检索结果-南通市图书馆

作者：陆小清南京农业大学

学位级别：硕士

为提供我省沿海地区耐盐碱、耐水湿树种的多样化品种，本文详细叙述了落羽杉属中山杉的起源与杂交选育过程;并简要介绍了中山杉系列新品种的形态特征和生长特性;提出了本研究目的意义。为加快推广中山杉优良无性系，本文重点开展了落羽... 详细信息

为提供我省沿海地区耐盐碱、耐水湿树种的多样化品种，本文详细叙述了落羽杉属中山杉的起源与杂交选育过程;并简要介绍了中山杉系列新品种的形态特征和生长特性;提出了本研究目的意义。为加快推广中山杉优良无性系，本文重点开展了落羽杉属中山杉优良无性系的区域试验、耐盐碱试验和扦插试验，并提出了一整套与之相适应的栽培技术．试验结果如下：1、根据中山杉系列无性系在不同立地条件生长生长状况，初步评估在滩涂湿地、平原农区试验推广的有中山118号、9号、102号、24号、1号和未参试而在盐碱地区生长比较中表现突出的27号、136号等7个无性系。在沿海滩涂盐碱地区试验推广的有：中山27号、136号、118号、24号、1号等5个无性系。2、比较了不同品种、扦插基质和NAA处理浓度对中山杉无性系扦插生根的影响。结果表明，不同品种的生根率存在显著差异。27号的平均生根率最高为76.2％，118号、146号、24号比302号扦插效果好．149号的平均生根率最低，为9.01％。不同浓度NAA处理的生根率也存在显著差异，以1500ppm的平均生根率最高，为53.9％。118号、27号、146号在三种基质中的扦插生根率都较好。24号在园土+沙基质中平均生根率较对照种302号高，为45.5％，而在泥碳+珍珠岩基质中只有12.1％，在泥碳土+砻糠灰基质中最低，为9.0％。102号在泥碳+珍珠岩、泥碳土+砻糠灰基质中平均生根率都较对照种302号高，分别是25.1％、26.9％，在沙+园土基质中最低只有12.6％。1号、149号在三种基质中的平均生根率都较302号低，说明1号、149号较难扦插繁殖。3、采用水培法，以相对生长量、盐害指数和相对电导率为指标，对中山杉优良无性系耐盐能力的进行了评价。结果表明，不同无性系的耐盐力不等。中山杉118号具有较好的耐盐力;中山杉136号、1号、146号和149号耐盐力中等;中山杉102号、27号和24号的耐盐力较差。相对生长量、盐害指数和相对电导率之间存在着极显著相关关系，均可作为中山杉耐盐能力的评价指标。4、经过综合评价，提出了适宜在我省不同生境推广种植的中山杉无性系，其中中山118号、27号、136号因其生长快、适应性强、易繁殖，可在全省大力推产。

关键词：中山杉新无性系区域试验扦插试验耐盐试验

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

葡萄、桃抗病基因同源序列的克隆与分析

葡萄、桃抗病基因同源序列的克隆与分析

作者：王华峰南京农业大学

学位级别：硕士

本文根据NBS-LRR类和STK类抗病基因的保守序列，采用基于同源序列的候选基因法，对不同抗病性的4个桃种类和5个葡萄种类进行了抗病基因同源序列的克隆与分析，其结果如下： 1．几种提取植物基因组DNA方法比较。提取桃基因组DN... 详细信息

