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查尔森合并症指数在急性胆管炎中的临床应用

查尔森合并症指数在急性胆管炎中的临床应用

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作者：杨秋分苏州大学

学位级别：硕士

目的分析急性胆管炎（Acute cholangitis,AC）患者的临床特点,探究查尔森合并症指数（the Charlson Comorbidity Index,CCI）在急性胆管炎中的临床特征,评价内科合并症,术前生理状态等对患者预后的影响,为临床诊疗提供指导。方法采用回... 详细信息

目的分析急性胆管炎（Acute cholangitis,AC）患者的临床特点,探究查尔森合并症指数（the Charlson Comorbidity Index,CCI）在急性胆管炎中的临床特征,评价内科合并症,术前生理状态等对患者预后的影响,为临床诊疗提供指导。方法采用回顾性分析的方法,采集苏州大学附属第一医院在2014年1月至2020年1月诊断为急性胆管炎的患者的临床资料,根据《东京指南（Tokyo Guidelines 2018）》（TG18）中急性胆管炎严重程度评估标准,分为Ⅰ级、Ⅱ级、Ⅲ级,根据手术方式分为内镜下逆行胰胆管造影术（Endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP）组、外科手术组、经皮肝穿刺胆管引流（Percutaneous transhepatic cholangial drainage,PTCD）组及保守治疗组,记录包括年龄、性别、既往内科合并症、白细胞（White blood cell count,WBC）、血小板（Platelet count,PLT）、凝血酶原时间国际标准化比值（Prothrombin time international normalized ratio,PT-INR）、总胆红素（Total bilirubin,TB）、谷丙转氨酶（Alanineaminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（Aspartate transaminase,AST）、血清白蛋白（Albumin,ALB）、肌酐（Creatinine,Cr）、降钙素原（Procalcitonin,PCT）、术后是否发生并发症及30天内死亡等临床资料,依据CCI评分表计算患者入院时查尔森合并症指数。采用Logistic单因素和多因素回归分析影响急性胆管炎术后并发症及30天内死亡的因素,并绘制受试者工作特征曲线（Receiver Operating Characteristic,ROC）,探究CCI对急性胆管炎患者术后并发症及30天内死亡的预测价值。结果本次研究共纳入355例急性胆管炎患者,其中包括男性179例（50.4%）,女性176例（49.6%）,以胆总管结石为病因者300例（84.5%）。根据TG18严重程度评估标准,诊断出Ⅰ级患者143例（40.3%）,Ⅱ级患者95例（26.7%）,Ⅲ级患者117例（33.0%）。对三组患者临床特征进行分析,发现年龄、WBC、PLT、PT-INR、TB、ALB、Cr、PCT、CCI评分等指标组间差异性显著（P＜0.001）。其中,Ⅲ级患者CCI评分总体高于Ⅰ、Ⅱ级患者。根据患者住院治疗方式,统计ERCP组129例（36.3%）,外科手术组114例（32.1%）,PTCD组5例（1.4%）,保守治疗组107例（30.1%）。248例非保守治疗的患者中,发生并发症者48例（19.4%）,无并发症者200例（80.6%）。对是否发生并发症进行单因素分析发现,Cr（OR=1.006,P＜0.05）及CCI（OR=1.419,P＜0.001）与患者术后并发症的发生具有相关性,我们进一步行Logistic多因素分析发现,CCI评分与患者术后并发症独立相关（OR=1.34,P＜0.01）。对患者进行随访研究,根据患者30天是否死亡进行单因素分析显示,BMI、PLT＜100、PT-INR＞1.2、TB、AST、ALB、Cr及CCI与患者30天内死亡具有相关性（P均＜0.01）,进一步行Logistic 多因素分析发现,BMI（OR=0.785,P＜0.05）、PT-INR＞1.2（OR=5.479,P＜0.05）、Cr（OR= 1.005,P＜0.05）、CCI 评分（OR=1.437,P＜0.05）是急性胆管炎30天内死亡的独立危险因素。为探究CCI评分对患者术后并发症及30天内死亡的预测价值,绘制受试者工作特征曲线显示,其曲线下面积（Area under the curve,AUC）分别为 0.675（95%C10.585-0.765）、0.864（95%CI0.801-0.927）,表明 CCI评分对急性胆管炎患者术后并发症的发生及30天内死亡具有一定预测价值,二者ROC曲线最大截断值均为2,认为当CCI评分＞2时,其术后并发症的发生及30天内死亡的可能性较大。结论***是急性胆管炎患者术后并发症及30天内死亡的独立危险因素。***对急性胆管炎患者术后并发症的发生及30天内死亡具有预测价值,CCI＞2时其术后并发症的发生及30天内死亡可能性较大。

