检索结果-南通市图书馆

作者：姚春潮西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以美味猕猴桃20个品种(株系)、中华猕猴桃15个品种(株系)及美味猕猴桃海瓦德×秦雄201人工控制杂交群体14个单株共计49份材料为试材,首先以亲本海瓦德和秦雄201的DNA为模板,对随机引物进行筛选,然后以F代6个植株的DNA等量混合的雌... 详细信息

本研究以美味猕猴桃20个品种(株系)、中华猕猴桃15个品种(株系)及美味猕猴桃海瓦德×秦雄201人工控制杂交群体14个单株共计49份材料为试材,首先以亲本海瓦德和秦雄201的DNA为模板,对随机引物进行筛选,然后以F代6个植株的DNA等量混合的雌性DNA样与雄性DNA样为模板,对引物进一步筛选,最后用杂交组合F代个体DNA为模板,获得了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032和S79,并对所得标记的有效性在中华猕猴桃和美味猕猴桃上进行了验证。同时对获得的与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032进行了测序及序列相似性分析。取得的主要结果如下: 1.通过对300个随机引物的筛选和研究,得到了与猕猴桃雄性基因连锁的RAPD标记S1032和S79。在中华猕猴桃、美味猕猴桃雌雄个体上进一步验证发现:标记S1032存在于研究所用的22株雄株中,在27株雌性个体中只有4株存在标记片段S1032;标记S79在22株雄株中有19株存在(在F代6株雄株有5株存在),在27株雌性个体中有13株存在标记片段S79(在F代6株雌株有1株存在)。表明猕猴桃雄性基因连锁的标记S1032与实际符合率高于标记S79。 2.从美味猕猴桃“秦雄201”亲本和中华猕猴桃“江西78-1”中分别回收了特异标记S1032的DNA片段,对它们进行了克隆、测序,获得了S1032标记的核苷酸序列,其由867 bp的特定碱基序列组成。将来自于中华猕猴桃雄性标记S1032的特定碱基序列片段登陆Genbank,其登陆号为AY336259。为进一步将RAPD标记转化为SCAR标记和利用特定碱基序列及基因连锁图谱克隆雄性基因奠定基础。 3.利用BLAST工具对美味猕猴桃和中华猕猴桃特异标记S1032的DNA片段碱基序列进行了相似性分析,两序列的相似性达97%。在CBI库中,利用BLAST工具对美味猕猴桃特异标记S1032的DNA序列相似性分析发现,该序列与其它生物体DNA序列同源性较小,为猕猴桃基因组所特有。

关键词：猕猴桃 RAPD标记性别连锁克隆测序

中国野葡萄醛脱氢酶基因遗传转化拟南芥的研究

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中国野葡萄醛脱氢酶基因遗传转化拟南芥的研究

作者：雷龑西北农林科技大学

学位级别：硕士

对中国野葡萄醛脱氢酶(ALDH)基因进行了遗传转化拟南芥的研究。取得的主要成果如下: 1.以课题组前期研究获得的重组质粒pGEM-T-ALDH为模板,通过PCR扩增ALDH基因片段,将其与pENTR/D-Topo载体连接后获得入门克隆载体pENTR/D-ALDH,将pENTR/... 详细信息

对中国野葡萄醛脱氢酶(ALDH)基因进行了遗传转化拟南芥的研究。取得的主要成果如下: 1.以课题组前期研究获得的重组质粒pGEM-T-ALDH为模板,通过PCR扩增ALDH基因片段,将其与pENTR/D-Topo载体连接后获得入门克隆载体pENTR/D-ALDH,将pENTR/D-ALDH与质粒pHellsgate8进行LR反应后获得葡萄ALDH基因的植物干扰表达载体pHellsgate8-ALDH。 2.将质粒pWR306中包含ED35s启动子、Omega元件及TNOS终止子的一段核苷酸序列定向克隆到质粒pCAMBIA 1300,构建了中间过量表达载体pWR-Ⅱ;将重组质粒pGEM-T-ALDH的ALDH基因片段定向克隆到中间过量表达载体pWR-Ⅱ,构建了葡萄ALDH基因的植物过量表达载pWR-Ⅱ-ALDH。 3.以农杆菌介导的花序浸沾法转化拟南芥,分别获得了卡那霉素抗性株系20株和潮霉素抗性株系9株。PCR检测证明卡那霉素抗性株系中7个为阳性株系,潮霉素抗性株系中3个为阳性株系。 4.对经PCR检测呈阳性的过量表达载体转基因拟南芥进行Real-Time PCR检测,结果表明在转基因植株中,ALDH的相对表达量远高于野生型。转基因突变体植株和野生植株在形态上有一定的差异,说明葡萄ALDH基因在拟南芥中表达对其生长发育有一定影响。

