检索结果-南通市图书馆

作者：曾昭奇哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

管道运输是油气运输中最主要、最快捷、经济、可靠的方式,可用于输送水、原油、天然气、成品油等,具有输量大、距离长、安全性高、成本低等优点,在各国发展迅速。管道运输业的主体是管道,管道工程的核心工作是管口的焊接。因此研究高效... 详细信息

管道运输是油气运输中最主要、最快捷、经济、可靠的方式,可用于输送水、原油、天然气、成品油等,具有输量大、距离长、安全性高、成本低等优点,在各国发展迅速。管道运输业的主体是管道,管道工程的核心工作是管口的焊接。因此研究高效率、性能可靠的管道全位置自动焊接机具有十分重要的意义。首先,研制了一种导轨式管道全位置自动焊接机,其关键技术包括:研制新型的行走机构、焊枪摆动机构、横向调整机构、高度与倾角调整机构和轨道,着重对其结构特点、动作原理、设计要点进行了分析。利用SolidWorks三维设计软件建立其有限元模型,并利用Cosmosworks有限元分析软件进行机械结构有限元分析,得到焊接机各个零部件的应力分布情况对整机结构强度和刚度的影响。其次,对焊接机进行模态分析,得到焊接机的各阶固有频率和固有振型,从而分析焊接机在焊接过程中的振动特性;并对自动焊接机进行运动仿真,得到各个模块的运动参数,包括速度、加速度等,校验自动焊接机能否满足技术要求。最后,根据管道全位置自动焊接机实际工作环境所得到的有限元分析结果,对自动焊接机进行结构优化,以达到体积小、重量轻、加工成本低、运动精度高、操作简便并且满足各项性能指标。现场实验表明,该自动焊接机能沿导轨平稳、可靠的行走,并进行管道的全位置焊接,整机采用模块化设计,便于安装、调试和维修,操作简便,成本低,适合我国现场施工作业及工人的技术水平,既保证了焊接质量,又提高了劳动效率。

关键词：管道全位置自动焊接机有限元分析模态分析结构优化

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阳离子嫁接物胶团基因给药系统研究

阳离子嫁接物胶团基因给药系统研究

作者：赵梦丹浙江大学

学位级别：硕士

随着人类基因组计划的完成,为基因治疗奠定了坚实的基础,基因治疗已成为世界最活跃的研究领域之一。当前,基因治疗的首要问题是如何选择合适的基因导入系统,因为目的基因为高度亲水性的大分子物质,带有负电性,其自身难以穿透细胞膜,进... 详细信息

随着人类基因组计划的完成,为基因治疗奠定了坚实的基础,基因治疗已成为世界最活跃的研究领域之一。当前,基因治疗的首要问题是如何选择合适的基因导入系统,因为目的基因为高度亲水性的大分子物质,带有负电性,其自身难以穿透细胞膜,进入细胞后也容易被核酸酶降解,生物半衰期短。构建安全有效的细胞内基因递送系统,解决基因高效靶向及实现表达调控是药剂工作者的任务之一。目前的基因导入系统研究,可分为病毒载体(viral vector)系统和非病毒载体(non-viral vector)系统两类。病毒载体充分利用病毒高度进化所具有的感染和寄生特性而被广泛有效地应用,但病毒载体存在诸多不足,如免疫原性高、毒性大、目的基因容量小、制备较复杂及费用较高等。以阳离子脂质体、阳离子聚合物为代表的非病毒载体,由于其安全性能高、易于大规模制备等优点,在基因治疗应用中备受瞩目。由两亲接枝共聚物分子在水性介质中自聚集形成的聚合物胶团(polymer micelles,PM),是继乳剂、脂质体、微粒和纳米粒后,近年来研究十分活跃的靶向控释胶粒给药系统。因其具有一些特有的药物载体性质,如小粒径、高载药量、药物的控制释放、生物相容性以及生物膜通透性等特性,被认为是一种潜在的新型靶向给药系统。聚合物胶团通过主动或被动的方式,实现药物的目标靶向。通过“渗透与保留作用”(permeability and retention effect,EPR)可被动靶向肿瘤部位;胶团表面可嫁接配体(如叶酸等),实现药物的主动靶向。

关键词：基因传递系统非病毒基因载体壳聚糖壳寡糖-硬脂酸嫁接物胶团基因转染 pEGFP-C1 LipofectamineTM2000 荧光探针

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精胺修饰糖脂共聚物介导基因治疗研究

精胺修饰糖脂共聚物介导基因治疗研究

作者：吴杰浙江大学

学位级别：硕士

壳聚糖-硬脂酸嫁接物(Chitosan-g-stearic acid,CS-SA)具有较强的肿瘤细胞摄取和亚细胞器转运能力,可密接质粒DNA,实现基因有效转染和抗肿瘤基因治疗。研究表明,壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束可密接基因药物转运进入靶细胞,受较弱质子缓冲能... 详细信息

