检索结果-南通市图书馆

作者：吴丹中国地质大学(北京)

学位级别：硕士

伴随着国务院的机构改革,我国进入了山、水、林、田、湖、草等全域全要素的国土空间规划阶段。以前部门分头管理模式所形成的空间分类体系,不能适应新时期自然资源统一管理的需求。同时空间规划进入了生态文明的新时代,如何在保护环境... 详细信息

伴随着国务院的机构改革,我国进入了山、水、林、田、湖、草等全域全要素的国土空间规划阶段。以前部门分头管理模式所形成的空间分类体系,不能适应新时期自然资源统一管理的需求。同时空间规划进入了生态文明的新时代,如何在保护环境的前提下,实现全域内各空间要素效益最大化,成为关注的焦点。文章从国土空间优化的技术方法出发,提出了一种算法和模型相耦合的优化模型构建方式。以湖南省安化县为研究区,设置适应区域发展的优化规则和目标,同时分成历史趋势发展、农地保护、生态优先三种不同的发展情景,利用模型求解出每种情景下的最优解,为空间规划提供科学参考。具体研究如下:(1)通过梳理国内外应用于国土空间优化的模型和算法,发现算法逐渐从传统的线性方式向机器智能方式发展,模型也逐渐从单一化向多元化转变。随着算法和模型的不断改进,寻优能力变强,求解速度变快。文章也在总结前人经验的基础上,构建了一种有效的国土空间优化模型。(2)安化县作为国家的重要生态功能保护区,其林地覆盖率达到了百分之七十,耕地面积少且分布破碎化,城镇用地低效粗放却依旧保持扩张趋势。无序蔓延的城镇用地不仅造成空间开发的乱序,而且侵占大量生态用地。(3)构建超级学习和元胞自动机模型相结合的国土空间优化方模型,对安化国土空间进行优化。优化后各类空间占比分别为:生态空间96.44%,农业空间9.98%,城镇空间3.56%,且各类空间布局更加合理,符合安化未来的发展规划预期。(4)通过设置历史趋势、农地保护、生态优先三种情景对安化县2025年国土空间格局进行优化。发现在历史趋势发展情景下的各类空间集聚度最高;农地保护情景下城镇扩张所占的耕地最少;生态优先情景下城镇扩张范围最小,为未来生态和农地的发展预留了优质土地资源。(5)文章不仅在实际运用上实现了国土空间的优化配置,而且在方法上采用机器智能算法与空间优化模型结合的方式,使得求解过程更高效和精确。模型也可以根据优化区域的特征适当修改参数,具有很强的适用性,为我国进行高效的国土空间优化工作提供技术支撑。

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湖南省乡村发展类型及乡村性研究

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作者：谭文宇中国地质大学(北京)

学位级别：硕士

乡村是中国社会经济发展的重要载体。农业稳定、农村和谐、农民安居乐业对于国家繁荣和长期稳定至关重要。习近平同志在中共十九大报告中提出,必须始终把解决好“三农”问题作为全党工作的重中之重,全面实施乡村振兴战略,坚持农业农村... 详细信息

乡村是中国社会经济发展的重要载体。农业稳定、农村和谐、农民安居乐业对于国家繁荣和长期稳定至关重要。习近平同志在中共十九大报告中提出,必须始终把解决好“三农”问题作为全党工作的重中之重,全面实施乡村振兴战略,坚持农业农村优先发展,加快推进农业农村现代化建设。当前我国乡村发展正处在转型升级的关键期,深入探究乡村发展和转型问题对推动城乡一体化发展,促进乡村振兴战略的实现具有重大意义。湖南省作为我们国家的一个农业大省,在保障国家粮食安全战略中具有十分重大的意义,并且其乡村发展极具代表性,具有典型的区域特色。自“中部崛起”战略等提出以来,湖南省社会经济得到快速发展,但是城市和乡村发展之间依然存在较大的差距,乡村发展仍然较为落后,发展面临诸多突出问题。本文通过运用多种计量模型和空间分析技术相结合,以湖南省87个县域为研究单元,从“农业-农村-农民”三农视角出发,借助土地利用和社会经济数据,首先,以产业作为衡量载体,对各县域的乡村发展类型进行划分并分析其时空格局演变过程;其次,结合地方特点,构建乡村性评价指标体系,测算出2000-2016年湖南省各县域的乡村性指数,以此对乡村性进行评价,揭示不同时点各县域的乡村发展水平;再次,分析乡村性时空格局的演变特征,并揭示乡村性水平分布的空间关联性和异质性;解释不同乡村发展类型内乡村性水平的差异特点以及演变特征;最后根据不同乡村发展类型乡村性的特点因地制宜的提出有利于乡村发展的差别化建议。主要研究结论如下:(1)2000年-2016年间,乡村发展类型在时间上,均衡发展型的县市数量一直位居第一且呈波动式下降的趋势,商旅服务型的县市数量一直最少且呈波动式增长的趋势,农业主导类型的县市数量呈波动式增长趋势,工业主导类型的县市数量呈逐渐增加的趋势;在空间上,各县域的乡村发展类型呈现出比较明显的空间非均衡性,其空间总体演变特征呈四种乡村发展类型由分散向相对集中靠拢的态势。(2)处于不同乡村性水平的县域在数量上变化明显,2000-2016年湖南省87个县域乡村性呈现出弱乡村性和较弱乡村性的数量逐渐增多、中等乡村性的数量基本保持不变、较强乡村性和强乡村性的数量不断减少的态势,且乡村性整体不断弱化,均值不断下降;在空间上,在四个研究时间节点上整体均呈现出“西部高东部低”的空间格局,乡村性指数的空间集聚性在不断减弱而异质性则在不断增强;乡村性水平变化呈现出97%的县市处于下降状态,其中缓慢下降型的县市数量最多,占76%,13%的县市处于波动下降状态,极少数县市呈现出波动上升的状态,这部分县市占3%。(3)不同乡村发展类型乡村性水平具有以下几个差异特征:农业主导型县市的乡村性水平整体偏高,多分布在所数市的外围;工业主导型县市的乡村性水平整体偏弱,大集中小分散的分布在“3+5”城市群;商旅服务型县市的乡村性水平整体偏强,分布较为零散;均衡发展型县市乡村性水平较为均匀,各个等级均有分布,但分布上东西差异较为明显。(4)不同乡村发展类型乡村发展的差别化建议,针对农业主导型县域,需要采取整体勇于创新发展理念,部分地区保留生产经营传统农业的方式。针对工业主导型县市,需要引导其朝着集约化、集聚化、生态化的方向前进。商旅服务型县市和均衡发展型县市二者具有相似之处,属于二者的县市因为农业或工业基础较差,缺乏特色产业等的支撑,应当鼓励这些县市因地制宜的深入挖掘自身的特色产业。