本文根据NBS-LRR类和STK类抗病基因的保守序列，采用基于同源序列的候选基因法，对不同抗病性的4个桃种类和5个葡萄种类进行了抗病基因同源序列的克隆与分析，其结果如下： 1．几种提取植物基因组DNA方法比较。提取桃基因组DNA的实验中，参照乔玉山等人的改良SDS微量法，并将微量法改为“中量法”，即用5ml离心管代替1.5ml离心管，加大了植物材料用量;并相应地增加DNA样品纯化次数;DNA溶解采用超纯无菌去离子水代替TE，最终获得了DNA浓度较大，质量较高的桃基因组DNA，为进一步所做的PCR反应实验，提供了良好的基础。用SDS法提取葡萄基因组DNA过程中，发现DNA样品有色素(糖类物质)存在。于是改采用CTAB法重新对葡萄基因组DNA进行了提取，并同样将微量法将改为“中量法”，最终既消除了色素的干扰，又获得了浓度较大，质量较高的葡萄基因组DNA。提取桃基因组DNA过程中采用的RNase的浓度为10mg／ml，完全消除DNA样品中的RNA杂质，而在提取葡萄基因组DNA过程中采用的RNase的浓度为0.1mg／ml，RNA杂质依然存在。 2．引物设计、PCR反应条件的优化和引物的筛选。根据NBS-LRR类中的拟南芥抗丁香假单孢杆菌基因RPS2和烟草抗花叶病毒基因N中保守的P-环(GGVGKTT)和跨膜结构域(GLPLAL)和STK类蛋白激酶的上游保守区(FG(K／V／I／S)VY(K／R)G)和下游保守区(D(V／I)YS(F／Y)G(V／I／M)，总共设计了13对简并引物，其中NBS-LRR类引物组合9对，STK类引物组合4对。以葡萄和桃基因组DNA为模板，设置Mg梯度，从1.0mM到4.5mM，每0.5mM为一梯度，共8个Mg梯度，在此基础上，对常规PCR反应条件先后进行了优化：基因组DNA模板99-100℃彻底变性10分钟;热启动时间5分钟，温度95℃;退火温度设为低Tm值引物的Tm值5℃、Tm值低的引物用量提高到2.0ul。在优化的PCR反应体系下，13对所设计的简并引物中：NBS-LRR类引物组合WN3／WN5在Mg终浓度为3mM时，从5种葡萄材料中扩增出了清晰明显的特征条带;STK类引物组合WS2／WS4在4种桃材料中、Mg终浓度也为3mM时，有模糊的扩增条带出现。针对STK类引物，接着采用桃基因组DNA的PCR产物为模板进行再次PCR扩增，同时将退火温度提高。最后在退火温度为43℃时，减少了PCR的非特异性扩增获得了清晰的特征扩增产物。 3.目的基因片段序列的分析. 回收PCR产物，连接转化，PcR检测后，进行测序，获得44个RGA序列，这些片段序列的大小在3 00一60Obp之间.初步异同分析后，得出”个各不相同的片段序列，其中18 个来自葡萄，11个来自桃.在随后的氨基酸序列分析中，有21个片段能推导出完整的氛基酸序列.经.氛基酸序列比较发现，发现它们除两端的引物序列外，都基本具有杭病基因所特有的保守氛基酸结构域.即最终获得了21个抗病基因同源序列，其中从葡萄中获得15个 NBs一LRR类杭病基因同源片段，从桃中6个STK类抗病塞因同源片段. 将这21个杭病塞因同源序列进行聚类分析得:从5种葡萄中共获得6类NBS一LRR类杭病基因同源序列;从4种桃中共获得4类STK类抗病基因同源序列.同时与已报道的相应同源序列也进行聚类分析知:来自99R的p一12与已克隆到的Ia了基因的氛基酸序列为一类，来自AKI的p一16与已克隆到的L瓦从万的基因的氛基酸序列为一类;来自皱叶黄露的t一3、 t一16与已克隆的尸to、L厂10基因的氛基酸序列为一类，其t一5与已克隆的Ia21玉因的序列为一类. 然后将所获得的杭病基因同源序列之间、同时与已知抗病基因的氛巷酸序列进行了同源性比较分析，发现所获得的抗病基因同源序列总的来说与已知抗病基因的氛基酸序列同源性较低，多数没超过3。%，而它们之间的同源性则相对较高，多在40%一6眼之间.但也有个别的氛基酸序列与已知杭病基因的氛基酸序列同源性较高，从5种葡萄中共获得6类 NBs一LRR类抗病基因同源序列中，如来自AKI的p一16与杭病基因L‘、从万的同源性分别为36.7%、32.7%、32.7%;来自”R的p一12与叁因Ial的孰基酸序列同源性为42.7%. 从4种桃中共获得4类STK类抗病基因同源序列中，来自皱叶黄露的t一3、t一16与基因Pt口同源性为39.1%、42.2%;t一5与基因肋21、乙r10的氛基酸序列的同源性分别为 28.7%、32.。%. 关键词:葡萄;桃;抗病基因;同源序列;克隆二-