壳聚糖-硬脂酸嫁接物(Chitosan-g-stearic acid,CS-SA)具有较强的肿瘤细胞摄取和亚细胞器转运能力,可密接质粒DNA,实现基因有效转染和抗肿瘤基因治疗。研究表明,壳聚糖-硬脂酸嫁接物胶束可密接基因药物转运进入靶细胞,受较弱质子缓冲能力的限制,该嫁接物胶束存在内-溶酶体逃逸问题,影响转染效率。为增强基因载体的质子缓冲能力,促进基因给药系统的内-溶酶体逃逸,本研究选用精胺进一步修饰壳聚糖-硬脂酸,构建精胺-硬脂酸-壳聚糖/质粒DNA基因递送系统,考察精胺对基因转染效率和p53基因治疗的影响,并探讨其相关机理。选择酶法降解制备低分子量壳聚糖(Chitosan,CS);碳二亚胺法合成壳聚糖-硬脂酸嫁接物(Chitosan-g-stearic acid,CS-SA);高碘酸法合成精胺-壳聚糖-硬脂酸嫁接物(Spermine modified chitosan-g-stearic acid,SP-CS-SA)。核磁共振氢谱确证嫁接物化学结构。三硝基苯磺酸法测得CS-SA的氨基取代度为3.76%;元素分析法测得CS-SA六元糖环开环比例为12.42%,SP-CS-SA的精胺(SP)嫁接比例为7.59%。芘荧光法测得CS-SA、SP-CS-SA临界胶束浓度分别为116.3±16.3μg/mL、108.2±3.8μg/mL。微粒粒度与Zeta电位分析仪测得CS-SA、SP-CS-SA胶束(浓度均为0.2 mg/mL)的数均粒径分别为133.6±23.2 nm、128.4±19.8nm,表面电位分别为22.8±3.2mV、18.2±1.8 mV。透射电子显微镜观察,显示两种胶束的粒径分布均较窄,外观呈不规则类球形,其粒径略小于由微粒粒度与Zeta电位分析仪测定的结果。酸碱滴定法测得,SP修饰后CS-SA的离子缓冲能力有较大提高。CS-SA、Sp-CS-SA的EC-1、Bel-7402细胞毒性,均明显小于Lipofectamine TM2000和PEI 25K。共孵育法分别制备壳聚糖-硬脂酸/pDNA(CS-SA/pDNA)、精胺-壳聚糖-硬脂酸/pDNA (SP-CS-SA/pDNA)基因递送系统。CS-SA/pDNA、SP-CS-SA/pDNA均可有效密接pDNA,形成粒径均一的基因递送系统。基因递送系统具有良好的保护pDNA免受酶降解的能力。SP-CS-SA/pEGFP-C1的EC-1、Bel-7402细胞转染效率,分别为44.6±4.9%,33.5±2.3%,显著高于CS-SA/pEGFP-Cl (***P<0.001),显示SP修饰显著提高了基因转染效率。细胞内共定位研究表明, 经SP修饰的SP-CS-SA/pDNA基因递送系统,可实现DNA从溶酶体的快速逃逸。研究结果显示,转染剂量条件下的CS-SA/pDNA、SP-CS-SA/pDNA,基本无细胞毒性。以Bel-7402为模型细胞,p53-EGFP-N1为治疗基因,考察CS-SA/P53-EGFP-N1、SP-CS-SA/p53-EGFP-N1基因递送系统的促肿瘤细胞凋亡作用。研究结果表明,SP-CS-SA/p53-EGFP-N1的Bel-7402细胞凋亡率为37.3±1.1%,明显大于CS-SA/p53-EGFP-N1 (10.1 ± 3.0%) (**P<0.01),接近于PEI25K/p53-EGFP-N1,但低于LipofectamineTM2000/p53-EGFP-N1 (P<0.05).选择SP修饰,可促进SP-CS-SA/p53-EGFP-N1基因表达,引起肿瘤细胞G1期阻滞,促进细胞凋亡。

关键词：精胺-壳聚糖硬脂酸嫁接物细胞摄取内-溶酶体逃逸基因转染 p53 细胞凋亡

肿瘤靶向近红外温敏纳米给药系统的制备及评价

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肿瘤靶向近红外温敏纳米给药系统的制备及评价

作者：邱国熙浙江大学

学位级别：硕士

给药系统一直面临药物释放问题的挑战,近红外响应型温敏给药系统可实现药物速释。本研究构建具有肿瘤主动靶向和光热条件快速释放化疗药物的纳米给药系统,实现高效低毒的光疗-化疗联合治疗。本研究采用原子转移自由基聚合反应法,丙烯酰... 详细信息

