检索结果-南通市图书馆

作者：朱艳璨上海师范大学

学位级别：硕士

随着人们生活水平的提高,他们对文化和旅游的需求不断增加。博物馆作为传承中华文化和增强文化自信的重要场所,以及文化旅游活动的目的地之一,在人们的文化生活中扮演着重要角色。博物馆的游客是文化旅游的主要参与者,他们的行为和兴趣... 详细信息

随着人们生活水平的提高,他们对文化和旅游的需求不断增加。博物馆作为传承中华文化和增强文化自信的重要场所,以及文化旅游活动的目的地之一,在人们的文化生活中扮演着重要角色。博物馆的游客是文化旅游的主要参与者,他们的行为和兴趣对博物馆的运营和文化传承具有重要影响,因此对博物馆游客的行为进行分析具有重要意义。通常,每座城市都有多座博物馆,这些博物馆涵盖各种主题和领域,形成的博物馆网络为游客提供了丰富多样的文化、历史和艺术体验,有助于城市文化系统的发展。本文基于关联分析的视角将游客群体行为引入城市内博物馆的研究,通过获取2013-2020年间携程网上海市内博物馆的游客参观信息,分析博物馆游客的阶段性游览统计数据,通过社会网络分析方法充分挖掘博物馆游客的流动特征和行为模式,以探讨博物馆之间的潜在联系,促进不同博物馆之间的合作与交流。这种合作有助于满足游客的兴趣和需求,进而推动博物馆旅游的发展。游客对于博物馆的参观选择既会受距离、时间等客观因素影响,也会受游客喜好、年龄等主观因素影响。基于前期学者的研究,本文从客观因素博物馆间空间距离与主观因素游客感知差异两个角度分析游客群体对于博物馆的选择行为。首先,本文利用网络爬虫技术获取OTA平台上游客的评论信息以及游客的账户名称等数据,结合本文研究对象和相关理论将游客感知分成五个维度去讨论,并确定各维度的关键词,利用Nvivo软件对采集到的评论信息根据感知关键词的类型进行质性分析,计算博物馆间的感知差异,运用Stata软件和游客的账户名称信息计算得出不同游客参观相同博物馆的数据,参考地球两点间经纬度的距离计算博物馆间空间距离;其次,通过社会网络分析法对感知差异和游客群体的参观行为进行整体和个体节点分析;最后,用stata软件进行回归分析。根据分析,本文得出4点结论。(1)上海市博物馆间的感知差异逐年递减,说明博物馆的种类同质化越来越明显,相同类型的博物馆越建越多,而独特性高的博物馆数量较少。(2)上海市的博物馆存在明显的两极分化现象。一些博物馆之间具有较强的关联度,而另一些博物馆与其他博物馆几乎没有关联。(3)博物馆间的空间距离越远博物馆间的游客流动概率越小,即两个博物馆间的距离越近越吸引游客同时参观两个博物馆,博物馆的地理位置优越、交通便捷以及集群的分布形式有利于吸引游客参观。(4)游客对博物馆的感知差异与博物馆间的关联强度非简单的线性相关,呈现出正U型变化趋势,说明当博物馆之间的感知差异逐渐增大时,游客出于学习成本等因素可能会选择自己比较熟悉的同类型博物馆去参观,但是当博物馆之间的感知差异非常大时,游客选择两种完全不同类型的博物馆游览的概率会上升,这表明,当博物馆的类型完全不同时,游客会产生好奇心理,渴望去参观。此外,本文结合以上分析结果为博物馆发展提出一些建议,通过构建满足游客需求的城市博物馆联盟,促使博物馆间形成合作关系,以节点中心度较高的博物馆为核心,带动周边博物馆发展,让博物馆成为城市发展旅游的动力,同时要有针对性的开发现有数量较少的类型的博物馆,吸引更多游客,还可以通过大众媒体宣传让游客更加了解博物馆,通过在博物馆间设置接驳班车、设计博物馆旅游线路等方便游客在城市博物馆间流动,促进不同博物馆间关联的形成,最终目的是推动城市博物馆旅游的发展。

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太空葛麻姆SP1的生物学效应研究

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作者：明钟镱江西中医药大学

学位级别：硕士

目的葛麻姆是豆科葛属的多年生藤本植物,在我国长江以南分布广泛,但是目前关于其资源开发利用的研究还未见广泛报道。本研究通过“神舟十二号”飞船搭载葛麻姆种子,利用太空特殊环境对其产生诱变,返回地面后种植,以未搭载的葛麻姆为对照... 详细信息

