蛋白表达;测股骨上1/30PG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组股骨OPG蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药高剂量组、盖天力组、骨疏康组可上调股骨OPG蛋白表达(P＜0.01),其中低剂量组、补脾组(P＞0.05),无统计学意义;与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05)模型空白组RANKL蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调RANKL蛋白表达(P＜0.01),差异显著。测肾OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组肾OPG蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、盖天力组可上调肾OPG蛋白表达(P＜0.01),骨疏康组也可上调OPG蛋白表达(P＜0.05),补脾组(P＞0.05);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组RANKL蛋白表达显著下降(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度上调肾RANKL蛋白表达(P＜0.01),差异显著,补脾组(P＞0.05)。测下丘脑OPG/RANKL,与正常组比较,假手术组OPG指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑OPG蛋白表达显著上升(P＜0.01),用药12周后,与模空组比较,补肾中药低剂量、高剂量组、补脾组、盖天力组、骨疏康组均可不同程度下调下丘脑OPG基因表达(P＜0.01);与正常组比较,假手术组RANKL指标无显著性差异(P＞0.05),模型空白组下丘脑

关键词：肾虚骨质疏松症补肾壮骨 OPG RANKL

密骨颗粒对肾虚骨质疏松大鼠及成骨细胞IGF-ⅠmRNA基因表达影响的实验研究

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密骨颗粒对肾虚骨质疏松大鼠及成骨细胞IGF-ⅠmRNA基因表达影响的...

作者：杜松辽宁中医学院

学位级别：硕士

目的：通过观察补肾中药密骨颗粒对肾虚骨质疏松大鼠及体外培养成骨细胞的IOF-ⅠmRNA基因表达的影响，旨在从基因表达调控水平阐明密骨颗粒防治骨质疏松症的机理。方法：采用去势法背部切除双侧卵巢，建立肾虚骨质疏松大鼠模型;原代培... 详细信息

目的：通过观察补肾中药密骨颗粒对肾虚骨质疏松大鼠及体外培养成骨细胞的IOF-ⅠmRNA基因表达的影响，旨在从基因表达调控水平阐明密骨颗粒防治骨质疏松症的机理。方法：采用去势法背部切除双侧卵巢，建立肾虚骨质疏松大鼠模型;原代培养成骨细胞建立体外模型。使用NORLAND公司XR—36型双能X线骨密度仪，采用小动物骨密度测定软件，测定大鼠左后肢股骨和胫骨的骨密度;以RT-PCT法检测肾虚骨质疏松大鼠骨组织内及体外原代培养成骨细胞IGF-Ⅰ mRNA基因表达;以免疫组化法检测肾虚骨质疏松大鼠骨组织内IGF-Ⅰ的表达;以Elisa法检测肾虚骨质疏松大鼠血清IGF-Ⅰ活性;以碱性磷酸酶钙钴法鉴定成骨细胞;以MTT法测定密骨颗粒含药血清对体外培养成骨细胞增殖的影响。结果：体内实验表明，密骨颗粒实验组与骨疏康对照组及尼尔雌醇对照组的IGF-Ⅰ mRNA基因表达与模型空白组比较均明显增强(P＜0.01)，密骨颗粒实验组与骨疏康对照组及尼尔雌醇对照组的IGF-Ⅰ表达与模型空白组比较均明显增强(P＜0.01)，血清IGF-Ⅰ活性均明显高于模型空白组(P＜0.01);体外实验表明，密骨颗粒含药血清有促成骨细胞增殖的作用;密骨颗粒含药血清及骨疏康对照组和尼尔雌醇对照组均明显促进成骨细胞内IGF-Ⅰ mRNA基因表达，以上作用均呈剂量依赖性。结论：密骨颗粒可能通过影响胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ调节系统对骨形成过程产生促进效应，从而达到防治骨质疏松症的目的。

关键词：骨质疏松症肾虚 IGF-I 基因

补肾中药血清对成骨细胞中BMP2、7与Smad1/5信号转导蛋白活性的影响

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补肾中药血清对成骨细胞中BMP2、7与Smad1/5信号转导蛋白活性的影...