关键词：中国野生葡萄醛脱氢酶基因 RNA干扰载体过量表达载体拟南芥

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电火花加工参数优化的研究

电火花加工参数优化的研究

作者：孙志伟华南理工大学

学位级别：硕士

电火花成形加工已经成为机械行业中一种必不可少的重要加工方法,拥有独特的加工优势,目前已经广泛地应用于模具制造、电子、仪器、汽车等领域。在电火花成形加工中,选择合理的电参数对于放电加工效率、加工质量以及电极的损耗等加工工... 详细信息

电火花成形加工已经成为机械行业中一种必不可少的重要加工方法,拥有独特的加工优势,目前已经广泛地应用于模具制造、电子、仪器、汽车等领域。在电火花成形加工中,选择合理的电参数对于放电加工效率、加工质量以及电极的损耗等加工工艺效果有很大的影响。传统的电参数的选择仍旧依靠操作员工的经验,效果很差。耐普罗机械(广州)有限公司,是一家以生产手机模具而驰名的模具生产厂商,常年为Nokia、Motorola、NEC、博世、高露洁等国际大公司生产模具。论文针对公司电火花成形加工效率低的情况,对电火花成形加工中参数的选择优化进行了研究。分析电火花成形加工原理,将电火花成形加工的放电过程分为放电通道的形成、放电能量的转换、电蚀物抛出、极间介质冷却四个阶段,并对正常火花放电、过渡放电、电弧放电作了比较,电弧放电是对电加工有害的放电:分析脉冲宽度、脉冲间隙、峰值电流、伺服电压与加工速度、表面粗糙度、电极损耗之间的关系,为进行电火花成形加工单因素试验提供理论基础。在日本牧野(MAKNO)公司所生产的EDNC65机床上进行单因素影响试验,分别对加工精度、加工速度、工具电极损耗这三方面设计单因素试验,得出脉冲宽度、脉冲间隙、峰值电流、伺服电压与加工质量之间的直观关系。电火花成形加工中电参数的优化,是多目标优化。分析传统的多目标优化的方法,总结传统方法的缺点。介绍基于遗传算法的多目标优化方法及其特点,遗传算法具有抗干扰性强、善于解决非线性问题等优点,适合解决电参数优化问题。带精英策略的快速非支配遗传算法,解决了非支配遗传算法计算复杂度高、优良个体被破坏等问题。建立基于带精英策略的快速非支配排序遗传算法的电火花成形加工电参数优化模型。论文针对东洋碳素石墨电极材料IS063,常用模具钢材8407的电火花成形加工,进行了基于带精英策略的非支配排序遗传算法的电火花成形加工电参数选择优化,并在此模型基础上进行了MATLAB编程,计算结果显示,电火花加工平均加工速度随着迭代次数逐渐增大,迭代25次后趋于稳定。采用优化前和优化后的电参数进行实例加工,结果显示运用此方法进行电参数的优化可以提高电火花成形加工的效率、加工质量、降低电极的损耗,在粗加工中加工速度提高了22.8%;在精加工中,粗糙度减低了?13%,同时加工速度降低了10.17%。

