检索结果-南通市图书馆

作者：张静南昌大学

学位级别：硕士

背景:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。其病因是BCR-ABL融合蛋白具有强烈酪氨酸激酶活性,能激活多条癌性信号通路引起造血细胞恶性转化,是CML的始发因素。靶向BCR-ABL的第... 详细信息

背景:慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)是一种起源于造血干细胞的恶性骨髓增殖性疾病。其病因是BCR-ABL融合蛋白具有强烈酪氨酸激酶活性,能激活多条癌性信号通路引起造血细胞恶性转化,是CML的始发因素。靶向BCR-ABL的第一、二代酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors,TKIs)已经广泛应用于临床,然而以imatinib(IM)为代表的TKIs出现化疗耐药已成为其治疗的最主要障碍,这严重影响了CML患者的长期疗效。我们前期研究发现,IM耐药CML细胞(K562/G01)中Bcl-x基因发生异常剪接大量转录生成Bcl-x L,而Bcl-x S相应减低,致Bcl-x L/Bcl-x S比值显著增高,由此可见,Bcl-x基因的异常剪接参与CML进展。现已证实Bcl-x基因的异常剪接事件与多种肿瘤细胞的化疗抵抗密切相关,Bcl-x L抗凋亡蛋白的过表达和Bcl-x S促凋亡蛋白的低表达均直接增强肿瘤细胞的化疗抵抗能力。由此可见,通过调控K562/G01细胞内Bcl-x L和Bcl-x S的表达量,将是改善其对IM化疗抵抗的途径之一。Vivo-Morpholinos(v MO)技术是近年发展起来的一种能实现体内、外直接调控靶基因选择性剪接的高效方法。因此,本研究设想应用v MO技术靶向调控Bcl-x基因的异常剪接,在减少Bcl-x L生成的同时增加Bcl-x S的表达,实现对Bcl-x L和Bcl-x S双向、同时调控,将能有效逆转K562/G01细胞对IM耐药。目的:探讨v MO靶向纠正Bcl-x异常剪接在耐药CML细胞中的增敏作用,为耐药CML患者治疗提供新的思路。方法:荧光标记的v MO技术与K562/G01细胞进行共培养,在不同时间通过流式细胞术和荧光显微镜检测荧光染色细胞百分率;K562/G01细胞经IM组(2μM),v MO组,对照试验的随机序列(RS-v MO),IM+v MO组及不处理(空白对照)处理后培养48h,通过CCK8法检测靶向调控Bcl-x剪接对K562/G01细胞活性与药物敏感性试验的影响;流式细胞术测定靶向调控Bcl-x剪接对K562/G01细胞凋亡的影响;通过q PCR和western blot分别检测K562/G01细胞胞内Bcl-x L、Bcl-x S m RNA和蛋白表达量。结果:(1)v MO(8μl)在48h后能够成功高效转染K562/G01细胞;(2)RS-v MO对K562/G01细胞几乎无毒性作用;与单独IM处理组相比,IM+v MO明显抑制K562/G01细胞活性,且细胞的IC50也显著降低,增加其对IM的敏感性;同时v MO增加IM诱导的K562/G01凋亡。(3)q PCR及western-blot均发现,IM+v MO技术可以双向、同时调控Bcl-x剪接模式,使Bcl-x L表达量明显降低的同时Bcl-x S表达量显著升高。结论:本研究证实v MO联合IM可以靶向纠正Bcl-x异常剪接,显著下调Bcl-x L/Bcl-x S凋亡蛋白的比值,逆转K562/G01细胞对IM耐药,为临床治疗CML及其他伴Bcl-x剪接异常的肿瘤的化疗增敏提供理新思路。

关键词： imatinib 耐药慢性粒细胞白血病 Bcl-x 选择性剪接

肝细胞癌患者尿液外泌体中差异性磷脂的筛选及鉴定

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肝细胞癌患者尿液外泌体中差异性磷脂的筛选及鉴定

作者：钟琼慧南昌大学

学位级别：硕士

背景:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝癌,占原发性肝癌病理分型的90%以上;亦是临床上最常见的肝癌类型。HCC患者临床表现多样且复杂,个体差异大,早期诊断较为困难。临床诊断肝癌常用的技术方法分为实验室相... 详细信息