作者：张晓玮辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过研究补肾中药血清对离体SD大鼠成骨细胞中BMP2、BMP7、Smad1/5在细胞中活性的变化,探讨骨质疏松症病机的分子生物学机制;研究补肾益髓壮骨中药防治骨质疏松症的作用机理,从而为临床防治骨质疏松症提供科学的实验依据。材料与方... 详细信息

目的:通过研究补肾中药血清对离体SD大鼠成骨细胞中BMP2、BMP7、Smad1/5在细胞中活性的变化,探讨骨质疏松症病机的分子生物学机制;研究补肾益髓壮骨中药防治骨质疏松症的作用机理,从而为临床防治骨质疏松症提供科学的实验依据。材料与方法:采用多次胶原酶消化法获取新生SD大鼠颅盖骨中的成骨细胞进行体外培养,并应用Gomori改良钙钴法对其进行碱性磷酸酶表达的鉴定。随机将实验用大鼠分为正常组、骨疏康颗粒对照组(骨疏康组)、补肾中药组(补肾组)、补中益气颗粒对照组(补脾组);对实验大鼠给药干预8天后,通过血清药理学的方法使用各组大鼠血清培养成骨细胞48小时,另设加入UPP通路的蛋白酶体抑制剂MG132作为对照组;应用MTT法检测离体成骨细胞的增殖率,并应用免疫组化SABC法检测成骨细胞中BMP2、BMP7、Smad1/5活性的表达。结果:1补肾中药血清作用于体外培养的成骨细胞48小时后可以明显促进成骨细胞的增殖(P< 0.01)。2应用UPP通路蛋白酶体抑制剂MG132可以明显抑制成骨细胞的增殖(P<0.01)。3成骨细胞碱性磷酸酶染色结果:成骨细胞经Gomori改良钙钴法染色和苏木精复染后,可见棕黑色细微颗粒,多数分布于细胞膜上以及周围,胞浆中也可见到少量颗粒。阴性对照组细胞内无棕黑色颗粒,细胞核内可见嗜苏木精之蓝色颗粒。4成骨细胞BMP2免疫组化结果:与正常组比较,骨疏康组和补肾组表达水平明显上升(P<0.01);补脾组、MG132+正常组、MG132+骨疏康组、MG132+补肾组和MG132+补脾组表达水平明显降低(P<0.01)。与补肾组比较,各组的表达水平均明显降低(P<0.01)。5成骨细胞BMP7免疫组化结果:与正常组相比,补肾组表达水平明显上升(P<0.01);骨疏康组、补脾组、MG132+正常组、MG132+骨疏康组、MG132+补肾组和MG132+补脾组表达水平明显降低(P<0.01)。与补肾组比较,各组表达水平均明显降低(P<0.01)。加入MG132的各含药血清组中,MG132+正常组表达水平最高,MG132+补肾组与MG132+正常组比较其阳性表达水平降低(P<0.01)。6成骨细胞Smad1/5免疫组化结果:与正常组相比,补肾组、骨疏康组、补脾组、MG132+正常组、MG132+骨疏康组、MG132+补肾组和MG132+补脾组表达水平明显降低(P<0.01)。与补肾组比较,骨疏康组、补脾组、MG132+正常组、MG132+骨疏康组、MG132+补肾组和MG132+补脾组表达水平明显降低(P<0.01)。加入MG132的各含药血清组中,MG132+正常组表达水平最高,MG132+补肾组与MG132+正常组比较阳性表达水平降低(P<0.01);MG132+补肾组与MG132+骨疏康组、MG132+补脾组比较阳性表达水平上升(P<0.01)。结论:1采用多次胶原酶消化法获取大鼠成骨细胞进行体外培养的方法是可靠、简便、易行的,可以提供大量高纯度的成骨细胞用于科学研究使用。2体外培养的新生大鼠颅盖骨中存在BMP2、BMP7和Smad1/5的活性表达,表明正常大鼠成骨细胞中存在BMP-Smad信号转导通路。3补肾中药血清可以明显促进成骨细胞的增殖,明显升高成骨细胞中BMP2、BMP7和Smad1/5的表达水平,提示补肾益髓壮骨中药具有防治骨质疏松症的作用。4应用UPP通路的蛋白酶体抑制剂MG132可以明显抑制成骨细胞的增殖,并且明显降低成骨细胞中BMP2、BMP7和Smad1/5的表达水平。5应用补肾益髓壮骨中药血清具有干预蛋白酶体抑制剂MG132抑制成骨细胞增殖的作用,对体外培养成骨细胞中BMP2、BMP7和Smad1/5活性的表达有明显提升作用。

