检索结果-南通市图书馆

作者：臧金凤北京中医药大学

学位级别：硕士

目的雌激素是女性体内非常关键的调节激素,在人体分布广泛,可调控女性的生殖、神经、心血管、骨骼等系统的功能,在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、骨质疏松、绝经后妇女综合征等多种疾病的发生发展和转归中起着重要作用;而雌激素发挥上述作用... 详细信息

目的雌激素是女性体内非常关键的调节激素,在人体分布广泛,可调控女性的生殖、神经、心血管、骨骼等系统的功能,在乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、骨质疏松、绝经后妇女综合征等多种疾病的发生发展和转归中起着重要作用;而雌激素发挥上述作用离不开其在靶细胞上的关键作用靶点——雌激素受体(Estrogen receptor, ER)。ER有ERα和ERβ两种亚型,位于胞浆或胞核内,具有转录因子的作用。雌激素与ER结合,形成二聚体,然后与雌激素受体反应元件(estrogen response element, ERE)结合,刺激靶基因转录,从而调节雌激素促进细胞增生、分化和维持正常的生理功能。其信号传导过程属于基因型慢效应途径。近年来多项研究发现,雌激素对靶细胞的作用除了基因型慢效应外,还有非基因型快速效应。研究表明,存在一种膜性受体——G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor, GPER),雌激素与该受体结合,反式活化表皮因子生长受体(epidermal growth factor receptor, EGFR)、调节细胞外信号调节激酶(extracellular regulate kinase, ERK)、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinase, MAPK)等激酶活性,从而激活相应的信号转导通路,引发非基因型快速效应,使雌激素敏感器官产生细胞增殖反应,广泛参与机体的病理生理调控。与内源性雌激素结构类似的植物雌激素(phytoestrogen, PE),也可通过与体内相应的雌激素受体结合发挥雌激素和抗雌激素双重效应。中药丹参是唇形科植物丹参的干燥根及根茎,具有活血祛瘀、凉血消痈、清热安神等功效。现代药理研究表明,丹参在生物体内可参与多项重要的生命活动,表现出保护心血管、增强机体免疫功能、抗菌、抗炎、抗氧化、镇痛、抗衰老等多方面药理效应,特别是在多个靶器官都具有抗肿瘤的功效。其主要活性成分丹参酮ⅡA是丹参酮发挥药效作用的重要物质基础,具有植物雌激素药理功效,其药理作用靶点和途径的揭示将为药物的临床应用提供重要的实验依据。本课题主要研究丹参酮ⅡA对宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞和子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的抑制效应及其ER介导途径。方法采用MTT法检测细胞活性,间接反映细胞增殖;应用流式细胞技术检测细胞周期;应用Western blot法检测相应雌激素效应蛋白表达。结果1.丹参酮ⅡA对宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞、子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响应用人的宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞、子宫内膜癌Ishikawa细胞为研究载体,丹参酮ⅡA为研究对象,通过MTT方法检测细胞增殖情况。1.1检测不同浓度丹参酮ⅡA对宫颈癌siha、乳腺癌T47D细胞、子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖的影响结果：通过MTT法进行细胞增殖试验,与对照组相比,丹参酮ⅡA表现出抑制宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞、子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖作用,且表现出一定的剂量依赖性。1.2检测ER完全拮抗剂ICI182 780、ERα拮抗剂MPP、ERβ拮抗剂PHTPP干预下宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞增殖变化结果：(1)ERa拮抗剂MPP可增强丹参酮ⅡA对宫颈癌siha细胞增殖的抑制作用：ERβ拮抗剂PHTPP可减弱丹参酮ⅡA对宫颈癌siha细胞增殖的抑制作用。(2)ER完全拮抗剂I(CI182 780可显著增强丹参酮ⅡA对乳腺癌T47D细胞增殖的抑制作用。2.丹参酮ⅡA对宫颈癌siha、乳腺癌T47D细胞周期的影响应用人的宫颈癌siha、乳腺癌T47D细胞为研究载体,丹参酮ⅡA为研究对象,通过流式细胞术检测细胞周期变化。结果：选取药物作用效果显著的48h检测细胞周期,发现雌二醇对宫颈癌siha乳腺癌T47D细胞增殖指数有明显升高作用。而丹参酮ⅡA可使宫颈癌siha、乳腺癌T47D细胞增殖指数显著降低,与雌二醇的作用趋势相反,主要表现在S期细胞比例明显降低,而Go/Gl期细胞比例明显增加。3.丹参酮ⅡA对宫颈癌siha细胞、乳腺癌T47D细胞、子宫内膜癌Ishikawa细胞雌激素效应蛋白的表达3.1以siha细胞为载体,应用Western blot方法观察丹参酮ⅡA对p-ERK、cyclin D两种蛋白表达的影响,从蛋白水平探讨丹参酮ⅡA发挥植物雌激素样作用的机制。结果：丹参酮ⅡA可使宫颈癌siha细胞p-ERK和cyclin D表达水平显著降低,且表现出一定的剂量依赖性。3.2以T47D细胞为载体,应用Western blot方法观察丹参酮ⅡA对GPER、p-ERK、cyclinD三种蛋白表达的影响,从蛋白水平探讨丹参酮ⅡA发挥

来源：

同方学位论文库评论

羟基红花黄色素A的植物雌激素样作用及机制研究

引用

作者：陈梦北京中医药大学

学位级别：硕士

一研究目的雌激素(estrogen, E)是人体内关键的调节激素,与雌激素受体(estrogen receptor,ER)结合后发挥生物学效应,这点对于女性来说更为重要。妇女绝经后易高发卵巢癌、子宫内膜癌、骨质疏松、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化等疾病是因... 详细信息