关键词：葡萄桃抗病基因同源序列克隆

多酚氧化酶基因dsRNAi导入丰水梨的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

多酚氧化酶基因dsRNAi导入丰水梨的研究

作者：周莉莉南京农业大学

学位级别：硕士

本文研究不同取材时间、材料处理、基本培养基、植物生长调节物质等因子对丰水梨诱导增殖、生根培养的影响。结果表明：采集5月至6月上旬新梢，用0.1％升汞对丰水梨消毒6min，接种于AS培养基附加BA 1.0mg／L、NAA 0.2mg／L、GA 1.0mg／... 详细信息

本文研究不同取材时间、材料处理、基本培养基、植物生长调节物质等因子对丰水梨诱导增殖、生根培养的影响。结果表明：采集5月至6月上旬新梢，用0.1％升汞对丰水梨消毒6min，接种于AS培养基附加BA 1.0mg／L、NAA 0.2mg／L、GA 1.0mg／L以及0.1mg／L抗坏血酸，适宜于丰水梨芽启动培养及减轻褐变。扩繁以AS附加BA1.5mg／L +NAA0.1mg／L +GA 3.0mg／L与BA1.0mg／L +NAA0.2mg／L +GA 1.0mg／L两种培养基与植物生长调节物质组合交替使用效果较好，扩繁系数达到5-6。生根培养以ASH基本培养附加0.2mg／L NAA，效果较好，生根率达到60.0％。研究了不同基本培养基、植物生长调节物质种类及浓度、外植体类型、叶片放置方式、暗培养时间以及乙烯抑制剂AgNO处理等因素对于丰水梨离体再生体系建立的影响。结果表明，以继代培养28～35d试管苗第3～5节位处于生理活性期的叶片，前期暗培养21d，接种于NN69+TDZ2.0mg／L+IBA0.1mg／L，光下培养50天，叶片再生频率和再生芽数分别达到86.7％和2.92。AgNO浓度在0.1～1.5mg／L对叶片再生有显著促进作用，能够使叶片再生频率提高30-40％，NN69+TDZ2.0mg／L+IBA0.2mg／L+AgNO 1.0mg／L以及NN69+TDZ1.5mg／L+IBA0.3mg／L+AgNO 0.1mg／L使丰水梨叶片再生频率均达到100％。叶片比茎段适宜作为再生材料，同一叶片的基部和中部比顶端更容易产生愈伤并再生出不定芽。叶片远轴面向下接触培养基比近轴面向下利于叶片再生。通过对叶片预培养时间、侵染时间、共培养时间、抑菌素种类和浓度、延时筛选时间、不同选择压等影响遗传转化因素的研究，建立的丰水梨遗传转化体系为：叶片黑暗预培养3d，经农杆菌侵染3min，在含TDZ2.0mg／L、IBA0.2mg／L、AgNO 1.0mg／L的NN69培养基上黑暗共培养3d，然后加250mg／L Cef黑暗维持培养3d，再进行Km 7.5mg／L的选择压黑暗培养至抗性愈伤出现;转为光照条件1-2次的继代筛选，获得抗性芽。实验获得了具有卡那霉素抗性的丰水梨转化植株9个株系，该抗性植株GUS组织化学染色结果表明获得了2个株系的GUS阳性植株，待进一步检测。

关键词：丰水梨 PP0基因 dsRNAi 农杆菌介导遗传转化

水稻和八棱海棠中ERF类转录因子的克隆及功能研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

水稻和八棱海棠中ERF类转录因子的克隆及功能研究

作者：武丽娟南京农业大学

学位级别：硕士

干旱、低温、高盐和病害等生物和非生物胁迫，严重影响了植物的生长和作物的产量。因此，系统研究植物的环境胁迫应答机制就显得非常重要。植物体内存在着很多转录因子，它们在适应环境胁迫的过程中对胁迫信号做出响应，激活胁迫诱导基... 详细信息

