检索结果-南通市图书馆

作者：秦小飞郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的房颤是临床上最常见的持续性心律失常,可导致血栓栓塞和心力衰竭等并发症,严重影响患者的生活质量和寿命。应用射频导管在肺静脉开口处节段性消融电学隔离肺静脉是目前阵发性房颤导管消融治疗的主要策略。射频导管消融虽然... 详细信息

背景与目的房颤是临床上最常见的持续性心律失常,可导致血栓栓塞和心力衰竭等并发症,严重影响患者的生活质量和寿命。应用射频导管在肺静脉开口处节段性消融电学隔离肺静脉是目前阵发性房颤导管消融治疗的主要策略。射频导管消融虽然即刻成功率高,但术后房颤复发率也高,这主要是由于射频导管对肺静脉肌袖组织的损伤透壁性差造成的;肺静脉狭窄是射频消融肺静脉的主要并发症,有可能导致肺动脉高压,临床处理非常困难。相对于射频能量超声能量有对组织损伤均匀彻底和术后无肺静脉狭窄的优点。灌注超声导管同时具备超声的能量优势和目前临床上使用的超声球囊导管所缺乏的操作优势,本实验拟通过对比灌注超声导管与冷盐水灌注射频导管电学隔离犬肺静脉的即刻效果,评价采用灌注超声导管节段性消融电学隔离肺静脉的可行性及有效性。材料和方法健康杂种家犬23只,体重在15～21kg之间,雌雄不限。随机分为冷盐水灌注射频导管消融组(A组,n=12),及灌注超声导管消融组(B组,n=11)。实验前犬禁食水12小时,实验时采用戊巴比妥钠静脉注射全身麻醉(30mg/kg),麻醉满意后取平卧位固定于X线导管床上。Seldinger's法穿刺双侧股静脉,将冠状静脉窦(CS)标测导管放置到位后行房间隔穿刺,穿刺成功后通过房间隔穿刺鞘依次行左上肺静脉(LSPV)、右上肺静脉(RSPV)、左下肺静脉(LIPV)及右下肺静脉(RIPV)逆行造影以判断肺静脉的走行和开口位置,造影完成后采用环状电极行肺静脉标测,各组动物分别在环状电极标测指导下应用冷盐水灌注射频导管及灌注超声导管行节段性消融电学隔离肺静脉。冷盐水灌注射频导管预设温度40-45℃,功率30W-40W,产生有效放电后继续巩固放电30-60s;灌注超声导管预设温度55℃,功率30W-40W,每次消融60s。消融终点均为肺静脉电位(PVP)完全消失或肺静脉内仍可记录到肺静脉电位但与心房电

关键词：灌注超声导管射频能量心房颤动肺静脉犬

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心房颤动的非药物治疗进展

心房颤动的非药物治疗进展

作者：陶海龙郑州大学

学位级别：硕士

心房颤动是临床中最常见的持续性快速心律失常,发生率随着年龄增加而升高,主要临床危害是增加血栓栓塞的危险,同时影响心脏收缩功能,致使心排出量下降,严重时会出现心力衰竭。对于房颤的治疗,目前尚缺乏有效的药物治疗手段。因此,非药... 详细信息

心房颤动是临床中最常见的持续性快速心律失常,发生率随着年龄增加而升高,主要临床危害是增加血栓栓塞的危险,同时影响心脏收缩功能,致使心排出量下降,严重时会出现心力衰竭。对于房颤的治疗,目前尚缺乏有效的药物治疗手段。因此,非药物治疗的方法逐渐引起了人们的关注,包括:外科迷宫手术、导管射频消融、植入心房除颤器以及起搏预防房颤的发生。基于多发折返学说Cox率先开展了外科迷宫手术,最初的迷宫Ⅰ型及Ⅱ型由于手术操作复杂、并发症较多,已被淘汰。目前采用更为有效安全的迷宫Ⅲ型手术和改良迷宫手术,后者采用单纯左心房迷宫术以及射频、冷冻、超声、微波等消融手段取代传统的物理性切开来实现心房组织隔离。迄今为止,迷宫术式中Ⅲ型手术病例最多、随诊时间最长、治疗效果最好,是开展心房颤动最有效的外科治疗方法。改良迷宫手术中,射频、冷冻消融手段由于操作简便,损伤小因而应用最多,微波消融术应用时间较短,远期临床疗效有待观察。尽管目前射频、冷冻等能量的应用代替了直接切割,使手术简单化和微创化,外科手术根治房颤仍限于合并有需要开胸手术的心脏疾病患者,而对于单纯房颤患者无论医生或是患者均较少选择外科手术。经导管消融治疗心房颤动(房颤)是近年心脏临床电生理研究的热点之一,常用消融部位包括:房室交界区、心房壁和肺静脉。通过导管消融房室交界区,完全阻断房室传导并植入永久起搏器术是目前应用最多的一种控制房颤心室率的非药物治疗手段。该项治疗最大的优点是成功率高,并发症少,但由于房颤并未转复,血栓栓塞的风险仍然存在,因此对于高危患者仍然需要抗凝治疗。房室结改良术是经导管消融控制房颤快速心室率的另一种非药物治疗手段,其优点是既可减慢房室传导,又可保持生理性的房室同步活动,因而避免了植入永久起搏器。