关键词：骨质疏松症成骨细胞补肾中药 BMP2、7 Smad1/5

补肾中药有效成分对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

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补肾中药有效成分对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

作者：陈谊敬辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：根据“肾藏精生髓主骨”的理论，采用补肾中药有效成分诱导骨髓间充质干细胞成骨分化;以阐明补肾中药防治骨质疏松症的作用机理，进一步为“肾藏精生髓主骨”脏象理论提供实验依据。材料与方法：随机将SPF级SD雌性大鼠分为正常对... 详细信息

目的：根据“肾藏精生髓主骨”的理论，采用补肾中药有效成分诱导骨髓间充质干细胞成骨分化;以阐明补肾中药防治骨质疏松症的作用机理，进一步为“肾藏精生髓主骨”脏象理论提供实验依据。材料与方法：随机将SPF级SD雌性大鼠分为正常对照组、阳性对照组（转化液组）、补肾配伍组第1组（淫羊藿苷低剂量、补骨脂素低剂量、齐墩果酸低剂量、二苯乙烯苷低剂量）、补肾配伍第2组（淫羊藿苷低剂量、补骨脂素中剂量、齐墩果酸中剂量、二苯乙烯苷中剂量）、补肾配伍第3组（淫羊藿苷低剂量、补骨脂素高剂量、齐墩果酸高剂量、二苯乙烯苷高剂量）、补肾配伍第4组（淫羊藿苷中剂量、补骨脂素低剂量、齐墩果酸中剂量、二苯乙烯苷高剂量）、补肾配伍第5组（（淫羊藿苷中剂量、补骨脂素中剂量、齐墩果酸高剂量、二苯乙烯苷低剂量）、补肾配伍第6组（淫羊藿苷中剂量、补骨脂素高剂量、齐墩果酸低剂量、二苯乙烯苷中剂量）、补肾配伍第7组（淫羊藿苷高剂量、补骨脂素低剂量、齐墩果酸高剂量、二苯乙烯苷中剂量）、补肾配伍第8组（淫羊藿苷高剂量、补骨脂素中剂量、齐墩果酸低剂量、二苯乙烯苷高剂量）、补肾配伍第9组（淫羊藿苷高剂量、补骨脂素高剂量、齐墩果酸中剂量、二苯乙烯苷低剂量）、非补肾药对照组（黄芪甲苷组、川芎嗪组）;通过血清药理学方法，对实验大鼠连续灌胃给药3天后，取材（取含药血清），使用各组大鼠含药血清培养骨髓间充质干细胞6天、12天、18天;用茜素红染色对钙化结节进行成骨细胞鉴定;应用MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖率，并用ELISA法检测成骨细胞中碱性磷酸酶（Alkaline phosphates，ALP）、骨钙素（Osteocalcin，BGP）、骨形态发生蛋白2（Bone morphogenetic protein，BMP-2）的活性表达及含量，用实时定量PCR法检测氨基末端激酶（1N-terminal kinase1，JNK1）的基因表达。结果：1.补肾中药有效成分含药血清作用于体外培养骨髓间充质干细胞72h，可以促进骨髓间充质干细胞的增殖。2.成骨细胞的染色结果：钙化结节可成大片红色，多数分布于细胞密集处。阴性对照则无红色，颜色与之前无改变。3.成骨细胞ALP活性、BGP含量、BMP-2含量在6天、12天、18天检测结果中，12天达到高峰值。其结果是：12天成骨细胞ALP酶联免疫结果：与正常对照组比较，补肾中药配伍共9组、阳性对照组（转化液组）和黄芪甲苷组均明显增加，存在显著性差异（P<0.01);与阳性对照组比较，补肾中药配伍组中第5组、6组、8组、9组均明显增大（P<0.01);与非补肾中药组比较，补肾中药配伍组第3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组OD值均明显高于黄芪甲苷组和川芎嗪组，存在显著性差异（P<0.01);补肾中药配伍组之间比较，5组、6组、9组OD值均明显高于其它组，存在显著性差异（P<0.01)。12天成骨细胞BGP酶联免疫结果：与正常对照组比较，补肾中药配伍组共9组和阳性对照组（转化液组）OD值均明显增加，存在显著性差异（P<0.01);与阳性对照组比较，补肾中药配伍组中第6组、9组OD值均明显增加（P<0.01);与非补肾中药组比较，补肾中药配伍组（正交设计共9组）OD值均明显高于黄芪甲苷组和川芎嗪组，存在显著性差异（P<0.01);补肾中药配伍组之间比较，第5组、6组、9组OD值明显高于其它组，存在显著性差异（P<0.01)。12天成骨细胞BMP-2酶联免疫结果：与正常对照组比较，补肾中药配伍组共9组和阳性对照组（转化液组）、非补肾中药黄芪甲苷组和川芎嗪组OD值均明显增加，存在显著性差异（P<0.01);与阳性对照组比较，补肾中药配伍组中第5组、6组OD值均明显增加（P<0.01);与非补肾中药比较，补肾中药配伍组第3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组OD值均明显高于黄芪甲苷组和川芎嗪组，存在显著性差异（P<0.01);，补肾中药配伍组之间比较，第5组、6组、9组）OD值均明显增加，存在显著性差异（P<0.01)。***1:Real-Time PCR结果显示：补肾中药诱导骨髓间充质干细胞成骨分化实验中，与正常对照组比较，补肾中药配伍组共9组和阳性对照组（转化液组）、非补肾中药对照组表达水平均明显增加，存在显著性差异（P<0.01);与阳性对照组比较，补肾中药配伍组共9组、非补肾中药组（黄芪甲苷组、川芎嗪组）表达水平明显增加（P<0.01);与非补肾中药川芎嗪组比较，补肾中药配伍组（第4组）表达水平明显增加，存在显著性差异（P<0.01);与黄芪甲苷组比较，补肾中药配伍组中（第4组、5组）表达水平明显增加，存在显著性差异（P<0.01)。结论：1.补肾中药有效成分能促进