给药系统一直面临药物释放问题的挑战,近红外响应型温敏给药系统可实现药物速释。本研究构建具有肿瘤主动靶向和光热条件快速释放化疗药物的纳米给药系统,实现高效低毒的光疗-化疗联合治疗。本研究采用原子转移自由基聚合反应法,丙烯酰胺(Acrylamide,AAm)和丙烯腈(Acrylonit,AN)共聚形成温敏聚合物聚(丙烯酰胺-丙烯腈)(poly(acrylamide-co-acrylonitrile),p(AAm-co-AN))。考察自由基聚合反应引发剂、反应物投料比和反应时间对聚合物上临界溶解温度(Upper critical solution temperature,UCST)的影响,优选引发剂偶氮二异丁腈(Azodiisobutyronitrile,AIBN)为1%wt,AAm和AN摩尔比为16:9,反应时间为24 h,得分子量为20.5 kDa,UCST为45℃的p(AAm-co-AN)。采用具有肿瘤主动靶向功能的透明质酸(Hyaluronicacid,HA)嫁接p(AAm-co-AN),得透明质酸-聚(丙烯酰胺-丙烯腈)嫁接物(Hyaluronicacid-poly(acrylamide-co-acrylonitrile),HA-P)。HA-P在水中可自聚集形成胶束结构,芘荧光法测定其临界胶束浓度为72.2μg/m L。微粒粒度与表面电位分析仪测得粒径为250.6±2.8 nm,表面电位为-28.2±0.3 mV。环境温度≥45℃,HA-P胶束的粒径骤降至10 nm以下,胶束结构崩解。电镜观察发现,常温下胶束结构完好;环境温度≥45℃,胶束结构崩解。以阿霉素(Doxorubicin,DOX)为化疗模型药物,吲哚菁绿(Hydrophobic indocyanine green,ICG)为光敏剂,透析法制备近红外响应型温敏给药系统HA-P/DOX&ICG纳米粒。经测定,HA-P/DOX&ICG纳米粒粒径为217.5±0.9 nm,表面电位为-24.1±1.4 mV。环境温度≥45℃,HA-P/DOX&ICG纳米粒的粒径骤降至10 nm以下,纳米粒结构崩解。当DOX和ICG投料比为1:1(D/I=1:1),投药量为10%时,荧光分光光度法、紫外-可见光分光光度法分别测定,得到HA-P/DOX&ICG的DOX载药量及包封率分别为5.56±0.23%,59.0±2.7%,ICG载药量及包封率分别为5.74±0.12%,61.0±1.4%。控制HA-P/DOX&ICG纳米粒水分散体ICG浓度为10μg/m L,水性介质中近红外光照(808 nm,1 W/cm,5 min),纳米粒光照前后水分散体温度差为23.7℃,光热转换能力较游离ICG(温度差为22.5℃)无明显差异。透析法测定不同设置温度和有或无近红外光照条件下,载药纳米粒的温敏释放。在温度为45℃和特定时间近红外光照条件下,载药纳米粒在不同pH条件下均显示敏感释放特性。以人乳腺癌细胞MCF-7为细胞模型。细胞摄取实验结果表明,经细胞膜表面CD44受体介导,MCF-7可高效摄取HA-P/DOX&ICG纳米粒。以尼罗红(Nile red,NR)替换DOX,得HA-P/NR&ICG纳米粒。细胞摄取后,载药纳米粒能响应近红外光照(808 nm,1 W/cm,3 min)快速释放模拟药物NR,激光共聚焦显微镜下光照组NR荧光强度显著强于未光照组。MTT法评价细胞毒性,结果显示,近红外光照前后HA-P/DOX&ICG纳米粒的IC分别为3.78μg/m L和1.46μg/m L,光照可显著提高HA-P/DOX&ICG细胞毒性。ROS荧光探针(Singlet oxygen sensor green,SOSG)评价细胞产ROS能力,结果显示,HA-P/DOX&ICG近红外光照组的胞内ROS水平是HA-P/DOX&ICG未近红外光照组的1.98倍。流式细胞分析仪测定各制剂的促细胞凋亡能力,结果显示,HA-P/DOX&ICG近红外光照组的细胞晚期凋亡率为55.41%,分别是HA-P/DOX&ICG未红外光照组、DOX与ICG联合给药组的1.87、1.73倍。以异位接种乳腺癌MCF-7的Bal B/c裸鼠为评价模型,近红外荧光活体成像分析显示,HA-P/DOX&ICG纳米粒能够在肿瘤部位主动聚集。模型动物抗肿瘤药效学研究结果显示,与生理盐水组相比,近红外(808 nm,1 W/cm,3 min)光照后,HA-P/DOX&ICG纳米粒的抑瘤率为95.9%,明显高于无近红外光照HA-P/DOX&ICG组的61.8%。本研究结果揭示,肿瘤主动靶向温敏释放纳米给药系统HA-P/DOX&ICG,能在肿瘤部位主动聚集,减少化疗药物DOX的毒副作用。当环境温度≥UCST时,UCST型温敏聚合物发生物理性状改变,纳米