关键词：电火花加工电参数多目标优化遗传算法精英策略

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温室葡萄枝叶徒长的调控技术研究

温室葡萄枝叶徒长的调控技术研究

作者：张国强山西农业大学

学位级别：硕士

本文针对温室葡萄的枝叶徒长现象,在分析原因的基础上,采取了不同整枝方式与PP333浓度的技术调控处理,分别调查研究了无核早红葡萄枝、叶、果在处理后的生长发育质量与解剖结构的变化,研究结果表明: (1)不同整枝方式的温室葡萄,在PP333... 详细信息

本文针对温室葡萄的枝叶徒长现象,在分析原因的基础上,采取了不同整枝方式与PP333浓度的技术调控处理,分别调查研究了无核早红葡萄枝、叶、果在处理后的生长发育质量与解剖结构的变化,研究结果表明: (1)不同整枝方式的温室葡萄,在PP333处理后其新梢生长动态表现不同,水平整枝比直立整枝的新梢生长曲线明显缓和,生长速率和长度均明显减小。 (2)温室葡萄采取水平整枝方式加适合的化学调控,可以有效地防止新梢徒长现象,从而达到露地葡萄的生长状态。PP333处理的最佳浓度为1500mg/kg。 (3)PP333在叶面喷施温室葡萄新梢后,控制徒长的有效期仅23 天左右。 (4)温室葡萄的新梢在PP333喷施后,对其次生木质部导管细胞发育抑制作用的大小与PP333浓度呈正比。水平枝受到的抑制作用比直立枝更明显。 (5)喷施PP333能显著提高温室葡萄叶片中叶绿素a、叶绿素b 和总叶绿素的含量,最佳浓度为1500mg/kg。 (6)水平整枝方式下叶片的栅栏组织厚度、海绵组织厚度、总厚度、叶绿素含量、净光合速率和果实的穗重、含糖量等都显著大于直立整枝方式;用PP333处理时这些指标均有明显的增加效应,并且直立枝以2000mg/kg 浓度最佳,而水平枝则以1500mg/kg 浓度最佳。 (7)叶片的蒸腾速率、气孔导度和叶肉细胞间隙CO2浓度三项指标受PP333处理影响较小,无明显规律性,但在一定程度上受整枝方式影响。 (8)从有效控制新梢徒长从而提高枝、芽、叶、果质量的角度上说,温室葡萄最好按枝条水平分布的棚架树形培养,而不宜培养成直立性篱架树形。

关键词：温室葡萄徒长控制 PP333 整枝方式

木质包装热处理中心温度与可测环境参数的相关性研究

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木质包装热处理中心温度与可测环境参数的相关性研究

作者：李丽福建农林大学

学位级别：硕士

植保公约组织制定的木质包装热处理标准“木材中心温度达到56℃后处理30min以上”，从目前的研究结果看来，完全能够有效杀死木质包装携带的真菌、昆虫和线虫。这一处理指标的关键是准确确定木材的中心温度，然而在实践中，直接测定木... 详细信息

植保公约组织制定的木质包装热处理标准“木材中心温度达到56℃后处理30min以上”，从目前的研究结果看来，完全能够有效杀死木质包装携带的真菌、昆虫和线虫。这一处理指标的关键是准确确定木材的中心温度，然而在实践中，直接测定木材的中心温度需要较高的技术，企业自行测定不能保证除害效果。因此通过实验室内准确的检测，建立相应的规范，使其在应用中只需监测热处理设施中的温湿度，从而实现木质包装热处理简便易行具有重要的意义。通过不同厚度、含水率、加热温湿度和木材初始温度对木材中心升温影响的研究结果表明：木材厚度、含水率和初始温度与升温速率负相关，加热空气温度和湿度与升温速率正相关，其中厚度对木材热传导速率的影响最大，表现为极显著相关;其次是加热空气温度和木材含水率：加热空气的湿度易受外界条件的影响，和加热温度存在着交互关系，热的传导始终处于不稳定状态，和升温速率的相关性较低。另外，研究木材初温和材质对升温速率的影响结果表明：初始温度低，木段内外存在较大的温度差，有利于热传导，升温速率增大;密度低的木材，细胞腔比例高、热扩散率大，升温速率加快。初步探索了影响因子的交互作用、木材表面温度与湿球温度的关系、木材热传导速率与表面温度的关系，从而建立了通过环境参数预测木材中心温度的初步模型，预测值和实际值之间的差距较小。但由于试验还在进行中，方程有待进一步在实际处理条件下检验和验证，故在论文中没有列出。