一研究目的雌激素(estrogen, E)是人体内关键的调节激素,与雌激素受体(estrogen receptor,ER)结合后发挥生物学效应,这点对于女性来说更为重要。妇女绝经后易高发卵巢癌、子宫内膜癌、骨质疏松、阿尔茨海默病、动脉粥样硬化等疾病是因为绝经后雌激素水平显著降低引发的。虽然目前采用雌激素替代疗法(estrogen replacement therapy, ERT)可缓解症状,但是副作用也不容小视。此时从天然植物中提取,无明显副作用的植物雌激素(phytoestrogen, PE)进入人们的研究视野。许多治疗妇科疾病的中药如川红花、牛膝、补骨脂等均含有植物雌激素成分。植物雌激素与内源性雌激素结构类似,同样是与体内相应的ER结合发挥作用,具有雌激素和抗雌激素双重效应。一方面,当体内雌激素水平较低时,PE与ER结合发挥微弱的雌激素样作用,并启动一系列生理反应;另一方面,体内雌激素水平较高时,PE又可竞争性地抑制内源性雌激素发挥作用而产生抗雌激素作用。羟基红花黄色素A (hydroxysafflor yellow A, HSYA)是中药红花中生物活性最强的药理成分,发挥作用的过程与内源性雌激素类似,其所具有的雌激素受体亚型特异性结合与调节功能的相关研究尚未见报道。本研究拟从细胞与分子水平着手,阐明HSYA的植物雌激素样作用及发挥作用的物质基础和作用机制,以期为红花相关中成药及制剂的临床应用提供理论依据。二研究方法和结果 1HSYA对T47D细胞和SK-BR-3细胞增殖、细胞周期的影响 1.1以ER阳性人乳腺癌T47D细胞为研究载体,以HSYA为研究对象,通过MTT方法检测细胞增殖情况,通过流式细胞术检测细胞周期变化。 1.1.1检测不同浓度HSYA对T47D细胞增殖的影响结果：应用MTT去进行细胞增殖试验,与正常对照组相比,HSYA在24h即表现出促细胞增殖作用,在48h时最显著,至72h时作用减弱。 1.1.2检测ER完全拮抗剂、ERa拮抗剂、ERβ拮抗剂、ERa激动剂、ERp激动剂干预下T47D细胞增殖变化结果：HSYA对T47D细胞增殖的促进作用,可被雌激素受体完全拮抗剂所拮抗。加入ERa拮抗剂MPP与ERβ拮抗剂PHTPP后拮抗了雌二醇及HSYA促细胞增殖的作用。并且相同剂量的PHTPP比MPP的作用更明显,提示ERβ表达量的变化对细胞增殖的影响比ERa更显著。与正常对照组相比,雌二醇组及雌二醇分别加入ERa激动剂PPT、ERβ激动剂DPN组,促进细胞增殖作用显著。在HSYA加入ERa激动剂PPT、ERβ激动剂DPN后,其对于HSYA原有的促增殖作用无太大影响。但与10"7mol-L-1HSYA相比,加入PPT72h时具有显著促进作用。 1.1.3检测HSYA对T47D细胞周期的影响结果：选取药物作用效果显著的48h检测细胞周期,发现10-6mmo1·L-1、10-7mo1·L-1的HSYA使细胞S期比例增加,G2/M期的比例也有小幅上升,使细胞增殖指数升高。 1.2以ER阴性人乳腺癌SK-BR-3细胞为研究载体,以HSYA为研究对象,通过MTT方法检测细胞增殖情况。结果：10-5mol·L-1-10"7mol·L-1的HSYA对SK-BR-3细胞有抑制作用,并且该作用一直持续48h.10-9mol·L-1的HSYA对细胞有轻微的促进增殖作用。48h时各组与正常对照组相比均无显著性差异。 2HSYA对T47D细胞ERmRNA表达的影响采用实时荧光定量RT-PCR技术,从基因水平探讨HSYA发挥植物雌激素样作用的机制。结果：HSYA显著促进ERα、ERPmRNA的表达。药物作用组ERβmRNA/ERamRNA比值显著高于正常组。 3HSYA对T47D细胞和SK-BR-3细胞雌激素效应蛋白表达的影响 3.1以T47D细胞为载体,应用Western blot方法观察HSYA对ERα、ERβ、ERK1/2、 p-ERK1/2、P27、PR六种蛋白表达的影响,从蛋白水平探讨HSYA发挥植物雌激素样作用的机制。结果：10-7mol·L-1的HSYA促进ERa表达达最大值,且呈现一定剂量依赖性。10-7mol·L-1、10-8mol·L-1的HSYA促ERp表达的作用最明显。ERp与ERa的比值随HSYA浓度的变化而变化,与细胞增殖相关,在10"7mol·L-1、10-8mol·L-1HSYA作用下,ERβ/ERa值最大,促细胞增殖作用也应最显著。 10-7mol·L-1的HSYA显著促进ERK1/2及p-ERK1/2的表达。HSYA作用下P27蛋白的表达均显著低于正常组。10"7mol·L-1、10-8mol·L-1的HSYA显著促进PR蛋白表达,但10-9mol·L-1抑制了PR蛋白表达。 3.2

来源：

同方学位论文库评论

四物汤植物雌激素样效应的多靶点分子机制及ER介导的信号通路研究

引用

作者：张则业北京中医药大学

学位级别：硕士

雌激素在人体内的作用广泛,在人体的多个系统都发挥着重要的生理功能。植物雌激素是主要来源于植物,可以起到类似雌激素作用的活性成分。许多中药方剂长期应用于妇科临床并具有显著疗效,针对其药理机制的研究发现,在人体的多个系统都发... 详细信息