关键词：心房颤动射频消融介入

干预犬左心房峡部对心房颤动诱发率的影响及其机制研究

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干预犬左心房峡部对心房颤动诱发率的影响及其机制研究

作者：龙德勇郑州大学

学位级别：硕士

目的探讨干预犬左心房峡部对Marshall韧带电位和心房颤动(简称房颤)诱发率的影响及房颤诱发率与Marshall韧带电位之间的关系。方法对19只健康杂种家犬于全麻下干预左心房峡部。左心房峡部干预的方法是在开胸手术后直视下行自左下肺... 详细信息

目的探讨干预犬左心房峡部对Marshall韧带电位和心房颤动(简称房颤)诱发率的影响及房颤诱发率与Marshall韧带电位之间的关系。方法对19只健康杂种家犬于全麻下干预左心房峡部。左心房峡部干预的方法是在开胸手术后直视下行自左下肺静脉下缘中点至冠状静脉窦上缘之间的透壁切口，切口方向垂直于二尖瓣环，切开后立即缝合切口。在干预左心房峡部以前用梳状电极对Marshall韧带行心外膜电生理标测，同时测定峡部传导时间，然后以S1S2及S1S1刺激各肺静脉及左、右心耳诱发房颤。将持续10秒以上并且以同一刺激可重复3次以上的房颤视为可诱发房颤，否则为不可诱发。干预左心房峡部后对Marshll韧带重新进行心外膜标测、同一部位测量左心房峡部传导时间及S1S2及S1S1电刺激诱发房颤。根据干预左心房峡部后Marshall韧带电位是否消失(即是否电学隔离Marshall韧带)将19只犬分为两组：Marshall韧带电位消失组(A组，电学隔离组)和Marshall韧带电位未消失组(B组，未电学隔离组)。将各组干预左心房峡部前后房颤诱发率和左心房峡部传导时间进行对比并作统计学分析处理;将A、B两组间干预左心房峡部前后房颤诱发率进行对比并作统计学分析处理。以α=0.05为检验水准。结果全部19只犬均可记录到Marshall韧带电位，Marshall韧带电位记录率为100％(19/19)。A组12只犬干预左心房峡部后Marshall韧带电位消失，该组动物在干预左心房峡部前有10只犬可诱发出房颤，干预左心房峡前房颤诱发率为83.3％(10/12);而在干预左心房峡部后仅2只犬可诱发出房颤，干预后房颤诱发率为16.7％(2/12)。A组动物干预左心房峡部前后房颤诱发率对比分析差异显著，P＜0.05。B组7只犬干预左心房峡部后Marshall韧带电位未消失，该组动物在干预左心房峡部前6只可诱发出房颤，干预前房颤诱发率为85.7％％(6/7);郑州大学2003届硕士研究生毕业论文干预犬左心房峡部对心房颤动诱发率的影响及其机制研究而干预左心房峡部后仍有5只犬可诱发出房颤，干预后房颤诱发率为77.4%(5/7)。B组动物干预左心房峡部前后房颤诱发率作对比分析及统计学处理P>0.05，干预前后房颤诱发率差异无显著性。干预左心房峡部后将A、B两组间房颤诱发率对比分析及统计学处理见差异显著(P