关键词：查尔森合并症指数急性胆管炎临床特征预后

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ERCP术后胆总管结石复发预测模型的构建与验证

ERCP术后胆总管结石复发预测模型的构建与验证

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作者：陈文杰苏州大学

学位级别：硕士

目的探讨经内镜逆行胰胆管造影(endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)取石术后胆总管结石复发的相关危险因素,尝试构建结石复发的列线图风险预测模型,并进行验证,以便早期识别高危患者。方法在2017年1月—2020年12月... 详细信息

目的探讨经内镜逆行胰胆管造影(endoscopic retrograde cholangiopancreatography,ERCP)取石术后胆总管结石复发的相关危险因素,尝试构建结石复发的列线图风险预测模型,并进行验证,以便早期识别高危患者。方法在2017年1月—2020年12月之间至苏州大学附属第一医院消化内科住院行ERCP治疗的胆总管结石患者共计813例,根据纳入及排除标准筛选后,有665例患者入组,将入组患者按照8:2随机抽取,532例(80%)作为建模组,133例(20%)作为验证组,根据患者首次ERCP治疗6个月后是否出现结石复发,分为复发组和未复发组,收集两组患者的临床资料,观察两组之间差异。在建模组中,运用单因素和多因素Logistic回归分析筛选出ERCP术后胆总管结石复发的独立危险因素,基于独立危险因素构建列线图风险预测模型。在建模组和验证组中进行的验证均采用C指数和受试者工作特征曲线下面积(area under the receiver operating characteristic curve,AUC)评估模型的区分度,采用校准图评估列线图模型的预测结果与实际结果之间的一致性,采用Bootstrap重复抽样的方法计算校正后的C指数。在验证组中,通过受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)、整体鉴别指数(integrated discrimination improvement,IDI)和净重新分类指数(net reclassification improvement,NRI)来比较本研究建立的列线图模型和以往发表的评分系统的预测能力,通过绘制两组模型的决策曲线分析法(decision curve analysis,DCA)曲线和新模型的临床影响曲线(clinical impact curve,CIC)来评估模型的临床实用性。结果1.根据胆总管结石复发的定义,在建模组532例患者中,复发患者131例,未复发患者401例,复发率24.6%;在验证组133例患者中,复发者38例,未复发者95例,复发率28.6%。2.单因素Logistic回归分析结果显示,体重指数、总胆红素、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、碱性磷酸酶、胆囊切除术后、既往胆道外科手术史、胆总管直径、结石直径、胆汁细菌培养阳性、治疗方式与ERCP术后胆总管结石复发之间具有相关性(P<0.05)。3.多因素Logistic回归分析结果显示,胆囊切除术后、胆总管扩张、胆汁细菌培养阳性、乳头括约肌切开是ERCP术后胆总管结石复发的独立危险因素(P<0.05)。4.以胆囊切除术后、胆总管直径、胆汁细菌培养阳性、乳头括约肌切开这四个因素来构建预测模型,并以列线图的形式进行可视化。在建模组中,模型C指数和AUC值为0.810(95%CI:0.770-0.846),校正C指数为0.822,校正曲线表明预测结果和实际结果之间具有良好的一致性。5.在验证组中,模型C指数和AUC值为0.851(95%CI:0.771-0.912),校正C指数为0.862,校正曲线表明预测结果和实际结果之间具有良好的一致性。6.在验证组中,列线图模型的AUC值为 0.851(95%CI:0.771-0.912),评分系统的 AUC 值为 0.771(95%CI:0.677-0.848),P=0.248。以结石复发为观察终点,两个模型间比较,IDI=0.246(95%CI:0.142-0.349),P=0.000,表明发生和未发生复发结局事件样本的平均预测风险差异在列线图模型中提高了 24.6%。分组总体 NRI=0.495(95%CI:0.231-0.759),P=0.000。连续总体NRI=0.968(95%CI:0.650-1.287),P=0.000。临床决策分析提示使用列线图模型在0.4-0.8的阈概率区间列线图的净受益率明显高于已有的评分系统,具有良好的临床应用价值。结论1.在胆总管结石首选ERCP治疗的情况下,术后结石复发率仍然较高;2.胆囊切除术后、胆总管扩张、胆汁细菌培养阳性、十二指肠乳头括约肌切开是ERCP术后胆总管结石复发的独立危险因素;3.本研究构建了一个新型的ERCP术后胆总管结石复发的风险预测模型,经验证具有良好的区分度和一致性;4.在验证组中,本研究构建的列线图模型对ERCP术后胆总管结石复发的预测能力不劣于已有的评分系统,具有良好的临床应用价值,使用该模型有助于识别高危患者。

关键词：经内镜逆行胰胆管造影术胆总管结石复发列线图验证

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褪黑素联合吉西他滨对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

褪黑素联合吉西他滨对人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤生长的影响

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作者：方华蓥苏州大学

学位级别：硕士

目的探讨褪黑素(Melatonin,MT)与吉西他滨(Gemcitabine,GEM)对人胰腺癌SW1990裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法将对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞注射在裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,模型建立后将25只实验裸鼠随机分为五组,每... 详细信息