雌激素在人体内的作用广泛,在人体的多个系统都发挥着重要的生理功能。植物雌激素是主要来源于植物,可以起到类似雌激素作用的活性成分。许多中药方剂长期应用于妇科临床并具有显著疗效,针对其药理机制的研究发现,在人体的多个系统都发挥着重要的生理功能。四物汤被誉为“妇科第一方”,由当归、川芎、白芍、熟地黄四味药组成,应用于妇科的功效主要为补血调经。前期已经有研究表明四物汤可以发挥拟雌激素样作用或抗雌激素样作用,本篇研究将从四物汤的植物雌激素效应入手,两个方面探讨四物汤植物雌激素效应的双向调节。一方面,本研究用乳腺癌细胞来探究四物汤的抗雌激素样效应的分子机理,应用网络药理学、分子对接等方式筛选出四物汤对非三阴性乳腺癌的关键靶点,然后用乳腺癌（MCF-7）细胞进行体外验证。另一方面,本研究用雌性SD大鼠来探究四物汤的拟雌激素效应的分子机理,应用网络药理学结合文献研究查找分析“四物汤-雌激素”的关键通路靶点,并进行了体内实验的验证。本文的具体研究内容以及结果如下:（1）四物汤成分靶点数据库的建立从TCMSP数据库中收集四物汤的有效入血成分,熟地黄有效成分2种,白芍有效成分13种,川芎有效成分7种,当归有效成分2种。从ETCM数据库中收集到符合标准的四物汤主要成分共121种,其中白芍的有效成分16种,川芎的有效成分53种,当归的有效成分51种,熟地黄的有效成分有1种。接着,从TCMSP数据库收集每一成分的靶点信息。同时使用SwissTarget数据库寻找与成分化学结构相匹配的靶点。整合两个数据库的靶点作为药物靶点数据进行使用。（2）非三阴性乳腺癌相关靶点收集从OMIM,GeneCards收集乳腺癌的相关靶点,同时从GEO数据库中筛选相关的芯片进行差异分析,进行整合。共筛选出3131个non-TNBC相关基因。（3）“四物汤-非三阴性乳腺癌”关键|靶点的筛选整合“四物汤-非三阴性乳腺癌”数据靶点,获得相关基因79个,构建蛋白互作网络,“degree”值前十的靶点为:IL6,AKT1,JUN,PTGS2,MAPK8,CASP3,ESR1,CAT,MMP9 和 PPARG。通过 oncomine 肿瘤数据库以及 Kaplan-Meier 生存分析网站进一步筛选,将PTGS2,ESR1,CAT,PPARG确认为关键靶点进行后续验证。（4）“四物汤-非三阴性乳腺癌”关键靶点的分子对接验证四物汤的化学成分与靶点的结合度良好,其中Myricanone与PPARG的对接分数为-8.8,（+）-catechin 与 CAT 的对接分数为-7.8,Beta-sitosterol 与 PTGS2 的对接分数为-9.2,（+）-catechin与ESR1的对接分数为-8.0。（5）四物汤对MCF-7细胞抗雌激素样作用靶点验证四物汤干预后,MCF-7细胞增殖明显减少,四物汤浓度在5mg/mL的浓度时抑制效果最好。RT-PCR检测结果表明:与对照组相比,四物汤组的PTGS2,ESR1,PPARG的mRNA表达量水平升高（P＜0.01）。与对照组相比,四物汤组CAT的mRNA表达水平降低。Western Blot结果与RT-PCR结果一致。因此,四物汤可以通过调控PTGS2,ESR1,PPARG,CAT等靶向位点对MCF-7细胞发挥抗雌激素样作用。（6）“四物汤-雌激素”相关通路机制分析依据“四物汤-雌激素”相关靶点,KEGG通路分析符合p-value＜0.05的共有132 条通路。与激素相关的通路有:AGE-RAGE signaling pathway in diabetic complications、Prolactin signaling pathway、Endocrine resistance、Estrogen signaling pathway、MAPK signaling pathway;炎症相关的通路有:TNF signaling pathway、NF-kappa B signaling pathway、IL-17 signaling pathway、C-type lectin receptor signaling pathway、Th17 cell differentiation、Hepatitis C;免疫相关的通路有:Toll-likereceptor signaling pathway、C-type lectin receptor signaling pathway;有关凋亡的通路有:Platinum drug resistance、Apoptosis、Apoptosis-multiple species;神经系统相关通路:Neurotrophin signaling pathway;代谢相关的通路有:Tryptophan metabolism、Drug

来源：

同方学位论文库评论

基于GPER信号通路探讨四物汤的雌激素样效应及其分子机制

引用

作者：卢迪北京中医药大学

学位级别：硕士

目的宋《太平惠民和剂局方》将四物汤列于“治妇人诸疾”,后世成为治冲任虚损所致各种妇科病证的基础方。作为中医的经典方剂,近年来实验研究表明,四物汤及其组方有一定的雌激素样作用,目前对其雌激素效应靶点的研究主要集中在经典雌激... 详细信息

目的宋《太平惠民和剂局方》将四物汤列于“治妇人诸疾”,后世成为治冲任虚损所致各种妇科病证的基础方。作为中医的经典方剂,近年来实验研究表明,四物汤及其组方有一定的雌激素样作用,目前对其雌激素效应靶点的研究主要集中在经典雌激素核受体ERα和ERβ亚型,对其通过膜受体途径发挥雌激素效应的分子机制还不明确。G蛋白偶联雌激素受体(GPER)是近年来发现并引起广泛关注的雌激素膜受体,不同于经典雌激素核受体,它能介导雌激素快速非基因组效应或间接参与基因转录的调控,继而影响下游信号分子表达而发挥其调控作用[2]。本实验旨在深入探索四物汤通过GPER介导发挥雌激素样效应的可能分子机理。方法1.40只未性成熟SD大鼠随机分为正常对照组、雌激素组和四物汤高、低剂量组,分别以生理盐水、雌激素和四物汤颗粒剂灌胃大鼠4天后,腹主动脉取血后,分组收集保存含药血清;在乳鼠出生后至72h之间,无菌操作剪取乳鼠头盖骨,以酶消化法提取原代成骨细胞(ROBs),显微镜下观察ROBs的形态学特征,碱性磷酸酶染色和茜素红染色用于ROBs的鉴定和成熟分化鉴定;MTT法检测四物汤含药血清对ROBs增殖活性的影响,并以G1和G15作为工具药,检测四物汤含药血清对GPER介导信号通路的影响;利用细胞免疫荧光实验,并以G1和G15作为工具药,检测PI3K、AKT、p-Akt和EGFR、ERK、p-ERK在ROBs中表达水平的变化。2.40只未性成熟SD大鼠随机分为正常对照组、雌激素组和四物汤高、低剂量组,分别以生理盐水、雌激素和四物汤颗粒剂灌胃大鼠4天后,腹主动脉取血后,分组收集保存含药血清,同时在取血后迅速剖开腹腔,分离出子宫,称重,计算子宫系数;采用MTT法检测四物汤含药血清对ER阳性MCF7细胞增殖活性的影响,并以ERα拮抗剂MPP或ERβ拮抗剂PHTPP作为工具药,检测四物汤含药血清对ER信号通路的影响;利用western blot实验,检测在四物汤含药血清作用下,MCF7细胞中ERα和ERβ蛋白表达量和ERα/ERβ比值的变化。3.40只未性成熟SD大鼠随机分为正常对照组、雌激素组和四物汤高、低剂量组,分别以生理盐水、雌激素和四物汤颗粒剂灌胃大鼠4天后,腹主动脉取血后,分组收集保存含药血清;利用western blot实验,检测在四物汤含药血清作用下,MCF7细胞中PI3K和p-Akt蛋白表达量的变化;利用RT-PCR实验,并以G15作为工具药,检测在四物汤含药血清作用下,MCF7细胞中GPER、PI3K和AKTmRNA表达量的变化。结果1.基于GPER通路探究四物汤对成骨细胞的雌激素样效应的作用机制ALP染色后发现,ROBs中阳性反应呈现灰黑色颗粒或块状、条状沉淀;茜素红染色后,ROBs中钙沉积阳性细胞呈现橘红色;四物汤含药血清可促进ROBs增殖(P0.05);在四物汤高剂量含药血清作用后,ROBs中EGFR、p-ERK的平均荧光强度增强(P0.05)。2.基于ER通路探究四物汤对ER阳性细胞的雌激素样效应的作用机制四物汤含药血清可发挥雌激素样效应,增加未性成熟大鼠的子宫系数(P<0.05或0.01);四物汤含药血清可促进MCF7细胞增殖(P<0.05或0.01),该促增殖作用在加入MPP或PHTPP后均被减弱,且加入PHTPP后拮抗作用更显著(P<0.01);Western blot检测发现,四物汤含药血清可提高MCF7细胞ERα、ERβ表达水平,并可降低ERα与ERβ 比值(P<0.01)。3.基于GPER通路探究四物汤对ER阳性细胞的雌激素样效应的作用机制Western blot检测发现,四物汤含药血清作用ER阳性MCF7细胞后,与正常对照组相比,四物汤高、低剂量组的PI3K、p-Akt蛋白表达量减少(P<0.01);从结果中也可看出,四物汤含药血清对PI3K、p-Akt表达量均不及雌激素组明显(P<0.01)。RT-PCR检测发现,与正常对照组相比,四物汤含药血清高、低剂量组可使细胞MCF7中GPER、PI3K、AKTmRNA表达减少(P<0.01);但在

来源：

同方学位论文库评论

基于FOXO3a转录因子探讨二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护机制

基于FOXO3a转录因子探讨二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞的保护...