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鸡滑液囊支原体LP78蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

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作者：温政山东农业大学

学位级别：硕士

鸡滑液支原体感染是由滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的关节渗出性滑膜炎、滑液囊和腱鞘发炎为主要特征的急性或慢性传染性疾病,也可引起气囊炎,甚至导致全身感染,常常与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、大肠杆菌等致病微... 详细信息

鸡滑液支原体感染是由滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)引起的关节渗出性滑膜炎、滑液囊和腱鞘发炎为主要特征的急性或慢性传染性疾病,也可引起气囊炎,甚至导致全身感染,常常与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、大肠杆菌等致病微生物或混合感染。其膜上含有丰富的脂蛋白,称为脂质相关膜蛋白(Lipid associated membrane proteins,LAMPs),具有很强的免疫原性。同时脂蛋白易发生相位、抗原变异,造成支原体表面种类丰富多样化。虽然人们对支原体致病机理尚不明确,但越来越多的研究表明脂蛋白在其致病过程中扮演重要的角色。LP78蛋白是滑液囊支原体膜上的一种脂蛋白,具有很强的免疫原性。本研究首先参照GenBank中滑液支原体WVU1853株的LP78基因序列设计引物,以MS1853株的基因组作为PCR模板进行分段扩增LP78基因序列,然后以各分段产物作为模板进行LP78全长扩增,然后将获得的滑液支原体WVU1853株LP78基因克隆至原核表达载体pColdⅠ,酶切鉴定,测序并经点突变完成,密码子优化后,表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)。采用冷休克表达系统,经IPTG诱导大量表达LP78蛋白,然后通过His-tag磁珠纯化的方法,进行LP78蛋白的纯化,以此获得较纯的LP78蛋白。本研究用纯化后的滑液支原体脂蛋白LP78基因原核表达产物对BALB/c小鼠进行腹部皮下多点免疫,取效价最高的小鼠脾脏与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合,并通过多次杂交瘤细胞筛选的方法对融合后的细胞进行筛选,直至筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。采用间接ELISA和Western-blot检测方法对获得的单克隆抗体特异性进行检测。将获得的杂交瘤细胞反复冻融和传代,进行杂交瘤细胞稳定性检测。本研究成功制备了两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株H5和C9。经过间接ELISA和Western-blot检测结果表明,2株单克隆抗体均可与滑液囊支原体发生特异性地结合,并且与禽类其他病原体不发生反应。稳定性检测表明,两株杂交瘤细胞株经过多次连续传代后,仍具有稳定分泌单克隆抗体的能力,具有很好的稳定性。经过单克隆抗体亚类鉴定试剂盒鉴定,两株单克隆抗体均为IgG 1,轻链均为κ轻链型。采用6-8周龄的雌性BALB/c制备腹水,采用HiTrapTM IgG Purification HP进行纯化腹水,经过SDS-PAGE凝胶电泳对纯化后的腹水进行化分析,可以看见53 kD左右的重链和23 kD左右的轻链两条明显的蛋白条带,结果表明其纯化的效果较好,经BCA蛋白浓度检测试剂盒方法测定得到两种单抗的浓度分别为1.019 mg/m L和1.1 mg/mL。本研究通过Overlap PCR的方法获得LP78全长,成功表达并纯化了重组LP78蛋白,并成功制备了2株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,为滑液囊支原体的诊断方法的建立提供了良好的材料,同时为深入研究脂蛋白LP78的生物学功能奠定了基础。