目的探讨褪黑素(Melatonin,MT)与吉西他滨(Gemcitabine,GEM)对人胰腺癌SW1990裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法将对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞注射在裸鼠皮下,建立皮下移植瘤模型,模型建立后将25只实验裸鼠随机分为五组,每组5只:(1)对照组(A组):肿瘤周围皮下注射生理盐水+腹腔注射生理盐水;(2)MT低剂量组(B组):肿瘤周围皮下注射MT 10mg/kg·d+腹腔注射生理盐水;(3)MT高剂量组(C组):肿瘤周围皮下注射MT 20mg/kg·d+腹腔注射生理盐水;(4)GEM组(D组):肿瘤周围皮下注射生理盐水+腹腔注射GEM 50 mg/kg·d;(5)联合干预组(E组):肿瘤周围皮下注射MT 20 mg/kg·d +GEM腹腔注射50mg/kg·d。所有裸鼠均为分组后当日开始给药,每日给药一次。MT先用少量的无水酒精溶解后再用生理盐水调整注射液体量,每只约0.2ml,注射方式为肿瘤周围皮下注射,一周内连续注射四天,连续三周;GEM直接用生理盐水溶解调整注射液体量,每只约1ml,注射方式为腹腔注射,每周第一天和第四天注射,连续三周。给药后定期测量肿瘤大小,21天后处死裸鼠。测量各组皮下移植瘤的瘤体积、称瘤重,计算抑瘤率,测定血清丙二醛(MDA)含量,MTT法测定脾脏NK细胞杀伤活性,RT-PCR检测瘤组织VEGF、TGF-β1的表达,并用免疫组化法测定瘤组织Caspase-3及Caspase-9的表达。结果25只裸鼠实验期间无一只死亡,成瘤率100%。(1)与对照组的肿瘤体积(1.476±0.075)cm3相比,MT低剂量组(0.998±0.112)cm3、MT高剂量组(0.756±0.128)cm3、GEM组(0.746±0.115)cm3和联合组(0.305±0.111)cm3肿瘤体积明显减小(P<0.01),其中MT高剂量组肿瘤体积比低剂量组小(P<0.05),联合组最小。(2)MT低剂量组、MT高剂量组、吉西他滨组、联合组抑瘤率分别为41.57%、58.62%、59.27%、77.55%。(3)与对照组血清MDA含量(3.0868±0.1317)nmol/ml相比,MT低剂量组(2.5567±0.1600)nmol/ml ,MT高剂量组(2.0874±0.1159)nmol/ml,联合组(2.1007±0.0973)nmol/ml血清MDA含量明显下降(P<0.01),MT高剂量组下降最明显。(4)MT低剂量组、MT高剂量组及联合组NK细胞的杀伤活性分别为(44.27±3.19)%、(45.16±3.20)%、(30.29±2.91)%,与对照组(18.07±1.23)%比显著增强(P<0.01);吉西他滨单药组NK细胞的杀伤活性(14.24±2.70)%与对照组比较明显下降(P<0.05)。(5)MT低剂量组、MT高剂量组、吉西他滨组及联合组VEGFmRNA的相对值分别为1.1367±0.0520、0.9925±0.3313、1.1552±0.0680、0.6510±0.03946,明显低于对照组1.3828±0.2342(P<0.01),MT高剂量组的表达低于低剂量组(P<0.05),且联合干预组的表达最低(P<0.05);TGF-β1mRNA的相对值,对照组为1.5169±0.1713,吉西他滨组为1.2343±0.0674,MT低剂量组为1.0646±0.4712,MT高剂量组为0.8144±0.1373,联合组为0.5464±0.0559,所有药物干预组的表达明显低于对照组(P<0.01),并且各干预组间表达差异有统计学意义(P<0.05)。(6)MT低剂量组、MT高剂量组、吉西他滨组及联合组Caspase-3表达的阳性细胞指数分别38.26±2.75、42.23±5.52、61.81±5.47、75.74±3.96,明显高于对照组6.55±1.53(P<0.01),并且各干预组间表达差异有统计学意义(P<0.05);MT低剂量组、MT高剂量组、吉西他滨组及联合组Caspase-9表达的阳性细胞指数分别33.74±3.22、45.99±3.17、52.96±3.49、81.05±6.76,明显高于对照组10.25±1.42(P<0.01),并且各干预组之间相比均有统计学意义(P<0.05)。结论褪黑素能有效抑制裸鼠皮下移植性胰腺癌的生长,高剂量组的抑瘤效果较低剂量更为明显,并且与吉西他滨联合应用,可显著增加吉西他滨抑瘤效果。褪黑素抑制肿瘤生长的机制可能与其促进细胞凋亡,减少肿瘤血管的生成,增强宿主免疫功能,及抗氧化作用密切相关。

关键词：胰腺癌褪黑素吉西他滨细胞凋亡 VEGF TGF-β1

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ERK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎及肺损伤保护作用的实验研究

ERK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎及肺损伤保护作用的实验研...