引用

作者：赵笛北京中医药大学

学位级别：硕士

目的意义卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)指妇女40岁之前出现的非生理性月经停止,为临床常见的妇科疾病,诱发一系列生殖内分泌及健康等问题,严重者会丧失生殖能力。尤其随着现代生活节奏加快、生活压力增大,卵巢早衰的发病率... 详细信息

目的意义卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)指妇女40岁之前出现的非生理性月经停止,为临床常见的妇科疾病,诱发一系列生殖内分泌及健康等问题,严重者会丧失生殖能力。尤其随着现代生活节奏加快、生活压力增大,卵巢早衰的发病率逐年升高,近年来甚至有年轻化趋势。化疗作为治疗免疫性疾病和肿瘤的常用手段,疗效确切,广泛应用于临床;但化疗药物对靶细胞选择性较差,不仅杀死病变细胞,对正常组织和细胞也会造成不同程度的损伤。随着化疗导致卵巢功能低下和不孕的报道日渐增多,化疗作为引发POF重要原因之一日益受到人们的关注。顺铂(cisplatin,CDDP)即为临床常用的化疗药物,有不少报道称其对卵泡发育有一定损伤,并具有卵巢毒性。本实验室在前期研究中已成功建立了顺铂诱导卵巢早衰的动物模型。FOX03a转录因子为FOXO蛋白家族的成员之一,参与细胞的增殖、生长、分化、凋亡及衰老等重要生命过程的调控。此外,FOX03a转录因子是磷脂酰肌醇-3-激酶-蛋白激酶 B(phosphatidylinositol-3-kinase-protein-kinaseB,PI3K-AKT)信号通路下游的重要靶蛋白之一,通过调节非特异性周期依赖性激酶抑制因子(cyclin-dependent kinase inhibitor,CKI)P27kip1和前凋亡蛋白Bim来调控细胞周期及细胞凋亡。中医验方二仙汤是补肾常用方药,现代药理研究表明其对性腺、内分泌及免疫系统、骨质疏松等均具有显著的改善作用,临床上普遍应用于妇女围绝经期综合症、更年期高血压、绝经期骨质疏松、前列腺炎等疾病的治疗,对卵巢早衰也有显著疗效。目前对二仙汤的实验研究大多为在体动物模型的形态学观察及生理生化指标的检测,而分子机制方面的研究少有报道。二仙汤治疗化疗损伤性卵巢早衰的分子作用机制尚未阐明,尤其基于FOX03a转录因子探讨二仙汤对顺铂损伤卵巢颗粒细胞的分子保护机制国内尚未有研究。本实验以离体大鼠卵巢颗粒细胞为研究对象,基于FOX03a-P27kip1/Bim途径探讨补肾验方二仙汤对卵巢颗粒细胞增殖及凋亡的作用机制,以期为二仙汤应用于临床治疗卵巢早衰提供更为详实有力的理论依据。研究方法提取原代大鼠卵巢颗粒细胞,利用顺铂制备颗粒细胞损伤模型,分别给予正常、戊酸雌二醇、二仙汤高、中、低剂量药理血清(大鼠源),观察二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞的干预效果:MTT法检测二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞增殖的影响;流式细胞术检测二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞周期及凋亡的影响;免疫组织化学法检测二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞中FOXO3a、P27kip1、Bim表达定位的影响,同时加入LY294002抑制剂,进一步验证二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞的保护机制是否与调控FOXO3a及P27kip1、Bim的表达有关;蛋白印迹法检测二仙汤药理血清对顺铂损伤卵巢颗粒细胞中FOX03a、P27kip1、Bim表达水平的影响。研究结果1.二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响二仙汤各剂量药理血清对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞均具有明显的增殖促进作用,其中,中剂量组效果最为显著;药理血清的增殖促进作用一直持续到72h,且以48h作用效果最为显著。因此本研究选择48h为药理血清作用时间。2.二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞周期及凋亡的影响(1)二仙汤各剂量药理血清均能影响顺铂损伤卵巢颗粒细胞的周期时相变化:使S期细胞显著增多,Go/G1期细胞相对减少,增殖指数升高。各剂量组间无差异,其中低剂量组增殖效果较好。(2)二仙汤各剂量药理血清均能降低顺铂损伤卵巢颗粒细胞的凋亡率,中剂量组效果最为显著。3.二仙汤对顺铂损伤大鼠卵巢颗粒细胞中FOXO3a/P27kip1/Bim蛋白表达的影响(1)FOXO3a在胞质胞核内均有表达,P27kip1主要表达于胞核,Bim主要表达于胞质;顺铂诱导FOXO3a在胞核内的表达,核内阳性颗粒明显增多,同时诱导P27kip1、Bim高表达,二仙汤各剂量组则均能明显降低三者阳性颗粒的表达;平均光密度分析结果显示,模型组与正常组相比,FOXO3a、P27kip1、Bim的平均光密度均有明显增加,而戊酸雌二醇组和二仙汤各剂量组与模型组相比,三者平均光密度值均有显著降低,各剂量组之间无差异,以中剂量效果较好。加抑制剂LY294002各组与对应不加抑制剂各组相比,FOXO3a、P27kip1、Bim阳性颗粒的表达均明显增加且三者的平均光密度值均有所升高。(2)蛋白印迹结果显示,模型组与正常组相比,FOXO3a、P27kip1、Bim的相对表达量均显著增加,而戊酸雌二醇组和二仙汤各剂量组与模型组相比,三者相对表达量均有明显降低。总体上,各剂量组之间无明显差异,低

来源：

同方学位论文库评论

二仙汤治疗顺铂所致大鼠化疗性损伤卵巢早衰的实验研究

引用

作者：张丽娟北京中医药大学

学位级别：硕士

研究背景卵巢早衰(Premature Ovarian Failure, POF)是指月经初潮正常或青春期延迟,第二特征发育正常的女性在40岁以前出现持续性闭经和性器官萎缩,并伴有卵泡刺激素和黄体生成素升高,而雌激素降低的综合征,为妇科常见的内分泌疾病。流... 详细信息