关键词：聚合物胶束肿瘤主动靶向上临界溶解温度温敏释放光疗-化疗联合治疗

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壳寡糖纳米载体的细胞摄取机理研究

壳寡糖纳米载体的细胞摄取机理研究

作者：万丽卿浙江大学

学位级别：硕士

壳聚糖是一类由氨基葡萄糖组成的阳离子聚合物，具有很好的生物相容性、低毒性和可生物降解性。研究发现，壳聚糖及其衍生物对生物大分子药物具有保护作用，以该类聚合物为载体制备的多肽、蛋白质、核酸类药物的口服制剂已成为该类药物... 详细信息

壳聚糖是一类由氨基葡萄糖组成的阳离子聚合物，具有很好的生物相容性、低毒性和可生物降解性。研究发现，壳聚糖及其衍生物对生物大分子药物具有保护作用，以该类聚合物为载体制备的多肽、蛋白质、核酸类药物的口服制剂已成为该类药物的研究热点，近年来又开始应用于携带质粒DNA的基因治疗研究。壳聚糖的pKa值约为6.5，大分子量壳聚糖在生理pH条件下(7.2～7.4)不溶解;且消化道内也没有直接作用于壳聚糖分：子结构中β糖苷降解的壳聚糖酶，导致作为药物载体的大分子量的壳聚糖难以被人体消化道吸收。因此，研究低分子量壳聚糖(壳寡糖，chitosan oligosaccharide,CSO)作为药物载体材料具有非常重要的意义。本课题通过水解与超滤分离技术得到壳寡糖，用凝胶渗透色谱法(gelpermeation chromatogram,GPC)测定其分予量;采用溶剂扩散法制备壳寡糖纳米粒(CSO-NPs);用硬脂酸(stearic acid,SA)修饰壳寡糖得到共聚物，在水中自聚集形成几十纳米大小的聚合物胶团(CSO-SA);以粒度及表面电位分析仪测定纳米粒、聚合物胶团的粒径、表面电位(Zeta电位);以丝裂霉素C(mitomycin C)为模型药物，制备载药纳米粒和胶团，建立药物含毓测定方法，测定药物包封率。以A549人Ⅱ型肺上皮细胞为模型细胞，评价纳米载体、载药纳米粒和胶团的细胞毒性。用异硫氰基荧光素(fluorescein isothiocyanate，硕士论文:壳寡糖纳米载体的细胞摄取机理研究FITC)标记CSO一PS和CSO一SA胶团，用于研究细胞摄取的机理;通过荧光倒置显微镜、荧光分光光度计、流式细胞仪及激光共聚焦显微镜等各种方法定性、定量地研究A549细胞对壳寡糖及其纳米粒、聚合物胶团的摄取作用，探索纳米粒、胶团的细胞摄取的机理。通过水解与超滤分离技术得到壳寡糖，凝胶渗透色谱法测得重均分子量M，为18.7K七la，该分子量的壳寡糖能够溶解于生理pH值的PBs溶液中。经溶剂扩散法制备得到壳寡糖纳米粒，用粒度及表面电位分析仪测得的数均和体均粒径分别为133.3nm和368.2nln，表面电位(Zeta电位)为53.9土3.1mV。以碳二亚胺(l一ethyl一3一(3一dimet场lamin叩ropyl)earbodiimide hydrochloride，EDC)为交联偶合剂，在壳寡糖的主链上嫁接硬脂酸形成壳寡糖与硬脂酸的共聚物。经取代度测定，不同投料比例嫁接的壳寡糖硬脂酸聚合物，实际被硬脂酸取代的氨基百分率分别为13.08%、7.48%和4.20%。该聚合物呈梳状结构，具有两亲性，在水性介质中自发形成以疏水链为内核、亲水链为外壳的粒径为几十纳米的聚合物胶团(CSO一SA)。经粒度及表面电位分析仪测定，以5二1、10:1和20:1比例嫁接硬脂酸后形成的CSO一SA胶团的数均粒径随着嫁接比例的增加而减小，分别为75.67nln、***和***，表面电位分别为49.2士1 .6 mV、58.5士2.3 mV和54.1士***。以A549肺上皮细胞为模型细胞，评价壳寡糖及其纳米粒(CSO一PS)、CSO一SA胶团的细胞毒性。实验结果表明壳寡糖及其纳米粒的细胞毒性均很低，Ie50分别为944.36林g·mL一‘和643.16林g·mL一’;而嫁接硬脂酸后的eso一sA胶团的细胞毒性略有增加，且5:1、10:1和20:1比例嫁接硬脂酸后形成的eso一sA胶团的xe50值分别为41 1.09士43.29协g·mL一，、402.26士22.05 09·mL一’和223 .02士34.20协g·mL一，。本研究所用的是水解得到的低分子量壳聚糖，细胞毒性明显小于文献报道的大分子量壳聚糖;壳寡糖形成的纳米粒以及硬脂酸修饰后的壳寡糖聚合物胶团的细胞毒性也低于其它常用的聚阳离子(如多聚L-赖氨酸聚阳离子载体的ICS。仅为50士10林g·mL一，)。因此，壳寡糖纳米载体有硕士论文:壳寡糖纳米载体的细胞摄取机理