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作者：胡艺嘉苏州大学

学位级别：硕士

目的探讨ERK通路抑制剂PD98059对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎（AP）及相关肺损伤的保护作用及其作用机制。方法72只KM小鼠被随机分为四组，每组再按照3h,6h,12h三个时间点分3个亚组，总共12组，即模型组（AP组）3h,6h,12h组，PD9805... 详细信息

目的探讨ERK通路抑制剂PD98059对雨蛙肽诱导的小鼠急性胰腺炎（AP）及相关肺损伤的保护作用及其作用机制。方法72只KM小鼠被随机分为四组，每组再按照3h,6h,12h三个时间点分3个亚组，总共12组，即模型组（AP组）3h,6h,12h组，PD98059组（T组）3h,6h,12h组，对照一组（C1组）3h,6h,12h组，对照二组（C2组）3h,6h,12h组，每亚组均6只。给小鼠腹腔注射雨蛙肽溶液（100ug/kg体重），1次/时，共6次构造AP模型;对照两组腹腔注射相应剂量的生理盐水;在AP诱导前0.5h,1h给需要注射PD98059的小鼠腹腔注射PD98059（10mg/kg体重）进行预处理。各组于诱导后相应时间点即3h、6h和12h分批处死小鼠，通过自动生化仪检测血清淀粉酶（AMY），采用ELISA法检测各组血清sICAM-1、TNF-、IL-6、IL-18水平，胰腺组织湿干比（W/D），胰腺、肺组织髓过氧化物酶（MPO）浓度，RT-PCR检测胰腺组织及肺组织ICAM-1mRNA的表达量，以及光镜下观察胰腺、肺组织病理变化，并用相应的评分标准对胰腺、肺组织进行病理学评分。结果在胰腺组织中：（1）与C1、C2组相比较，AP组各时间点血清淀粉酶、sICAM-1、TNF-、IL-6、IL-18水平，胰腺组织湿干比，胰腺组织MPO，胰腺组织ICAM-1mRNA的表达量均明显增高（P＜0.01），且胰腺组织病理损伤在一定时间范围内随时间进展呈进行性加重，其病理评分均显著高于对照C1、C2组（P＜0.01）;（2）而比较T组与AP组，则发现T组各时间点血清淀粉酶、sICAM-1、TNF-水平，胰腺组织湿干比、胰腺组织MPO水平及ICAM-1mRNA表达均较AP相应时间点组显著降低（P＜0.05），IL-6、18浓度亦较AP组为低，其中6h，12h的IL-6水平较AP组明显降低（P＜0.05），及12h的IL-18水平较AP组显著降低（P＜0.05），其3h、6h、12h胰腺组织病理学改变较AP组减轻，其病理学评分亦相应减低（P＜0.05）。在肺组织中：（1）与C1、C2组相比较，AP组各时间点肺组织MPO水平，肺组织ICAM-1mRNA的表达量均明显增高（P＜0.01），且肺组织病理损伤在一定时间范围内亦随时间进展呈进行性加重，其病理评分均显著高于对照C1、C2组（P＜0.01）;（2）比较T组与AP组，发现T组各时间点肺组织MPO水平及ICAM-1mRNA表达均较AP组显著降低（P＜0.05），其3h、6h、12h肺组织病理学改变较AP组减轻，其病理学评分也相应减低（P＜0.05）。结论作为MEK1/2特异性抑制剂的PD98059通过阻断ERK信号转导通路，减少ICAM-1、TNF-、IL-6、IL-18等炎症因子、细胞因子的产生，从而阻断了AP病情的进展及肺脏的损伤，早期应用PD98059进行干预对急性胰腺炎及其肺损伤具有一定的保护作用。

关键词：急性胰腺炎急性胰腺炎相关性肺损伤细胞外信号调节激酶信号转导通路 PD98059 细胞间粘附分子-1

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非液流型锌溴电池电极修饰及其新型双极板研制探索

非液流型锌溴电池电极修饰及其新型双极板研制探索

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作者：胡文迪华东师范大学

学位级别：硕士

随着人们对环境问题的日益关注,越来越多的可再生新能源被应用于生产生活的各个方面。锌溴电池由于其优异的性能、低廉的成本、较小的环境影响,作为大型的储能电池,自上世纪70年代以来逐渐被人们所关注。在早期的研究中,非液流型锌溴... 详细信息