背景:肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的原发性肝癌,占原发性肝癌病理分型的90%以上;亦是临床上最常见的肝癌类型。HCC患者临床表现多样且复杂,个体差异大,早期诊断较为困难。临床诊断肝癌常用的技术方法分为实验室相关指标检测与影像学检查,而确诊肝癌的细胞学类型则需依靠病理学手段。随着科学的发展,对HCC等肿瘤的不断深入研究,潜在的小分子标志物逐渐走入研究者的视角,例如外泌体。外泌体(exosome)是一种包含了大量生物活性分子的膜性囊泡,对疾病的诊断、分期、治疗与预后都有一定的指导意义。尿液是为数不多可通过无创手段分离外泌体的临床标本,但其中大量存在的T-H蛋白是干扰外泌体分离提取的一大难点,因此亟需优化分离提取方法以获得浓度和纯度均合格的尿液外泌体。代谢组学技术可用于分析小分子代谢物,特别是脂质成分的动态变化,能够直观地体现机体生理及病理过程的整体代谢变化轨迹,对机体的健康状况、疾病的进展、诊断及治疗有着重大意义。目的:本研究旨在提供一种简便、特异的方法获取尿液中的外泌体,通过一种新型的质谱手段——电喷雾萃取电离质谱(extractive electrospray ionization mass spectrometry,EESI-MS)分析HCC、肝硬化、慢性乙型肝炎、健康对照等4组尿液中外泌体的磷脂成分,分析其具体组分变化。为HCC的早期无创诊断提供一条新的思路。方法:使用超高速离心法(200,000 g)、实验室自研方法以及外泌体提取试剂盒法提取尿液中的外泌体,Western Blot检测外泌体表面标志物比较三种方法的浓度及杂蛋白分布情况;选择最优的方法提取外泌体后,利用透射电镜(transmission electron microscope,TEM)、可调电阻脉冲传感(tunable resistive pulse sensing,TRPS)、Western Blot观测其形态、粒径及蛋白标志物浓度。利用改良Folch法提取外泌体中的脂质成分。对EESI-MS进行不同电压及萃取剂的测试,对信号峰强度、信号值广度、信号稳定性等参数进行优化,选择最合适的电压及萃取剂。利用EESI-MS对HCC、肝硬化、慢性乙型肝炎、健康对照等4组标本(实验队列每组10例,共40例,每例样本分为3份上样,共120个样本;验证队列每组20例,共80例,每例样本分为3份上样,共240个样本)进行检测,比较指纹谱图差异;利用MATLAB R2015a软件进行主成分分析(principal component analysis,PCA)并筛选出差异磷脂,利用碰撞诱导解离(collision-induced dissociation,CID)试验对目标离子进行识别和确认。利用热图进行4组磷脂的组内相关性分析,并利用ROC曲线下面积(area under curve,AUC)及约登指数判断各差异磷脂成分及组合对HCC的诊断效能。同时利用Metaboanalyst线上软件对差异磷脂进行代谢通路富集。结果:(1)Western Blot显示超高速离心法与实验室自研方法对T-H蛋白的去除均合格,试剂盒法则会残留T-H杂蛋白,且实验室自研方法分离的外泌体浓度更高;TEM、TRPS也证实了实验室自研方法分离的外泌体的存在。(2)EESI-MS检测尿液中外泌体磷脂在电压+3 kV,萃取剂为甲醇/双蒸水/冰乙酸(1/1/0.02)时信号峰值最强,m/z50000范围内捕捉捕捉质谱峰数目多、信号最稳定。(3)一级指纹谱图显示4组的m/z有较大差异,显示出各自疾病种类的特异性。(4)PCA结果显示4组(HCC组、肝硬化组、慢性乙型肝炎组、对照组)能独立区分开,其中HCC患者与健康对照可明显进行区分,实验队列中差异最明显的质谱峰为m/z 754,m/z 787,m/z 832和m/z 877,验证队列中差异最明显的质谱峰为m/z726、m/z787、m/z832、m/z877。(5)各差异目标离子的相对丰度在HCC组中与其他各组有明显差异(P中2种为神经鞘磷脂,4种为磷脂酰胆碱及1种为磷脂酰甘油。(7)实验队列中m/z726、m/z754、m/

关键词：肝细胞癌尿液外泌体磷脂 EESI-MS

中国汉族人群原发免疫性血小板减少症的全基因组关联研究

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中国汉族人群原发免疫性血小板减少症的全基因组关联研究

作者：徐颜美南昌大学

学位级别：硕士

背景：原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia，ITP)是一种原因不明的、以血小板减少为特征的自身免疫性疾病。我国成人ITP的年发病率约为(50)/10万，女性患者明显多于男性。近年来，研究表明ITP可能由免疫、多重微... 详细信息