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基于最小阻力模型的湖南省安化县生态保护红线划定研究

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作者：彭琛琛沈阳农业大学

学位级别：硕士

快速发展的社会经济对生态环境造成了巨大的影响,生态环境问题日益严峻。生态保护红线作为中国生态环境保护制度的一项创新,对遏制生态环境退化起到重要的“底线”作用,它的合理划定关系到国家和区域生态安全及经济社会的可持续发展。自... 详细信息

快速发展的社会经济对生态环境造成了巨大的影响,生态环境问题日益严峻。生态保护红线作为中国生态环境保护制度的一项创新,对遏制生态环境退化起到重要的“底线”作用,它的合理划定关系到国家和区域生态安全及经济社会的可持续发展。自2011年“红线”提出至今,关于其划定方法的研究已取得诸多进展,各省(市)的生态保护红线划定工作也先后得以开展,且环保部在2017年颁布的《生态保护红线划定指南》(简称《指南》)指导全国的生态保护红线划定工作。但《指南》中的方法体系适用于国家或省域尺度,而对县域尺度上的生态红线划定的方法指导上尚需增强针对性和进一步完善。基于此,本文以安化县为例尝试探索建立一套县级生态保护红线划定方法体系,力图为我国中小尺度的生态保护红线划定提供参考。在分析国内外生态区划定方法研究基础上,归纳目前红线划定方法研究限制与不足,针对安化县实地情况从县级尺度出发对《指南》的评价体系加以改进的基础上构建安化县的生态保护重要性评价体系,在GIS支持下采用定量分析法、专家打分法、空间叠置分析法等方法分别进行生态功能重要性评价与生态敏感性评价进而得到生态保护重要性评价等级,并基于评价结果选取最小阻力模型构建生态安全格局,最终划定安化县生态保护红线。主要研究结论如下:1.针对安化县实际情况结合《指南》构建了安化县的生态保护重要性评价体系。选取水源涵养、土壤保持、碳固定与生物多样性维护进行生态功能重要性评价;选取水土流失、土地石漠化和地质灾害进行生态敏感性评价。与《指南》相比,本研究增加了碳固定功能重要性、地质灾害敏感性两方面评价内容,评价方法选取方面也主要以模型计算为主,评价指标如蒸散量、坡长坡度因子等也进行了细化。2.安化县生态功能极重要区域总面积为718.04km,约占安化县总面积的14.52%,主要分布在西南地区山地区域。安化县生态敏感区域总面积为555.34km,约占安化县总面积的11.23%,主要分布在东部的清塘铺镇与资水河流沿岸地区,其他地区分布较为零散。安化县禁止开发区面积为304.78km,主要包括柘溪森林公园、雪峰湖地质公园、六步溪省级自然保护区与水源保护区的核心区。3.安化县生态安全格局主要由三个生态阻力等级的区域、12个生态源汇点、11条关键廊道与55个潜在廊道构成。其中低阻力区域与关键生态廊道所构成的格局就是安化县最低水平的安全格局;中阻力区域与潜在廊道构成了安化县的中等安全格局;其余地区生态功能较弱,连通性差,是全县生态功能薄弱的区域。4.安化县终划定的生态保护红线包括低阻力区域与关键廊道,总面积为1608.39km,占全县总面积32.52%,其中低阻力区域面积1588.36km,占全县面积32.12%;关键廊道总长438.09km,面积为42.22km,占全县面积0.85%。这些区域主要分布在西部山地及北部清塘铺镇部分区域,中部与东北部零散分布。这些区域包括了全县生态功能极重要、生态环境极敏感与相关规划已确定的核心保护区。

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Class Ⅰ NDV与Class Ⅱ NDV气溶胶传播能力的比较研究

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作者：高晟斌山东农业大学

学位级别：硕士

目的:气溶胶传播是新城疫病毒(NDV)的主要传播方式,但过去的研究都是针对Class Ⅱ NDV。本课题的主要目的是研究Class Ⅰ NDV能否通过气溶胶传播并比较ClassⅠ NDV和Class Ⅱ NDV的气源性传播能力。方法:本研究建立了一个试验条件下新... 详细信息

