检索结果-南通市图书馆

作者：王晓蔓河北农业大学

学位级别：硕士

本研究以清香核桃种胚为试材,对离体胚培养进行研究,以提高胚的萌发成苗率和继代增殖效果;以辽宁5号继代苗和清香种胚为试材,研究潮霉素和卡那霉素对核桃继代苗生长和种胚萌发的影响,进行适宜选择压的筛选,为今后核桃遗传转化研究打下... 详细信息

本研究以清香核桃种胚为试材,对离体胚培养进行研究,以提高胚的萌发成苗率和继代增殖效果;以辽宁5号继代苗和清香种胚为试材,研究潮霉素和卡那霉素对核桃继代苗生长和种胚萌发的影响,进行适宜选择压的筛选,为今后核桃遗传转化研究打下良好的基础;以核桃品种中林1号、绿波、晋龙、清香等为试材,采用花粉管通道法将外源基因导入核桃中,对外源DNA浓度、导入时间、导入方法等因素进行系统研究,为进一步提高花粉管通道法进行核桃遗传转化的效率奠定基础;主要结果如下:1.核桃离体胚培养:胚萌发阶段以DKW培养基+6-BA0.5～1.0mg/L+IBA 0.01mg/L+白砂糖45～55g/L有利于胚萌发,不定芽分化多,增殖效果最好。种胚萌发后顶芽和两侧的不定芽以6-BA1.0～1.5mg/L配合IBA 0.03mg/L有利于胚培苗增殖扩繁。2.核桃继代苗和种胚对抗生素的敏感性测定:辽宁5号核桃继代苗在含Hyg18mg/L的培养基上培养,植株明显褐化死亡,在含Kan300mg/L的培养基上生长受抑制,全部白化;清香核桃种胚在Hyg20mg/L时种胚褐化,在Kan150mg/L种胚无分化,呈短缩的白色锥体状。3.制作荧光切片观察授粉后花粉的萌发和伸长情况。外源DNA溶液的滴加时间宜在授粉后14～48h,此时花粉管通道已经打开,有利于DNA的导入;子房注射的时间宜在授粉后24～48h,此时花粉管到达胚囊。4.利用花粉管通道法将农杆菌AGL1的质粒DNA导入四个核桃主栽品种中,结果表明:不同导入方法在受体当代结实率上存在较明显的差异,其中子房注射法结实率低于滴加法,达到显著水平。导入方法宜采用切割柱头滴加法,既能保证坐果率,又有利于外源DNA溶液导入胚囊。5.外源DNA浓度为200μg/mL和500μg/mL时结实率和果实子叶GUS基因瞬时表达率较高,浓度增加结实率和GUS基因瞬时表达率降低。6.转化果实胚培养成苗后经Hyg15mg/L的继代培养基上进行抗性检测,进一步经PCR扩增检测,3个转化株系扩增出的特异性条带和阳性对照一致,表明外源基因通过花粉管通道导入核桃基因组中是可行的。

关键词：核桃花粉管通道法外源DNA 胚培养 PCR 抗生素

农杆菌介导β-1，3-葡聚糖酶基因转入嘎拉苹果的研究

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农杆菌介导β-1，3-葡聚糖酶基因转入嘎拉苹果的研究

作者：张丽丽河北农业大学

学位级别：硕士

本研究以苹果(Malus domestica Borkh)主栽品种嘎拉(Gala)组培苗为试材，系统研究了影响叶片离体再生及叶盘法遗传转化效率的若干因素，优化了苹果离体叶片再生不定芽系统和遗传转化系统;以农杆菌EHA105为介导将目的基因——β-1，3-葡... 详细信息

本研究以苹果(Malus domestica Borkh)主栽品种嘎拉(Gala)组培苗为试材，系统研究了影响叶片离体再生及叶盘法遗传转化效率的若干因素，优化了苹果离体叶片再生不定芽系统和遗传转化系统;以农杆菌EHA105为介导将目的基因——β-1，3-葡聚糖酶抗病基因导入苹果品种，成功获得了转化植株，为今后苹果遗传转化及抗病性研究提供了依据。试验结果表明： 1．苹果不同外植体再生不定芽能力不同，以叶片的再生效果优于白化茎段。 2．继代苗苗龄对嘎拉叶片不定芽再生效率无明显影响，但考虑到取材的难易，以继代培养20～30d为宜。 3．苹果离体叶片再生过程中，前期暗培养可以显著提高叶片再生频率。暗培养时间以14～21d为宣，随暗培养时间延长再生频率虽没有降低趋势，但是再生芽黄化现象严重，不利生长。 4．接种方式对嘎拉苹果的叶片再生效率影响不显著，但对再生芽数的影响显著，以近轴面朝上接种再生芽数多。 5．在根癌农杆菌EHA105介导的遗传转化体系中，以叶片为转化受体，适宜的卡那霉素(Kan)选择压为10mg／L，抑菌抗生素为头孢霉素(Cef)300mg／L。 6．研究了影响叶盘法遗传转化的因素，优化了遗传转化途径：外植体在分化培养基上预培养1～2d;农杆菌悬浮至对数生长期，菌液浓度为OD=0.6～0.8时侵染外植体10min;共培养1～2d;然后脱菌、选择同时进行，每隔20d左右更换一次选择培养基。 7．共有19个转化株系通过了Kan抗性检测，具体包括三个方面：①转化株在附加Kan50mg／L的继代培养基上能够连续增殖继代，生长正常。②转化株叶片在附加或未加Kan50mg／L的再生培养基上的再生能力无明显差异。③转化株在附加Kan50mg／L的生根培养基中能正常生根。 8．通过Kan抗性筛选的转化株系经GUS检测，均出现蓝色斑点，进一步经PCR扩增检测，转化株系扩增出的特异条带和阳性对照一致，表明Glu基因已整合至嘎拉苹果基因组DNA中。