背景：原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia，ITP)是一种原因不明的、以血小板减少为特征的自身免疫性疾病。我国成人ITP的年发病率约为(50)/10万，女性患者明显多于男性。近年来，研究表明ITP可能由免疫、多重微效基因和环境因素共同导致，但其发病机制仍然不清。迄今为止，研究者采用候选基因法发现50种与ITP显著关联的候选基因，但这些基因仅能解释小部分ITP的遗传发病机制。虽然国内外研究者在ITP的遗传学发病机制方面已取得一定的成果，但是目前尚未有研究采用全基因组关联分析(genome-wide associated study，GWAS)策略对ITP进行遗传易感性分析，而本实验将弥补这一空白。目的：本研究选取中国汉族ITP患者为研究对象，应用GWAS策略寻找ITP可靠的易感位点，并验证最显著的易感位点与ITP的关联性，以期进一步丰富ITP的遗传学发病机制。方法：采用病例-对照研究方法，收集200例ITP患者和200例与病例组年龄、性别、种族相匹配的对照者。提取所有受试者外周静脉抗凝血的全基因组DNA，构建DNA混合池。利用Illumina Human OmniZhonghua-8基因芯片对DNA混合池行单核苷酸多态性位点(single nucleotide polymorphisms，SNPs)检测，运用生物信息学方法筛选显著差异的SNPs，应用TaqMan探针法验证这些显著SNPs与ITP的关联性，并结合基因富集分析初步探讨其生物学功能。结果：(1)人类全基因组芯片筛选出860,720个SNPs，经Bonferroni法校正显示4个SNPs(rs117503120、rs5998634、rs4483616和rs16866133)达到本次GWAS的显著性差异阈值(P <5.8×10-8)，与之匹配的基因为GBE1-LOC728290、ODZ4、SYN3-TIMP3、RBM45-OSBPL6;(2)TaqMan探针法验证结果显示rs5998634位点对ITP的发病起风险作用，而rs117503120和rs16866133对ITP的发病起保护作用;(3)以P <10-5为阈值选取287个基因进行基因富集分析，结果显示3条重要的信号通路(Pathway in cancer、JAK-STATsignaling pathway和Neuroactive ligand-receptor interaction)参与ITP的发病机制。结论：本研究首次对ITP进行两阶段的GWAS，成功鉴定出4个可靠的ITP易感位点，发现3条重要信号通路参与ITP的发病过程，为探讨ITP病因学机制探讨提供新的理论指导。

关键词：原发免疫性血小板减少症全基因组关联分析易感位点信号通路

外泌体miRNA作为三种性质胸腔积液标志物的研究

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外泌体miRNA作为三种性质胸腔积液标志物的研究

作者：王燕南昌大学

学位级别：硕士

背景:胸腔积液(pleural effusion,PE)是多种原因导致胸膜腔出现的过多液体,常继发于肺和胸膜疾病,及时准确的胸腔积液性质鉴别对疾病的诊疗至关重要。在我国,原发性肺癌以及肺结核是导致胸腔积液的首要原因。近20%的患者在胸腔积液常规... 详细信息