关键词：壳寡糖,纳米粒,硬脂酸,聚合物胶团,A549细胞,细胞毒性,细胞摄取,内吞,丝裂霉素C

壳寡糖—脂肪酸嫁接物给药系统的药物控释研究

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壳寡糖—脂肪酸嫁接物给药系统的药物控释研究

作者：任国飞浙江大学

学位级别：硕士

聚合物胶团是近几年正在发展的一类新型纳米药物载体,具有增溶、靶向、低毒、长循环等优点。聚合物胶团可由两亲性嵌段或接枝共聚物于水中自聚集形成,共聚物分子中同时具有亲水性基团和疏水性基团。聚合物胶团具有特殊的“核-壳”结构,... 详细信息

聚合物胶团是近几年正在发展的一类新型纳米药物载体,具有增溶、靶向、低毒、长循环等优点。聚合物胶团可由两亲性嵌段或接枝共聚物于水中自聚集形成,共聚物分子中同时具有亲水性基团和疏水性基团。聚合物胶团具有特殊的“核-壳”结构,其疏水性内核可以增溶难溶性的抗肿瘤药物,减少抗肿瘤药物对正常组织的毒副作用,并通过被动或主动靶向,实现药物对肿瘤细胞的亚细胞器靶向。本研究以分子量为450 Kda的壳聚糖为原料,通过酶降解和超滤膜分离技术得到低分子量壳聚糖——壳寡糖(chitosan oligosaccharide,CSO),凝胶渗透色谱法测定其分子量。以碳二亚胺为交联剂,将长链脂肪酸,如豆蔻酸(myristic acid,MA)、软脂酸(palmitic acid,PA)、硬脂酸(stearic acid,SA)、山蓊酸(behenic acid,BA)与壳寡糖共价结合得到壳寡糖-脂肪酸嫁接物,用红外光谱和核磁共振对嫁接物进行结构确证。用三硝基苯磺酸法测定嫁接物的氨基取代度;芘荧光法测定嫁接物的临界胶团浓度;微粒粒度及表面电位分析仪测定嫁接物胶团的粒径和表面电位。以低分子量肝素为模型药物,分别制备肝素脂质纳米粒,肝素壳寡糖修饰脂质纳米粒和肝素嫁接物修饰脂质纳米粒,比较三种纳米粒的理化性质及体外释放性能,考察嫁接物对肝素脂质纳米粒给药系统的影响。以

关键词：壳寡糖豆蔻酸软脂酸硬脂酸山萮酸嫁接物胶团氨基取代度低分子量肝素纳米粒戊二醛固化紫杉醇体外释放

γ-多聚谷氨酸对糖脂嫁接物胶束介导基因转染的影响

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γ-多聚谷氨酸对糖脂嫁接物胶束介导基因转染的影响

作者：易汉希浙江大学

学位级别：硕士

壳聚糖-硬脂酸胶束(Chitosan-g-stearic acid, CS)具有较强的肿瘤细胞摄取能力和细胞核转运能力,其表面正电荷可有效密接质粒DNA (Plasmid DNA, pDNA),实现体内外基因有效转染和抗肿瘤疗效。前期研究结果表明,CS嫁接物胶束包封治疗基因... 详细信息