目的葛麻姆是豆科葛属的多年生藤本植物,在我国长江以南分布广泛,但是目前关于其资源开发利用的研究还未见广泛报道。本研究通过“神舟十二号”飞船搭载葛麻姆种子,利用太空特殊环境对其产生诱变,返回地面后种植,以未搭载的葛麻姆为对照,从种子萌发育苗条件、植株农艺性状、叶部质量性状、遗传物质变化等方面进行对比研究,为筛选与培育优质的葛麻姆种质资源奠定基础。方法(1)以普通的葛麻姆种子作为实验材料,通过设置不同的消毒方式、引发时间、引发温度来确定种子萌发环境条件,采用聚乙二醇(PEG-6000)、赤霉素(GA)、硝普纳(SNP)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、萘乙酸(NAA)、吲哚乙酸(IAA)对种子进行浸种处理,处理后播种于分别装有基质A(市面售卖育苗基质,含泥炭、椰糠、蛭石、珍珠岩)、基质B(细砂:蛭石:珍珠岩=1:1:1)、基质C(泥炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1)的育苗盘内,测定种子发芽指标和生长指标,确定葛麻姆种子萌发生长的最适宜条件。(2)航天组及地面对照组的葛麻姆种子进行种子萌发、育苗移栽、田间管理,于成熟期采用农艺性状测量法测定主要农艺性状、紫外分光光度法检测叶片总黄酮含量、凯氏定氮法检测叶片粗蛋白质含量、纤维袋法检测叶片中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量并根据公式计算出单株的相对饲用价值,通过结果分析航天诱变后葛麻姆农艺性状和品质性状指标之间的相关性及变异情况。(3)在呈现显著差异的植株中随机选取10株航天诱变葛麻姆,取幼嫩叶片通过流式细胞仪检测,使用玉米B37为内参,同时对普通葛麻姆进行常规根尖压片实验确定其染色体倍性作为对照样品,通过公式计算分析航天诱变后的葛麻姆基因组大小及染色体倍性的变异情况。结果(1)NAA 0.5～8mg·L对葛麻姆种子的萌发表现为抑制作用,PEG 5～55%、GA 80～300mg·L、SNP 30～50mg·L、6-BA 4～25mg·L和IAA 100～125mg·L对葛麻姆种子的萌发主要表现为促进作用。PEG 15～45%、GA 80～120mg·L、SNP10～50mg·L和IAA 75～200mg·L对幼苗生长有促进作用,而6-BA 2～50mg·L和NAA 0.5～8mg·L不利于幼苗根系的伸长。综合分析PEG 35%处理的葛麻姆种子萌发生长效果提升最为显著。细砂:蛭石:珍珠岩=1:1:1的基质配比有利于葛麻姆种子的萌发和出苗,而泥炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1有利于葛麻姆幼苗的生长。建议栽培上葛麻姆种子采用PEG 35%进行浸种处理后,播种于装有基质细砂:蛭石:珍珠岩=1:1:1的育苗盘内,培育30d后移栽入基质为泥炭土:蛭石:珍珠岩=6:3:1的培养钵内,可有效解决葛麻姆种子透过性差难以萌发的问题,提高种苗成活率。(2)通过对葛麻姆的9个农艺性状(基茎直径、节间长、顶生小叶长、顶生小叶宽、顶生小叶叶形指数、侧生小叶长、侧生小叶宽、侧生小叶叶形指数、叶柄长)与5个叶片质量性状(总黄酮含量、粗蛋白质含量、中性洗涤纤维含量、酸性洗涤纤维含量、相对饲用价值)的结果进行显著性分析,发现经航天诱变处理后,葛麻姆各性状出现不同程度的差异,且这14个性状指标之间存在一定相关性。对其进行主成分分析,从中提取出4个主成分,即叶片大小性状因子、相对饲用价值性状因子、叶片形状性状因子和成分含量性状因子。基于意向培育葛麻姆优质饲料植株的目的,航天诱变后编号为SP2、SP3、SP6、SP10、SP11、SP15、SP52、SP71、SP72、SP91、SP96、SP103、SP114、SP118、SP124、SP128、SP131、SP135、SP142、SP175、SP193的植株叶片大小明显大于对照组;SP30、SP55、SP59、SP92、SP108、SP172、SP176、SP182、SP188、SP195号植株叶部总黄酮含量与对照组相比显著提高;SP13、SP19、SP27、SP29、SP43、SP65、SP106、SP107、SP119、SP134、SP170、SP197号植株叶部粗蛋白质含量显著高于对照组;SP14、SP20、SP39、SP42、SP51、SP56、SP63、SP69、SP103、SP117、SP120、SP123、SP132、SP140、SP144、SP153、SP157、SP172、SP177、SP180、SP189、SP194号相较于对照组来说,植株叶部的相对饲用价值显著增加。育种上可按照育种要求对各主成分因子进行单独选择,为后续的航天诱变育种筛选优质葛麻姆提供一条捷径。(3)首次通过流式细胞术测定葛麻姆基因组大小为(0.81±0.01)Gb,常规根尖压片实验确定其染色体倍性为二倍体。根据流式细胞术测定结果分析葛麻姆SP代群体与CK组之间基因组大小存在显著差异性,但染色体倍

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紫苏种质中化学成分的评价

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作者：郭佳琪江西中医药大学

学位级别：硕士

紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.是唇形科紫苏属一年生草本。《中国药典》(2015版)收载紫苏的三部位(叶、梗、子)作为药用。研究表明,紫苏中以挥发油、黄酮类和酚酸类成分等为其主要化学成分及活性成分。根据挥发油中相对含量高的主... 详细信息

紫苏Perilla frutescens(L.)Britt.是唇形科紫苏属一年生草本。《中国药典》(2015版)收载紫苏的三部位(叶、梗、子)作为药用。研究表明,紫苏中以挥发油、黄酮类和酚酸类成分等为其主要化学成分及活性成分。根据挥发油中相对含量高的主要化合物不同将紫苏挥发油分为不同的化学型,我国紫苏资源中主要以PK(紫苏酮)型为主,但早在1977年相关文献就有报道——紫苏酮是一种有潜在肺毒性的物质。正确的紫苏入药品种应为PA(紫苏醛)型(《中国药典》规定合格紫苏叶为PA型)。因此,寻找、研究和培育PA型紫苏种质具有重要的意义。紫苏中酚酸类成分主要以迷迭香酸和咖啡酸为主,《中国药典》规定紫苏梗和紫苏子的含量测定成分为迷迭香酸(分别不低于0.1%和0.25%)。紫苏中黄酮及其苷类则主要以野黄芩素、木犀草素、芹菜素为母核的单糖及二糖葡萄糖醛酸苷类成分为主,该类成分具有抗氧化、抗肿瘤等活性。本论文用水蒸气蒸馏法、顶空固相微萃取、二氧化碳超临界萃取法和有机溶剂提取法等四种方法提取不同化学型的冻干干燥后的紫苏叶中的挥发性成分,通过GC-MS检测其成分构成和相对含量。比较不同挥发油提取方法对不同种质紫苏叶的挥发性成分提取的影响。结果表明,四种挥发油提取方法比较,水蒸馏提取法提取可以最为全面掌握挥发性成分的构成。而对于不同化学型的紫苏叶,采用不同提取方法得到的挥发性成分提取率和化合物数量存在差异。应当针对不同需求,科学地选择紫苏挥发性成分的提取方法。若实验材料充足,并旨在全面了解挥发性成分中化合物的组成,应选择水蒸气蒸馏法;若实验材料量较少,则可以选择超临界萃取法或固相微萃取法,帮助快速提取挥发性成分并对其主要化合物组成进行分析。采用气味排除法,从种植地的800份紫苏种质中通过气味初步筛选出非PK型种质的鲜叶,阴干后用水蒸气蒸馏法提取紫苏叶挥发油,经GC-MS对其化学成分进行分离和鉴定。从初筛获得的62份非PK型紫苏种质中,鉴定出单一构成化学型的PA型种质38份,PL型种质2份。发现3种新的化学型亚型,分别为1份PA-Ⅱ型种质,以高含量的D-柠檬烯为特点;3份PT-Ⅱ型种质,具有高含量(-)-胡椒酮,不含胡椒烯酮;2份PS型种质,以倍半萜成分为主,分别是以石竹烯氧化物为主的PS-c型和以(Z,E)α-法尼烯为主的PS-f型。混合化学型中,PAPK型3份,另有6种新混合型,包括PAPT型1份、PAPP型1份、PKPP型1份、PAPS型2份和PPPS型1份。建立了采用UPLC同时对紫苏种质中8个黄酮及酚酸类成分进行定量的方法,其中紫苏中野黄芩素-7-O-二葡萄糖醛酸苷、木犀草素-7-O-二葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖醛酸苷3个成分含量测定为首次报道。分析了紫苏不同部位(叶、梗、子)的样品,其中叶样品共72份,分为三部分:第一部分为8份种质(包括PA、PK、PP-a和PP-m等4个化学型)5个采收期的样品,种植于北京药植所,共37份;第二部分为5个PA型种质在北京药植所、安徽太和、河南平舆和甘肃庆阳四个地点栽培的样品,共17份;第三部分为新收集并经过GC-MS评价获得的PA型种质样品,种植于北京药植所,共18份。紫苏梗和紫苏子样品各10份,对应于第三部分紫苏叶样品中的10份种质。通过黄酮及酚酸类成分测定结果分析,不同种质的紫苏叶中两类成分含量存在差异;不同种质的紫苏叶中两类成分都存在差异,可以优选出高含量的种质。不同种质的紫苏梗酚酸类含量有所差异,黄酮类的总含量差异不大,两种黄酮类成分LDG、LG在不同种质之间的差异不大。不同种质的紫苏子酚酸类含量差异小于紫苏叶,而黄酮类含量差异不大。生长发育对两类成分含量的影响主要表现为,大多数紫苏种质的酚酸类成分含量呈现穗前期较高,开花前期降至最低,然后果熟期表现为最高的特点;一部分种质黄酮类成分特点为黄酮含量最高为开花前期,且与酚酸类成分的代谢呈负相关,另外一些种质的黄酮含量基本不受发育的影响。研究发现环境变化对酚酸类成分含量影响较大,对不同种质的影响程度不同;环境对种质中黄酮类成分的影响分为两种情况,一类是环境因素对所有种质产生一样的影响,另一类是黄酮类成分含量不因环境的变化而变化。另外,建议将含量较高的迷迭香酸、野黄芩素-7-O-二葡萄糖醛酸苷、野黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷、木犀草素-7-O-二葡萄糖醛酸苷、木犀草素-7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素-7-O-二葡萄糖醛酸苷,六种成分的总含量作为紫苏叶的质量标准成分;用黄酮类成分代替迷迭香酸作为紫苏梗的质量标准成分。本研究对更加科学地选取紫苏挥发性成分的提取方法有一定指导意义,实验筛选和发现的新化学型为后续研究紫苏挥发油中主要成分的合成代谢和新品种培育提供了珍贵的材料。紫苏(叶、梗、子)样品中黄酮及酚酸类成分的定量及结果的分析,对紫苏栽培地的选择