关键词：木质包装热处理除害处理植物检疫升温速率

百合查尔酮合成酶基因花特异启动子的功能分析

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百合查尔酮合成酶基因花特异启动子的功能分析

作者：常小丽西北农林科技大学

学位级别：硕士

百合花姿雅致、娟秀,花茎挺拔,是点缀庭园、盆栽与切花的名贵花卉,深受世界各国人民的喜爱。近年来,百合的品质改良围绕花色、花型、花香等观赏性状以及百合抗衰老、抗病研究等方面进行了许多研究,取得了可喜的成果。如何将人们希望的... 详细信息

百合花姿雅致、娟秀,花茎挺拔,是点缀庭园、盆栽与切花的名贵花卉,深受世界各国人民的喜爱。近年来,百合的品质改良围绕花色、花型、花香等观赏性状以及百合抗衰老、抗病研究等方面进行了许多研究,取得了可喜的成果。如何将人们希望的性状通过基因工程的手段转入百合,以获得更多的稳定遗传的新、奇、特的百合新品种,是目前百合育种学家所面临的问题。本研究在前人从百合中克隆获得查尔酮合成酶基因（chs）启动子的基础上,对该启动子的功能进行了初步的分析,旨在获得百合花器官特异、高效表达的启动子,为载体构建提供有效的调控元件,为应用该花特异启动子调控外源基因在花中特异表达,培育花卉新品种,提高花卉观赏价值提供科学依据。本研究取得的主要结果如下: 1、构建了植物表达载体以chsA-F和chsA-R为引物扩增pCHS模板,将启动子片段克隆到pGEM-T-easy载体上,获得重组质粒pCHS-T。用BamHⅠ和EcoRⅠ对双元表达载体pCAMBIA 1381和重组质粒pCHS-T进行双酶切,将启动子片段构建到pCAMBIA 1381中,用于驱动gus基因的表达,得到植物表达载体pCAM-CHS。用冻融法将该植物表达载体pCAM-CHS直接导入根癌农杆菌EHA105菌株中,通过农杆菌菌液PCR检测,表明该载体已成功导入农杆菌EHA105菌株中。 2、转化拟南芥并进行了PCR检测通过花序浸润法（Floral Dip）转化拟南芥,经潮霉素抗性筛选,获得阳性植株43株,转化效率为2.5%～3%。随机选取9株提取DNA,用hyg基因、gus基因和chs启动子的3对引物进行了PCR检测,9株转基因植物的DNA都扩增出了hyg基因和chs启动子,7株扩增出了gus基因,未转化植株3个基因均未扩增出来。 3、对转基因植株进行了GUS组织化学检测对转基因植株不同部位的组织进行GUS检测,经X-gluc染色显示,花序中有明显的蓝色,叶腋处有微量的蓝色,茎、根及荚果中都无蓝色出现。表明在转基因拟南芥的花中表现很强的GUS活性,茎、叶、根及荚果中无表达,叶腋处有微量表达,证明查尔酮合成酶基因启动子在转基因植株中能驱动外源基因的表达,具有明显的组织器官特异性。

关键词：百合花特异启动子载体构建 GUS

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无核香味葡萄胚挽救创新种质研究

无核香味葡萄胚挽救创新种质研究

作者：陈烁西北农林科技大学

学位级别：硕士

无核葡萄是当今世界葡萄重要的育种方向与研究内容。目前,生产中栽培的无核且具有香味的葡萄品种还非常有限,因此培育将无核和香味两个性状叠加于一体的新品种是葡萄育种研究中的重要目标。利用胚挽救技术,选取无核葡萄品种作母本,配备... 详细信息