研究背景卵巢早衰(Premature Ovarian Failure, POF)是指月经初潮正常或青春期延迟,第二特征发育正常的女性在40岁以前出现持续性闭经和性器官萎缩,并伴有卵泡刺激素和黄体生成素升高,而雌激素降低的综合征,为妇科常见的内分泌疾病。流行病学调查显示POF在40岁之前的发病率为1/100,30岁之前为1/1000,20岁之前为1/10000,且发病率呈逐年上升趋势。POF可导致不孕不育及低雌激素状态,也可导致一些其他疾病,严重影响患者生活,影响女性生理和心理健康。卵巢早衰成为当今医学研究的热点和难点。二仙汤是是经过长期临床实践证明疗效确凿的著名方剂。组方药物为：仙茅、淫羊藿、巴戟天、当归、知母、黄柏。在二仙汤中仙茅、淫羊藿温肾阳;巴戟天补肾壮阳,又能补益精血;当归滋肾补肝,活血养血;知母、黄柏滋肾阴,泻相火,对卵巢早衰的临床症状具有明显的改善作用。也常用于更年期综合征,闭经以及其他慢性病。从而成为治疗妇科病证中运用广泛的方剂之一。实验一顺铂建立大鼠卵巢早衰的实验研究目的：探讨采用临床常用药物顺铂建立化疗性损伤卵巢早衰动物模型的方法,通过不同剂量的顺铂腹腔注射,造成大鼠卵巢功能的损伤,确定最适宜的顺铂浓度,作为建立顺铂所致大鼠卵巢早衰的模型的剂量,并且用于下一步实验,也为今后实验研究提供帮助。方法：筛选出动情周期正常的60只健康雌性大鼠进入实验,随机分为正常组,低剂量组和高剂量组,每组20只。第1、第8天分别按低剂量组和高剂量组分别4mg/kg、6mg/kg腹腔注射顺铂注射液,正常组于同一时间腹腔注射1ML的生理盐水。造模期间每天定时进行阴道脱落细胞涂片实验,观察动情周期的变化及大鼠各项生命体征并记录体重变化。全部大鼠于第二次注射后7d进行取血,测血清中卵泡刺激素(FSH)、雌二醇(E2)、孕酮(Pro)和黄体生成素(LH)水平含量变化。取卵巢组织行病理切片,进行HE染色观察卵巢形态学。结果：(1)大鼠体重给药前各组无明显变化,无统计学差异。给药后不同剂量组大鼠体重均有不同程度下降,且行动缓慢,喜弓背、蜷缩,食欲下降,体毛晦暗无光泽,与正常组比较在注射顺铂8d后高剂量组体重较低剂量组明显下降,正常组体重平稳增长。(2)给药后,正常组大鼠动情周期仍然规律,低剂量组用药后动情周期紊乱,动情间期延长,动情缩短。但停用药一周后部分大鼠动情周期有所恢复。高剂量组大鼠动情周期延长,甚至长期停留在动情间期,不出现动情期。停药后一周动情周期没有恢复。(3)高剂量组与正常组比较大鼠血的FSH值升高有统计学意义(P0.05)。顺铂对大鼠血清中Pro含量的影响,给药前后各组均无明显差异(P>0.05)。E2水平在给药后两组均有下降,与正常组比较有统计学意义(P0.05)。顺铂对大鼠血清中Pro含量的影响,给药前后各组均无明显差异(P>0.05)。E2水平在给药后两组均有下降,与正常组比较有统计学意义(P<0.05)。(4)正常组大鼠卵巢增大,各级卵泡生长活跃,闭锁卵泡很少,且卵泡颗粒细胞层较多。而低剂量组原始卵泡和初级卵泡减少,闭锁卵泡增加,黄体数量减少。高剂量组可见很少次级卵泡和成熟卵泡,大多数为闭锁卵泡,卵泡颗粒细胞层明显变薄,黄体明显减少。结论：本实验研究给予大鼠不同剂量的顺铂注射后,卵巢功能出现不同程度的损伤,而高剂量组模型更为理想。本实验研究为建立稳定的卵巢早衰动物模型提供一种操作简单,成功率高,结果可靠的实验方法。实验二二仙汤对大鼠化疗性损伤卵巢颗粒细胞凋亡的影响目的：本实验将以与卵泡凋亡有关的细胞因子和基因为研究主线,根据实验一原理建立化疗性损伤卵巢早衰动物模型,探讨二仙汤对卵泡生长、发育和凋亡的影响,通过整体动物实验,在细胞凋亡的分子水平阐明二仙汤治疗卵巢早衰的作用机制,为研究抗卵巢早衰新药

来源：

同方学位论文库评论

基于AGE/RAGE/Caspase 3通路介导的凋亡抑制途径探究二仙汤抗卵巢早衰的分子机制

基于AGE/RAGE/Caspase 3通路介导的凋亡抑制途径探究二仙汤抗卵巢...

引用

作者：刘姣北京中医药大学

学位级别：硕士

目的卵巢早衰(Premature Ovarian Failure,POF)是妇科常见内分泌疾病,是造成不孕的主要原因之一。近年来,POF发病率呈上升趋势,且发病日益年轻化,严重困扰育龄期妇女。POF致病因素较多,据报道放化疗引发的POF占发病人群的25%,引起了人... 详细信息