关键词：补肾中药骨髓间充质干细胞成骨细胞碱性磷酸酶骨钙素骨形态发生蛋白2 氨基末端激酶1

左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠抗氧化能力的影响

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左归丸对去卵巢骨质疏松大鼠抗氧化能力的影响

作者：张威辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:本研究采用摘除雌性大鼠卵巢进行绝经后骨质疏松症动物造模,运用补肾填精壮骨方剂左归丸加减进行干预,观察干预后大鼠骨密度、体重、子宫湿重的变化情况,并检测去卵巢骨质疏松大鼠血清中抗氧化能力指标SOD、NO、GSH-Px、MDA水平变... 详细信息

目的:本研究采用摘除雌性大鼠卵巢进行绝经后骨质疏松症动物造模,运用补肾填精壮骨方剂左归丸加减进行干预,观察干预后大鼠骨密度、体重、子宫湿重的变化情况,并检测去卵巢骨质疏松大鼠血清中抗氧化能力指标SOD、NO、GSH-Px、MDA水平变化,阐明左归丸对去卵巢骨质疏松症大鼠模型的作用机制,为临床治疗提供实验依据。材料与方法:采用3月龄SPF级实验用Wistar雌性大鼠80只,采用随机数字表法按照大鼠体重进行随机分组,共分为4组:正常对照组20只,造模期间正常饲养不进行造模处理,治疗期间采用生理盐水灌胃;其他三组均采用摘除大鼠双侧卵巢进行绝经后骨质疏松造模;模型组20只大鼠,治疗期间采用生理盐水灌胃;补肾填精壮骨中药左归丸组20只大鼠,治疗期间采用左归丸溶液进行灌胃;阿仑膦酸钠阳性药对照组(福善美组),20只大鼠,治疗期间采用福善美溶液进行灌胃治疗。治疗周期为12周。治疗结束后,摘取大鼠左侧股骨、胫骨,应用双能X线骨密度仪检测对大鼠骨密度进行检测;摘取大鼠子宫,计算大鼠子宫湿重指数;抽取大鼠腹主动脉血液,分离血清,对血清SOD、NO、GSH-Px、MDA水平进行检测。结果:1.与正常对照组比较,模型组左下肢股骨、股骨前1/3、骨密度明显降低(P0.05),左归丸组体重下降差异显著(P0.05);血清中GSH-Px、NO水平升高明显(P0.05);血清GSH-Px、NO水平变化差异不明显(P>0.05),但左归丸组检测值略高于福善美组。提示左归丸组对绝经后骨质疏松症大鼠抗氧化能力相当且略优于福善美组。结论:1.左归丸干预去卵巢骨质疏松症大鼠可显著改善骨密度。2.去卵巢骨质疏松症模型具有脂质过氧化损伤,抗氧化能力下降。3.左归丸的作用机制之一是通过减轻脂质过氧化损伤,提高抗氧化能力,从而达到防治骨质疏松症的目的。