目的:气溶胶传播是新城疫病毒(NDV)的主要传播方式,但过去的研究都是针对Class Ⅱ NDV。本课题的主要目的是研究Class Ⅰ NDV能否通过气溶胶传播并比较ClassⅠ NDV和Class Ⅱ NDV的气源性传播能力。方法:本研究建立了一个试验条件下新城疫病毒气溶胶传播模型,将两个正负压隔离器A、B通过一根管道相连,并在隔离器内饲养SPF鸡,随机分为人工感染组、接触感染组、气溶胶感染组。人工感染组和接触感染组在隔离器A中饲养,气溶胶感染组在隔离器B中饲养。人工感染组的鸡于20 日龄接种Class Ⅰ NDVNX1069株。同时,在隔离器C和隔离器D进行相同试验,但接种病毒为Class Ⅱ NDVLasota株。接种病毒后的第 1、2、3、5、7、9、12、15、18、21、24、27、30、35、40 天采集隔离器中的空气样品以及试验鸡口腔泄殖腔棉拭子;第7、14、21、28、35、40天采用翅静脉采血法采集试验鸡血液样品。空气样品采用蚀斑计数法分析病毒气溶胶浓度;棉拭子样品采用qRT-PCR法分析试验鸡的排毒情况;血液样品采用HI试验检测血清中的NDV抗体效价。根据试验进展对试验鸡进行剖检并采集气管样品。以Elisa法分析气管黏膜中的SIgA水平并采用16S rRNA高通量测序分析气管黏膜中的菌群成分。结果:NDV气溶胶传播试验结果显示:隔离器A中于5dpi首次检测到Class Ⅰ NDV病毒气溶胶。隔离器A中的Class Ⅰ NDV病毒气溶胶于18dpi达到峰值13.81 ×103 PFU/m3。Class Ⅱ NDV病毒气溶胶于7dpi才首次被检测到,但是达到高峰的时间也为18dpi,峰值为13.01 X 103 PFU/m3。Class Ⅰ NDV隔离器B于7dpi首次检测到病毒气溶胶,但Class Ⅱ NDV隔离器D于9dpi才首次检测到病毒气溶胶。棉拭子检测结果显示:Class Ⅰ NDV气溶胶感染组的鸡于9dpi排毒而Class Ⅱ NDV气溶胶感染组则到15 dpi才排毒。HI试验结果显示:两种新城疫病毒产生的抗体滴度都很高,最高都可以达27以上。SIgA分析结果显示:Class Ⅰ NDV接触传播和气溶胶传播都可以使气管黏膜SIgA水平显著升高,接触传播和气溶胶传播之间无显著性差异。高通量测序的结果显示:ClassⅠ NDV接触传播与气溶胶传播引起气管黏膜菌群的变化不同。接触组和气溶胶组都会使呼吸道菌群多样性下降,但气溶胶组与空白组的呼吸道相同菌仅有21种,接触组与空白组有49种。气溶胶感染组与空白组的呼吸道黏膜菌群差异更大。属水平细菌丰度检测结果显示接触感染后气管黏膜中丰度上升的菌属多为条件致病菌:如埃希氏-志贺氏菌等,而气溶胶感染组丰度上升最大的菌属为乳酸菌属。结论:Class Ⅰ NDV可以形成病毒气溶胶,而且病毒气溶胶可以扩散到相邻的隔离器中。本试验中,Class Ⅰ NDV比Class Ⅱ NDV形成病毒气溶胶的时间更早,Class Ⅰ NDV气溶胶感染组的试验鸡排毒时间也更早。Class Ⅰ NDV通过不同传播途径感染都可以使气管黏膜SIgA水平显著上升。气溶胶感染组会使气管黏膜菌群变化更大,但直接接触感染更容易继发气管黏膜上存在的条件致病菌感染。

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流产布鲁菌免疫原性蛋白筛选及胶体金试纸条的初步研究

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作者：宋美莹山东农业大学

学位级别：硕士

布鲁菌病是一种重要的人畜共患病。主要引起反刍动物流产、不育和人类的慢性感染和波状热。在全世界广泛分布,对人类的健康和畜牧业的发展造成严重的危害。目前准确诊断该病是控制布鲁菌病的关键。传统检测方法的敏感性和特异性不理想,... 详细信息