随着人们对环境问题的日益关注,越来越多的可再生新能源被应用于生产生活的各个方面。锌溴电池由于其优异的性能、低廉的成本、较小的环境影响,作为大型的储能电池,自上世纪70年代以来逐渐被人们所关注。在早期的研究中,非液流型锌溴电池由于其在电池尺寸和总储存电量上的限制,被认定为不适合作为大型储能电池。然而,近年来,在中小型的储能领域,人们发现非液流型锌溴电池有着更快的充放电速度,更小的系统电能损耗,与铅酸电池相比较小的环境影响等,从而有其特殊的优势本文首先研究应用于非液流锌溴电池的修饰电极特性。通过不同工艺在石墨电极表面修饰沉积碳纳米管(CNT),采用扫描电子显微镜(SEM)、循环伏安法、充放电实验,研究用不同修饰工艺制作的石墨/CNT电极的表面形貌及其电化学特性,并在锌溴电池电解液中进行测试,得到电池在不同条件下的充放电特性。研究结果表明：采用碳纳米管修饰石墨电极能明显改善电极电化学特性、并提高锌溴电池充电电流大小及电池容量。在充放电测试的过程中,石墨材料被发现不能阻挡溴的扩散,在将多节锌溴电池单元串联形成更大电压时会在双电极间造成自放电,并可能在两端腐蚀金属引出线。因此,本文尝试用有机高分子材料聚四氟乙烯(PTFE)混合碳纳米管(CNT)在一定工艺条件下制作低阻值、不透溴的有机/碳纳米管复合材料,并采用扫描电子显微镜(SEM)、阻抗谱(EIS)测试、充放电实验测试,研究电极的最佳工艺。研究发现取碳纳米管、聚四氟乙烯质量比为1：3时,并进行200℃退火,能得到较好的性能折衷。最后,对大电池进行了电学性能测试,并分析可能遇到的问题。

关键词：非液流锌溴电池碳纳米管(CNT) 有机材料复合电极

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二甲双胍联合吉西他滨对裸鼠胰腺癌细胞株（CFPAC-1）皮下移植瘤生长的影响

二甲双胍联合吉西他滨对裸鼠胰腺癌细胞株（CFPAC-1）皮下移植瘤...

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作者：石玉琪苏州大学

学位级别：硕士

目的:探讨二甲双胍（metformin,MET）联合吉西他滨（gemcitabine,GEM）对裸鼠胰腺癌细胞株（CFPAC-1）皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法:建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将20只裸鼠随机分成四组,每组5只,分别给予:对照组（A组）... 详细信息

目的:探讨二甲双胍（metformin,MET）联合吉西他滨（gemcitabine,GEM）对裸鼠胰腺癌细胞株（CFPAC-1）皮下移植瘤生长的影响及可能机制。方法:建立人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型后,将20只裸鼠随机分成四组,每组5只,分别给予:对照组（A组）:生理盐水腹腔注射;MET干预组（B组）:二甲双胍200mg/（kg·d）腹腔注射,每日1次;GEM干预组（C组）:吉西他滨50mg/（kg·d）腹腔注射,每周2次;二甲双胍+吉西他滨联合干预组（D组）:二甲双胍200mg/（kg·d）,每日1次+吉西他滨50mg/（kg·d）腹腔注射,每周2次。给药过程中定期测量各组裸鼠的体重及皮下移植瘤体积,并绘制生长曲线。28天后处死裸鼠,测量各组肿瘤重量,计算抑瘤率。RT-PCR、Western blot分别检测瘤组织Bcl-xl、Bax、Survivin、Caspase-3、CyclinD1的mRN A及蛋白表达水平,免疫组化法检测瘤组织Caspase-3、PCNA的蛋白表达水平。结果:20只裸鼠全部成瘤,实验期间都存活。对照组、MET组、GEM组、联合组的移植瘤体积分别为（0.840±0.082）cm3、（0.583±0.029）cm3、（0.407±0.029）cm3、（0.224±0.044）cm3;瘤体重量分别为（0.910±0.100）g、（0.647±0.044）g、（0.494±0.118）g、（0.256±0.040）g,MET组、GEM组、联合组移植瘤体积及瘤体重量较对照组减小,且联合组减小最为显著,其抑瘤率分别为28.90±2.23%、45.71±3.20%、71.87±5.04%。RT-PCR显示MET组、GEM组、联合组CyclinD1、Bcl-xl、Survivin mRN A表达下调,而Bax、Caspase-3 mRNA表达上调,且联合组与各单药组比较均有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot显示MET组、GEM组及联合组CyclinD1、Bcl-xl、Survivin蛋白表达下调,而Bax、Caspase-3表达明显上调,联合组与各单药组比较均有统计学意义（P＜0.05）。免疫组化显示MET组、GEM组、联合组PCNA蛋白表达下调,而Caspase-3蛋白表达上调,联合组与各单药组比较均有统计学意义（P＜0.05）。结论:二甲双胍具有明显的抗肿瘤作用,同吉西他滨联合应用时有明显的协同作用。促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖可能是二甲双胍抑制肿瘤生长的重要机制。

关键词：二甲双胍吉西他滨胰腺癌凋亡增殖

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沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990及移植瘤生长的影响

沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990及移植瘤生长的影响

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作者：王楠苏州大学

学位级别：硕士

第一部分沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990生长的影响目的:探讨沉默Matriptase对胰腺癌株SW1990体外生长的影响,并探讨其对胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法:根据Genbank中Matriptase的编码区基因序列NM21978.3及相关参考文献... 详细信息

第一部分沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990生长的影响目的:探讨沉默Matriptase对胰腺癌株SW1990体外生长的影响,并探讨其对胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法:根据Genbank中Matriptase的编码区基因序列NM21978.3及相关参考文献,合成特异性针对Matriptase的si RNA及与Matriptase无关的阴性对照si RNA,瞬时转染胰腺癌细胞株SW1990;实验分为4组:阴性对照组(A组)、12.5 n M(B组)、25 n M(C组)、50 n M Matriptase-si RNA组(D组);利用real time PCR技术测定转染后24h各组细胞中Matriptase在m RNA水平上的相对表达量;Western blot技术检测转染后24 h各组细胞Matriptase在蛋白水平的相对表达量;明胶酶谱检测各组细胞在转染24 h后Matriptase酶活性及MMP-9表达量的变化,CCK-8检测各组细胞在转染24 h后细胞增殖能力的变化;划痕实验检测各组细胞在转染24 h后细胞迁移力的变化;Transwell侵袭实验检测各组细胞在转染24 h后细胞侵袭力的变化。Western blot检测各组细胞在转染24 h后u PA/pro-u PA、HGF、AKT、p-AKT、E-cadherin表达量的变化。结果:(1)胰腺癌细胞株SW1990、As PC-1中都有Matriptase的高表达,SW1990、As PC-1的蛋白表达量分别为(0.94±0.63)、(1.58±0.15);胰腺癌细胞株Pa TU8988中无Matriptase的表达。(2)胰腺癌细胞株SW1990在转染NC、12.5 n M、25 n M、50 n M Matriptase-si RNA 24 h后,各组Matriptase m RNA水平分别为1、0.44±0.05、0.28±0.04、0.25±0.07;但Matriptase蛋白表达水平分别是0.74±0.06、0.49±0.04、0.34±0.01、0.24±0.05。(3)Matriptase-si RNA转染前后细胞增殖力的变化,各组的24 h的吸光度分别为0.62±0.01、0.62±0.03、0.37±0.05、0.33±0.05;48 h的吸光度分别为0.77±0.05、0.69±0.03、0.48±0.02、0.42±0.05(4)A组及C组划痕间距分别为0.061±0.013、0.368±0.014,可见C组细胞的迁移距离明显降低;而A组和C组穿膜细胞数分别是(416±1.3)与(109±2.8),可见转染胰腺癌细胞株SW1990 Matriptase-si RNA后细胞的侵袭力明显降低。(5)Matriptase-si RNA转染前后Matriptase蛋白酶活性及MMP-9的变化,A、B、C、D各处理组的Matriptase酶活性分别1.50±0.16、1.21±0.27、0.64±0.16、0.62±0.03;MMP-9的活性分别为0.93±0.26、0.48±0.36、0.35±0.11、0.35±0.12。其中C组与D组的Matriptase酶活性及MMP-9活性明显降低(6)经转染处理后A、B、C、D组的u PA/pro-u PA的比值分别为3.52±0.04、1.11±0.11、0.15±0.06、0.12±0.08;p-AKT各组的蛋白表达量分别为0.91±0.16、0.37±0.20、0.27±0.17、0.09±0.06;AKT蛋白相对表达量分别为1.13±0.05、1.01±0.11、1.22±0.19、1.03±0.37;E-cadherin蛋白相对表达量分别为1.20±0.09、0.87±0.92、0.85±0.08、0.63±0.26;结果示转染Matriptase-si RNA后u PA/pro-u PA比值降低,p-AKT表达量减少,AKT及E-cadherin表达量无明显变化。结论:沉默Matriptase使细胞的增殖、迁移及侵袭能力明显下降。其机制可能是抑制了Matriptase酶活性,导致pro-u PA的活化降低,进而导致MMP-9的活化、AKT的磷酸化减弱,最后细胞的增殖、迁移及侵袭下降。第二部分沉默Matriptase对胰腺癌细胞株SW1990移植瘤生长的影响目的:探讨沉默Matriptase对胰腺癌株移植瘤体内生长的影响,并探讨其在体内对胰腺癌细胞株移植瘤可能的作用机制。方法:(1)利用磷酸钙沉淀法制备慢病毒,并转导胰腺癌细胞株SW1990用于干扰Matriptase的表达,利用倒置荧光显微镜及流式细胞分析仪检测转染效果,流式细胞分选仪进行细胞分选,收集稳转细胞株;Wes