背景:胸腔积液(pleural effusion,PE)是多种原因导致胸膜腔出现的过多液体,常继发于肺和胸膜疾病,及时准确的胸腔积液性质鉴别对疾病的诊疗至关重要。在我国,原发性肺癌以及肺结核是导致胸腔积液的首要原因。近20%的患者在胸腔积液常规生化、胸部X线、CT甚至细胞病理学检查后,仍然不能明确病因。而作为胸腔积液性质鉴别诊断“金标准”的胸腔镜或胸膜活检等侵入性操作手段,诊断准确率高,但创伤大、风险高,患者依从性较差。目前,国内外关于胸腔积液的性质鉴定高水平研究指标有白介素、CEA、内皮素等可溶性物质,但这些可溶性物质有来源多元化、缺乏溯源性、性质不稳定、检测敏感度和特异度有限等诸多不足,即使联合应用也难有满意效果。外泌体是活细胞分泌的纳米级囊性微泡,可以通过物理阻隔及RNA沉默复合体(RISC)中的Ago2复合物相结合,避免了RNA酶的消化,在一定程度上增强了它所携带的miRNA、mRNA等生物活性分子的稳定性。因此,外泌体miRNA作为诊断标志物,具备性质稳定、含量较高、有溯源性以及无创检测等优势。本研究拟收集不同性质胸腔积液的外泌体,筛选其中可作为肺腺癌及肺结核胸腔积液性质鉴别的特征性外泌体miRNA谱,分析探讨此外泌体miRNA在胸腔积液诊断上的临床应用价值。目的:筛选胸腔积液性质相关特征性外泌体miRNA谱,为临床快速、准确的鉴别胸腔积液提供重要手段。方法:收集三种性质的胸腔积液(肺腺癌、肺结核以及炎性)并提取外泌体;根据标本来源分组送检外泌体miRNA,通过小RNA深度测序筛选出组间差异表达miRNA;接着分析整理差异miRNA进而确定具有临床鉴别诊断价值的miRNA谱;最后,运用基于SYBR荧光染料的实时荧光定量PCR技术对筛选出来的特征性miRNA谱进行临床验证。结果:(1)成功收集并提取到不同性质胸腔积液的外泌体;(2)小RNA深度测序结果显示肺腺癌性、结核性以及炎性胸腔积液的外泌体miRNA组间比较均存在显著差异,并且存在特征性miRNA组合(miR-483-5p、miR-205-5p、miR-375、miR-200c-3p、miR-429、miR-200b-3p、miR-200a-3p、miR-203a-3p、miR-141-3p、miR-148a-3p、miR-451a、miR-150-5p),可以很好的对三种性质胸腔积液进行鉴别诊断;(3)除外miR-205-5p、miR-148a-3p,其他miRNA在荧光定量PCR中的表达趋势与小RNA测序结果一致。结论:本研究通过应用小RNA测序技术,全面地分析不同性质胸腔积液外泌体所携带的miRNA,并结合荧光定量PCR验证技术,最终初步筛选出特征性miRNA谱,为胸腔积液的鉴别诊断提供新的方向。

关键词：胸腔积液外泌体 miRNA 深度测序鉴别诊断

伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病细胞来源exosomes转运miR-365传递耐药性实验研究

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伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病细胞来源exosomes转运miR-365传...

作者：闵清华南昌大学

学位级别：硕士

背景:慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是一类造血干细胞水平发生的获得性恶性血液肿瘤。伊马替尼（Imatinib）是目前治疗CML的一线药物,临床上20%-30%病人随着服药时间延长可发生耐药,其中大部分病人最终会向CML加速... 详细信息

背景:慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是一类造血干细胞水平发生的获得性恶性血液肿瘤。伊马替尼（Imatinib）是目前治疗CML的一线药物,临床上20%-30%病人随着服药时间延长可发生耐药,其中大部分病人最终会向CML加速期和急变期进展。exosomes是直径30～120nm,由细胞内多囊泡体与细胞膜融合而释放到细胞外的囊泡状小体。研究报道CML细胞分泌的exosomes能调控白血病细胞和骨髓微环境中的细胞,比如血管内皮细胞之间的交流,并促进疾病进展。而且,最近的研究报道CML细胞来源的exosomes能通过自分泌的机制促进肿瘤进展。这些事实启发我们推测:CML细胞来源的exosomes可能参与CML耐药过程。目的:本研究旨在阐明exosomes在CML伊马替尼耐药中的作用,为理解CML伊马替尼耐药机制,进而改善CML疗效提供新的思路。方法:培养伊马替尼耐药慢粒白血病细胞株（K562/G01）,伊马替尼敏感慢粒白血病细胞株（K562）;应用超速离心法提取细胞培养基中的exosomes,应用电子显微镜,粒径分析仪,western blot对exosomes进行鉴定;将K562/G01细胞来源exosomes与K562细胞共培养,用细胞毒性试验检测处理后的K562细胞对伊马替尼的耐药性;用micro RNA array和q RT-PCR检测K562/G01细胞与K562细胞来源exosomes中差异的miRNA表达谱;构建过表达miR-365的K562细胞株,并测定其对伊马替尼的耐药性;用western blot检测各实验组和对照组细胞中凋亡相关蛋白的表达。结果:我们成功分离并鉴定K562细胞和K562/G01细胞来源exosomes;K562/G01细胞来源exosomes能被K562细胞摄取并传递耐药特性;exosomes介导miR-365在伊马替尼耐药的和敏感的慢粒细胞之间转移;在伊马替尼敏感的慢粒细胞中miR-365降低化疗敏感性和抑制凋亡。结论:我们的研究揭示,伊马替尼耐药的慢性粒细胞白血病细胞exosomes通过传递miR-365介导耐药特性的水平转移。后面的工作将研究miR-365的直接靶基因并在体内实验中验证这个发现。

关键词：慢性粒细胞白血病 exosomes 化疗耐药 miR-365

N末端B型脑钠肽原评价血液透析对合并不同心功能衰竭的肾衰患者心功能的影响

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N末端B型脑钠肽原评价血液透析对合并不同心功能衰竭的肾衰患者心...