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乳腺癌细胞中加入帕妥珠单抗对曲妥珠单抗介导的ADCC效应影响研究

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作者：田悦昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]验证不同亚型的人乳腺癌细胞中人表皮生长因子受体-2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER-2）、上皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR）蛋白的表达水平,研究HER-2、EGFR蛋白的表达量与曲妥珠单... 详细信息

[目的]验证不同亚型的人乳腺癌细胞中人表皮生长因子受体-2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2,HER-2）、上皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR）蛋白的表达水平,研究HER-2、EGFR蛋白的表达量与曲妥珠单抗介导的抗体依赖性的细胞介导的细胞毒作用（Antibody-dependent Cell-mediated Cytotoxicity,ADCC）之间的相关性;在此基础上,进一步研究自然杀伤（Natural Killer,NK）细胞比例增加对曲妥珠单抗所介导的ADCC产生的影响;探索加入曲妥珠单抗后达到ADCC峰值的反应时间;以及在加入曲妥珠单抗后间隔不同时间加入帕妥珠单抗,对其介导的ADCC效应影响差异,旨在探索乳腺癌临床治疗的更多辅助治疗手段,探讨增强临床双靶用药获益的更多可能。[方法]1.培育不同亚型的人乳腺癌细胞,提取总蛋白,利用Western Blot对不同样本中HER-2、EGFR蛋白的含量进行测定,根据HER-2蛋白的表达量选择过表达及低表达的细胞株。2.利用密度梯度离心法,从健康成年人全血中分离、提取外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells,PBMCs）。3.使用磁珠分离法,从PBMCs中提取、纯化NK细胞,以选择CD56+的NK细胞。培育人髓系白血病细胞K562,与分离纯化后的NK细胞共培养,使用流式细胞术,测定NK细胞杀伤力。4.将纯化后的NK细胞与各亚型的乳腺癌细胞株按不同比例共孵育,加入等量曲妥珠单抗,使用流式细胞术,测定不同NK细胞与靶细胞比例下的ADCC差异。5.在一定范围内,改变曲妥珠单抗的加药浓度,使用流式细胞术测定对HER2阳性乳腺癌细胞株的ADCC效应影响;测定加入曲妥珠单抗后,不同反应时间的ADCC效应差异,探索达到ADCC峰值的反应时间。6.在HER-2阳性乳腺癌细胞株中加入曲妥珠单抗后,间隔不同时间加入帕妥珠单抗,使用流式细胞术检测其对曲妥珠单抗介导的ADCC效应的影响差异,以及对达到ADCC峰值时间的影响。[结果]*** Blot 结果显示,HER-2、EGFR 蛋白在 SK-BR-3、BT-474 细胞株中均为高表达,MDA-MB-231、MCF-7细胞株中无表达或低表达、K562细胞株中无表达。2.分离纯化后的NK细胞与分离前的PBMCs对比,细胞纯度增加,CD56+的NK细胞占比明显增多。3.不同健康成年人的NK细胞杀伤能力不一,存在个体间差异。4.当NK细胞与靶细胞比例增高时,在各亚型乳腺癌细胞株中,ADCC效应均随之增加,但加入曲妥珠单抗后HER-2阳性乳腺癌细胞株中的ADCC效应增强,较HER-2阴性乳腺癌细胞株显著。在MDA-MB-231细胞株中,ADCC效应或受到抑制。5.在一定范围内,改变曲妥珠单抗的浓度对ADCC的影响差异较小。6.添加曲妥珠单抗,作用4-24h,在24h时达到ADCC峰值。7.当曲妥珠单抗与帕妥珠单抗的浓度为1:1时,杀伤比例较1:2稳定。8.加入曲妥珠单抗后,间隔1h内加入帕妥珠单抗,在共同作用12h时,杀伤比例显著增高,作用20h时达到杀伤比例峰值。9.在加入曲妥珠单抗后24h测定结果,间隔0h、4h、8h、12h、16h、20h加入帕妥珠单抗,间隔8h、作用16h时达到杀伤比例峰值,较单独加入曲妥珠单抗的实验组提前8h,其杀伤比例峰值与间隔1h内加入帕妥珠单抗组的杀伤比例峰值接近。[结论]在HER2阳性或阴性的人乳腺癌细胞中,加入不同比例经IL-2刺激的CD56+NK细胞,杀伤比例随加入的NK细胞比例增加而增强;当效应细胞与靶细胞比例为9:1时,加入曲妥珠单抗,在HER-2阳性的人乳腺癌细胞株中得到的杀伤比例显著高于阴性;以增加NK细胞数量、刺激NK细胞增殖以及改善NK细胞功能为目的的免疫治疗,或能成为HER-2阳性乳腺癌临床治疗的辅助治疗手段。而随着药物浓度的增加,ADCC效应具有饱和性。由于客观原因的限制,许多患者在临床治疗过程中,往往由于各种因素未能直接进行双靶治疗,有部分患者仅接受了曲妥珠单抗的单靶治疗,有部分患者在接受单靶治疗一段时间后才进行了双靶治疗,这些患者的临床获益是我们想要探索研究的。通过我们的实验发现,对比单独使用曲妥珠单抗的实验组,使用双靶药物的实验组得到的杀伤比例更为稳定、且达到杀伤比例的峰值提前,且实验组间的杀伤比例峰值接近。使用双靶药物的效果要优于仅使用曲妥珠单抗,这一点与临床结论是一致的,而间隔一段时间后加入帕妥珠单抗,与间隔1h内加入帕妥珠单抗相比,其ADCC峰值没有太大差异,或可证明在进行单靶治疗后再接受双靶治疗的患者,其ADCC的获益并