关键词：心房颤动 Marshall韧带左心房峡部

左心室弥漫性纤维化对持续性心房颤动患者导管消融预后的影响

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左心室弥漫性纤维化对持续性心房颤动患者导管消融预后的影响

作者：王喆首都医科大学

学位级别：硕士

目的:持续性心房颤动(房颤)患者常合并有心室弥漫性心肌纤维化。心室纤维化可引起心室僵硬度增加,与心功能不全密切相关,是心血管疾病不良预后的危险因素。本研究采用心脏核磁共振(CMR)新技术弛豫时间映射图(T1mapping)成像技术对入组... 详细信息

目的:持续性心房颤动(房颤)患者常合并有心室弥漫性心肌纤维化。心室纤维化可引起心室僵硬度增加,与心功能不全密切相关,是心血管疾病不良预后的危险因素。本研究采用心脏核磁共振(CMR)新技术弛豫时间映射图(T1mapping)成像技术对入组人员左心室纤维化程度进行定量分析,探讨左心室纤维化程度对持续房颤患者射频消融预后的影响。方法:32名健康志愿者(10名女性,平均年龄47.7±12.2岁)及80名第一次接受射频消融手术治疗的持续性房颤患者(12名女性,平均年龄55.72±11.3岁)入组本研究并接受3.0T心脏核磁共振检查,测量左心室平均心肌T1值并计算细胞外容积分数(Extracellular volume fraction,ECV)。持续房颤患者均接受房颤导管射频消融(Radiofrequency Catheter Ablation,RFCA)治疗,术后定期随访心律失常复发情况。结果:截至2016年2月,平均随访(8.9±3.1)月。55位患者维持窦性心律,25位患者复发,无死亡。COX回归分析显示ECV大于28.71%(HR 8.185;95.0%CI 1.891-35.431)与左心房前后径(Left ventricle dimension,LAD)(HR 1.056;95.0%CI 1.003-1.096)是RFCA术后房颤复发的独立危险因素。结论:CMR测定左心室ECV增大是持续性房颤患者射频消融术后复发的独立预测因子。

关键词：左心室纤维化心房纤颤心房颤动射频消融术磁共振成像细胞外容积

冠心病血运重建患者动脉粥样硬化危险因素的流行率与控制情况调查

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冠心病血运重建患者动脉粥样硬化危险因素的流行率与控制情况调查

作者：徐和平郑州大学

学位级别：硕士

背景及目的：由于人们预期寿命延长和生活方式改变，冠心病正在成长为我国主要死亡原因，加重我国卫生保健系统经济负担。广泛临床和统计学资料已经证实许多增加冠心病危险因素。一些危险因素是可改变、治疗和控制的，例如吸烟、高脂血... 详细信息

背景及目的：由于人们预期寿命延长和生活方式改变，冠心病正在成长为我国主要死亡原因，加重我国卫生保健系统经济负担。广泛临床和统计学资料已经证实许多增加冠心病危险因素。一些危险因素是可改变、治疗和控制的，例如吸烟、高脂血症、高血压病和糖尿病。由于采用标准和人群不同，各个研究得出的动脉粥样硬化危险因素的流行情况不同，即动脉粥样硬化危险因素的流行情况还没有精确确定。同时我国大部分动脉粥样硬化危险因素流行情况的资料源于西方国家，故我国冠心病血运重建患者动脉粥样硬化危险因素的流行情况还没有一个充分评价：在临床实践中，二级预防在减少死亡、心肌梗死和卒中复合终点事件中已经证实是有效的，对冠心病患者可能特别有效且花费是值得的。不断有许多证据强调在冠心病二级预防治疗中对可变危险因素控制的重要性。但调查显示冠心病患者危险因素控制情况极差。在我国冠心病血运重建患者，可改变危险因素控制情况至今还没有一个评估。本研究目的了解冠心病患者接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)或冠状动脉旁路移植术(CABG)动脉粥样硬化危险因素的流行情况和术后可改变危险因素的控制情况，分析其与循证医学指南的差距，提高冠心病二级预防水平。方法：资料收集和分析分两个阶段：第一阶段，选择DESIRE(Drug-Eluting Stent Impact on Revascularization)单中心注册的2001年7月1日～2004年6