干旱、低温、高盐和病害等生物和非生物胁迫，严重影响了植物的生长和作物的产量。因此，系统研究植物的环境胁迫应答机制就显得非常重要。植物体内存在着很多转录因子，它们在适应环境胁迫的过程中对胁迫信号做出响应，激活胁迫诱导基因的表达，提高植物的抗逆性。拟南芥中根据DNA结合域的特点将转录因子分成若干个家族，如AP2／EREBP，，MYB，WRKY，bZIP等，这些转录因子在植物的胁迫响应过程中发挥着重要的作用。本研究从水稻和八棱海棠中分别克隆到两个新基因OsAP210和MrPF1，它们都属于ERF类转录因子基因家族。利用酵母单杂交方法从水稻cDNA文库中克隆到一个可以与ERE-2cis特异性结合的ERF类转录因子基因OsAP210。该基因的开放阅读框包含1014个核苷酸，编码一个由338个氨基酸组成的蛋白。该基因编码的蛋白包含一个AP2保守结合域，一个C-端的核定位信号区以及两个位于AP2结合域两侧的酸性区。对经过不同激素和不同逆境胁迫处理的水稻以及水稻不同组织进行RT-PCR分析，结果显示OsAP210基因受到低温和NaCl的诱导，并未受到其他各种激素和逆境胁迫的诱导表达。而其转基因拟南芥则表现出对干旱、高盐和氧化胁迫的耐受性。利用RACE(rapid amplification of cDNA ends)技术从八棱海棠cDNA文库中克隆到一个新的编码ERF类转录因子基因MrPF1。该基因的开放阅读框包含1164个核苷酸，编码一个由388个氨基酸组成的蛋白。通过将转录因子MrPF1与辣椒中的CaPF1、番茄中的JERF1和烟草中的NtDRF1进行同源比对，发现这四个转录因子具有很高的同源性。它们的保守结构域包含一个ERF结合域，一个核定位信号区和一个N-端高度保守的基序“MCGGAIISD”。对八棱海棠进行不同激素和不同逆境胁迫处理，并进行实时荧光定量PCR分析，结果表明MrPF1受到低温、ABA(100μM)和PEG(100μM)的诱导。

关键词：水稻八棱海棠生物和非生物胁迫转录因子 OsAP210 MrPF1

农杆菌介导DSACO基因转化‘明水’梨的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

农杆菌介导DSACO基因转化‘明水’梨的研究

作者：李海南京农业大学

学位级别：硕士

梨是蔷薇科(Rosaceae)梨亚料(Romaceae)梨属(Pyrus)多年生木本植物,是世界主要的果树作物之一,栽培面积和产量均仅次于苹果。砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)原产于我国中部、南部和西部各省,适于在温暖多雨地区栽培,是原产于中国的四个梨... 详细信息

梨是蔷薇科(Rosaceae)梨亚料(Romaceae)梨属(Pyrus)多年生木本植物,是世界主要的果树作物之一,栽培面积和产量均仅次于苹果。砂梨(Pyrus pyrifolia Nakai)原产于我国中部、南部和西部各省,适于在温暖多雨地区栽培,是原产于中国的四个梨栽培种之一,具有耐热、抗旱、抗火疫病等优良性状。但其果实大多贮藏性差,如何提高果实耐贮性是解决好砂梨产业化的关键问题。目前的研究主要是针对砂梨果实的生理特点,通过改善果实的贮藏条件和采用一些乙烯抑制剂来延长砂梨果实的货架期,不能解决根本问题。本实验中以‘明水’(Pyrus pyrifolia Akemizu)梨为主要试材,通过转基因技术导入DSACO基因,提高该品种的耐储性,提高其市场竞争力。主要研究内容如下：1、为了将植物表达载体转入模式植物番茄中,本研究初次研究了不同浓度ZT和IAA对‘江疏14号’番茄子叶再生的影响,表明该品种在MS+ZT 1.5mg/L+IAA 0.7mg/L的培养基中再生率为81.3%。建立了DSACO和DSLOX基因转化番茄的遗传转化体系,对获得的抗性植株进行初步检测,结果表明上述2个基因的转化效率低,用于转化后抗性植株假阳性率很高。2、对原有的植物表达载体pYF028-DSACO和pYL028-DSLOX进行改造。将原有DSACO和DSLOX基因经PCR验证后,提取农杆菌质粒转化大肠杆菌DH5α,提取大肠杆菌质粒,PCR验证并进行双酶切,将酶切后的目的片段回收,连接与pYH4215空载体上。重组质粒转化农杆菌EHA105感受态。结果表明：pYF028-DSACO改造成功并重新命名为pYH4215-ACOi。3、ACOi基因转化番茄‘江苏14号’,实验中对不同筛选压浓度进行了梯度实验,确定潮霉素浓度。对抑菌素的种类和浓度进行选择,确定抑制超强活性农杆菌EHA105的方法,最终调整了适合ACOi基因转化番茄的遗传转化体系。获得12个抗性株系,通过GUS染色、PCR和PT-PCR检测,得到了3个转基因植株。结果表明：ACOi用于番茄的转化效率要高于DSACO。4、以‘明水’梨枝条为外植体,研究了无菌苗的获得,无菌苗的继代培养和增殖培养。以无菌苗的叶片为外植体,研究不同基本培养基,不同细胞分裂素和生长素组合等再生影响因素对叶片不定芽再生的影响。实验表明：以在NN69+TDZ 1.5 mg/L+IBA 0.2 mg/L+AgNO3 1.0 mg/L,暗培养25d,叶片不定芽再生率最高为71.8%。5、研究了不同浓度筛选压、不同菌液浓度和不同侵染时间、以及不同抑菌素浓度等因素对遗传转化的影响。分别建立了农杆菌介导DSACO基因和ACOi基因转化‘明水’梨的遗传转化体系。实验共获得9个抗性株系,对抗性株系进行了GUS染色,PCR和RT-PCR检测,确定在2个株系的‘明水’梨的基因组中成功整合入外源的DSACO基因并得到表达。