无核葡萄是当今世界葡萄重要的育种方向与研究内容。目前,生产中栽培的无核且具有香味的葡萄品种还非常有限,因此培育将无核和香味两个性状叠加于一体的新品种是葡萄育种研究中的重要目标。利用胚挽救技术,选取无核葡萄品种作母本,配备具有浓郁玫瑰香味的葡萄品种为父本,杂交后获得具有稳定遗传的子代株系在现今葡萄优质种质资源培育工作中具有重要意义。本研究通过荧光实时定量PCR分析萜类物质合成关键酶基因表达水平后确定了杂交父本为5个玫瑰香味品种,并选择9个无核葡萄品种作杂交母本,共配置11个无核玫瑰香味杂交组合,进行离体胚挽救培养。利用无核分子标记对杂交子代进行无核性状早期辅助选择鉴定,主要研究结果如下:(1)香味亲本的筛选:玫瑰香葡萄品种独特的气味与萜类物质的存在有关。本研究以‘玫瑰香’、‘183’等8个鲜食葡萄成熟果实为试材,检测萜类物质合成途径关键酶基因在不同葡萄中的表达情况。其中调控萜类物质合成途径前期的关键酶基因DXS1、DXS3、DXR及HDR分别在‘阳光玫瑰’‘183’‘玫瑰香’中表达量最高;控萜类物质合成途径中期的关键酶基因GPPS及FPPS分别在‘183’及‘阳光玫瑰’中表达量最高;调控萜类物质合成途径晚期的关键酶基因Linnalool syn和α-Terpineol syn分别在‘阳光玫瑰’及‘183’中表达量最高,α-Terpineol syn相较于其它酶基因在各成熟葡萄果实中的表达量也是最高的,是其它酶基因表达量的10-65倍。(2)配置无核香味杂交组合:根据萜类物质合成关键酶基因表达分析筛选出萜类物质合成酶基因表达水平较高的品种配置杂交组合11个,通过胚挽救育种流程得到杂种后代477株,继代移栽327株;其中以‘红宝石无核’与‘Fresno Seedless’作母本的香味无核胚挽救杂交组合胚挽救效果较好,以‘玫瑰香’及‘183’作父本的香味无核胚挽救杂交组合成苗率较高,杂交组合‘红宝石无核×阳光玫瑰’胚的发育率和成苗率最高,分别为55.6%和38.82%;‘红宝石无核’与‘Fresno Seedless’适合作为胚挽救育种的母本材料,‘玫瑰香’与‘183’适合作为父本材料。(3)杂种幼果最佳采样时间确定:对无核香味胚挽救杂交组合的幼果进行连续取样,以‘京早晶’为母本的杂交组合在授粉后40 d时成苗率最高,达到14.29%;‘Fresno Seedless’为母本的杂交组合在授粉后36 d成苗率最高,为33.33%;‘Australian seedless’为母本的杂交组合在授粉后的33 d成苗率最高,达到36.00%。(4)幼胚发育与萌发培养基成分优化:在以WPM为基础培养基,添加浓度为:0.1 mg·LBR+0.2 mg·L 6-BA时萌发率最高,55.88%,高于对照21.59%;同时添加BR和IAA两种外源激素对胚萌发有抑制作用;添加BR的杂种胚在生根成苗过程中根系生长较未添加BR的杂种苗健壮。(5)分子标记辅助选择:使用无核基因探针GSLP1-569与无核分子标记SCF27-2000对F代的56个株系进行早期无核性状鉴定,其中14个株系同时携带以上两种无核分子标记的特异条带,初步判断这14株杂种株系携带无核性状。综上,本研究共获得无核玫瑰香味杂种胚挽救苗327株,从中筛选56个株系进行早期无核性状鉴定,得到14个株系同时携带两种不同无核分子标记的特异条带;筛选出‘红宝石无核’、‘Fresno Seedless’两个优势母本品种,结合亲本萜类物质合成关键酶基因表达分析结果适合用作香味胚挽救育种父本的有‘玫瑰香’及‘183’;确定了以‘京早晶’‘Fresno Seedless’及‘Australian seedless’为母本的杂交组合最佳采样时间分别为授粉后40天、36天和33天;得到优化的胚萌发培养基:WPM+0.1 mg·L BR+0.2 mg·L6-BA。