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RNA结合蛋白RALY在三阴性乳腺癌中的表达及其功能研究

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作者：赵胜迪昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是乳腺癌中一种特殊的亚型,因其具有转移性高、侵袭性高、复发性高、死亡率高和预后差等特点已成为近年来乳腺癌研究和关注的焦点,而新近研究表明,RNA结合蛋白（RNA Binding ... 详细信息

[目的]三阴性乳腺癌（triple negative breast cancer,TNBC）是乳腺癌中一种特殊的亚型,因其具有转移性高、侵袭性高、复发性高、死亡率高和预后差等特点已成为近年来乳腺癌研究和关注的焦点,而新近研究表明,RNA结合蛋白（RNA Binding Proteins,RBPs）RALY与多种癌症的发生、发展、转移及预后相关。因此,本研究以乳腺癌组织样本及人乳腺癌细胞系为研究对象,通过组织芯片检测RALY在癌组织和癌旁组织中的表达水平,并分析RALY在乳腺癌中的表达和临床预后的关系。检测RALY mRNA和蛋白在非致瘤性乳腺上皮细胞株（MCF-10A）、三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231、BT549）、人表皮生长因子受体阳性细胞系（SK-BR-3）及激素受体阳性乳腺癌细胞系（MCF-7）中表达。研究表明,乳腺癌癌组织中RALY的表达高于癌旁组织,更是在乳腺癌细胞系中广泛表达,尤其是在三阴性乳腺癌细胞系,因此我们以三阴性乳腺癌为主要研究对象,进而研究RALY在三阴性乳腺癌中的表达情况以及RALY对人三阴性乳腺癌细胞系的迁移、侵袭、增殖及凋亡的影响。[方法]1.行免疫组化（Immunohistochemistry,IHC）法检测乳腺癌组织芯片RALY的表达情况,分析RALY在乳腺癌的癌组织及癌旁组织中表达情况,以及RALY与三阴性乳腺癌的相关性,进一步分析RALY的表达与患者的年龄、TNM分期、Ki-67表达等临床参数的统计学差异。2.培养非致瘤性乳腺上皮细胞系（MCF-10A）、三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231、BT549）、人表皮生长因子受体阳性细胞系（SK-BR-3）及激素受体阳性乳腺癌细胞系（MCF-7）,通过Western blot检测不同人乳腺细胞系中RALY蛋白表达水平,通过qRT-PCR检测不同人乳腺细胞系中RALY mRNA的表达情况,进而分析RALY与三阴性乳腺癌细胞系的相关性。3.使用RALY siRNA瞬时转染三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231）,构建敲低RALY基因的三阴性乳腺癌细胞系。并通过Western blot、qRT-PCR验证转染效率。4.敲低RALY后的三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231）行划痕实验检测癌细胞的迁移能力,利用transwell实验检测细胞的侵袭能力。5.敲低RALY后的三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231）行CCK-8法检测癌细胞的增殖能力,利用细胞流式细胞仪检测细胞凋亡能力。[结果]***在乳腺癌组织及癌旁组织中均有表达,且RALY在癌组织中表达水平明显高于癌旁组织。（P＜0.05,差异具有统计学意义）***在三阴性乳腺癌组织中的表达高于非三阴性乳腺癌组织,但RALY与年龄、TNM分期、Ki-67水平无相关性。3.三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、BT549）的RALY在蛋白水平及mRNA水平均高于非致瘤性乳腺上皮细胞株（MCF-10A）、激素受体阳性乳腺癌细胞株（MCF-7）及人表皮生长因子受体阳性细胞（SK-BR-3）,而MDA-MB-231中RALY的表达与SK-BR-3接近。（P＜0.05,差异具有统计学意义）4.敲低三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231）RALY后,在蛋白水平和mRNA水平均低于空白对照组。（P＜0.05,差异具有统计学意义）5.敲低三阴性乳腺癌细胞系（HCC1806、HCC1937、MDA-MB-231）RALY后,抑制细胞的迁移及侵袭能力。（P＜0.05,差异具有统计学意义）6.三阴性乳腺癌细胞系敲低RALY后,结果提示RALY抑制细胞凋亡。（P＜0.05,差异具有统计学意义）7.三阴性乳腺癌细胞系敲低RALY后,结果提示RALY对细胞增殖能力无明显影响。（P＞0.05,不具有显著的统计学差异）[结论]***在乳腺癌组织中的表达高于癌旁组织,提示RALY与乳腺癌的发生发展密不可分,具有促癌作用。***在三阴性乳腺癌组织中的表达水平高于非三阴性乳腺癌组织,提示RALY与乳腺癌的恶性程度相关,促进三阴性乳腺癌的发生发展。3.三阴性乳腺癌细胞系中,RALY的蛋白水平及mRNA水平均高于非三阴性乳腺癌细胞系,提示RALY可能促进三阴性乳腺癌的发生及发展。4.敲低后的三阴性乳腺癌细胞系,其迁移及侵袭能力均降低,提示RALY具有促进乳腺癌细胞的迁移和侵袭作用。5.三阴性乳腺癌敲低RALY后,其凋亡能力增强,提示RALY可以抑制三阴性乳腺癌细胞的凋亡,或与乳腺癌的发生有关