布鲁菌病是一种重要的人畜共患病。主要引起反刍动物流产、不育和人类的慢性感染和波状热。在全世界广泛分布,对人类的健康和畜牧业的发展造成严重的危害。目前准确诊断该病是控制布鲁菌病的关键。传统检测方法的敏感性和特异性不理想,且实验条件要求高。常见的血清学诊断方法有假阳性现象存在。因此,开发一种灵敏、便捷、特异的检测方法对于布鲁菌病诊断具有十分重要的意义。在本研究中,我们完成了三部分研究内容:1)布鲁菌已报道主要免疫原性蛋白的筛选。通过对BALB/c小鼠腹腔注射流产布鲁菌S2308株的方法,建立小鼠感染模型。评估了已报道的布鲁菌主要免疫原性蛋白的OMP16、BP26、BLS、BCSP31、VirB12、SodC和GroEL在布鲁菌感染不同阶段抗体生成规律,探讨了它们在布鲁菌病诊断中的应用。在随后研究中,通过免疫印迹试验评估了7种蛋白对44例临床牛血清的检测效果。2)筛选流产布鲁菌新的免疫原性蛋白。通过免疫印迹试验分析流产布鲁菌感染小鼠不同阶段的血清中以及临床牛羊布鲁菌病阳性血清中抗体生成规律和特点,确定布鲁菌主要免疫原性蛋白的相对区域。通过SDS-PAGE分离布鲁菌总蛋白,对照免疫印迹试验结果,切胶回收免疫原性蛋白条带进行质谱分析,随后,在大肠杆菌中成功表达和纯化了免疫原性蛋白SSB,并对其反应原性进行了后续分析。3)布鲁菌胶体金试纸条的初步制备。首先,基于BP26-ELISA、BLS-ELISA和LPS-ELISA检测临床牛血清,结果发现LPS依然是用于布鲁菌检测最优的抗原。之后,以提纯的LPS为抗原制备胶体金免疫层析试纸条,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,通过对胶体金封闭液、重悬液及NC膜等条件进行优化,确定以SPG标记胶体金颗粒,以提纯LPS作为检测线,羊抗鼠IgG作为质控线,制备布鲁菌病快速检测试纸条。结果表明,1)在7种布鲁菌主要免疫原性蛋白中,BP26和BLS是两种最佳的免疫原性蛋白。BP26和BLS与30例布鲁菌病阳性血清发生了反应,但同时与14例布鲁菌病阴性血清也产生了假阳性反应。间接ELISA分析,BP26-ELISA与LPS-ELISA相比,检测布鲁菌病阳性血清的符合率为92.68%,而检测阴性血清的符合率仅为52.94%。BLS-ELISA同样难区分布鲁菌病阳性血清和阴性血清。LPS-ELISA可以显著区分阳性和阴性布病样本。同时,以不同截断的BP26蛋白片段为抗原同样不能排除与布鲁菌病阴性血清产生的假阳性反应。2)免疫印迹试验分析感染小鼠血清和临床牛羊血清,发现布鲁菌免疫原性蛋白主要集中在相对分子量400kDa和70kDa的两个区域。质谱分析共鉴定到6个布鲁菌免疫原性蛋白。免疫印迹试验发现,SSB蛋白与临床布鲁菌病牛血清具有较好的反应原性,与虎红平板凝集试验的符合率约为82%。3)以提纯LPS为抗原制备胶体金试纸条,确定了最适pH、蛋白标记量、NC膜、稳定液与重悬液等条件,初步制备了布鲁菌病检测胶体金试纸条,检测牛布鲁菌病标准阴性和阳性血清反应,结果与预期结果一致。综上所述,我们发现BP26和BLS尽管为布鲁菌较好的免疫原性蛋白,但作为抗原用于布鲁菌病诊断会产生假阳性反应,造成误诊。此外,SSB蛋白与临床布鲁菌病牛血清具有较好的反应原性,与虎红平板凝集试验的符合率约为82%。间接ELISA分析发现,LPS依然是布鲁菌最重要的抗原。以LPS为检测抗原,初步研制了检测布鲁菌病的胶体金试纸条,并且可以在5min内获得实验结果。该研究为布鲁菌病诊断试剂的研发奠定基础。

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微酸性电解水对肉鸡沙门氏菌的防治研究

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作者：徐东杉山东农业大学

学位级别：硕士

微酸性电解水(Slightly Acidic Electrolyzed Water,SAEW)是通过直流电压对含有氯离子的水溶液电解,生成一种p H 5～6.5的功能水,富含活性氧(ROS),如羟基自由基(·OH)、过氧化氢(HO)、次氯酸(HCl O)等成分。具有广谱杀菌、安全无毒、绿... 详细信息