关键词： ‘明水’梨再生基因转化 DSACO ACOi 番茄

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

富士苹果芽变的细胞学与分子生物学鉴定研究

富士苹果芽变的细胞学与分子生物学鉴定研究

作者：宣继萍南京农业大学

学位级别：硕士

本文以16个富士系苹果的芽变初选优系及其对照品种富士、长富2、长富6为试材，进行了花粉粒形态性状、气孔大小密度等细胞学方面的研究，并应用RAPD和ISSR技术进行了分子生物学鉴定，结果如下： 1.无论是花粉粒的大小、形态还是气孔... 详细信息

本文以16个富士系苹果的芽变初选优系及其对照品种富士、长富2、长富6为试材，进行了花粉粒形态性状、气孔大小密度等细胞学方面的研究，并应用RAPD和ISSR技术进行了分子生物学鉴定，结果如下： 1.无论是花粉粒的大小、形态还是气孔的大小、密度，芽变初选优系与其对照之间均无显著差异，所有试材的花粉粒的形状均为圆三角形。 2.建立了苹果RAPD扩增反应体系：25μl反应液中，10×Buffer2.5μl MgCl2.0mM，dNTP0.19mM，primer 0.24μM，DNA30ng，Taq DNA polymerase 1U。 3.筛选了300个随机引物，其中S1147和S1189鉴别出丰6芽变初选优系;S1125、S1141、S1138鉴定出D芽变初选优系;S1073、S1039、S1064、S1056 鉴别出D芽变初选优系;S1124、S1127、S1140、S1179、S1181鉴别出了 D芽变初选优系;S1146、S1302、S1090、S1291鉴定出了D芽变初选优系。 4.建立了苹果ISSR反应体系：25μl反应液中，10×Buffer2.5μL， MgCl1.5mM，dNTP0.20mM，primer0.4μM，DNA30ng，Taq DNA polymerase 1U。 5.构建了富士、长富2、长富6、红星、新世纪、美国8号6个品种的ISSR 指纹图谱，其中IS061构建了富士、长富2、长富6三个品种的指纹图谱， IS026成功地构建了富士、红星、新世纪、美国8号的指纹图谱。 6.运用ISSR技术鉴定出了9个富士芽变初选优系，其中有5个芽变初选优系应用RAPD技术无法鉴定。

关键词：富士苹果,芽变鉴定,RAPD,ISSR

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

上海市松江区梨安全优质生产及产业发展研究

上海市松江区梨安全优质生产及产业发展研究

作者：沈根华南京农业大学

学位级别：硕士

松江区位于上海西南部,区域面积604.7km,属海洋性季风气候。松江地处太湖流域碟形洼地底部,境内地势低洼,大部分地区以青紫泥为主,在全区耕地面积中,海拔3.2米以下低洼地约占2/3。2004年农林牧渔业总产值22.5亿元,GDP8.3亿元,占全区GDP... 详细信息