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葛、粉葛和葛麻姆3个变种的生药学特征研究

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作者：谢璐欣江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:为理清葛根、粉葛和葛花的药材基原,本课题从资源分布、形态、物候等多方面对葛、粉葛和葛麻姆3个变种进行综合分析,同时在种质评价的基础上,对3变种根部和花部药用成分进行分析,为葛的资源开发和保护提供参考。方法:1.通过查阅全... 详细信息

目的:为理清葛根、粉葛和葛花的药材基原,本课题从资源分布、形态、物候等多方面对葛、粉葛和葛麻姆3个变种进行综合分析,同时在种质评价的基础上,对3变种根部和花部药用成分进行分析,为葛的资源开发和保护提供参考。方法:1.通过查阅全国关于葛3个变种的标本,结合11个省市的实地考察,对葛3变种在中国的分布概况进行梳理,并调查和采集葛的种质资源,对野生的葛种质多样性进行初步评估。2.2020年2月～2021年1月对栽种在江西中医药大学葛种质资源圃的11份葛种质进行物候统计,并进行茎、叶、花、果实等形态性状的观测,对比分析葛3变种的物候和形态差异。3.采用UPLC-Q-TOF-MS技术对来自多个省市的25份葛种质根部化学成分进行分析鉴定,并建立OPLS-DA模型对检测得到的MS数据进行差异分析,通过VIP值筛选得到葛3变种根部主要差异化合物。同时,建立HPLC含量检测方法,对根部10种异黄酮成分进行含量检测,评价不同种质的根部药材质量。4.采用UPLC-Q-TOF-MS技术对来自葛3个变种的28份种质花部化学成分进行检测分析鉴定,并建立OPLS-DA模型对检测得到的MS数据进行差异分析,通过VIP值筛选得到葛3变种花部主要差异化合物。同时,采用HPLC法对花部8种异黄酮成分进行含量检测,评价不同变种的花部药材质量差异。结果:1.葛的3个变种具有明显的南北分布差异,野葛主要以北方山林多见,粉葛和葛麻姆有广阔的共同分布区,主要以长江以南为主。同时,葛的3变种在西南地区形成共同的混合分布。实际调查发现,野生状态下的葛3变种在根、叶、花等形态性状上呈现丰富的种质差异。2.不同变种的物候期存在一定差异,野葛萌芽始于2月中旬,6月下旬开始开花;粉葛3月初发芽,9月初进入开花期;葛麻姆在种质内出现不同类型的变化,其中JXLB*（江西于都）具有发芽早,落叶晚的现象,而其他种质与粉葛种质物候近似。在性状观测上,花序轴长、花冠大小及果实形态在3变种间有明显差异,可作为区分3变种在不同时期的鉴别依据。3.从野葛、粉葛和葛麻姆的根部共鉴定得到84个化合物,其中异黄酮类46个,黄酮类7个,三萜皂苷类17个,葛酚苷类8个,香豆素类2个,倍半萜类4个。野葛、粉葛和葛麻姆分别鉴定得到84个、81个和70个。通过正负离子模式下筛选得到puerarin（葛根素）、puerarin-6?-O-xyloside（葛根素-6?-O-木糖苷）、3?-methoxy puerarin（3?-甲氧基葛根素）、3?-hydroxy puerarin（3?-羟基葛根素）、daidzin（大豆苷）、6?-O-malonyl genistin（6?-O-丙二酰基染料木苷）、6?-O-malonyl daidzin（6?-O-丙二酰基大豆苷）、genistein（染料木素）、daidzein-4?,7-di-glucoside（大豆苷元-4?,7-二葡萄糖苷）、puerarin-7-O-glucoside（葛根素-7-O-葡萄糖苷）、5,6,7-trihydroxy-4?-methoxy isoflavone-6,7-di-O-β-D-glucopyranoside、kudzusaponin A5、genistein-8-C-apiofuranosyl（1→6）glucoside、sophoraside A、glycitin（黄豆黄苷）、genistin（染料木苷）、daidzein-4?-β-D-glucopyranoside（大豆苷元-4?-β-D-吡喃葡萄糖苷）、3?-hydroxy puerarin-4?-O-deoxyhexoside（3?-羟基葛根素-4?-O-脱氧己糖苷）、apigenin 7-glucoside（芹菜素-7-O-葡萄糖苷）、daidzein（大豆苷元）、soyasaponin I（大豆皂苷I）、Isoorientin（异荭草素）、Sissotrin（印度黄檀苷）、Ononin（芒柄花苷）等24个差异化合物,其中大部分为异黄酮类成分。4.从3个不同变种来源的葛花中共鉴定出35个化合物,其中异黄酮类成分22种,黄酮类成分6种,皂苷类成分7种;野葛花、粉葛花及葛麻姆花分别包含32,35,33个。正、负离子模式下筛选得到葛花苷,鸢尾苷,6"-O-木糖鸢尾苷,黄豆黄苷,4’-甲氧基鸢尾黄素-7-葡萄糖苷,6"-O-木糖黄豆黄苷,葛花苷元,槐花皂苷Ⅲ,6"-O-丙二酰基黄豆苷,次葛花苷,鸢尾苷元,芦丁,大豆皂苷BB,牡荆素,鹰嘴豆芽素A,染料木苷,葛花亭,赤豆皂苷Ⅱ共18个差异化合物。结论:葛的3个变种在中国分布区域极广,不同变种在地域分布上呈南北差异,并在中国西南山区有同域分布。葛的不同变种野生种质形态多样性丰富,生长习性不同,有一定的物候差异,在种质驯化及品种栽培过程应当

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CTRP1在三阴性乳腺癌中的作用及其机制研究

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作者：张文珠昆明医科大学

学位级别：硕士

【目的】研究脂肪因子CTRP1在三阴性乳腺癌中的表达、作用及其机制。从临床、细胞、动物水平探讨CTRP1对三阴性乳腺癌发生发展的作用,明确CTRP1调节CCL2及其下游通路的机制。【方法】(1)共收集了94例临床乳腺癌组织,通过免疫组化研究CT... 详细信息