作者：任妹南昌大学

学位级别：硕士

目的:通过研究需要接受血液透析的肾功能衰竭合并不同程度心功能衰竭患者的血清N末端B型脑钠肽原(NT-pro BNP)水平及左室舒张末期内径(LVDd),分析不同LVDd的患者在接受首次血液透析前后的心功能改善程度,来评估血液透析对慢性充血性心衰... 详细信息

目的:通过研究需要接受血液透析的肾功能衰竭合并不同程度心功能衰竭患者的血清N末端B型脑钠肽原(NT-pro BNP)水平及左室舒张末期内径(LVDd),分析不同LVDd的患者在接受首次血液透析前后的心功能改善程度,来评估血液透析对慢性充血性心衰(CHF)患者心功能的影响,为肾功能衰竭合并心功能衰竭的患者接受血液透析的获益程度及预后评估提供依据,并制定相应的治疗方案。方法:选取2012年6月至2014年1月在萍乡市人民医院初诊为需要接受血液透析治疗的肾功能衰竭患者(CRD)91例,其中合并不同程度心脏功能衰竭的患者58例,年龄跨度为50-70岁,均为男性患者,所有患者均事先告知实验研究内容并取得患者知情同意,所有入组患者病情相对稳定,心脏功能按NYHA分级在II-III级,3个月内未发生过急性心血管疾病、急性心肌梗死、急性肺栓塞、心包炎等疾病,排除肥厚性心肌病、限制性心肌病等疾病。并由30名健康志愿者组成正常对照组。所有患者在首次为期1周的血液透析治疗中未出现心功能恶化、高血压危象、严重出凝血功能障碍等并发症。所有入组患者在接受首次血液透析前由心脏彩超测量左室舒张末期内径(LVDd),合并心功能衰竭患者按LVDd进行分组,A组:50mm中线经过心脏十字结构,获取心尖四腔心切面,心脏彩超由同一名有经验医生进行操作,同一指标进行两次测量,取平均值作为此次实验研究数据。在为期1周的血液透析结束后,再次进行上述各项检测,记录数据。结果:(1)慢性肾功能衰竭患者NT-pro BNP及LVDd水平较正常对照组普遍增高,且合并心功能衰竭组高于未合并心功能衰竭组(P中C组下降幅度最大(P0.05)。结论:NT-pro BNP可以评价肾功能衰竭患者的心功能,灵敏度及特异性优于LVDd,血液透析可以改善慢性心功能不全,NT-pro BNP的下降幅度与透析前LVDd值呈正比,并且NT-pro BNP的敏感性优于LVDd,LVDd越大的患者,透析的获益越大。

关键词：血液透析 N末端B型脑钠肽原左室舒张末期内径充血性心力衰竭肾功能衰竭

多元协同促进农村教育提升的路径选择 ——基于午亭中学的案例分析

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多元协同促进农村教育提升的路径选择 ——基于午亭中学的案例分析

作者：张囡囡山西师范大学

学位级别：硕士

在城镇化大潮的席卷下,乡村中学生源日益减少、办学规模日渐萎缩、不断撤校合并已是普遍现象。本论文选取午亭中学(原郭峪中学)为研究对象,运用访谈、问卷调查的研究方法,描绘了郭峪中学重生为午亭中学的过程,尝试为宏观的农村教育变迁... 详细信息