关键词：葡萄无核性状萜类物质合成基因表达香味胚挽救育种分子标记辅助选择

引进美国制汁葡萄品种农艺生物学性状鉴定研究

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引进美国制汁葡萄品种农艺生物学性状鉴定研究

作者：高奇超西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究以从美国引进的制汁葡萄品种卡托巴、康可、黄金玫瑰、玫瑰露、康拜尔为试材,于2009010年,在陕西杨凌地区,初步观察和记载了其物候期、植物学性状、生长结果习性等生物学特性,调查和分析了其对白粉病、黑痘病、霜霉病的综合抗性,... 详细信息

本研究以从美国引进的制汁葡萄品种卡托巴、康可、黄金玫瑰、玫瑰露、康拜尔为试材,于2009010年,在陕西杨凌地区,初步观察和记载了其物候期、植物学性状、生长结果习性等生物学特性,调查和分析了其对白粉病、黑痘病、霜霉病的综合抗性,并研究了其光合特性。旨在探索引进制汁葡萄的基本特征和不同品种间的差异,加深对其农艺性状及生理特性的系统认识,以期为生产上推广应用提供理论依据。研究结果表明: 1.引进制汁葡萄品种均于3月下旬开始萌芽,玫瑰露和康拜尔于8月中旬成熟,属于中熟品种;卡托巴、康可、黄金玫瑰于9月中旬成熟,属于晚熟品种。 2.引进制汁葡萄品种在陕西杨凌地区不仅能正常生长,而且表现出了美洲种或欧美杂交种典型的植物学特性。其成龄叶大小在149.3-355.3cm之间;成熟枝条节间长度在5.55.5cm之间,节间粗度在0.4-0.9cm之间;果穗大小在18.664.2cm之间,平均穗重在15.513.8g之间;果粒大小在1.32-4.56cm2之间,平均粒重在0.8-4.4g之间;出汁率在61.8-70.2%之间。 3.植株生长势卡托巴、康可和黄金玫瑰较强,玫瑰露和康拜尔较弱。它们的萌芽率在64.6-86.2%之间;结果枝百分率在54.5-91.4%之间;每结果枝果穗数在1.4.1之间;平均单株产量在63.4-5350.0g之间。其中康可的萌芽率、结果枝百分率、每结果枝果穗数均较高,黄金玫瑰的平均单株产量最高,达到5350.0g。 4.引进制汁葡萄品种对白粉病、黑痘病和霜霉病均表现出较强的抗性。对白粉病的抗性,康可、玫瑰露和康拜尔达到高抗的水平,卡托巴和黄金玫瑰处于抗病水平;对黑痘病的抗性,引进品种均达抗病水平;对霜霉病的抗性,除玫瑰露为高抗外,其它引进品种均表现为抗病。 5.引进制汁葡萄品种光补偿点在23.9-42.2μmol·m·s之间;光饱和点在1575.0642.9μmol·m·s之间;CO2补偿点在65.1-74.3μmol·mol之间;CO2饱和点在897.5061.7μmol·mol之间。与卡托巴和康可相比,黄金玫瑰的净光合速率、表观量子效率、羧化效率及RuBP最大再生速率均较高,表现出了较强的光合能力,这与其连续两年都获得较高的产量相一致。

关键词：制汁葡萄生物学特性抗病性光合特性

中国野生华东葡萄‘白河-35-1’抗白粉病相关基因表达分析

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中国野生华东葡萄‘白河-35-1’抗白粉病相关基因表达分析

作者：王欢西北农林科技大学

学位级别：硕士

葡萄是一种世界性重要的经济作物，其栽培面积与产量均位居世界水果生产前列。然而，葡萄白粉病为危害葡萄生产产业的主要真菌病害之一，严重影响了葡萄的果实品质。我国拥有丰富的野生葡萄资源，对白粉病有较高的抗性。其中，中国野生... 详细信息