关键词： Matriptase 胰腺癌增殖迁移与侵袭 MMP-9

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超声内镜在可疑胆总管结石中的诊断价值

超声内镜在可疑胆总管结石中的诊断价值

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作者：李春亮苏州大学

学位级别：硕士

目的探讨超声内镜对可疑胆总管结石的诊断价值。方法回顾性收集86例已行B超、CT或MRCP检查但未能确诊的可疑胆总管结石患者的临床资料,计算EUS作为补充诊断手段对胆总管结石诊断的准确率、阳性预测值、阴性预测值及并发症的发生率,并与... 详细信息

目的探讨超声内镜对可疑胆总管结石的诊断价值。方法回顾性收集86例已行B超、CT或MRCP检查但未能确诊的可疑胆总管结石患者的临床资料,计算EUS作为补充诊断手段对胆总管结石诊断的准确率、阳性预测值、阴性预测值及并发症的发生率,并与之前的三种影像学检查对比。根据金标准将患者分为结石阳性组及结石阴性组,金标准为ERCP、腹腔镜探查或开腹胆总管探查取石阳性则认为胆总管结石阳性,若以上检查未发现结石且在随访6月后未发现结石则认为胆总管结石阴性,以卡方检验或t检验的方式比较可能对胆总管结石有预测作用的各指标在两组患者中的差异。结果86例可疑胆总管结石患者经金标准诊断后阳性患者42例,其中泥沙样结石13例,非泥沙样结石29例,阴性患者44例。患者的临床表现主要有腹痛、黄疸、发热,或以急性胰腺炎、胆管炎等起病,其中腹痛为最常见的症状,有91.9%的患者有腹痛。可疑胆总管结石患者的WBC、TP、ALP、GGT、AST、ALT均可有不同程度的升高,其中以GGT升高所占比例最高。EUS对86例患者进行补充诊断时仅出现了1例假阴性患者,诊断的正确率为98.8%,阳性预测值及阴性预测值分别为100%及97.1%,未发现与EUS相关的并发症,使48.8%的患者避免了胆总管侵入性操作。胆总管结石阳性组中GGT的平均值及胆总管扩张的比例高于胆总管结石阴性组,且差异具有统计学意义(P=0.017、0.004)。年龄、性别、其他影像学检查与EUS间隔时间、本院影像学检查、症状及其他的实验室检查在两组之间均值或分布差异无统计学意义。结论EUS对于已行B超、CT、MRCP其中之一或多项检查的可疑胆总管结石患者具有安全高效的补充诊断作用,使48.8%的患者避免了不必要的胆总管侵入性操作;胆总管扩张及GGT升高的可疑胆总管结石患者其结石阳性的可能性更大,但仍需要EUS进一步明确诊断。

关键词：超声内镜胆总管结石诊断

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沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响

沙利度胺对人胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响

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作者：沈阳苏州大学

学位级别：硕士

第一部分沙利度胺对胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响目的研究沙利度胺（Thalidomide,THD）对胰腺癌细胞株SW1990细胞体外生长及血管生成的影响,并探讨其对人胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法采用浓度为3.125、6... 详细信息

第一部分沙利度胺对胰腺癌细胞株SW1990生长及血管生成的影响目的研究沙利度胺（Thalidomide,THD）对胰腺癌细胞株SW1990细胞体外生长及血管生成的影响,并探讨其对人胰腺癌细胞株SW1990可能的作用机制。方法采用浓度为3.125、6.25、12.5、25、50、100、200和400μg/ml的THD处理人胰腺癌SW1990细胞,应用MTT法检测OD值,计算各实验组和对照组SW1990细胞的抑制率,并计算最适宜的沙利度胺IC50;取浓度为50、100、200μg/ml的THD处理人胰腺癌SW1990细胞,流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡和细胞周期的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和VEGF的mRNA表达水平;免疫印迹法（Westen Blot）检测Bcl-2、Bax和VEGF的蛋白表达水平。结果（1）MTT法显示:THD可明显抑制SW1990细胞的生长,并随着药物浓度的增加和作用时间的延长而明显增强（P＜0.05）。（2）流式细胞术显示:SW1990细胞经THD作用48小时后,细胞出现明显凋亡,且以早期凋亡为主。在50μg/ml浓度下早期凋亡率为（8.77±3.30）%,而在200μg/ml浓度下为（29.43±2.25）%,与THD浓度呈正相关;且随着药物浓度的增加,SW1990细胞G0/G1期比例上升,从（46.55±2.44）%上升到（58.83±2.33）%,S期细胞比例下降（P＜0.05）。（3）RT-PCR检测Bcl-2、Bax和VEGF的mRNA表明:SW1990细胞经不同浓度THD作用48小时后,Bcl-2、VEGF的mRNA的表达呈浓度依赖性下降,Bax-mRNA的表达呈浓度依赖性增加,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。（4）Western Blot结果显示:SW1990细胞经不同浓度THD作用48小时后,VEGF、Bcl-2蛋白表达呈浓度依赖性下降,Bax蛋白表达呈浓度依赖性升高,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论THD可抑制人胰腺癌SW1990细胞的生长,且呈时间和剂量依赖性,其机制可能是直接抑制肿瘤细胞增殖;阻滞细胞周期于静止期;诱导细胞早期凋亡;抑制血管生成。第二部分沙利度胺联合吉西他滨对人胰腺癌SW1990细胞生长的影响目的:探讨沙利度胺（Thalidomide,THD）联合吉西他滨（Gemcitabine,GEM）对人胰腺癌SW1990细胞的协同抑制作用及机制。方法以浓度为50μg/ml的沙利度胺联合20μmol/L的吉西他滨处理对数生长期的人胰腺癌SW1990细胞,应用MTT比色法检测OD值,计算对照组和各实验组SW1990细胞的抑制率;AnnexinV/PI双染法检测SW1990细胞早期凋亡情况;RT-PCR检测细胞凋亡因子Bcl-2及Bax的mRNA表达水平;免疫印迹法（Westen Blot）检测凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达水平。结果沙利度胺和吉西他滨都能有效地抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,二者联合作用具有协同效应;50μg/mlTHD作用SW1990细胞48h后细胞早期凋亡为（8.7±1.87）%,20μmol/LGEM组为（27.73±2.40）%,两者联合组为（39.4±3.24）%;RT-PCR检测抗凋亡因子Bcl-2-mRNA表达明显下降,促凋亡因子Bax-mRNA表达上升,各组与对照组及单药组与联合组比较均有统计学意义（P＜0.05）。Western Blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显下降,促凋亡蛋白Bax表达上升,各组与对照组及单药组与联合组比较均有统计学意义（P＜0.05）。结论沙利度胺联合吉西他滨可明显抑制人胰腺癌SW1990细胞增殖,其机制可能是通过促进细胞凋亡而发挥作用。