在城镇化大潮的席卷下,乡村中学生源日益减少、办学规模日渐萎缩、不断撤校合并已是普遍现象。本论文选取午亭中学(原郭峪中学)为研究对象,运用访谈、问卷调查的研究方法,描绘了郭峪中学重生为午亭中学的过程,尝试为宏观的农村教育变迁提供一个微观个案图景。尽管在城镇化的过程中,中国农村教育呈现出普遍衰败之趋势,但农村学校的存在仍具有重要的社会价值。一方面,保留一定数量的农村学校能够满足农村常住人口的教育需求,另一方面,从长远来看,农村学校的存在对于乡村振兴来说意义重大,是培养和留住乡村振兴人才的民生基础。但是,由于农村学校普遍生源不足,大量小规模学校的存在与规模办学效益之间存在持久张力,再加上政府作为兴办教育的责任主体,财力和行动能力有限,以至于单纯依靠政府的力量保留和发展农村学校存在诸多困境。然而,午亭中学的案例表明,调动其它社会主体如村集体企业、村委会甚至是村民与政府协同兴办农村学校是完全可能的。如果能够有积极行动的主体进行有效的制度供给、建立顺畅的责任分担和平等协商机制,并且拥有一定的资源条件,那么,在农村教育公共服务领域探索多元协同治理是大有可为的。

关键词：农村教育多元协同午亭中学

血浆长链非编码RNA AFAP1-AS1和ANRIL检测在鼻咽癌早期诊断中的意义

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血浆长链非编码RNA AFAP1-AS1和ANRIL检测在鼻咽癌早期诊断中的意...

作者：胡晓梅南昌大学

学位级别：硕士

背景:鼻咽癌是我国南方高发的鼻咽部恶性肿瘤。因肿瘤发生的部位特殊并呈浸润性生长,不同于其他的头颈部肿瘤,鼻咽癌极易侵犯邻近组织器官,区域淋巴结转移率高。放疗对早期鼻咽癌非常有效,但因鼻咽腔位置隐蔽,早期常无典型症状,临床很... 详细信息

背景:鼻咽癌是我国南方高发的鼻咽部恶性肿瘤。因肿瘤发生的部位特殊并呈浸润性生长,不同于其他的头颈部肿瘤,鼻咽癌极易侵犯邻近组织器官,区域淋巴结转移率高。放疗对早期鼻咽癌非常有效,但因鼻咽腔位置隐蔽,早期常无典型症状,临床很难做出早期诊断,约75%患者首诊时已达中晚期,目前多应用放疗、化疗及分子靶向治疗等综合治疗手段,但因其局部肿瘤浸润广泛且已有区域淋巴结转移,具有较高的局部复发率和远处转移率而导致疗效欠佳,因此,如何做到早期诊断是目前鼻咽癌诊疗中面临的难题。长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是指长度大于200个核苷酸的转录本,缺少完整的开放阅读框和蛋白质编码功能,但在表观遗传、转录及转录后等多层面调控基因表达的RNA片段。研究报道长链非编码RNA在多种肿瘤中高表达,能显著促进肿瘤的增殖、侵袭和迁移,在肿瘤的发生、发展进程中具有重要作用。而且,近年来的文献报道长链非编码RNA AFAP1-AS1和ANRIL在鼻咽癌癌组织或鼻咽癌细胞系中高表达,又有研究证实在人体不同的体液中如血清、血浆、尿液、甚至胃液都能检测到lncRNA以可测量水平高稳定性存在,因血浆样品检测相对于病理活检而言为非侵袭性,取材简便易行,利于筛查和推广,血浆循环lncRNA有望成为临床上极具应用前景的无创性诊断标记物,因此,本研究设想通过检测鼻咽癌患者血浆中AFAP1-AS1、ANRIL表达水平,评价其在鼻咽癌的临床诊断效能、与鼻咽癌临床分期的相关性,探讨其成为鼻咽癌早期诊断标记物的可能性。目的:本研究旨在检测血浆长链非编码RNA AFAP1-AS1和ANRIL在鼻咽癌、鼻咽良性病变、健康对照组血浆中的表达差异,评价其临床诊断效能,分析与鼻咽癌临床分期的相关性,探讨其作为鼻咽癌早期准确诊断标记物的可能性,进而为鼻咽癌诊疗提供新思路。方法:收集57例鼻咽癌患者、32例鼻咽良性疾病者、50例健康体检者的血浆样本,提取血浆样本总RNA,逆转录成cDNA,以GAPDH为内源性参考基因,采用qRT-PCR技术检测lncRNA AFAP1-AS1和ANRIL,用2方法计算其表达水平。Mann-whitney检验比较鼻咽癌组、鼻咽良性病变组、健康对照组间血浆AFAP1-AS1、ANRIL的表达水平差异,ROC曲线评价血浆AFAP1-AS1和ANRIL诊断鼻咽癌的临床价值。试验组按照AJCC/IUCC分期体系第八版建立TNM分期,采用spearman等级相关系数评价AFAP1-AS1、ANRIL与鼻咽癌临床TNM分期之间的相关性。结果:(1)鼻咽癌试验组血浆AFAP1-AS1相对表达水平显著高于良性对照组(P0.05);ANRIL在鼻咽癌试验组相对表达水平也显著高于良性对照组(P中晚期组显著高于早期组,T分期(P=0.004)、N分期(P=0.342)、M分期(P=0.005),而AFAP1-AS1的表达水平在鼻咽癌早期组与中晚期组之间无明显差异差异。Spearman相关性分析表明血浆AFAP1-AS1(r=0.266,p=0.045)和ANRIL(r=0.373,p=0.004)表达水平均与鼻咽癌M分期呈正相关,ANRIL(r=0.427,p=0.001)表达水平与T分期正相关,与淋巴结受累情况不相关;AFAP1-AS1表达水平与T分期和N分期均不相关,ANRIL相比于AFAP1-AS1与鼻咽癌TNM分期具有较好的相关性。结论:LncRNA AFAP1-AS1和ANRIL在鼻咽癌患者血浆中的表达量显著性升高,且与鼻咽癌TNM分期呈显著正相关关系。检测其血浆表达水平有助于鼻咽癌的早期诊断以及疾病的分期判断;血浆LncRNA AFAP1-AS1和ANRIL可能是早期诊断鼻咽癌潜在的生物标志物。