【目的】研究脂肪因子CTRP1在三阴性乳腺癌中的表达、作用及其机制。从临床、细胞、动物水平探讨CTRP1对三阴性乳腺癌发生发展的作用,明确CTRP1调节CCL2及其下游通路的机制。【方法】(1)共收集了94例临床乳腺癌组织,通过免疫组化研究CTRP1的表达与乳腺癌恶性程度、分子分型、Ki-67、TNM分期、WHO分级等临床病理指标是否有相关性。(2)培养了7株正常乳腺和乳腺癌细胞系,其中三阴性乳腺癌细胞4株,提取蛋白及RNA,通过Western Blotting和q RT-PCR分别检测CTRP1蛋白和m RNA表达量。(3)在三阴性乳腺癌细胞系中通过si RNA转染敲低CTRP1,并通过Western Blotting和q RT-PCR检测其敲低效率。(4)在三阴性乳腺癌细胞中敲低CTRP1或在培养基中添加高低浓度CTRP1重组人蛋白后进行相关功能实验:CCK8及Ed U检测增殖、划痕愈合实验检测迁移、Transwell检测侵袭、流式检测细胞存活及周期、检测糖酵解。(5)通过q RT-PCR及Elisa检测敲低CTRP1后对CCL2表达的影响,确定CTRP1对CCL2表达的调节。(6)Rescue实验:在敲低CTRP1的细胞中添加CCL2蛋白,功能实验检测CCL2对敲低CTRP1后的挽救作用。进一步的确定CTRP1通过调节CCL2的表达影响三阴性乳腺癌细胞功能。(7)探索CTRP1调控CCL2的下游通路,q RT-PCR及Western Blotting检测上皮间质转化(EMT)相关因子表达的变化,以及激活p44/42 MAPK、Smad3通路。(8)构建慢病毒稳转敲低CTRP1的三阴性乳腺癌细胞株。构建裸鼠成瘤及转移模型,活体成像检测肿瘤生长及转移,待肿瘤长到一定体积,根据动物伦理要求,处死小鼠,取癌组织及转移组织切片染色观察病变。【结果】(1)临床病理组织免疫组化结果显示,CTRP1在三阴性乳腺癌组织中高表达。且与肿瘤的良恶性程度、WHO组织学分级密切相关,随着肿瘤恶性程度加深,表达升高。(2)与非致瘤性乳腺上皮细胞系(MCF-10A)、ER+乳腺癌细胞系(MCF-7)、HER2+乳腺癌细胞系(SK-BR-3)相较,三阴性乳腺癌细胞系(BT-549、HCC1937、HCC1806、MDA-MB-231)中CTRP1蛋白及m RNA均高表达。(3)在三阴性乳腺癌细胞(BT549、HCC1806)中敲低CTRP1抑制细胞增殖、侵袭、迁移、存活、糖酵解,阻滞细胞周期。添加高浓度CTRP1重组人蛋白(100ng/ml)促进细胞侵袭、迁移及糖酵解。(4)CTRP1通过调节CCL2的表达影响三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为。在三阴性乳腺癌细胞(BT549、HCC1806)中敲低CTRP1可抑制CCL2的分泌及其m RNA的表达。敲低CTRP1的细胞培养基中添加CCL2重组人蛋白,可逆转敲低CTRP1对癌细胞生物学行为的抑制。(5)CTRP1通过调节CCL2的表达促进三阴性乳腺癌细胞EMT。敲低CTRP1后E-cadherin表达升高;N-cadherin、Vimentin、Snail及Twist1表达降低;添加CCL2后可逆转上述变化。(6)CTRP1激活CCL2-MAPK/Smad3通路。敲低CTRP1显著抑制了p44/42MAPK磷酸化(Thr-202/Tyr-204)及Smad3磷酸化(Ser423/425),添加CCL2重组人蛋白可逆转CTRP1敲低后的蛋白磷酸化抑制。(7)在裸鼠体内,敲低CTRP1抑制BT549移植瘤的生长及肺、肝、骨转移。【结论】CTRP1在三阴性乳腺癌细胞及三阴性乳腺癌组织中高表达,且与临床病理指标具有相关性。CTRP1通过激活CCL2-MAPK/Smad3通路促进三阴性乳腺癌细胞的恶性生物学行为,并且CTRP1可促进裸鼠移植瘤的生长及转移。

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淫羊藿种质资源黄酮含量快速评价的方法学研究

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作者：温春梅江西中医药大学

学位级别：硕士

淫羊藿始载于《神农本草经》,传统上具有补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨的功效。现代研究表明,淫羊藿具有治疗高血压、冠心病、骨质疏松、更年期综合征、阳痿、半身不遂、四肢麻木等多方面药理作用。在2015版《中国药典》中对淫羊藿属植... 详细信息