微酸性电解水(Slightly Acidic Electrolyzed Water,SAEW)是通过直流电压对含有氯离子的水溶液电解,生成一种p H 5～6.5的功能水,富含活性氧(ROS),如羟基自由基(·OH)、过氧化氢(HO)、次氯酸(HCl O)等成分。具有广谱杀菌、安全无毒、绿色环保、制取便捷等优点,在医疗卫生、食品和农业方面广泛应用。目前已有研究发现SAEW可以提高母羊、仔猪和肉鸡的生产性能或免疫性能等,但是未见SAEW体内防治肉鸡沙门氏菌的报道。我国自2020年起禁止在饲料中添加抗生素促生长添加剂,亟需一种安全无毒、绿色环保的抗生素替代品预防动物细菌感染。因此,本研究选择817肉鸡为试验动物,进行SAEW对肉鸡生产性能和免疫性能等的影响及其抗沙门氏菌感染的效果,为进一步SAEW应用于肉鸡生产提供实验依据。本研究首先选用自制SAEW对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸭疫里默氏杆菌和产气荚膜梭菌等6种病原菌进行高通量体外杀菌试验,同时与次氯酸钙、84消毒液这两种常见含氯消毒剂进行杀菌效果比较。根据SAEW体外杀菌结果,选用10 ppm、20 ppm、40 ppm SAEW给与肉鸡饮水。以增重和料重比等生产性能、血清Ig G和Ig A等免疫性能、肝脏和脾脏器官指数等指标为判定标准,进行安全性试验。选取120只1日龄817肉鸡随机分为4组,每组3个重复,每个重复10只。空白组完全饮用自来水,低浓度组完全饮用10 ppm SAEW,中浓度组完全饮用20ppm SAEW,高浓度组完全饮用40 ppm SAEW,连续饮用28 d。根据SAEW对肉鸡增重、血清和肝脏器官指数等指标的结果,进行SAEW防治肉鸡沙门氏菌的实验,以肝脏载菌量和组织病理学变化为判定标准。选取30只1日龄817肉鸡随机分为空白组、阳性组和SAEW组3组,每组10只。空白组和阳性组饮用自来水,SAEW组饮用SAEW。3日龄时,阳性组和SAEW组人工口服感染肠炎沙门氏菌18044菌液(400μL 10cfu/m L/只),攻菌前2d SAEW组饮用10 ppm SAEW,攻菌后饮用40 ppm SAEW。攻菌后第3 d和第7 d剖杀鸡只各5只并检测指标。根据前期试验结果,结合生产成本等因素,选用10 ppm SAEW在山东亚太中慧集团养殖场进行中试试验。8万只同一批次的1日龄白羽肉鸡随机分为2组,每组4万只,共两种不同批次的鸡只。按照正常的生产流程,对照组饮用场内饮用水,除免疫环节外,试验组饮用10 ppm SAEW,试验周期为39/40 d。SAEW体外杀菌结果显示,10 ppm SAEW对10 cfu/m L的大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鸭疫里默氏杆菌和产气荚膜梭菌作用5 min,杀菌率达99.999%;与次氯酸钙、84消毒液相比,更低浓度SAEW可达到同样的杀菌效果。连续28 d饮用SAEW的肉鸡精神良好,采食饮水正常。结果显示,与空白组相比,电解水组的增重和料重比的差异不显著(P>0.05);心、肝、脾、肺和肾等器官眼观无出血、肿胀等现象,肝脏和脾脏器官指数差异不显著(P>0.05);组织切片显示电解水组的肠绒毛正常、黏膜上皮完整、黏膜固有层正常,无明显病变。低浓度组ALB含量显著升高(P0.05);ALT含量差异不显著(P>0.05);高浓度组AST含量显著降低(P0.05);高浓度组TBIL含量极显著升高(P0.05);除中浓度组21日龄CREA含量显著升高(P0.05)。高浓度组血清Ig G和Ig A含量显著降低(P0.05)。低浓度组的肠道菌群丰富度和多样性增多,低和中浓度组的艾森伯格菌属、栖粪杆菌属、乳酸杆菌属和劳特氏杆菌属等有益菌的相对丰度增大。SAEW防治肉鸡沙门氏菌实验结果显示,阳性组肉鸡精神萎靡,排稀粪,SAEW组肉鸡正常。组织切片显示,阳性组的肝脏明显充血、肝细胞变性肿胀、脾脏严重炎症反应,盲肠肠绒毛和黏膜上皮脱落;攻毒后3 d,20%SAEW组肝脏轻度充血和轻度脂肪变性,80%SAEW组肝脏无明显病变,脾脏和盲肠轻度炎症,盲肠轻度充血;攻毒后7 d,SAEW组脾脏和盲肠均无明显病变。与阳性组相比,SAEW组的肝脏载菌量明显减少;SAEW组的盲肠黏膜SIg A极显著高于阳性组(P0.05)。中试试验结果显示,鸡舍水线中大肠杆菌数量减少28%-52%,达到

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冷鲜猪肉优势菌群分析及噬菌体防腐效果评价

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作者：张雨霈山东农业大学

学位级别：硕士

冷鲜肉已成为肉品行业发展的主要方向和生鲜肉消费的主流,但其供应链,包括养殖、屠宰、分割、加工、储藏和运输等诸多环节,易受到微生物污染导致食品腐败和食品安全问题;影响冷鲜肉品质和食品安全的微生物主要包括腐败菌和食源性致病菌... 详细信息