关键词：左归丸骨质疏松症超氧化物歧化酶一氧化氮谷胱甘肽过氧化物酶丙二醛

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基于太极模式的命门学说探讨

基于太极模式的命门学说探讨

作者：杜磊辽宁中医药大学

学位级别：硕士

命门学说是从本体论出发,研究生命系统并指导临床应用的中医理论。命门学说是整个中医理论的框架,框架的核心是“道生一,一生二,二生三,三生万物。万物负阴而抱阳,冲气以为和。”“易有太极,是生两仪,两仪生四象,四象生八卦。”“一曰水... 详细信息

命门学说是从本体论出发,研究生命系统并指导临床应用的中医理论。命门学说是整个中医理论的框架,框架的核心是“道生一,一生二,二生三,三生万物。万物负阴而抱阳,冲气以为和。”“易有太极,是生两仪,两仪生四象,四象生八卦。”“一曰水,二曰火,三曰木,四曰金,五曰土。”、“精气神”。四种本体论柔和在一起的先秦哲学。“道”与“易”言体,“道”言体之化,化中求变,化中参悟“人”;“易”言体之变,变中求化,变中参悟“人”;“五行”与“精气神”言用,“精气神”言用中之动,动中求静,动中参悟“人生”;“五行”言用中之静,静中参悟“人生”。四者,中国哲学的基石,命门学说的核心内容,也就是中医理论核心。本论文主要分为六部分：第一部分是命门与太极关系之概述。重点阐发命门本体论,以及太极、命门、命门学说、《内经》理论基础及关系。第二部分是命门学说理论的形成与发展。“命门”一词比较早的是在《内经》中的“目”说,但本论文所言命门学说肇始于《难经》对命门精神的表述,经宋明理学的影响,成熟于明代三大命门学说：孙一奎动气命门学说,张景岳水火命门学说,赵献可君主命门学说。命门学说可以说与道教内丹术是同一理论,内丹术的发展也是命门学说在中医界以外的成熟路线。第三部分是“命门学说核心”图;内经理论框架：“终极命门学说”图;内经理论框架背后的太极图,周敦颐对太极的表述,以及本人改善的周敦颐太极图。第四部分是如何理解太极,从儒家言退而求其次,释家言不昧因果,道家言道法自然,医家言逆从阴阳,可理解为自限以致用。第五部分是自限以致用的个人修身与医家的治病（命门学说的临床应用）。个人修身已达到合于太极的神圣,神圣是本文化内的代表,起着主要的传播本文化的使命,比如老子、孔子、庄子、释迦牟尼就是中国文化发扬光大屹立于世界不倒的神圣,更是中医理论的开创与传播的主要代表,中医要想继续造福人类就不可能缺少理论的继承与发扬的大家,而大家无不修身养性,静坐是所有提高自己修养的最好方法之一,而这些以知识为基础,知识现代已经普及,自用学习知识就够了,自用且要传播则必须格物、致知、诚意、正心、修身、齐家、治国、平天下。第六部分是命门学说的临床应用。以张景岳对“命门、大宝、真阴”的论述为代表,创立左右归丸、左右归饮,核心药物是：补阴以熟地、甘草、山药、枸杞为主化裁加减;补阳以附子、熟地、肉桂、甘草为主化裁加减。以及孙思邈心肾相交理论。关于心肾相交用药,从孙一奎的著作中找到一些内容,其中核心药物是茯苓。心肾相交理论主要是来自道家内丹术的命门水火,内丹术的命门水火又来自外丹术的铅汞,与内经的水火既济,水火未济两卦。

关键词：命门太极阴阳精气神