壳聚糖-硬脂酸胶束(Chitosan-g-stearic acid, CS)具有较强的肿瘤细胞摄取能力和细胞核转运能力,其表面正电荷可有效密接质粒DNA (Plasmid DNA, pDNA),实现体内外基因有效转染和抗肿瘤疗效。前期研究结果表明,CS嫁接物胶束包封治疗基因进入靶细胞后,递送系统的内涵体快速逃逸和治疗基因的有效释放,是制约其基因转染效率的主因。为实现递送系统在靶细胞内的内涵体快速逃逸以及基因药物的有效释放,本研究构建壳聚糖-硬脂酸嫁接物/聚乙二醇化多聚谷氨酸/pDNA三元基因递送系统,考察聚乙二醇化多聚谷氨酸(Poly(ethylene glycol)-b-poly(γ-glutamic acid), PG)的引入对转染效率的影响、研究其相应的细胞摄取、内涵体逃逸和pDNA释放等过程的相关机理。本研究以18.0 kDa的壳聚糖(Chitosan)为原料,以碳二亚胺(1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide, EDC)为交联耦合剂,通过CS侧链上的氨基和硬脂酸(Stearic acid, SA)上的羧基酰胺反应,合成CS。通过席夫反应在CS上键合聚乙二醇(Poly(ethylene glycol), PEG),合成聚乙二醇化的糖脂嫁接物(PEGylated chitosan-g-stearic acid, PCS)。核磁共振氢谱确证CS和PCS嫁接物的化学结构;三硝基苯磺酸法测定氨基取代度;芘荧光法测定临界胶束浓度;动态光散射法测定嫁接物胶束的粒径和表面电位;透射电镜观察胶束的大小和形态学特征。引入阴离子多肽PG,分别构建CS/pDNA, PCS/pDNA二元和CS/PG/pDNA三元基因递送系统。测定基因递送系统的粒径和表面电位,通过透射电镜观察其粒子大小和形态;凝胶电泳分析嫁接物胶束对pDNA的密接能力,以及DNase Ⅰ酶保护能力。以编码增强型绿色荧光蛋白pEGFP-C1为报告基因,以人胚肾细胞HEK293作为模型细胞,用荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白的表达,用FC定量测定其转染效率,比较二元、三元基因递送系统转染效率的差异;以食管癌细胞EC-1作为模型细胞,通过三种不同的复合方式分别制备CS/PG/pDNA-Ⅰ、 CS/PG/pDNA-Ⅱ和CS/PG/pDNA-Ⅲ三元基因递送系统,用激光共聚焦显微镜(Confocal laser scanning microscope, CLSM)观察绿色荧光蛋白的表达,用FC定量测定其转染效率,比较和总结不同三元基因递送系统转染效率的差异和特点。MTT法考察递送系统及其对应载体的细胞毒性。用四甲基异硫氰酸罗丹明B (Rhodamine B isothiocyanate, RITC)标记的CS和PCS制备二元、三元基因递送系统,CLSM观察其细胞摄取、胞内内涵体逃逸和报告基因的细胞内释放过程。FC定量测定阳性细胞百分率和平均荧光强度,考察基因递送系统在HEK293和EC-1细胞上的摄取能力,以γ-多聚谷氨酸(Poly(y-glutamic acid), γ-PGA)为摄取抑制剂,研究基因递送系统在HEK293细胞上的入胞途径。以HEK293为模型细胞,CLSM共定位分析,研究基因递送系统的内涵体逃逸和报告基因的释放动力学;以巨噬细胞RAW264.7作为模型细胞,CLSM观察基因递送系统的细胞摄取,考察PEG修饰对基因递送系统被网状内皮系统(Reticuloendothelial system, RES)吞噬的影响。经EDC介导,得到两亲性CS嫁接物。核磁共振氢谱确证了CS和PCS的化学结构,二者的氨基取代度分别为7.1%和11.0%,其相应的临界胶束浓度分别为72.0和89.0 pg/mL;浓度为10mg/mL时,其表面电位分别为18.7±0.6和16.3±1.6 mV。TEM图显示胶束呈类球形,粒径较小,分布均一。嫁接物胶束具有较强的pDNA密接能力,当N/P比≥1时,CS完全阻滞pDNA迁移,CS/pDNA和PCS/pDNA二元、CS/PG/pDNA三元基因递送系统均具备DNaseI酶保护能力。体外基因转染结果显示,在HEK293细胞上,当N/C/P比为2.5：1：1时,CS/PG/pDNA三元基因递送系统达到最大基因转染效率40.8%,为CS/pDNA和PCS/pDNA-二元基因递送系统的30.4和50.0倍;在EC-1细胞上,当N/C/P比为10：1：1时,CS/PG/pDNA-Ⅲ三元基因递送系统达到最大基因转染效率11.6%,为CS/pDNA和PCS/pDNA二元基因递送系统的1.9和3.7倍。以γ-PGA为抑制剂,摄取实验结果表明,CS/PG/pDNA三元基因递送系统经由γ-PGA特异性受体介导的方式入胞;γ

关键词：壳聚糖-硬脂酸嫁接物 γ-多聚谷氨酸聚乙二醇化内涵体逃逸 pDNA释放基因转染

病灶细胞内药物pH敏感释放的糖脂纳米给药系统研究

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病灶细胞内药物pH敏感释放的糖脂纳米给药系统研究

作者：程博琳浙江大学

学位级别：硕士

随着纳米载体技术的不断进步,聚合物胶束可通过EPR效应在肿瘤部位大量富集,实现很好的被动靶向。经特异性配体的修饰,增加载体对肿瘤细胞的亲和力,实现载体对药物的定向输送和肿瘤主动靶向,为肿瘤治疗带来了新的希望。研究发现,给药系... 详细信息