关键词：沙利度胺胰腺癌细胞凋亡 Bcl-2 Bax VEGF 吉西他滨协同效应凋亡

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原发性胃肠道淋巴瘤的临床特征及预后分析

原发性胃肠道淋巴瘤的临床特征及预后分析

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作者：李瑶苏州大学

学位级别：硕士

目的:探讨原发性胃肠道淋巴瘤的临床特点并分析影响其预后的相关因素。方法:收集2006年1月至2016年1月于苏州大学附属第一医院就诊的原发性胃肠道淋巴瘤患者。收集患者的年龄、性别、发病部位、临床表现、内镜下表现、病理分型及治疗方... 详细信息

目的:探讨原发性胃肠道淋巴瘤的临床特点并分析影响其预后的相关因素。方法:收集2006年1月至2016年1月于苏州大学附属第一医院就诊的原发性胃肠道淋巴瘤患者。收集患者的年龄、性别、发病部位、临床表现、内镜下表现、病理分型及治疗方式。Kaplan-Meier法分析不同临床因素对患者生存率的影响,Cox回归模型分析患者预后危险因素。结果:共有180例患者纳入此次研究,其中男性102例,女性78例,中位发病年龄为59岁。原发性胃肠道淋巴瘤临床表现多样,较常见的为:腹痛、腹胀、消化道出血、体重减轻、大便习惯或性状改变。胃淋巴瘤101例,其最常见的发病部位为胃窦,发生率为65.34%,胃镜检查初步准确率为43.30%:肠道淋巴瘤79例,其最常见的发病部位为小肠,发生率为55.70%,肠镜检查初步准确率为24.00%。180例患者中B细胞淋巴瘤为160例,T细胞淋巴瘤为20例,其中又以弥漫大B细胞型最为多见,共103例,其次为MALT淋巴瘤,共35例。根据Ann Arbor改良分期,IE期病例有49例,IIE期有48例,Ⅲ期有28例,而Ⅳ期有55例。有83位患者接受了外科手术联合化疗,81位患者接受了外科手术,5位患者接受了化疗,2位患者接受了外科手术、化疗以及放疗,1位患者接受了外科手术及放疗,1位患者接受了放疗,7位患者未行相关治疗。原发性胃肠道淋巴瘤的3年生存率为57.39%,年龄>60岁、病变位于小肠、临床分期处于Ⅲ/Ⅳ期、IPI指数≥3、LDH表达高水平、T细胞源性及单纯手术的患者其预后较差,临床分期为影响原发性胃肠道淋巴瘤患者预后的独立危险因素。手术联合化疗的预后要优于单纯手术,且与临床分期有关。结论:原发性胃肠道淋巴瘤好发于中老年男性,以胃淋巴瘤最为常见,其中弥漫性大B细胞淋巴瘤和MALT淋巴瘤是最常见的病理类型。年龄>60岁、病变位于小肠、临床分期处于Ⅲ/Ⅳ期、IPI指数≥3、LDH表达高水平、T细胞源性及单纯手术的预后较差。手术联合化疗适用于临床分期处于Ⅲ/Ⅳ期的患者。

关键词：原发性胃肠道淋巴瘤临床特点预后因素

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