关键词：冠心病危险因素血运重建流行病学二级预防随访预后

灌注超声导管输出能量及其损伤效应的实验研究

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灌注超声导管输出能量及其损伤效应的实验研究

作者：王小芳郑州大学

学位级别：硕士

超声既是一种波动形式,又是一种能量形式。当一定剂量的超声在生物体内传播时,可引起生物体的功能或结构发生变化,这便是超声生物效应,按其作用机制分为机械效应、温热效应及空化效应等。超声对生物组织的作用取决于上述三种效应的总和... 详细信息

超声既是一种波动形式,又是一种能量形式。当一定剂量的超声在生物体内传播时,可引起生物体的功能或结构发生变化,这便是超声生物效应,按其作用机制分为机械效应、温热效应及空化效应等。超声对生物组织的作用取决于上述三种效应的总和。超声心肌消融就是利用超声生物效应造成符合临床要求的心肌损伤灶,达到破坏病灶的目的。射频消融是利用射频电流通过心肌组织时产生的电磁热引起组织升温、干燥,造成心肌凝固性坏死达到治疗目的。超声导管消融的基本构想是通过置于心导管顶端的换能器释放超声能量直接作用于心内膜表面,利用超声生物效应(主要是热效应)造成心肌损伤。以往的研究表明,超声消融不仅损伤面积大,消融深度可控,且不要求象射频导管与心肌界面的紧密接触,故有利于房颤的消融。国内一些学者亦在动物实验中观察到超声消融可在入心静脉口形成完全持久的电隔离,且未见管腔急性和慢性狭窄,操作亦较简单,表明超声用于房颤的消融可能优于射频电流。而且超声能量在较低的预设温度加热(如50℃时)不会剥脱内皮,所以很少发生血栓并发症和再狭窄。本研究采用IBI公司生产的新型的灌注超声导管,由于该型导管刚刚设计完成,并未投入临床使用。本研究希望通过动物在体实验来确定采用该型导管消融时的最佳输出功率及最佳输出时间。

关键词：超声输出能量损伤效应犬导管消融

辅用Swartz长鞘在经静脉途径射频消融治疗阵发性室上性心动过速的应用价值

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辅用Swartz长鞘在经静脉途径射频消融治疗阵发性室上性心动过速的...

作者：李新郑州大学

学位级别：硕士

目的探讨经静脉途径射频消融治疗阵发性室上性心动过速（PSVT）中应用Swartz R0（SR0）长鞘的价值。方法 PSVT患者182例,其中右侧房室折返性心动过速（AVRT）49例,房室结折返性心动过速（AVNRT）133例。将患者随机分为SR0长鞘组及常规... 详细信息

目的探讨经静脉途径射频消融治疗阵发性室上性心动过速（PSVT）中应用Swartz R0（SR0）长鞘的价值。方法 PSVT患者182例,其中右侧房室折返性心动过速（AVRT）49例,房室结折返性心动过速（AVNRT）133例。将患者随机分为SR0长鞘组及常规组。SR0长鞘组在消融时通过SR0长鞘放置消融导管进行消融,常规组则通过血管穿刺鞘放置消融导管进行消融。统计分析两种消融方式的即刻成功率、手术过程、安全性及随访成功率。数字变量以均数±标准差表示、数字变量的比较采用t检验;率的比较采用X检验,α=0.05为检验水准。结果 91例患者（其中右侧AVRT21例、AVNRT70例）通过SR0长鞘放置消融导管进行消融;另外91例患者通过常规方法进行消融（其中右侧AVRT28例,AVNRT63例）。SR0长鞘组和常规组即刻成功率无显著性差异（96.7%VS 93.4%,P=0.50）;辅用长鞘组较常规组手术时间（73±35min VS 101±65min,P增加手术成功率,但可明显简化手术过程、缩短手术时间。

关键词：室上性心动过速射频消融 Swartz长鞘

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SGLT2抑制剂缓解阿霉素心脏毒性的研究

SGLT2抑制剂缓解阿霉素心脏毒性的研究

作者：董一鸣郑州大学

学位级别：硕士

研究背景及目的心力衰竭是一种临床综合征,通常是由结构和（或）功能性心脏异常引起的包括呼吸困难、颈静脉压力升高、肺淤血、下肢肿胀等症状。心衰在人群中的总体患病率大约为1-2%。心力衰竭不仅给患者带来了很大痛苦和压力,同时也大... 详细信息