随着纳米载体技术的不断进步,聚合物胶束可通过EPR效应在肿瘤部位大量富集,实现很好的被动靶向。经特异性配体的修饰,增加载体对肿瘤细胞的亲和力,实现载体对药物的定向输送和肿瘤主动靶向,为肿瘤治疗带来了新的希望。研究发现,给药系统药物剂量与疗效不完全成正比,肿瘤治疗效果仍面临挑战,这可能与纳米载体的病灶细胞内药物释放有关。本研究构建了一种pH敏感型糖脂纳米载体,能在肿瘤细胞内快速释放药物,提高游离药物的浓度,从而提高治疗效果。本研究以对醛基苯甲酸(4-formylbenzoic acid, FBA)为桥链试剂,采用两步法交联亲水性低分子量壳聚糖(chitosan, CSO)和疏水性十八醇(Stearyl Alcohol, SA),构建西弗碱型糖脂嫁接物(4-formylbenzoic acid-linked stearic acid grafted chitosan, CSO-FBA-SA),核磁共振氢谱法确证嫁接物结构,其氨基取代度为7.6%。在水性介质中可自组装形成“核-壳”结构胶束,临界胶束浓度为194.9μg/mL。透射电镜下观察呈类球形,分布较均一,粒径为72.3±12.4 nm,表面电位为31.6±0.5 mV。以碱基阿霉素(doxorubicin, DOX)为模型药物,透析法制得西弗碱型糖脂嫁接物载药纳米粒,有机溶剂提取法及荧光分光光度法,测得药物包封率为73.2%。体外不同pH条件下的释放结果显示,CSO-FBA-SA/DOX载药纳米粒在低pH环境下,具有快速释药行为,释放速率明显快于同pH条件下非敏感的CSO-SA/DOX纳米粒。细胞摄取实验结果显示,CSO-FBA-SA/DOX纳米粒在肿瘤细胞的内在化过程呈时间依赖性,且摄取速率明显快于游离DOX。细胞定量摄取实验显示了相同的研究结果。细胞内释放结果显示,本研究所观察的24h内,CSO-FBA-SA载药纳米粒在肿瘤细胞内能快速释放出游离药物,释放速度明显快于CSO-SA载药纳米粒。CSO-FBA-SA/DOX载药纳米粒在MCF-7上的细胞毒性,分别是CSO-SA/DOX纳米粒和游离DOX的3.75倍和4.77倍,显示细胞毒性与CSO-FBA-SA/DOX纳米粒的药物释放速率呈正相关。受MCF-7细胞溶酶体内更低pH环境的影响,CSO-FBA-SA/DOX纳米粒具有更快的药物释放速率,从而使该纳米粒的MCF-7的IC50值明显低于SKOV-3细胞,两者相差2.12倍。给药系统的细胞内游离阿霉素浓度经时变化研究结果显示,与CSO-SA/DOX纳米粒和游离DOX相比,CSO-FBA-SA/DOX纳米粒的药时曲线下面积最大,主要归因于给药系统的快速摄取及摄取后的药物快速释放。因此,CSO-FBA-SA/DOX纳米粒对肿瘤细胞增殖的抑制作用,明显强于CSO-SA/DOX纳米粒和游离DOX。体内模拟药物尼罗红的释放实验证实,西弗碱型糖脂纳米载体能特异性响应肿瘤组织内低pH环境,比非敏感的CSO-SA嫁接物载体有更快的药物释放速率。正常组织中,本研究观察的24 h内,除肝脏有少量的药物释放外,其他组织均未发现明显的尼罗红的释放。显示西弗碱型糖脂纳米粒可明显降低肿瘤化疗药物的正常组织毒性。进一步的心脏切片显示市售盐酸阿霉素制剂有明显的心脏毒性,而西弗碱型糖脂纳米粒无明显表现。模型动物抗肿瘤药效学结果显示,西弗碱型糖脂嫁接物载药纳米粒的抑瘤率为70.1%,而非敏感载药纳米粒的抑瘤率为60.9%,西弗碱型糖脂嫁接物载药纳米粒在抗肿瘤药效上有明显提高,且与市售盐酸阿霉素制剂(抑瘤率为74.2%)抗肿瘤效果相当。西弗碱型糖脂纳米给药系统,可选择性地在肿瘤部位释放药物,减小正常组织的药物释放毒性。因此,西弗碱型糖脂嫁接物载药纳米粒是一种安全、有效、具有潜在发展价值的纳米给药系统。

关键词：糖脂纳米载体 pH敏感选择性药物释放经时变化

胰岛素固体脂质纳米粒的制备及其体内药效学研究

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胰岛素固体脂质纳米粒的制备及其体内药效学研究

作者：张继明浙江大学

学位级别：硕士

以脂质为骨架材料制备固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)，是近年来研究十分活跃的靶向控释胶粒给药系统。本课题选择硬脂酸、硬脂胺作为SLN给药系统的载体材料，以胰岛素(insulin,INS)为模型药物，采用水性溶剂扩散法制... 详细信息