目的卵巢早衰(Premature Ovarian Failure,POF)是妇科常见内分泌疾病,是造成不孕的主要原因之一。近年来,POF发病率呈上升趋势,且发病日益年轻化,严重困扰育龄期妇女。POF致病因素较多,据报道放化疗引发的POF占发病人群的25%,引起了人们广泛的关注。POF主要发病机制为卵泡过早耗竭,卵巢颗粒细胞(Ovarian granulosa cells,GCs)在卵母细胞生长、发育过程中为其提供营养和能量支持,促进卵泡发育及卵母细胞成熟,是卵巢实现功能的重要基础,因此,GCs功能障碍是POF发生的重要因素。GCs 为晚期糖基化终产物受体(Advanced glycosylation end product receptor,RAGE)阳性细胞,晚期糖基化终产物(Advanced glycosylation end products,AGEs)与RAGE结合后可激活多种不同细胞内信号通路,包括P38 MAPK、MAPK/ERK、TGF-β/Smad、PI3K/Akt、JAK/STAT和NF-κB等,诱导细胞凋亡、氧化应激、自噬及慢性炎症反应等过程的发生,最终引发多种与衰老相关的疾病。基于此,本研究将以AGE/RAGE轴调控的下游相关通路为主要分子途径,深入探究中药防治POF的可能机制。FoxO家族蛋白参与重要的细胞过程,如细胞代谢及细胞凋亡等。促凋亡因子FoxO1在氧化应激状态下过表达激活凋亡因子Caspase 3促进GCs凋亡,诱导卵巢闭锁卵泡增加。SIRT1是一种NAD+依赖性的去乙酰化酶,通过对FoxO1去乙酰化促进基因转录,保护卵母细胞,避免氧化应激引起的损伤。基于此,本研究将以SIRT1/FoxO1轴调控的下游相关通路为主要分子途径,深入探究中药主要成分防治POF的可能机制。中医将POF归于“闭经”范畴。肾为先天之本,五脏六腑之根,主藏精、发育与生殖,与人的生长、发育和衰老密切相关。中医认为肾精充盈与否在月经病发病中占主导因素,防治闭经主要应使肾精充盛,肾阴阳平衡。补肾方剂二仙汤,温补肾阳与滋阴泻火并重,补中有泻,可以调节肾阴阳平衡。自上世纪50年代由张伯纳教授组方并首先用于临床,二仙汤现已广泛应用于卵巢早衰等多种妇科内分泌疾病的治疗。但目前针对其治疗POF的具体分子通路的相关研究尚不够深入,特别是基于AGE/RAGE/Caspase 3信号通路探讨二仙汤抗POF的分子途径尚无报道。本研究以顺铂诱导的POF模型大鼠及H2O2构建的衰老模型KGN细胞为对象,基于AGE/RAGE/Caspase 3途径,探讨二仙汤抗卵巢衰老的药效作用靶点与分子通路,为临床防治卵巢早衰提供新的实验依据。方法1.基于AGE/RAGE/Caspase 3通路探究二仙汤抑制衰老大鼠卵巢凋亡与氧化的分子机制将大鼠分为六组:对照组、模型组、二仙汤低剂量组、二仙汤中剂量组、二仙汤高剂量组、雌二醇组。应用顺铂构建卵巢衰老模型,二仙汤及雌二醇灌胃持续21天。镜下观察大鼠阴道涂片,监测动情周期;测量大鼠体重和卵巢重量,检测二仙汤对POF大鼠卵巢系数的影响;HE染色法检测二仙汤对POF大鼠卵泡发育的影响;ELISA法检测二仙汤对POF大鼠性激素分泌的影响;TUNEL染色法检测二仙汤对卵巢组织细胞凋亡水平的影响;生化分析法检测二仙汤对POF大鼠氧化水平的影响;Western Blot法检测二仙汤对POF大鼠卵巢组织细胞凋亡及其传导通路关键蛋白表达的影响。2.基于AGE/RAGE/Caspase 3通路探究二仙汤抑制衰老卵巢颗粒细胞凋亡与氧化的分子机制将KGN细胞分为对照组、模型组、二仙汤低剂量组、二仙汤高剂量组、雌二醇组;应用H2O2构建衰老KGN细胞模型,二仙汤组及雌二醇组分别加入不同剂量二仙汤和雌二醇干预24h。UPLC/MS法分析、验证二仙汤冻干粉的主要成分;CCK-8细胞活性分析检测二仙汤对衰老KGN细胞增殖的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测二仙汤对衰老KGN细胞衰老状态的影响;流式细胞术检测二仙汤对衰老KGN细胞凋亡水平的影响;流式细胞术检测二仙汤对衰老KGN细胞氧化水平的影响;生化分析法检测二仙汤对衰老KGN细胞氧化水平的影响;qRT-PCR法检测二仙汤对衰老KGN细胞氧化及其传导通路关键因子mRNA表达的影响;Western blot检测二仙汤对衰老KGN细胞氧化及其传导通路关键蛋白表达的影响。3.基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制衰老卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的分子机制将KGN细胞分为对照组、模型组、小檗碱高剂量组和低剂量组;应用H2O2构建衰老KGN细胞模型,小檗碱组分别加入不同浓度小檗碱干预24 h。CCK-8细胞活性分析检测小檗碱对衰老KGN细胞增殖的影响;β-半乳糖苷酶染色法检测小檗碱对衰老KGN细胞衰老状态的影响;

来源：

同方学位论文库评论

姜黄素对体外培养的人循环纤维细胞分化迁移的影响研究

引用

作者：富徐燕北京中医药大学

学位级别：硕士

纤维化是临床上常见的病理生理改变,是在创伤、感染、炎症、血液循环障碍及免疫反应等多种机体内外致病因素作用下,以细胞外基质(ECM)异常沉积为特征的各种疾病的不良结局,是机体对损伤的一种反应。纤维化的可怕后果是严重影响组织、器... 详细信息