淫羊藿始载于《神农本草经》,传统上具有补肾壮阳、祛风除湿、强筋健骨的功效。现代研究表明,淫羊藿具有治疗高血压、冠心病、骨质疏松、更年期综合征、阳痿、半身不遂、四肢麻木等多方面药理作用。在2015版《中国药典》中对淫羊藿属植物入药使用规定了5个物种来源—淫羊藿Epimedium brevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿***(*** Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿*** Maxim.、朝鲜淫羊藿*** Nakai和巫山淫羊藿*** Ying。淫羊藿化学成分丰富,以黄酮类成分为主,且黄酮类中具有异戊烯基结构黄酮醇苷是淫羊藿的主要活性成分。在2015版《中国药典》之前,朝藿定C与淫羊藿苷被规定为淫羊藿质控指标,在2020版《中国药典》公示中提出以朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷成分总含量作为淫羊藿的质量控制标准。目的:目前,淫羊藿黄酮含量测定的方法很多,中国药典中规定由UV法对淫羊藿总黄酮含量进行测定,用HPLC法对几种单体化合物进行含量测定,HPLC和UV法在含量测定中应用成熟且测定准确,但对大量样本含量的快速测定面临困难。因此本课题基于HPLC(UPLC)和UV两种成熟方法,通过便携式紫外可见荧光仪(MX)或傅里叶红外光谱仪(FTIR)建立一种对淫羊藿黄酮含量快速评价的方法,用于淫羊藿的种质资源遴选和品种选育时大量样本的测定,以期为淫羊藿的药用生产应用提供技术方法。方法:本研究选用箭叶淫羊藿的湖南种源(HNJY)和贵州种源(GZJY)、拟巫山淫羊藿(NWS)和柔毛淫羊藿(RM)作为实验对象,首先采用UPLC Q-TOF MS技术对其主要成分进行定性分析,确定出研究对象的主要成分,用于后续定量分析的成分选择。MX测定法:采用MX的类黄酮指数(FLAV)对63个HNJY淫羊藿新鲜叶片进行类黄酮含量测定,以正背面FLAV值之和作为叶片总黄酮含量,分别与UV测定总黄酮含量及HPLC测定各成分含量总和进行线性回归分析。FTIR测定法:采用FTIR法对淫羊藿叶片粉末(HNJY71个,GZJY40个,NWS19个)进行扫描,由UPLC方法对淫羊藿成分含量进行测定,结合PLS化学计量法进行定量模型构建,选择HNJY 60个校正集样本,11个验证集样本,对朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷4个成分含量之和(ABCI%)的定量模型及加鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿次苷Ⅱ的6个成分之和(TF%)的定量模型;以及选择HNJY、GZJY和NWS共90个校正集,20个验证集样本,研究ABCI%定量模型,筛选最佳拟合模型并计算预测准确率。结果:由UPLC Q-TOF MS对HNJY、GZJY、RM及NWS淫羊藿样本的定性分析,共鉴定成分31个,其中黄酮类成分29个(其中带异戊烯基结构黄酮24个),1个生物碱及1个有机酸类成分。且各物种的主要成分均为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ和淫羊藿次苷Ⅱ,其中GZJY淫羊藿增加朝藿定A,NWS减少淫羊藿次苷Ⅱ。MX对淫羊藿黄酮含量快速测定的实验结果中MX与HPLC,MX与UV测定相关性均在30%以下,预测准确性低;FTIR法构建的3个定量模型中,HNJY样本的ABCI%百分含量定量模型得出校正模型R=0.9974,SEE=0.116,SEP=0.135,线性方程为Y=0.9973X+0.0231,校正集和验证集样本的平均预测准确率分别为98.985%和96.087%;HNJY TF%定量模型,得出校正模型R=0.9971,SEE=0.119,SEP=0.137,线性方程为Y=0.997X+0.0245,校正集和验证集样本的平均预测准确率分别为98.998%和94.771%;HNJY、GZJY和NWS样本的ABCI%定量模型,得出校正模型R=0.9968,SEE=0.166,SEP=0.173,线性方程为Y=0.997X+0.0223,校正集和验证集样本的平均预测准确率分别为97.471%和92.36%。结论:本研究对MX和HPLC、MX和UV测定黄酮含量构建相关性并未取得预想结果,分析可能的原因为:1.淫羊藿叶片次生成分组成复杂,含有大量在365 nm下有吸收的其他成分;2.淫羊藿苷类黄酮可能也存在于叶肉中,而不符合MX方法适合于表皮成分的测定;***测定的鲜叶和HPLC等方法测定的干叶成分构成上存在差异。FTIR法结合UPLC法对淫羊藿种质资源黄酮含量进行快速无损方法学探究取得很好的结果,共构建的三个定量模型校正集样本的预测值和实际值的平均预测准确率均大于97%;验证集基于同一个物种建立模型的预测值和实际值的平均预测准确率均大于94%,基于不同物种的模型大于92%,其中对于GZJY验证集样本,准

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干旱胁迫对粉葛形态、抗氧化活性的影响及转录组分析

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作者：杨碧穗江西中医药大学

学位级别：硕士

粉葛(Pueraria montana ***(Bentham)***)是豆科葛属的多年生藤本植物,具有耐旱、耐寒的特性,但目前对粉葛抗旱性的研究较少,抗旱机制并不清楚。因此,本试验以1年生粉葛幼苗为试验材料,采用盆栽种植模拟干旱胁迫和复水试验,观察、测定... 详细信息

粉葛(Pueraria montana ***(Bentham)***)是豆科葛属的多年生藤本植物,具有耐旱、耐寒的特性,但目前对粉葛抗旱性的研究较少,抗旱机制并不清楚。因此,本试验以1年生粉葛幼苗为试验材料,采用盆栽种植模拟干旱胁迫和复水试验,观察、测定叶片形态结构(叶片气孔、解剖结构)、生理生化指标的变化,对干旱胁迫及复水过程中粉葛根进行转录组测序分析。主要研究结果如下:(1)随着干旱胁迫程度的加重,粉葛叶片相对含水量逐渐降低,生物量在干旱前期增加,后逐渐降低;叶片出现卷曲、干枯,甚至脱落等现象,并且茎藤枯萎。复水后叶片反绿,生长旺盛,植物形态与对照组无明显差异。(2)正常环境下,粉葛叶片气孔大部分处在开放状态。随着干旱胁迫程度加重,粉葛叶片下表皮气孔密度、开放率均出现先升高后降低的变化趋势,气孔长度、宽度逐渐减小,恢复浇水后,气孔密度、开放率、长度、宽度等逐渐恢复至正常状态,表明粉葛在干旱胁迫时可通过调节气孔数量、大小、开合度来抵抗干旱胁迫造成的缺水环境,复水后可迅速反应,恢复正常。(3)叶片解剖结构对植物响应环境变化有重要意义。随着干旱胁迫程度加重,粉葛叶片叶肉细胞逐渐变小、紧密排列,栅栏组织杂乱疏松排列;上、下表皮厚度、栅栏组织厚度、海绵组织厚度随胁迫加重逐渐下降,在干旱18天时下降至最低,复水后均迅速上升,恢复正常;栅栏组织与海绵组织厚度比在干旱胁迫及复水条件下与对照组无显著差异变化。(4)在干旱胁迫及复水过程中,粉葛叶片和根的抗氧化酶活性有显著变化,MDA含量变化幅度较小。根中的POD活性、SOD活性、CAT活性均高于叶片中的酶活性,说明粉葛根对水分缺水更敏感。随着干旱胁迫程度加重,根中POD活性、SOD活性持续上升,CAT活性逐渐降低,MDA含量呈现先升高后下降的变化趋势;叶片中POD活性逐渐升高,SOD、CAT活性逐渐降低,MDA含量呈现先降低后上升再降低的变化趋势。复水后,根中的POD、SOD活性持续上升,CAT活性先降低后上升,但未恢复至对照组水平,MDA含量先上升后下降,逐渐恢复至正常状态;叶片中的POD活性持续升高,SOD活性、CAT活性和MDA含量逐渐恢复至对照组水平。(5)对粉葛根的转录组测序分析,共获得195.79 Gb clean data,各样品clean data均达到6.01Gb以上;对原始数据进行质控处理后,共得到1310143772条raw reads,测序错误率在0.027%以下。对得到的raw reads进行组装优化后共得到62981条unigene,平均长度为1246.25 bp,122718条transcript,平均长度为1478.06 bp。将获得的unigene与六大数据库(NR、Swiss-prot,pfam,COG,GO和KEGG数据库)进行比对,共有36255条unigene被注释,占总unigene数的57.56%,在GO数据库中unigene主要被注释到结合、催化活性、细胞过程等term中,在KEGG数据库中unigene主要被注释到碳水化合物代谢、翻译、折叠分类和降解等pathway通路中。(6)通过对差异表达基因(Differential Expression Genes,DEGs)的筛选、分析,探讨与干旱胁迫相关的代谢通路和基因。正常发育的对照组之间和干旱胁迫处理组之间的差异表达基因分析表明干旱胁迫对植物的生长发育影响较大,复水后植株能够迅速反应,恢复至正常对照。对照组与连续干旱12天、18天、复水后6天、12天的差异基因数目分别为3363(1090个上调,2273个下调)、5986(2120个上调、3866个下调)、4690(2486个上调、2204个下调)、5281(1925个上调、3356个下调)个DEGs。在干旱18天的差异表达基因数目最多,说明在此时胁迫对植物的影响最显著,有9条KEGG代谢通路被显著富集,主要包括苯丙烷生物合成、淀粉和蔗糖代谢、类黄酮生物合成、植物激素信号转导、MAPK信号通路-植物、α-亚麻酸代谢、氰基氨基酸代谢和亚油酸代谢途径,且DEGs多为基因上调表达。复水12天,共有19条KEGG pathway代谢通路被显著富集,主要包括淀粉和蔗糖代谢、植物激素信号转导、苯丙烷生物合成等途径。说明粉葛在干旱胁迫及复水后采取不同的响应机制应对逆境,形成一个复杂的网络调控,并在复水后能够迅速恢复。发现2个CAT相关基因、2个SOD基因、2个GPX基因,6个POD基因在干旱及复水过程均显著差异表达。共鉴定出426个转录因子与干旱胁迫相关,所属28个转录家族,主要与AP2/ERF、MYB、b HLH等转录家族相关。综上所述,粉葛通过对叶片形态变化、抗氧化活性的改变和转录组测序结果来说明了粉葛在干旱胁迫和复