松江区位于上海西南部,区域面积604.7km,属海洋性季风气候。松江地处太湖流域碟形洼地底部,境内地势低洼,大部分地区以青紫泥为主,在全区耕地面积中,海拔3.2米以下低洼地约占2/3。2004年农林牧渔业总产值22.5亿元,GDP8.3亿元,占全区GDP的1.5%。目前,蔬菜、瓜果、花卉、水产已成为农业的四大主导产业。松江果树栽培以梨、桃、葡萄及其他小水果为主,全区果树栽培面积1.9万亩,其中梨1万多亩,占全区果树栽培面积的52.6%,是上海梨生产的重要产地,面积及产量均占上海全市的1/3。近年来,在梨树生产上进行了市农委科技兴农项目《优质梨新品种和安全生产技术的开发》,四新技术推广项目《早熟、优质梨新品种的推广》以及《上海优质桃、梨生产技术的开发》等多项研究推广。本文是在此基础上,通过调查分析梨树生产存在的问题,结合当前梨安全优质生产的要求,提出了梨安全优质生产及产业发展的措施,并形成了研究报告。报告主要分四个方面,一是上海松江梨生产的基本情况和存在问题;二是安全优质生产的概念及标准,主要包括无公害、绿色、有机及上海市地方标准安全卫生优质四类;三是安全优质生产的关键技术要求,主要包括选择安全生产环境、选用良种、深沟高畦、授粉树配置、土肥水管理、花果管理,拉枝及摘心,棚架式栽培,果实套袋,综合防治,采收贮藏以及梨果安全性、商品性测定等。尤其在拉枝摘心、采收贮藏等方面进行了试验研究。通过拉枝摘心,可以达到梨快速成形,早结果,生产优质果品的目的;通过采收试验,确定了优质早熟梨早生新水、长寿、翠冠的最适采收期;同时通过贮藏试验确定,早生新水在20℃～30℃条件下,可存放10天左右,在试验研究和实践基础上,制定了《上海市松江区梨无公害生产技术规程》和绿色梨《上海仓桥水晶梨生产技术操作规程》。四是对松江梨产业发展目标、发展方向、发展模式及对策作了思考。提出了“十一五”期内建设梨树种苗繁育中心、技术推广中心、生产中心、营销中心以及梨文化展示展览中心的目标,按照生产区域化、标准化、安全化方向,推行企业化经营,社会化服务,加快梨产业发展。

关键词：松江区梨安全优质生产产业发展

三种基于逆转座子分子标记技术体系的建立及其在苹果芽变鉴定中的应用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

三种基于逆转座子分子标记技术体系的建立及其在苹果芽变鉴定中的...

作者：贾怀志南京农业大学

学位级别：硕士

逆转座子通过RNA为中介进行转座,在植物基因组中分布广泛,拷贝数多,异质高,在种内和种间表现出较高的序列差异性和丰富的插入多态性,而且其引起的突变为稳定突变,针对这些特点开发出的几种分子标记与常规分子标记比较,其优势在于能覆盖... 详细信息

逆转座子通过RNA为中介进行转座,在植物基因组中分布广泛,拷贝数多,异质高,在种内和种间表现出较高的序列差异性和丰富的插入多态性,而且其引起的突变为稳定突变,针对这些特点开发出的几种分子标记与常规分子标记比较,其优势在于能覆盖全基因组,揭示的多态性更丰富,在遗传多样性和系谱研究、遗传连锁图谱构建及性状基因定位方面具有很大的发展潜力。苹果(Malus)是果树中最易发生芽变的树种之一。目前生产上广泛应用的许多优良品种和品系都是通过芽变选种获得的,全世界苹果总产量中大约有一半左右来源于芽变品种。芽变在苹果的优良品种的选育上起着极其重要的作用。但是常规方法来鉴别苹果芽变品种相对困难,本文通过建立和优化的苹果IRAP、REMAP标记体系并结合SSAP标记对苹果芽变品种进行鉴定,主要研究结果如下: 1通过苹果逆转座子长末端重复序列(LTRs)保守区域设计引物,对影响苹果IRAP和REMAP反应体系的重要因素进行了研究:建立并优化了苹果IRAP和REMAP分子标记技术体系。优化的苹果IRAP标记体系为:25μL反应体系中,模板DNA 50ng、25mmol/LMgCl 2.5μL、dNTP 2.0μL、10×Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0U、10μmol/L引物0.8μL。优化的苹果REMAP标记体系为:基因组DNA 50ng、25mmol/L MgCl2.5μL、dNTP 2.0μL、10×Buffer 2.5μL、Taq DNA聚合酶1.0U、10μmol/L LTR引物0.8μL、10μmol/L ISSR引物0.8μL。 2通过建立的IRAP和REMAP标记体系对苹果富士系和元帅系芽变品种进行了鉴定,利用SSAP技术对苹果富士系芽变品种进行了鉴定。结果表明:IRAP分析中引物L7在富士系芽变中具有多态性,引物L1在元帅系芽变上具有多态性;REMAP分析中仅有引物组合L1/P5在富士系芽变品种中表现出一定的多态性;SSAP技术对苹果普通富士及其14个芽变品种进行的研究中,从60对引物中筛选出的6对引物中,L12/E7能够将所有富士芽变品种同母本区分开来,其余5对引物能够在芽变品种中区分秋富5号、烟富1、盛放富1和长富1号。由于SSAP多态性主要来源基因组内逆转座子的转座,因此,富士苹果芽变品种的产生可能与逆转座子的插入引起的转座有关,同时也为新品种的选育提供早期鉴定方法。