冷鲜肉已成为肉品行业发展的主要方向和生鲜肉消费的主流,但其供应链,包括养殖、屠宰、分割、加工、储藏和运输等诸多环节,易受到微生物污染导致食品腐败和食品安全问题;影响冷鲜肉品质和食品安全的微生物主要包括腐败菌和食源性致病菌,而噬菌体对目标菌专一性、特异性、无毒无害的作用方式,使其成为消毒、防腐生物制剂的理想选择。本研究选择冷鲜猪肉为研究对象,明确冷链条件下腐败菌和致病菌的演变规律,分离优势腐败菌及其裂解性噬菌体,并将噬菌体进行抑菌防腐试验,为噬菌体在食品保鲜的应用上提供理论基础。本研究取山东地区四个品牌冷鲜猪肉样品,分别在4℃、8℃保存0d、1d、3d、5d,通过宏基因组学高通量测序技术对不同冷藏时间的猪肉样品微生物进行序列测定,分析菌群的多样性及结构组成,研究低温下猪肉菌群演变规律;同时通过传统方法分离纯化优势菌和测定菌落总数,获得低温储存条件下优势腐败菌和致病菌菌株。针对致病菌,采自某食品厂屠宰链中屠宰工具、屠宰工人、水样、体表及肉样共175份,调查李斯特菌在加工环节中的污染情况,经PCR鉴定及PCR产物测序分析,鉴定从猪屠宰链中的肉样中分离的单增李斯特菌,对单增李斯特菌进行血清型和毒素基因型检测,明晰其谱系、同源性差异及所含毒力基因;针对优势腐败菌,通过双层平板法和共培养法筛选分离相应的噬菌体,并以此为模型进行冷鲜肉抑菌防腐试验。致病菌方面,高通量测序分析表明菌群多样性随冷藏保存时间的延长而增加,其中李斯特菌为冷链优势增长致病菌,存在潜在致病风险。在屠宰链中分离到76株李斯特菌,其中单增李斯特菌有13株,污染率为7.4%。谱系Ⅱ(1/2a、1/2c、3a和3c)为主要的血清型占76.92%,每株单增李斯特菌至少含有一个毒力基因。对单增李斯特菌基因组中原噬菌体进行分析,为研发防控单增李斯特菌的噬菌体产品提供新的研究思路。单增李斯特菌的研究为探索致病性、毒性、耐药性之间的关系及消除安全隐患等奠定基础。腐败菌方面,高通量测序结果表明,不同品牌冷鲜猪肉样品优势菌群种类差异不明显,但菌群结构差异大,同一样品不同时间点的优势菌属分布较为相似,不同低温条件下增长的优势菌属有差异。总体来讲,低温冷藏过程中,厚壁菌门更具生长优势,气单胞菌、类香味菌为优势腐败菌。选择分离数量最多的气单胞菌(分离率为12%)为宿主菌,从养殖场的粪便、污水、沼液等环境中分离出9株噬菌体,其中两株噬菌体PAs6和PAh1裂解率高,效价均高于10pfu/mL,最佳感染复数分别为1和0.1,最适生长温度为37℃,最适p H值范围较广,有较好的热稳定性。将气单胞菌噬菌体PAs6用于猪肉抑菌防腐试验,噬菌体处理组的肉块出现腐败现象的时间延长1-2d,菌落总数减少,p H值从降低到升高的趋势有所减缓,表明噬菌体在用于冷鲜猪肉防腐上具有一定潜力,为开发真正安全绿色无污染的天然保鲜剂提供新的理论基础和技术手段。

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产气荚膜梭菌α毒素蛋白在感染小鼠器官分布的检测

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作者：王苗利山东农业大学

学位级别：硕士

为了认识α毒素在感染产气荚膜梭菌动物体内的分布,深入探讨产气荚膜梭菌的肠源毒血症的致病机理,本实验自制了高效价的产气荚膜梭菌α毒素的多克隆抗体,并以此作为一抗采用免疫组织化学方法对人工感染产气荚膜梭菌病的小鼠体内的α毒... 详细信息

为了认识α毒素在感染产气荚膜梭菌动物体内的分布,深入探讨产气荚膜梭菌的肠源毒血症的致病机理,本实验自制了高效价的产气荚膜梭菌α毒素的多克隆抗体,并以此作为一抗采用免疫组织化学方法对人工感染产气荚膜梭菌病的小鼠体内的α毒素进行了定位,阐明了产气荚膜梭菌毒素的分布状况,揭示了家畜猝死症的致病机理。首先在厌氧条件下培养复活了A型产气荚膜梭菌标准菌株,提取DNA模板,设计特异性的引物,并对其α毒素的全长基因进行PCR扩增、克隆。以常规基因重组技术,将回收的目的基因片段插入原核表达载pET28a,得到重组质粒,经酶切、测序鉴定后,用该重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),转化完成后,用IPTG诱导表达,摸索诱导最优条件后,将最佳条件下的诱导产物进行SDS-PAGE电泳,并经镍柱亲和纯化目的蛋白;PBS透析,Western blot检测了蛋白的特异性。将表达并纯化的α毒素蛋白500μg混以免疫弗氏佐剂免疫家兔四次,定期取血清并用ELISA方法检测抗体滴度,获得多克隆抗体。将产气荚膜梭菌接种产毒培养基,厌氧环境45C、4h培养,取培养液常规硫酸铵法提取外毒素,用灭菌生理盐水稀释,腹腔皮下注射小鼠,取72h内死亡小鼠的器官组织:心、肝、脾、肺、肾、胃,小肠、延脑,投入4%多聚甲醛中固,然后制作组织切片,用自制的兔抗α毒素多克隆抗体作为一抗,HRP(辣根过氧化物酶)和FITC(荧光素)分别标记的羊抗兔IgG,作为二抗。通过免疫组织化学法对患产气荚膜梭菌病的小鼠体内的α毒素进行了定位检测。结果表明,PCR扩增出长度为1228 bp的产物,通过Blast比对,确认为α毒素基因;对表达载体pet28a和含有目的基因的重组T载体分别进行双酶切,并将酶切后的线性pet28回收产物和酶切后的目的片段回收产物进行连接,成功构建了pet28a-α表达载体。经IPTG诱导、表达产物经SDS-PAGE电泳,获得大小为45KD特异的表达条带,表达量可达42.1%。Western blot结果证明表达的目的蛋白具有高度的特异性。以表达的α毒素蛋白为抗原,四次免疫家兔后,获得得多克隆抗体经ELISA测定,其效价为1 : 512,000。经免疫组织化学法对器官的毒素分布检测指出,在小鼠的延髓、肠、肾、肺、胃的组织细胞胞浆中发现了阳性颗粒,说明α毒素随血液循环系统进入并侵害了动物的延髓、肠、肾、肺、胃等组织。在脾、肝的血管内发现阳性颗粒,但在主质细胞中未发现毒素分布,说明毒素无法侵害脾肝的主质细胞。研究显示,本实验成功的制备了高效价的兔抗α毒素多克隆抗体,免疫组化结果提示,首次在延髓的细胞胞浆中发现了α毒素,延髓是生命中枢、呼吸、心血管中枢,毒素的侵害使其紊乱,加之毒素对消化系统呼吸系统及肾脏的毒害作用,导致动物死亡。