关键词：苹果 β-1,3-葡聚糖酶基因抗病再生根癌农杆菌遗传转化 PCR

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葡萄根癌病病原菌传播及防治措施研究

葡萄根癌病病原菌传播及防治措施研究

作者：张洁河北农业大学

学位级别：硕士

为了解决葡萄生产上葡萄根癌病发生严重问题，以葡萄根癌病病原菌为研究对象，研究了葡萄生产中埋土防寒措施对葡萄根癌病发生的影响;对葡萄根癌病田间发病状况进行调查研究，并研究了葡萄根癌病对葡萄植株根际土pH及微生物数量的影响;... 详细信息

为了解决葡萄生产上葡萄根癌病发生严重问题，以葡萄根癌病病原菌为研究对象，研究了葡萄生产中埋土防寒措施对葡萄根癌病发生的影响;对葡萄根癌病田间发病状况进行调查研究，并研究了葡萄根癌病对葡萄植株根际土pH及微生物数量的影响;通过对病原菌进行分离培养，利用分子生物学手段对菌株类型进行了鉴定;研究了病原菌在葡萄植株体内的传播途径，并对患病株上的枝条用于繁殖材料的安全性进行了探讨。研究了9种药剂对葡萄根癌病室内、室外防治效果;在组织培养条件下，对9个葡萄品种对根癌病抗性进行了比较，同时，研究了在离体条件下进行葡萄抗根癌病性状鉴定的可行性和可靠性，探索一种快速、可靠的离体筛选方法。主要研究结果如下：1.本研究对葡萄根癌病发病株与其临近未发病株根系土的pH及微生物数量进行测定，结果表明，发病株根系土pH值显著低于其临近未发病株，对应的真菌、细菌、放线菌数目均显著高于临近未发病株，说明土壤pH及微生物种群数量与葡萄根癌病的发生存在相关性。2.葡萄出土期，以巨峰葡萄木质瘤，木质瘤处土，以及枝条切口处附着土为材料，于培养基上分离根癌病原菌相似菌株，采用与生长素合成有关基因序列引物及葡萄土壤杆菌6b特异基因序列引物对这些菌株DNA进行PCR扩增，三种材料均有一株菌扩增获得特异性目的条带，鉴定为葡萄土壤杆菌章鱼碱类型，说明患病株进行埋土后，其上患病组织中的病原菌会通过雨水或雪水污染土壤成为再侵染源，而土壤中存在的病原菌又会通过剪切口或其它伤口进入植株体内，进一步说明埋土防寒会加重葡萄根癌病的发生。采集巨峰葡萄幼嫩茎部及根部癌瘤，从中共分离获得致病性病原菌株6株，病原菌鉴定结果表明，这6株菌均为葡萄土壤杆菌章鱼碱类型。3.在葡萄生长季，向两年生幼嫩葡萄植株接种葡萄土壤杆菌1个半月后，运用真空抽滤法于带瘤枝段及其上部枝段分离出目的菌株，而从侧枝枝段中未分离出。同时，运用该法对采自休眠期5株葡萄植株的5个枝条进行病菌分离，有一个枝条中分离出病原菌，结果表明，采自患病植株的幼嫩枝条和休眠期枝条均不能作为扦插繁殖的材料;组培苗接种葡萄土壤杆菌一个半月后茎叶组织及诱导形成的冠瘿瘤中均分离到病原菌株，室外室内试验均表明病原菌在植株体内通过树液流动而传播至植物其他部位;葡萄伤流期，对5株患病葡萄的伤流液进行病原菌分离，其中有2株中检测出病原菌，说明病原菌随树液进行侵染传播在葡萄伤流期便已开始。4.通过对向日葵的接种试验，从幼嫩癌瘤中分离所得病原菌中筛选出毒性最强株系。采用抑菌圈法检测了9种杀菌剂和抗菌素对该菌株的抑菌效果。结果表明：72%农用硫酸链霉素对该菌株的抑制作用显著，其次为三氯异氰尿酸和80%乙蒜素。参试的20%龙克菌、80%多菌灵、3%中生菌素、40%可杀得三千、2%春雷霉素、25%叶枯唑对该菌株无明显抑制作用。药剂的田间防治试验结果表明，1000倍72%农用硫酸链霉素、200倍80%乙蒜素、100倍无水硫酸铜三种药剂处理均不同程度的降低了病害的发生，相对防效分别为79.6%、74.2%、71.3%，1000倍72%农用硫酸链霉素处理作用最显著。5.对魏可、红斯威特、北醇、火焰无核、克瑞森、皇家秋天、四倍体玫瑰香、皇家夏天、莫利莎九个葡萄品种组培苗接种L-R菌株、L3菌株，45天后调查结瘤百分率和瘤重，基于结瘤百分率和瘤重评价供试材料对葡萄根癌病的抗性，结果表明两菌株接种均未发现完全免疫品种，所有品种发病率均在73.3%以上，在供试的品种中魏可的发病率及平均瘤重均较其它品种低，其对葡萄根癌病的抗性高于其它品种，该方法能反映不同品种的抗性水平，可作为葡萄对根癌病敏感性评价、筛选抗性种质的一种有效的方法。