关键词：苹果逆转座子 IRAP REMAP SSAP 芽变

八棱海棠与水稻AP2/EREBP类转录因子的克隆及功能分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

八棱海棠与水稻AP2/EREBP类转录因子的克隆及功能分析

作者：付晓燕南京农业大学

学位级别：硕士

植物在其整个生活周期中，无时不处于变化着的环境中。干旱、高盐和低温是诸多非生物逆境中对作物危害最为严重的自然灾害，长期以来，人们都非常关注对这种非生物胁迫的研究。通常在逆境条件下，植物能感知、传递逆境胁迫信号，诱导相... 详细信息

植物在其整个生活周期中，无时不处于变化着的环境中。干旱、高盐和低温是诸多非生物逆境中对作物危害最为严重的自然灾害，长期以来，人们都非常关注对这种非生物胁迫的研究。通常在逆境条件下，植物能感知、传递逆境胁迫信号，诱导相关功能基因的表达，在生理生化上作出适应性响应。而转录因子在植物逆境信号传递，相关功能基因的表达调控及发育阶段的调控中发挥着关键作用。AP2／EREBP类转录因子是一类调控植物发育且与植物胁迫抗性相关的转录因子，目前拟南芥和水稻中与干旱、高盐和低温相关的AP2／EREBP类转录因子研究得比较深入。其中，DREB和ERF类转录因子可能参与了生物胁迫和非生物胁迫。但对于苹果等木本植物的相关研究还鲜有报道。因此从八棱海棠中克隆类似的转录因子将具有重要的理论意义和现实意义。本研究中利用水稻作为一种模式植物以顺式调控元件DRE和ERE为诱饵，通过“酵母单杂交”的方法从水稻cDNA文库中筛选获得了能够与ERE序列特异性结合的转录因子OsAP25和能够与DRE序列特异性结合的转录因子OsDREB1A并分别对其进行生物信息学分析和逆境环境下的表达分析。根据氨基酸序列的同源性和序列的结构特征，除了OsDREB1A基因，所克隆到的OsAP25基因是还未见报道的新基因。OsAP25转录因子基因的核苷酸序列分析表明，该基因含有1035bp的开放阅读框(ORF)，推测编码345个氨基酸，蛋白质分子量为36.4kDa，等电点(pI)为5.54。它也具有ERF类转录因子的典型结构特征，N-端和C-端富含酸性氨基酸，推测为转录激活区;C-端有一个富含碱性氨基酸区推测为核定位信号区(NLS);在C-端还有一个特有的MAP位点作为激活区;中间是由58个氨基酸组成的保守的DNA结合域(ERF结构域)，其第13位和18位分别为丙氨酸(A)和天冬氨酸(D)。根据拟南芥DREB类基因序列和水稻基因组序列比对后，得到5个相似序列，设计简并引物，利用RACE方法从八棱海棠cDNA库中扩增出编码AP2／EREBP蛋白的基因MrDREB2A。根据核苷酸推测的氨基酸序列分析显示，所编码的蛋白具有DREB转录因子的一些典型特征：由58个氨基酸组成的AP2结构域中含有第13位的缬氨酸(V)和第18位的亮氨酸(L)。进一步分析发现，MrDREB2A属于DREB(A-6亚族)类转录因子。利用RT-PCR分别分析了OsAP25和MrDREB2A基因的表达特性。试验结果表明，OsAP25基因的转录依赖于ABA，受干旱、高盐和低温的诱导，而乙烯也微弱地激活了OsAP25基因的转录表达;MrDREB2A基因受到高盐、低温和干旱的诱导，对ABA也有强烈的响应。组织表达特异性检测表明，OsAP25在叶和根中转录水平很高，在茎中较低;MrDREB2A在叶中表达较高，在根和茎中的表达量略低。综上所述，DREB和ERF转录因子的克隆为改良作物的抗逆性提供了候选基因。