关键词：鼻咽癌长链非编码RNA AFAP1-AS1 ANRIL

AFR和ADS评分作为食管鳞癌患者术后辅助放化疗疗效评估和预后预测标志物研究

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AFR和ADS评分作为食管鳞癌患者术后辅助放化疗疗效评估和预后预测...

作者：郜秋芳南昌大学

学位级别：硕士

背景:食管癌(Esophageal cancer,EC)是发病率位于全球第八位,死亡率位居全球第六位的恶性肿瘤。我国是食管癌的高发区域,90%以上表现为食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。尽管随着外科技术、化疗药物的不断发展... 详细信息

背景:食管癌(Esophageal cancer,EC)是发病率位于全球第八位,死亡率位居全球第六位的恶性肿瘤。我国是食管癌的高发区域,90%以上表现为食管鳞状细胞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)。尽管随着外科技术、化疗药物的不断发展,部分食管癌患者得到了有效的治疗,但仍有不少患者发现时已经处于疾病晚期,失去了手术指征。因此,越来越多的研究者希望能够找到简单有效的标志物作为食管癌术后预后的指标,以便能够早发现早治疗,从而延长患者的总生存期及提高患者的生存质量。近来,有许多研究表明炎症可以加速肿瘤的进展。证实了中性粒细胞数/淋巴细胞数比值(Neutrophil-lymphocyte ratio,NLR)、中性粒细胞数/(白细胞数-中性粒细胞数)比值(Derived neutrophil-lymphocyte ratio,dNLR)、血小板数/淋巴细胞数比值(Platelet-lymphocyte ratio,PLR)以及淋巴细胞数/单核细胞数比值(Lymphocyte-monocyte ratio,LMR)均可以作为癌症预后指标。除此之外,也有研究表明术前较高的纤维蛋白原(Fibrinogen,Fib)水平可能会引发肿瘤的进展和预后不良。但是,基于Fib与白蛋白(Albumin,Alb)作为预后监测指标的报道较少。目的:本研究的主要目的是对食管癌患者术前Fib,白蛋白,AFR(Alb/Fib ratio)以及血液学指标(NLR,dNLR,PLR,LMR)进行统计学分析,探讨这些指标对食管鳞癌患者术后的预测价值及其临床关系。方法:严格按照排除标准与纳入标准收集2010年1月至2013年12月在南昌大学第二附属医院首次确诊为食管鳞癌并进行手术的患者,共纳入153例,并获得患者的一般临床资料,病理资料,手术之前的血常规指标(NLR,d NLR,PLR,LMR)、Fib与Alb并经过系统随访得到的患者的生存期,且生存年限为3年,再进行统计分析,筛选出对预后监测效果较好的指标建立nomogram预测模型,评估食管癌患者的预后。结果:***,Alb,AFR,NLR,dNLR,PLR和LMR用于预测总生存期的临界值分别为3.2 mg/dL,38.2g/L,9.3,2.1,4.3,145.9和2.3。2.在COX单因素回归分析中,Alb(中,AFR,Alb,Fib,dNLR和PLR依然有统计学意义(p中预后没有统计学差异。5.通过R软件,包含ADS评分与去除ADS评分各建立了nomogram预测模型,发现c-index在两者之间有统计学差异(0.676 vs.0.618,p=0.05)。结论:通过术前AFR,Alb和dNLR建立的ADS预后评分可以作为食管癌患者术后是否需要进行辅助放化疗以及3年生存期的预测指标;依赖ADS评分建立的nomogram预测模型能够明显提高对进行手术治疗的食管鳞癌患者预后生存年限的评估。