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微生物气溶胶污染对肉鸭生长性能、福利水平及免疫功能的影响

引用

作者：于观留山东农业大学

学位级别：硕士

本研究通过评估不同饲养卫生清洁状况下微生物气溶胶的浓度对肉鸭生产性能、福利水平及免疫功能的影响,为建立肉鸭养殖环境主要微生物气溶胶的浓度标准提供参考。选用600只1日龄的樱桃谷肉鸭,随机平均分配到1个对照组A和4个清洁卫生条... 详细信息

本研究通过评估不同饲养卫生清洁状况下微生物气溶胶的浓度对肉鸭生产性能、福利水平及免疫功能的影响,为建立肉鸭养殖环境主要微生物气溶胶的浓度标准提供参考。选用600只1日龄的樱桃谷肉鸭,随机平均分配到1个对照组A和4个清洁卫生条件逐步变差的试验组B、C、D、E,每组3个重复,每个重复40只。使用国际标准的Andersen-6级固体撞击式空气微生物采样器和国际标准的AGI-30全玻璃液体冲击式空气微生物采集器定期收集各组空气样品,检测各组鸭舍的气载需氧菌、气载真菌、气载革兰氏阴性菌和气载内毒素浓度。定期测定各组肉鸭血清促肾上腺皮质激素的含量变化,评估其应激强度。与此相应地对各组肉鸭的日增重、料重比、屠宰指标等生产性能指标进行检测与评定,分析微生物气溶胶对肉鸭生产性能的影响;对各组肉鸭外观步态评分、肢体对称性(FA)和盲肠内容物主要菌群检测与评定,分析微生物气溶胶对肉鸭福利水平的影响;对各组肉鸭的血清H5 HIV抗体效价、血清IgG、血清IL-2、T淋巴细胞转化率、血清溶菌酶和免疫器官指数进行检测与评定,分析微生物气溶胶对肉鸭免疫功能的影响。此外,本研究还运用Person’s相关性系数分别分析了微生物主要成分与肉鸭生产性能指标、动物福利指标和免疫指标的相关性,以便更加客观地分析和评估肉鸭微生物气溶胶主要成分与肉鸭以上指标之间的关系。结果显示:当肉鸭舍的微生物气溶胶浓度升高至气载需氧菌为2.96×105 CFU?m-3、气载真菌为2.63×104 CFU?m-3、气载革兰氏阴性菌为3.09×104 CFU?m-3、气载内毒素为41.78×103 EU?m-3时(即试验组D内的微生物气溶胶参数),该组肉鸭的血清ACTH水平、料重比、死淘率显著高于对照组(P0.05);该组肉鸭盲肠内容物中的乳酸杆菌浓度较对照组显著降低(P<0.05),外观评分、步态评分、翅长肢体不对称性(FA)值、综合(FA)值、盲肠大肠杆菌浓度及沙门氏菌浓度(6周龄时)较对照组显著上升(P<0.05或P<0.01);该组肉鸭的血清IgG浓度较对照组显著上升(P<0.05),血清IL-2浓度、T淋巴细胞转化率及脾脏指数较对照组显著或极显著下降(P<0.05或P<0.01)。本研究表明,高浓度微生物气溶胶不仅显著影响肉鸭的生产性能,使肉鸭的平均日采食量、屠宰率、屠体重、胸肌重、胸肌率等显著降低,料重比、死淘率等指标的显著升高;而且还对肉鸭的福利水平造成不利的影响,使肉鸭盲肠内容物菌群中的益生菌即乳酸杆菌浓度显著降低,外观评分、步态评分、翅长肢体不对称性(FA)值、综合(FA)值、盲肠大肠杆菌浓度及沙门氏菌浓度显著上升;同时高浓度的微生物气溶胶还可导致肉鸭免疫负荷过重、推迟抗体效价峰值的出现、降低疫苗的免疫保护作用等不利影响。因而,试验组D内的微生物气溶胶参数(即:气载需氧菌:2.96×105CFU?m-3;气载真菌:2.63×104 CFU?m-3;气载革兰氏阴性菌:3.09×104 CFU?m-3;气载内毒素:41.78×103 EU?m-3)可初步作为肉鸭养殖环境中的微生物气溶胶上限标准。

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