葡萄是一种世界性重要的经济作物，其栽培面积与产量均位居世界水果生产前列。然而，葡萄白粉病为危害葡萄生产产业的主要真菌病害之一，严重影响了葡萄的果实品质。我国拥有丰富的野生葡萄资源，对白粉病有较高的抗性。其中，中国野生华东葡萄‘白河-35-1’（Vitis pseudoreticulata），为高抗葡萄白粉病（Uncinula necator）的一个野生葡萄资源，是研究葡萄抗白粉病机制的典型材料。葡萄中的白藜芦醇是受生物与非生物胁迫诱导产生的一种植保素。它在植物防御反应中发挥着极其重要的作用，同时还具有抗癌、抗氧化、抗肿瘤等多种医疗保健作用，而芪合成酶是催化葡萄合成白藜芦醇（Resveratrol）的关键酶。脂类相关质体蛋白VpPAP1受病原菌诱导积累，并参与葡萄抗病防御反应。因此，本文以中国野生华东葡萄‘白河-35-1’为研究材料，对其两个抗白粉病相关基因芪合成酶基因（VpSTS2）的及脂类相关质体蛋白基因（VpPAP1）进行表达分析的研究，主要取得以下结果： 1.以两个欧洲葡萄品种无核白（Vitis vinifera *** Seedless）和火焰无核（Vitis vinifera *** Seedless）的雄蕊和花蕾为外植体比较了2种诱导培养基（PIV和MC）的胚性愈伤诱导效率。结果表明，PIV比较适用于无核白雄蕊胚性愈伤的诱导，诱导率为2.3%，而MC培养基较适用于火焰无核雄蕊胚性愈伤的诱导，诱导率为1.9%。 2.将中国野生华东葡萄芪合成酶基因VpSTS2与GFP报告基因融合植物表达载体pC2300-35S-VpSTS2-GFP。亚细胞定位试验表明，VpSTS2定位在细胞质、细胞壁和细胞膜上。将植物表达载体pC2300-35S-VpSTS2-GFP转化欧洲葡萄品种无核白，获得抗性植株8株，经初步PCR检测有2株为阳性植株。 3.本课题组前期从中国野生华东葡萄（Vitis pseudoreticulata）高抗白粉病株系“白河-35-1”的芪合成酶基因上游调控序列中获得1772bp的芪合成酶基因启动子，并添加不同增强元件CaMV35S-enhancer、Omega构建三个不同的增强表达载体。本研究比较了转基因拟南芥中不同调控序列对VpSTS2基因的调控作用。结果如下： Real-time PCR分析接种白粉菌的转基因拟南芥叶片中，不同增强元件控制的VpSTS2基因的表达模式，结果发现，芪合成酶基因启动子添加CaMV35S-Omega调控下的VpSTS2基因表达水平最高。通过高效液相色谱对接种白粉病后的转基因植株和野生型拟南芥进行白藜芦醇含量的测定，结果发现在转基因株系中只检测到反式白藜芦醇苷的存在。其中，CaMV35S-Omega调控的转化植株反式白藜芦醇苷含量最高，含有增强元件Enhancer的转化植株次之，Omega最低，而在野生型拟南芥中没有检测到反式白藜芦醇苷的存在。 4.以前期获得的葡萄cDNA全长文库为基础，克隆了中国野生华东葡萄‘白河-35-1’（Vitis pseudoreticulata‘Baihe-35-1’）脂类相关质体蛋白基因VpPAP1（GenBank登录号JN624817）。序列分析表明，VpPAP1基因cDNA编码区全长为1034bp，其中5’-UTR和3’-UTR区域分别为26bp和63bp，开放阅读框为945bp，编码314个氨基酸，分子量为34169.37Da，等电点为7.76。葡萄叶片接种白粉菌Uncinula necator （Schw.） Burr.后，运用实时定量PCR技术分析VpPAP1基因的表达模式，在接种后24h达到峰值。