纤维化是临床上常见的病理生理改变,是在创伤、感染、炎症、血液循环障碍及免疫反应等多种机体内外致病因素作用下,以细胞外基质(ECM)异常沉积为特征的各种疾病的不良结局,是机体对损伤的一种反应。纤维化的可怕后果是严重影响组织、器官的功能,甚至可危及患者的生命。过去学者认为组织固有的(肌)成纤维细胞是细胞外基质生成的主要细胞,但自从1994年Bucala等人发现了循环纤维细胞后,越来越多的研究证明循环纤维细胞在纤维化疾病的产生和发展过程发挥了重要作用。循环纤维细胞由骨髓分化而来,存在于外周血中,能在趋化因子的作用下随血而至,到达损伤部位,活化的循环纤维细胞不仅自身可分泌ECM参与纤维化进程,也能通过分化成为(肌)成纤维细胞,来发挥生理性和病理性的纤维化作用。姜黄素是从姜科植物姜黄中提取的一种植物多酚,具有抗多种器官纤维化的功能。研究目的本研究通过建优化人循环纤维细胞体外培养、鉴定技术,研究人循环纤维细胞在体外生物活性、分化、迁移的规律,探讨姜黄素对人循环纤维细胞的干预作用及其机制,为下一步在体内开展肾间质纤维化病变过程中循环纤维细胞活化募集和姜黄素干预作用的研究奠定基础。研究方法本实验从人外周血中提取淋巴细胞进行分离培养鉴定,当细胞分化为循环纤维细胞后,再进行姜黄素的各项实验研究。 1.循环纤维细胞的培养和鉴定采用密度梯度离心法分离纯化细胞,观察细胞的生长和分化情况,并采用流式细胞术和免疫化学法对细胞进行鉴定。 2.姜黄素对人循环纤维细胞生物活性的影响通过CCK-8法测定姜黄素对人循环纤维细胞活性的作用,采用流式细胞术检测姜黄素对细胞表型(COL I、CD34、CD45、CCR7、α-SMA)转变的影响,以及应用ELISA法检测姜黄素对细胞合成分泌致纤维化因子TGF-β1的作用。 3.姜黄素对循环纤维细胞靶向迁移的影响通过transwell小室实验,观察CCL21/CCR7信号通路对人循环纤维细胞迁移的作用,探索不同浓度姜黄素对由CCL21/CCR7信号通路介导的循环纤维细胞迁移的影响。研究结果 1.免疫组化结果显示体外分离培养的细胞呈CD45, CCR7和COL Ⅰ强阳性(++),而CD34表达较弱(+)。流式细胞技术显示99.8%的贴壁细胞呈COL Ⅰ阳性,77.8%的细胞为CD45阳性,只有1.0%细胞呈CD34阳性。 2.姜黄素对人循环纤维细胞的活性具有双向调节作用。短时间(24h)作用,不同浓度的姜黄素都能促进细胞活性。而长时间(72h)的作用则呈抑制作用,并且姜黄素浓度越大,对细胞活性的抑制能力越强(p<0.01)。当作用时间为48h时,低浓度(1pmol/L,3μmol/L)的姜黄素能促进细胞活性,而高浓度(lOpmol/L,20μmol/L)则发挥了抑制细胞活性的作用。 3.姜黄素可抑制人循环纤维细胞标记物COL I、CCR7和a-SMA蛋白的相对表达量,且呈现剂量依赖性。随着姜黄素浓度的增加,可表达COL I或CCR7或a-SMA的阳性细胞数也相应地减少,当姜黄素浓度达到20μmol/L时,阳性细胞降至最低(P<0.01)。 4.姜黄素可提高人循环纤维细胞表面标记物CD34和CD45蛋白的相对表达量,随着姜黄素浓度的增加,表达CD34和CD45蛋白的细胞数目也相应地增加。 5.姜黄素可抑制人循环纤维细胞致纤维化因子TGF-β1的合成分泌,呈现剂量依赖性,随着姜黄素浓度持续上升,其抑制TGF-β1分泌的作用也相应的增加(P<0.01)。 6.人循环纤维细胞可在CCL21的诱导下发生定向迁移。在姜黄素作用下72h后,细胞的迁移率显著下降,且呈现浓度依赖效应,其迁移率随着姜黄素浓度的增加而降低,当姜黄素浓度达到10pmol/L和20pmol/L时,对细胞迁移的抑制能力最强(P<0.01)。结论 1.根据目前常用的循环纤维细胞的鉴定标准,通过细胞表面标记物可确定本实验分离纯化培养得到的细胞为人循环纤维细胞。 2.姜黄素可双向调控循环纤维细胞的活性,抑制其向成纤维细胞或肌成纤维细胞的转分化。 3.姜黄素可抑制循环纤维细胞分泌致纤维化因子TGF-β1,从而发挥抗纤维化作用。 4.人循环纤维细胞可强表达趋化因子受体CCR7,并且细胞可在趋化因子CCL21的诱导下发生定向迁移,揭示了CCR7/CCL21信号通路能够介导人循环纤维细胞的迁移。 5.姜黄素可通过降低CCR7的表达来阻止循环纤维细胞的迁移,且迁移率随着姜黄素浓度的增加而降低。

来源：

同方学位论文库评论

基于GPER途径探讨二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞的影响及其分子机制

基于GPER途径探讨二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞的影响及其分...

引用

作者：程慧凯北京中医药大学

学位级别：硕士

目的乳腺癌是全世界女性中最常被诊断出的癌症,且多数被确诊后的患者会继续出现创伤后应激障碍的症状,并且症状通常会持续至少一年,其中疼痛,疲劳和绝经后症状为最常见,这些症状的识别和治疗是临床面临的主要问题,因为这些症状会损害患... 详细信息

目的乳腺癌是全世界女性中最常被诊断出的癌症,且多数被确诊后的患者会继续出现创伤后应激障碍的症状,并且症状通常会持续至少一年,其中疼痛,疲劳和绝经后症状为最常见,这些症状的识别和治疗是临床面临的主要问题,因为这些症状会损害患者健康及其相关的生活质量,且可以在任何年龄发作,但通常最常见于中年女性。由于早期诊断和治疗的进步,过去几年中乳腺癌的死亡率呈下降趋势,目前针对不同亚型乳腺癌的内分泌治疗中,所使用的药物被用于治疗和预防雌激素受体阳性乳腺癌。有研究表明,内分泌疗法是治疗乳腺癌的最有效且毒性小的疗法,内分泌治疗药物利用率的提高带来了预防和治愈乳腺癌程序的改进,但这也带来了新的挑战,其面临的主要有晚期复发,耐药性,注射痛苦和缺乏依从性等挑战。因此,寻找一种更为天然、有效、安全并能改善内分泌疗法不足之处的治疗药物,将为乳腺癌的治疗提供帮助。近年来,中药在抗癌治疗中有着日益广泛的应用,丹参作为我国的传统中药,其活性有效成分丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA已被证明具有明显的抗乳腺癌细胞增殖的作用,这与其植物雌激素样作用密切相关,而二氢丹参酮Ⅰ作为丹参的另一重要活性成分,也被证明具有抑制肿瘤细胞增殖的作用,但其具体分子作用机制尚不明了。植物雌激素是植物产生的非甾体化合物,具有与内源性雌激素相似的化学结构,因此,可以通过激活或阻断雌激素与雌激素受体的结合,产生雌激素样和抗雌激素样作用。而雌激素受体是一类可以与雌激素特异性结合形成激素-受体复合物而发挥生物学效应的蛋白质,除经典核受体ERα和ERβ外,近年来研究者们从雌激素的靶细胞中又发现了一种新型的雌激素结合蛋白:G蛋白偶联雌激素受体(G protein-coupled estrogen receptor,GPER),其被证明与雌激素结合后,可激发细胞的非基因组信号传导途径,作用于下游细胞增殖和凋亡信号传导通路的相关信号分子,进一步调节细胞的增殖、分化、凋亡等行为。具体而言,在GPER介导的下游分子通路中,PI3K/AKT信号途径在细胞增殖、凋亡过程中起着重要的作用。有研究表明,PI3K/AKT过度激活状态和肿瘤的发生发展有着密不可分的关系,其可以通过调节细胞周期、细胞凋亡相关调控蛋白的活性介导乳腺癌细胞增殖效应,因此,GPER/PI3K/AKT信号传导通路已成为乳腺癌研究过程中的热点通路。本研究将选取常见的人乳腺癌MCF-7细胞为研究对象,观察二氢丹参酮Ⅰ对MCF-7细胞增殖、凋亡的影响,并应用GPER及其下游传导通路关键因子干预剂,探讨GPER及其介导的PI3K/AKT信号通路在二氢丹参酮Ⅰ抗人乳腺癌MCF-7细胞中的作用,以期为全面揭示丹参的抗肿瘤效应及其机制提供参考。方法1.采用MTT细胞增殖实验观察二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖率的影响;2.采用流式细胞术检测二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖周期的影向;3.采用Annexin V-FITC/PI双染法检测二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡率的影响,并应用干预剂检测其对二氢丹参酮Ⅰ影响人乳腺癌MCF-7细胞凋亡率的干预作用;4.采用Western Blot技术检测二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖周期相关蛋白、细胞凋亡相关蛋白以及GPER/PI3K/AKT信号通路关键蛋白因子表达的影响,并加入干预剂:GPER特异性激动剂G1、P13K特异性抑制剂LY294002,观察它们对二氢丹参酮Ⅰ影响MCF-7细胞增殖和凋亡相关蛋白因子表达的干预作用,并揭示GPER及下游PI3K/AKT信号传导通路在二氢丹参酮Ⅰ抗乳腺癌效应中的介导功能。结果1.二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响1.1二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖率的影响MTT检测结果显示,0.1～0.5μg/ml二氢丹参酮Ⅰ作用48h后,均可显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.01)。1.2二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞增殖周期的影响流式细胞术结果显示,二氢丹参酮Ⅰ作用48h后,0.1μg/ml二氢丹参酮Ⅰ能够将MCF-7细胞阻滞在G1期。Western Blot检测结果显示,0.1μg/ml二氢丹参酮Ⅰ作用MCF-7细胞48h后,细胞周期相关蛋白cylinE、cyclinD1、CDK2蛋白的表达量都有一定程度的下降(P<0.01或0.05),而cylinA2蛋白的表达量基本无改变。2.二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡的影响2.1二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡率的影响Annexin V-FITC/PI双染结果显示,二氢丹参酮Ⅰ可显著提高MCF-7细胞凋亡率(P<0.01)。2.2二氢丹参酮Ⅰ对人乳腺癌MCF-7细胞中凋亡相关蛋白表达的影响Western Blot检测结果显示,0.1μg/ml二氢丹参酮Ⅰ在作用MCF-7细胞48h后