关键词：食管鳞状细胞癌炎症 ADS 预后

SRSF10通过对RFC5的异常选择性剪接影响结直肠癌的进展

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SRSF10通过对RFC5的异常选择性剪接影响结直肠癌的进展

作者：徐帅南昌大学

学位级别：硕士

研究背景据调查发现,在全球范围内的死亡率和发病率一直居高不下的结直肠癌(CRC),作为世界排名前三的肿瘤,结直肠癌早期时并不容易被发现,当患者出现症状时往往已经转移到身体其他器官,是恶性肿瘤相关死亡的重要原因之一。对于CRC的基... 详细信息

研究背景据调查发现,在全球范围内的死亡率和发病率一直居高不下的结直肠癌(CRC),作为世界排名前三的肿瘤,结直肠癌早期时并不容易被发现,当患者出现症状时往往已经转移到身体其他器官,是恶性肿瘤相关死亡的重要原因之一。对于CRC的基本发病机制表明,可变剪接(AS)与CRC的发生和发展有着密切的关系。在结直肠癌(CRC)中,富含丝氨酸/精氨酸(serine/arginine-rich)剪切因子10对其的作用尚未得到充分的研究。本研究中,我们主要发现了SRSF10可以通过对RFC5的前体mRNA的选择性剪接,产生不同的剪接变体,从而影响结直肠的致病潜能。研究目的1、研究SRSF10在结直肠癌中的表达水平。2、研究通过敲低与过表达SRSF10基因表达对结直肠癌细胞功能影响。3、研究sh SRSF10结直肠癌细胞对RFC5基因的选择性剪接以及影响其剪接变体的表达。材料与方法通过生物信息预测了CRC患者中SRSF10基因的表达情况。并研究了SRSF10在体外的功能实验,使用SW480和HCT116细胞并用sh-SRSF10和SRSF10puro转染细胞。通过q-PCR和Western Blot法验证敲降和过表达效率。通过CCK8测定细胞活力和增殖能力,transwell测定细胞侵袭和迁移能力,划痕试验检测细胞迁移能力,通过流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡。利用PRIdictor网站预测SRSF10于RFC5相互作用位点。琼脂糖凝胶电泳测定SRSF10作用的RFC5 pre-mRNA不同转录本。结果通过TCGA数据库分析,研究发现SRSF10在CRC患者中高表达,由于SRSF10对CRC中的具体发病机制仍有待充分阐明。本研究通过慢病毒转染SW480和HCT116细胞来抑制和促进SRSF10的表达。通过CCK8、Western Blot、transwell、划痕试验、流式细胞术等实验来评估SRSF10敲低和高表达对CRC细胞的增殖、侵袭、迁移、凋亡、周期的影响。结果表明SRSF10-shRNA有效的敲低了SRSF10的表达,并且SRSF10敲低抑制了CRC细胞的增殖、迁移能力,同时促进细胞凋亡,使CRC细胞的DNA复制周期发生改变,当SRSF10高表达时促进了CRC细胞的增殖、迁移能力,结直肠癌细胞周期同样也发生了改变。接着本研究对SRSF10敲低的CRC细胞测序,并预测到下游基因复制因子C的亚基5(RFC5),也证实了SRSF10通过对RFC5的外显子2的AS1的跳跃,使RFC5 exon2-AS1(S)转录变体增加以促进结直肠癌的发展。结论本研究表明,SRSF10的敲低可以在体外抑制结直肠癌细胞的增殖、侵袭、迁移,同时促进结直肠细胞凋亡和改变其周期。并且发现SRSF10敲低可以影响结直肠癌中RFC5外显子2的AS1的跳跃。因此SRSF10可能通过对RFC5的异常剪接产生RFC5外显子2的AS1的跳跃的异构体,从而促进结直肠癌的进展。可能成为CRC临床诊断和治疗的重要靶点。

关键词：结直肠癌 SRSF10 选择性剪接 RFC5 剪接变体