关键词：八棱海棠 MrDREB2A RACE 水稻 OsAP25 酵母单杂交

砂梨核微卫星位点的开发和杂交F1代的SSR分析

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

砂梨核微卫星位点的开发和杂交F1代的SSR分析

作者：王铤南京农业大学

学位级别：硕士

核微卫星(Nuclear Microsatellite,nSSR)是非常有效的分子标记工具,广泛应用于植物遗传结构、系统发育、亲缘关系等研究,但目前梨的nSSR标记还很少。因此,本文应用精确预测法进行了砂梨核nSSR的开发,能为梨属果树及其近缘种遗传结构、... 详细信息

核微卫星(Nuclear Microsatellite,nSSR)是非常有效的分子标记工具,广泛应用于植物遗传结构、系统发育、亲缘关系等研究,但目前梨的nSSR标记还很少。因此,本文应用精确预测法进行了砂梨核nSSR的开发,能为梨属果树及其近缘种遗传结构、亲缘关系等方面的研究提供有效工具。梨是原产于我国的最古老的果树种类之一,在水果生产中占有重要的地位。但是目前利用SSR技术构建梨遗传图谱的研究和应用较少,而梨遗传连锁图谱的构建和重要农艺性状和基因的定位对于拓展梨属的基因资源有着重大的意义。故本试验选用西子绿与喜水为杂交亲本及其F代共77个样本为作图群体。运用SSR分子标记技术,初步构建了砂梨分子遗传图谱。本试验获得的主要成果如下: 1以硅胶干燥保存的梨夏秋叶片为试材,对基因组DNA提取方法进行了研究。通过对CTAB方法的改进,提取梨DNA时不仅快速而且蛋白质、RNA、多糖等杂质较少,OD/OD在1.7-2.0之间,能满足酶切、PCR等试验的要求。同时对梅、苹果、桃、杏等果树夏秋叶片样品进行了通用性检验,同样高效快速地获得了高质量的DNA。 2由于具高变异性、重复性、共显性、在真核生物中的丰富性使得SSR成为在DNA指纹图谱、亲缘关系分析、连锁图谱和群体遗传分析方面有用的分子工具。但SSR开发方法的效率限制了它的应用。本文利用改进的亲和捕捉法来富集微卫星,并采用精确预测(AFC)模型来开发梨SSR分子标记。结果126个阳性克隆中随机挑选60个,其中38个克隆获得了特异的产物富集效率达到63%;根据模型推荐的前10个克隆进行测序,10个序列均为完整的微卫星片段,测序效率达到100%。高效开发出了梨SSR分子标记。 3通过优化PCR反应的退火温度和反应体系等参数,筛选多态性丰富的SSR引物,建立了适合梨的SSR分析技术体系:梨SSR分析的PCR反应体系以25μL为宜,含10×Buffer2.5μL,25mM MgCl 1.5μL,2.5mM dNTP 1.6μL,15 ng/μL Primer各1.0μL,5U/μL Taq聚合酶0.15μL,模板DNA(50 ng/μL)2.0μL。各引物复性温度梯度试验结果表明,所筛选的12对SSR引物的最佳复性温度在45℃到50℃之间。从40对SSR引物中筛选获得在双亲间存在多态性的引物12对,多态性比例为30.7%,这些引物适合用于构建梨遗传图谱的SSR分析。 4应用JoinMap3.0软件,初步构建了西子绿×喜水梨共4个遗传连锁群,包括12个孟德尔分离标记,覆盖梨基因组130.0cM,平均每两个连锁标记间的遗传距离为10.8cM,连锁群中标记间最大的遗传距离26.0cM,最小的遗传距离是6.0cM。其可,Group1和Group3连锁群分别含有4个标记,含标记数最多,长度分别为71.0cM,50.0cM,最长的连锁群Group1,长度为71.0cM,包括4个标记,最短的连锁群Group2只有2个标记,长度为19.0cM。

关键词：梨微卫星开发精确预测模型遗传图谱