来源：

同方学位论文库评论

丹参酮I植物雌激素样作用及其机制的研究

引用

作者：孙艳玲北京中医药大学

学位级别：硕士

一研究目的植物雌激素（phytoestrogen, PE）是从天然植物中提取的结构与内源性雌激素相似的一类化合物,能够与雌激素受体（estrogenreoePtors, ERs）结合发挥生物学效应,具有雌激素和抗雌激素双重效应,发挥何种效应取决于内源性雌... 详细信息

一研究目的植物雌激素（phytoestrogen, PE）是从天然植物中提取的结构与内源性雌激素相似的一类化合物,能够与雌激素受体（estrogenreoePtors, ERs）结合发挥生物学效应,具有雌激素和抗雌激素双重效应,发挥何种效应取决于内源性雌激素的水平和特异性的组织类型。流行病学研究发现,植物雌激素在许多疾病的预防和治疗方面均能发挥有益的作用,这些疾病心血管疾病、围绝经期综合症以及雌激素相关肿瘤（乳腺癌、前列腺癌）等。然而,研究中也发现了不一致的实验结果。因此,对其作用机制的研究和阐明自然成为研究者们关注的热点。作为中医治病用药的最主要形式之一,具有植物雌激素样作用的中药及其组成复方在这些疾病的预防和治疗中发挥了重要的作用。本实验通过观察不同浓度的丹参酮1对人乳腺癌T47D细胞增殖作用的影响,检测其对靶细胞雌激素受体亚型的调节作用及其效应,探讨丹参酮Ⅰ的植物雌激素样活性以及可能的作用机制,为指导妇科临床用药,特别是为围绝经期妇女的保健以及乳腺癌等雌激素依赖型肿瘤患者的用药提供理论基础和实验依据。二研究方法和结果 1丹参酮Ⅰ对T47D细胞增殖和细胞周期的影响以丹参酮Ⅰ为研究对象,在体外细胞实验中,通过MTT法检测其对ER阳性人乳腺癌T47D细胞增殖的影响;流式细胞术检测丹参酮Ⅰ对T47D细胞周期的影响;并检测雌激素受体完全拮抗剂ICI182780对丹参酮Ⅰ影响细胞增殖效应的干预作用,探讨丹参酮Ⅰ的植物雌激素样活性。结果：与溶剂对照组相比,在24h时,雌二醇对细胞增殖有明显刺激作用,并且此作用一直持续到72h。高浓度（10-5mol/L-10-6mol/L）的丹参酮Ⅰ在24h时即表现出对细胞增殖具有显著的抑制作用。而48h时,10-5mol/L-10-8mol/L的丹参酮Ⅰ均表现出对细胞增殖的抑制作用,且10-5mol/L-10-7mol/L的丹参酮Ⅰ对细胞增殖的抑制作用一直持续到72h。从整体上分析,药物浓度高,作用时间增加,药物抑制细胞增殖作用亦强,在一定的程度上体现时间-剂量-效应关系,IC1182780可完全拮抗此作用。丹参酮Ⅰ对人乳腺癌T47D细胞周期的影响：与溶剂对照组相比,48h时雌二醇使T47D细胞的Go/G1期细胞比例明显降低,而S期的细胞比例明显增加。不同浓度的丹参酮Ⅰ均使T47D细胞Go/G1期细胞比例明显升高,而S期的细胞比例明显降低;对G2/M期的细胞比例没有显著的影响。 2丹参酮Ⅰ对T47D细胞ER蛋白表达的影响应用Western blotting法观察丹参酮Ⅰ对ERα和ERβ蛋白表达的影响,探讨丹参酮Ⅰ发挥植物雌激素样作用的分子机制。结果：在T47D细胞中,ERα蛋白的表达占优势,而ERβ蛋白为低表达。与溶剂对照组相比,雌二醇和不同浓度丹参酮Ⅰ均可显著诱导T47D细胞ERα和ERβ的蛋白表达水平。 3丹参酮Ⅰ对T47D细胞ERα和ERβ mRNA表达的影响采用RT-PCR技术观察丹参酮Ⅰ对ERα和ERβ mRNA表达的影响,在基因水平上进一步探讨丹参酮Ⅰ发挥植物雌激素样作用的分子机制。结果：与溶剂对照组相比,阳性对照雌二醇组可诱导人乳腺癌T47D细胞中ERα和ERβ mRNA表达量的增高;丹参酮Ⅰ亦可诱导T47D细胞中ERα和ERβmRNA表达量的增加。 4报告基因方法对丹参酮Ⅰ植物雌激素样作用的研究通过荧光素酶报告基因技术方法探索丹参酮Ⅰ是否通过ERα和ERβ介导发挥植物雌激素样作用。结果：丹参酮Ⅰ可以诱导luc报告基因的转录激活,但是其作用强度明显低于雌二醇。

来源：

同方学位论文库评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：