关键词：葡萄芪合成酶基因调控元件遗传转化脂类相关质体蛋白基因

中国野生毛葡萄芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21调控抗白粉病的研究

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中国野生毛葡萄芪合酶基因VqSTS9和VqSTS21调控抗白粉病的研究

作者：丁茜西北农林科技大学

学位级别：硕士

葡萄是世界四大水果之一,在我国享有较高的经济地位。目前世界范围内主栽品种欧洲葡萄(Vitis vinifera)品质优良但抗病性较差,尤其易感白粉病。研究表明,白藜芦醇不仅在植物体内具有一定的抗病功能,而且对人体也有抗癌、抗氧化等保健功... 详细信息

葡萄是世界四大水果之一,在我国享有较高的经济地位。目前世界范围内主栽品种欧洲葡萄(Vitis vinifera)品质优良但抗病性较差,尤其易感白粉病。研究表明,白藜芦醇不仅在植物体内具有一定的抗病功能,而且对人体也有抗癌、抗氧化等保健功能。而芪合酶是白藜芦醇代谢途径的关键酶。因此,研究芪合酶基因(Stilbene synthase,STS)及其表达产物白藜芦醇对葡萄抗病育种有重要的意义。本课题组前期研究发现,中国野生毛葡萄‘丹凤-2’的果实中不仅白藜芦醇含量较高,而且对白粉病有较强的抗性。本研究以‘丹凤-2’为材料,克隆在成熟果实中表达较高的芪合酶基因Vq STS9和在幼叶中表达较高的芪合酶基因Vq STS21,构建植物过表达载体,用农杆菌介导法转入到欧洲葡萄无核白中,对基因表达特性进行了研究,主要研究与结果如下:1、通过对叶片人工接种白粉菌后,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析Vq STS9与Vq STS21在0、12、24、48、72、96、120、144 h不同时间段的表达。用同源序列克隆得到中国野生毛葡萄芪合酶基因Vq STS9(JQ868689)和Vq STS21(JQ868677),c DNA序列大小1179 bp,编码392个氨基酸,定位于16号染色体,分别与欧洲葡萄Vv STS6、Vv STS2相似度最高。2、以欧洲葡萄无核白、红地球、赤霞珠的单芽茎段为外植体,在IM0-IM3培养基上逐步诱导出愈伤组织。将带有目的基因Vq STS9、Vq STS21的过表达载体利用农杆菌介导法转入无核白中,共获得419棵无核白抗性植株,包括转Vq STS9和Vq STS21基因抗性苗,分别为223和196棵。经不同水平的检测,包括PCR和Western blot检测,最终鉴定出过表达Vq STS9和Vq STS21基因无核白植株分别有4株和3株。3、通过q RT-PCR分析转基因植株中与白藜芦醇合成相关的转录因子(MYB14、MYB15)和相关基因(STS、PAL、RSGT、CHS)表达。结果表明,转Vq STS9和Vq STS21基因无核白植株中芪合酶(STS)基因与苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)、白藜芦醇糖基转移酶基因(RSGT)、转录因子(MYB14、MYB15)的表达不同程度上升,而与葡萄STS竞争底物的查尔酮合成酶(CHS)基因表达降低。4、对无核白葡萄转基因植株和野生型植株进行人工接种白粉菌后,通过观察与比较,发现与野生型相比,菌丝在转基因植株叶片生长慢;q RT-PCR结果表明,白粉菌诱导下,转基因无核白植株的STS表达上调,随着接种时间发展,转基因植株芪类物质种类在接种前云杉新苷和白藜芦醇两类产物的基础上增加了葡萄素,并且积累量显著增加,芪合酶基因通过产物表达与积累,提高了无核白对白粉菌的抗性。综上,中国野生毛葡萄‘丹凤-2’的芪合酶基因Vq STS9、Vq STS21受生物与非生物胁迫诱导表达,并响应白粉菌诱导,表达上调。因此,中国野生毛葡萄‘丹凤-2’可以作为改良欧洲葡萄抗病性的种质资源,进行抗病育种研究与应用。

关键词：中国野生毛葡萄芪合酶基因遗传转化白藜芦醇白粉病