研究背景及目的心力衰竭是一种临床综合征,通常是由结构和（或）功能性心脏异常引起的包括呼吸困难、颈静脉压力升高、肺淤血、下肢肿胀等症状。心衰在人群中的总体患病率大约为1-2%。心力衰竭不仅给患者带来了很大痛苦和压力,同时也大量消耗了公共医疗资源。阿霉素（DOX）是肿瘤治疗中的常用化疗药,广泛用于实体恶性肿瘤和非实体恶性肿瘤。这类药物能显著降低癌症病人的死亡率,但是这种药物会对心血管系统造成不良影响。大约有7.25%-27%的癌症患者,经过联合化疗后,死于化疗药物的心脏毒性。8%-16%的成年癌症患者在化疗9年后,出现临床或者亚临床的心力衰竭。我们迫切的需要一些用药策略,来避免这些不利影响的出现。叙利亚金黄仓鼠已经被用于动物模型来研究人类疾病已经有60多年了。金黄仓鼠作为动物模型,具有的优势包括发情期周期短（4天）,更短的妊娠期（16天）,与大小鼠相比,ANP和BNP分泌水平与人类更接近。这为我们提供了良好的动物模型基础。SGLT2抑制剂是一类新型的抗糖尿病药物。可单独用药或与其他糖尿病药物联合使用,从而改善血糖控制,降低体重和血压。之前的研究表明,SGLT2抑制剂可以降低2型糖尿病患者发生心血管事件和心力衰竭的风险。Sglt2抑制剂有许多直接或者间接阻止心衰进程的作用,SGLT2抑制剂增强渗透性利尿,减少交感神经紧张,全身主要代谢从葡萄糖转化为脂肪,这些都可能提供心血管收益。为了验证SGLT2抑制剂对于阿霉素导致的心脏毒性效应是否具有缓解作用,我们使用阿霉素处理叙利亚金黄仓鼠诱导期心脏损伤,从而探究其治疗效果。研究方法我们首先摸索出不同剂量下阿霉素的心脏毒性效应,建立起心衰模型;后探究不同剂量的SGLT2抑制剂对于高浓度（2mg/kg）阿霉素导致的心脏毒性效应的缓解作用及生存曲线。随后我们探究了SGLT2抑制剂对低浓度剂量（1mg/kg）阿霉素心脏毒性的治疗作用。我们选取6周龄的雄性金黄仓鼠随机分为4组,A组（PBS组）,B组（DOX组）,C组（PBS-SGLT2 组）和D组（DOX-SGLT2 组）。DOX-SGLT2 组,DOX组进行持续六周,每周一次剂量为1mg/kg的阿霉素腹腔注射,PBS-SGLT2组和PBS组,则腹腔注射PBS。之后的四周,DOX-SGLT2组和PBS-SGLT2组进行SGLT2抑制剂灌胃治疗,剂量为5mg/kg每天一次,持续4周,DOX组和PBS组则灌胃溶液。随后进行超声心动图检查,分析心脏的射血分数。随后处死所有仓鼠,对比各组仓鼠的心脏重量与体重比（HW/BW）,进行实时荧光定量PCR反应（qRT-PCR）测定脑钠肽（Brain natriuretic peptide,BNP）和免疫印迹法（Western blot）测量LC3B等指标,对部分心脏组织行HE及Masson染色,观察对比各组心脏的纤维化和心肌排列。研究结果:SGLT2抑制剂对于高浓度剂量阿霉素的治疗作用不明显。在低浓度剂量阿霉素的研究中:B（DOX组）组和D（DOX-SGLT2）组仓鼠被成功诱导成为心力衰竭模型,左室射血分数明显降低（41%）,并且死亡率较低（11%）。在经SGLT2抑制剂灌胃治疗之后,D组射血分数回升至正常水平。与B组相比,D组BNP水平明显下降,与C（PBS-SGLT2）组接近。心脏组织Masson染色的纤维化面积,D组均值比B组均值降低了 10%。心脏超声显示的结果,表明D组在治疗后射血分数均值提高了至60%以上,比B组高20%左右。同时我们发现了SGLT2抑制剂可以明显增强自噬,提高蛋白LC3Ⅱ水平,并且降低凋亡,降低C-caspase。结论:阿霉素在低浓度1mg/kg的剂量下,连续六周,每周一次腹腔注射叙利亚金黄仓鼠即可诱导成为心衰模型。SGLT2抑制剂对阿霉素诱导的心衰仓鼠有非常好的治疗效果,能明显降低BNP,并且提升射血分数,减少心肌纤维化。SGLT2抑制剂较为理想的给药剂量是5mg/kg。SGLT2抑制剂通过增强心肌自噬水平和抗凋亡作用,从而缓解阿霉素的心肌损伤水平。