以脂质为骨架材料制备固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles,SLN)，是近年来研究十分活跃的靶向控释胶粒给药系统。本课题选择硬脂酸、硬脂胺作为SLN给药系统的载体材料，以胰岛素(insulin,INS)为模型药物，采用水性溶剂扩散法制备固体脂质纳米粒(INS-SLN)，考察各制备因素对药物包封率的影响，测定纳米粒的表面电位、粒径分布。采用化学嫁接的方法，得到硬脂胺(octadecylamine,ODA)的异硫氰基荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)荧光标记固体脂质，用差示热分析和红外光谱法考察嫁接物的结构;由冻融试验筛选合适的冻干保护剂，并对纳米粒进行再分散性研究;以pH 7.4PBS为释放介质，进行质硬脂胺载药纳米粒的体外释放研究。通过大鼠灌胃，研究荧光嫁接纳米粒载体肠道吸收机制;以糖尿病模型大鼠经呼吸道插入给药，对载药纳米粒进行体内药效学研究。通过溶剂扩散法制备得到硬脂酸纳米粒，其粒径在300～500nm之间，荷负电，表面电位为21mV;在pH 3.5、5.3、7.5的分散介质中，胰岛素包封率分别为10.7％、12.2％、10.3％;通过加入荷正电的凝聚剂三氯化铝，使纳米粒凝聚，易于分离。硬脂胺异硫氰基荧光素嫁接物经差示热分析表明有新的晶型产生，红外光谱证明嫁接物中有酰胺基的存在。制备硬脂胺载药纳米粒的过程中加入三聚磷酸钠，包封率提高至84.3％，硕士论文:胰岛素固体脂质纳米粒的制备及其体内药效学研究其粒径和电位分别为***、+2.3 mV。由冻融试验对不同浓度的三种冻干保护剂(泊洛沙姆、甘露醇和甘氨酸，终浓度分别为0.1%、0.3%和0.5%)进行筛选，结果浓度为0.5%的的甘氨酸具有良好的保护作用，对粒径和电位的影响最小;再分散试验表明冷冻干燥过程对INS一SLN的物理性质未见有明显影响，且在水中的再分散性良好。在pH 7.4 PBS释放液中，载药SLN在释药初期(lh)有药物的突释现象 (释放了药物总包封量的35.63%)，随后SLN中的药物呈持续释放，至24h药物的累积释放量为67.30%，表明SLN是一种脂质的骨架结构，可产生缓释效果。胰岛素SLN经呼吸道插入给药后，其生物利用度是皮下注射的95.54%。但胰岛素SLN的降血糖作用更加温和，维持时间明显延长，12小时时的血糖值仅恢复到给药前的80%，而胰岛素溶液的呼吸道插入给药和皮下注射给药均恢复到了给药前的水平，表明胰岛素SLN具有明显的长效作用。荧光标记固体脂质通过大鼠灌胃，发现淋巴液中的荧光强度明显高于血液，表明这种固体脂质纳米粒由口服途径给药，可经消化道淋巴完整吸收进入淋巴液。

关键词：硬脂酸硬脂胺固体脂质纳米粒胰岛素荧光标记淋巴吸收呼吸道给药

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高硅铝合金电火花加工工艺研究

高硅铝合金电火花加工工艺研究

作者：魏军齐哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

高硅铝合金作为理想的航空航天用电子封装材料应用越来与广泛。但是高硅铝合金很脆，普通机械加工很难实现复杂结构的加工，电火花加工不存在宏观作用力，在高硅铝合金复杂结构加工中拥有不可替代的地位，研究高硅铝合金电火花加工对其... 详细信息

高硅铝合金作为理想的航空航天用电子封装材料应用越来与广泛。但是高硅铝合金很脆，普通机械加工很难实现复杂结构的加工，电火花加工不存在宏观作用力，在高硅铝合金复杂结构加工中拥有不可替代的地位，研究高硅铝合金电火花加工对其推广应用具有重大意义。通过分析超声特性，得知超声振动能够增大材料蚀除量，改善放电状态，增强蚀除材料抛出作用，改善加工表面质量，降低加工表面变质层厚度，增大电极损耗。通过正负极性对比试验、两种高硅铝合金单因素对比试验、两种电火花加工正交对比试验，研究了高硅铝合电火花加工中极性效应和各参数对加工效果的影响，总结了高硅铝合金电火花加工规律，对比总结了两种电火花加工方式对加工效果影响的异同点。对比分析了两种电火花加工对表面性能的影响，包括表面粗糙度、表面元素、表面形貌、表面凝固层、表面耐磨性和摩擦系数以及表面显微硬度。结果表明两种电火花加工可以改善表面显微硬度、表面耐磨性以及表面滑动摩擦系数，超声电火花复合加工对表面性能的改善作用更加明显。通过研究表明，电火花加工以及超声电火花复合加工在高硅铝合金加工领域具有很好的应用前景。

关键词：高硅铝合金电火花加工正交试验单因素试验表面性能