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赣产栽培粉葛的生物学特性研究

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作者：黄秋连江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:江西是粉葛种植大省之一,目前有“赣葛一号”、“赣葛二号”、“小花叶葛”、“大花叶葛”等多个粉葛品种,其中“赣葛一号”推广最广,在湖北、陕西、河南、广东等地均有种植。本研究以赣产粉葛为材料,对其农艺性状与药用部位成分... 详细信息

目的:江西是粉葛种植大省之一,目前有“赣葛一号”、“赣葛二号”、“小花叶葛”、“大花叶葛”等多个粉葛品种,其中“赣葛一号”推广最广,在湖北、陕西、河南、广东等地均有种植。本研究以赣产粉葛为材料,对其农艺性状与药用部位成分的相关性,药用部位周皮、非周皮组织的异黄酮和重金属分布规律及其对重金属的富集能力进行研究,同时对同质园栽培不同品种赣产粉葛的形态学以及不同器官异黄酮积累规律进行研究,为赣产粉葛的栽培、加工、品种区分及推广奠定基础和提供参考依据。方法与结果:(1)以同质园栽培的22株“赣葛一号”单株样品为材料,运用农艺性状测量法测量14个农艺性状、UV测定不同部位总异黄酮含量以及HPLC测定药用部位异黄酮含量,并进行描述性统计分析、相关性分析、多元线性回归分析和通径分析。结果表明,药用部位异黄酮成分变异系数(超过30%)较大;藤直径、芦头直径和茎叶鲜重与根鲜重相关;顶生小叶宽、根鲜重和茎叶鲜重与根总黄酮含量相关;芦头直径与葛根素含量存在相关性。(2)通过HPLC测定赣产粉葛药用部位周皮和非周皮组织异黄酮含量,ICPMS测定周皮、非周皮和根际土的重金属含量。结果表明,周皮组织异黄酮和重金属均高于非周皮组织;粉葛存在Cd、Cr和Pb三个元素超标问题,去除周皮组织后Cr元素超标情况有所改善,而Cd和Pb元素超标改善不明显;粉葛对土壤中Cd的富集能力强,对Pb的有一定富集能力,而对As、Hg、Cu和Cr富集能力较差。(3)运用直接观测和表皮撕片法对同质园栽培的“赣葛一号”、“赣葛二号”、“小花叶葛”、“大花叶葛”四个品种茎、叶的形态学和叶表皮微形态进行研究,并进行聚类分析。结果表明,“赣葛一号”、“赣葛二号”和两个花叶品种(大花叶葛、小花叶葛)可以通过叶面花斑、叶片大小、侧生小叶裂数和下表皮非腺毛长、下表皮气孔密度等进行互相区分。(4)通过UV和HPLC对同质园栽培的“赣葛一号”、“赣葛二号”、“小花叶葛”、“大花叶葛”四个品种粉葛的根、芦头、藤和叶在不同生长期的异黄酮成分含量进行测定,并进行PCA和OPLS-DA分析。结果表明:(1)不同器官总异黄酮含量顺序为:芦头>根>藤>叶,且根、芦头和藤的总异黄酮积累规律为先上升后下降、再上升、再有波动的下降,而叶总异黄酮随着生长期的增加而增加;(2)根、芦头和藤中7种异黄酮积累规律基本一致,随着生长期的增加,先上升后下降,再上升再略有下降的趋势;根中异黄酮成分均在7月中旬达到第一个峰值,“赣葛一号”和“赣葛二号”在11月中旬达到第二个峰值,“小花叶葛”和“大花叶葛”在10月中旬达到第二个峰值;芦头中异黄酮在10月中旬达到峰值;藤中异黄酮“赣葛一号”和“小花叶葛”在10月中旬达到峰值,而“赣葛二号”在9月中旬达到峰值,“大花叶葛”在7月中旬达到峰值;(3)PCA和OPLSDA分析结果表明赣葛(赣葛一号、赣葛二号)和花叶葛(小花叶葛、大花叶葛)根和芦头中总异黄酮含量和葛根素含量存在显著差异。结论:本研究发现,“赣葛一号”芦头性状与药用部位生物量和异黄酮成分具有相关性;赣产粉葛对土壤中Cd元素富集作用较强,存在Cd、Cr和Pb超标问题,去除周皮可以改善Cr超标问题。并初步对赣产粉葛品种进行了区分,以及阐明了不同器官中异黄酮成分的积累规律。

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