关键词：阿霉素心力衰竭叙利亚金黄仓鼠 SGLT2抑制剂

心肌梗死患者冠状动脉造影血管病变特点与临床分析

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心肌梗死患者冠状动脉造影血管病变特点与临床分析

作者：艾民郑州大学

学位级别：硕士

背景与目的：动脉粥样硬化性疾病是严重危害人类健康的一大类疾病，在发达国家被称为“头号杀手”，是世界范围的主要死亡原因。在《2002年世界卫生报告》中指出，全球每年有1700万人死于心血管疾病，而一半以上死于急性心肌梗死，其中3... 详细信息

背景与目的：动脉粥样硬化性疾病是严重危害人类健康的一大类疾病，在发达国家被称为“头号杀手”，是世界范围的主要死亡原因。在《2002年世界卫生报告》中指出，全球每年有1700万人死于心血管疾病，而一半以上死于急性心肌梗死，其中3／4以上患者存在着吸烟、高血压、糖尿病和血脂紊乱四大冠心病危险因素。我国动脉粥样硬化性疾病发病率虽没有西方国家高，但正呈上升趋势。冠状动脉粥样硬化性心脏病为多致病因素性疾病，具有高脂血症、高血压、糖尿病、男性、高龄、冠心病家族史等患者易发生冠心病，而这些危险因素被称为冠心病危险因素。冠状动脉造影检查是确定有无冠状动脉疾病的首选影像学检查方法，心电图是诊断急性心肌梗死的基石，两者为临床工作中非常重要的检查手段。本研究旨在通过对351例患者的冠状动脉血管造影和心电图分析来揭示1支2支3支冠状动脉血管病变与前壁及下壁心肌梗死发生率之间的关系。资料与方法：选择2004年1月～2005年3月间在我院心内科住院并经冠状动脉造影确诊的冠心病患者351例，其中心肌梗死患者170例。患者入院2周内行冠状动脉造影检查，其中208例患者进行了超声心动图检查;对每一位住院患者进行冠心病危险因素调查（年龄、吸烟、高血压、糖尿病、血脂紊乱等）。统计学处理应用SPSS13.0软件，年龄用均数和标准差描述，用成组设计两样本均数比较的u检验（two-sample u-test for independent samples）和单因素方差分析（one-way ANOVA），a=0.05作为检验水准;吸烟、高血压、糖尿病、心肌梗死、血脂紊乱（总胆固醇升高、低密度脂蛋白胆固醇升高、高密度脂蛋白胆固醇降低）、左室扩大、室壁瘤、E／A＜1、EF＜50％用百分率来描述，用四格表资料X检验（chi-square test）和多个样本率X检验，a=0.05作为检验水准。

关键词：冠状动脉粥样硬化冠心病危险因素心肌梗死下壁心肌梗死前壁心肌梗死冠状动脉造影术心电描记术发病率超声心动描记术多普勒

利用CRISPR-Cas9构建MYBPC3基因敲除型叙利亚仓鼠遗传性心肌病模型

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利用CRISPR-Cas9构建MYBPC3基因敲除型叙利亚仓鼠遗传性心肌病模型

作者：翟亚飞郑州大学

学位级别：硕士

研究背景与目的心力衰竭(heart failure,HF)是全球范围内面临的公共卫生健康问题。而遗传性心肌病(inherited cardiomyopathies,IC)是引起心衰的主要原因之一。遗传性心肌病在人群中有着极高的发病率,同时是年轻人群中心原性猝死的主要... 详细信息

研究背景与目的心力衰竭(heart failure,HF)是全球范围内面临的公共卫生健康问题。而遗传性心肌病(inherited cardiomyopathies,IC)是引起心衰的主要原因之一。遗传性心肌病在人群中有着极高的发病率,同时是年轻人群中心原性猝死的主要原因。目前关于遗传性心肌病的治疗措施如药物治疗,器械辅助治疗,外科手术等方式尽管能缓解患者症状,未能从根本上逆转或者延缓疾病的进展。遗传性心肌病多位编码心肌肌小节相关蛋白基因的突变引起,在已知的致病基因的突变中,编码肌小节心肌纤维重链(myosin heavy chain,MHC)的基因MYH7和心肌结合蛋白C(cardiac myosin binding protein)的基因 MYBPC3 多见。MYBPC3基因上的突变多为碱基的丢失引起的移码突变。动物模型对于研究遗传性疾病有着无法替代的价值,目前的关于遗传性心肌病的动物模型存在于小鼠,大鼠,兔等动物。基于现有的动物模型研究发现的致病机制开发的治疗在人体成效甚微,因此迫切需要开发新型的遗传性心肌病动物模型为深入研究疾病提供工具。近年来随着CRISPR-Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats)技术的成熟和完善,基因编辑领域发生了巨大的变化。该技术比传统的方法更加便捷,低廉,高效,目前得到广泛的应用。叙利亚仓鼠(syria hamster)又称金黄地鼠(golden hamster),是目前实验室被广泛应用的动物之一,具有体型中等,孕期短,每胎产仔量多等特点。目前尚未有针对叙利亚仓鼠进行人为基因编辑构建的遗传性心肌病模型,因此本研究尝试借助叙利亚仓鼠为载体利用CRISPR-Cas9技术构建MYBPC3基因敲除的遗传性心肌病模型,为更深入的研究复杂的遗传性心肌病提供工具支持。方法选择打靶位点设计sgRNA,构建CRISPR-Cas9打靶系统并在体外验证切割效率。选择切割效率高的sgRNA进行受精卵注射得到MYBPC3基因敲除仓鼠。鉴定得到的F0子代基因型,同时进行脱靶效应的检测。选择产生移码突变效应的F0代鼠进行繁殖传代,在得到稳定遗传效应的MYBPC3基因敲除叙利亚仓鼠中观察表型。取6个月大的纯合,杂合,野生型同窝仓鼠进行心脏超声检测。将进行称重后的实验鼠进行处死,获取心脏标本并称重。利用RT-qPCR检测ANP,BNP,MYBPC3,β-MHC,TGF-β 等基因的表达。Western Blot 检测cMyBP-C 蛋白的含量。采用马松染色和HE染色观察心肌组织学的变化。结果选择仓鼠MYBPC3基因16号外显子为打靶区域,同时设计了两个sgRNA。体外切割效率验证中sgRNA1表现出30.22%的切割效率,sgRNA2无效。选择构建了 sgRNA1的打靶系统进行受精卵注射后得到了 8只F0代转基因仓鼠,其中5只产生了基因编辑效应。脱靶效应检测未发现出有脱靶出现;选择敲除4个碱基造成移码突变效应的F0#2仓鼠进行传代繁殖。在稳定遗传的F2代中选择纯合,杂合仓鼠与同窝野生型对照组进行表型鉴定发现:纯合组仓鼠心脏大体形态显著大于杂合组和野生型对照组。纯合组,杂合组的心脏占全身重量的比重高于对照组,且纯合组高于杂合组。RT-qPCR结果显示心衰标记物ANP,BNP的mRNA表达含量纯合组,杂合组高于对照组,纯合组升高最为显著。MYBPC3基因表达在纯合组,杂合组依次低于对照组。而心肌纤维化指标TGF-β和反应心肌肥厚的β-MHC表达量在三组中没有显著差异。Western blot结果显示cMyBP-c蛋白在纯合组未检测到,杂合组中含量高于对照组。马松染色在纯合组中观察到心肌排列紊乱,少许间质纤维化。心脏超声结果中纯合仓鼠出现左心室室腔扩大,射血分数(ejection fraction,EF)和左室短轴缩短率(fractional shortening,FS)降低的表现。结论利用CRISPR-Cas9成功的进行了叙利亚仓鼠MYBPC3基因高效安全的编辑。携带4个碱基敲除造成移码突变效应的纯合仓鼠在6月龄时出现扩张型心肌病的表型,成功的构建了MYBPC3基因敲除型叙利亚仓鼠遗传性心肌病动物模型。杂合仓鼠表型尚需延长观察时间进行表型鉴定。

关键词：遗传性心肌病动物模型叙利亚仓鼠 CRISPR-Cas9