关键词：葡萄根癌病病原菌型 PCR检测细菌分布药剂防治抗性

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A省B市C区羁押必要性审查调研报告

A省B市C区羁押必要性审查调研报告

作者：林增强广东财经大学

学位级别：硕士

羁押必要性审查制度的设立使审前羁押这一颇受争议的议题有望摆脱为人诟病的尴尬处境,被学界誉为我国刑事司法制度之突破性立法。然而羁押必要审查制度在理论和立法中仍然存在许多问题,远未达成共识,以至于对司法实践的指导意义十分有限... 详细信息

羁押必要性审查制度的设立使审前羁押这一颇受争议的议题有望摆脱为人诟病的尴尬处境,被学界誉为我国刑事司法制度之突破性立法。然而羁押必要审查制度在理论和立法中仍然存在许多问题,远未达成共识,以至于对司法实践的指导意义十分有限,这给司法实践中该制度的运作带来诸多问题和困惑。然而司法却不能以立法不完善为由拒绝执行,这便注定了司法机关必须在现有的制度背景之下尽可能地寻求解决之道,以确保立法的落实和贯彻。如此看来,检察机关无异于“带着镣铐起舞”,促使各基层检察院在现有立法框架之下结合各地具体情况,积极探索如何进一步完善。A省各基层检察机关在现有立法框架之下,结合各地实际情况经过一系列实践、探索和创新,在尽可能完善现有制度的基础上形成颇具特色的运作模式,积累了一些有借鉴和反思意义的宝贵经验。其中,C区检察院在A省乃至南方地区有较强代表性,“以管窥豹,可见一斑”。一可以C区窥见羁押必要性审查在A省乃至全国的运行状况;二可以羁押必要性审查为视角,窥见制度落地运行乃至中国刑事法治环境。本文共分为五个部分:第一部分是引言,主要交代此次调查的背景、目的、调查对象和方法等内容。第二部分是对A省B市C区羁押必要性审查相关工作中摸索与尝试的考察,以便了解C区羁押必要性审查的适用情况,以依申请和依职权两种启动方式为视角。主要包括依申请审查中辩护律师、在押人员、检察机关三视角,判决类型、羁押必要性审查数据、依职权审查中刑事执行检察科、侦查监督科、公诉科三部门等情况。第三部分对C区羁押必要性审查工作成效进行深入评析及反思。第四部分是针对调研发现的问题提出完善路径,即明晰概念、完善立法、细化程序、完善羁押替代措施、加大司法资源投入、改进绩效考评机制、鼓励试点等。第五部分结语对此次实证研究做总结,并对总体趋势做前瞻性思考。

关键词：羁押必要性审查三段三审隐形法双向审查程序重构配套措施

反式-2-己烯醛诱导‘巨峰’葡萄根癌病抗性物质的研究

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反式-2-己烯醛诱导‘巨峰’葡萄根癌病抗性物质的研究

作者：辛苗慧河北农业大学

学位级别：硕士

葡萄根癌病发生范围广危害程度深,目前无特效药物防治。反式-2-己烯醛是存在于植物体内具有抑菌作用的挥发性物质,植物受病原菌侵害后会大量释放该物质,使植物增强抗病性,在植物抗病中发挥着重要作用,目前其在诱导葡萄产生抗病性方面尚... 详细信息

葡萄根癌病发生范围广危害程度深,目前无特效药物防治。反式-2-己烯醛是存在于植物体内具有抑菌作用的挥发性物质,植物受病原菌侵害后会大量释放该物质,使植物增强抗病性,在植物抗病中发挥着重要作用,目前其在诱导葡萄产生抗病性方面尚未见报道。本试验利用纸片抑菌法研究反式-2-己烯醛对葡萄根癌病病原菌菌株L3、LR离体抑菌作用,通过测定抑菌圈直径探讨其抑菌效果;以‘巨峰’葡萄嫩枝扦插苗为试材,通过外源喷施反式-2-己烯醛,研究植物源挥发性物质对‘巨峰’葡萄植株挥发性物质和代谢物的影响,通过测定挥发物和代谢物含量探讨反式-2-己烯醛诱导对植株抗病性的影响,为反式-2-己烯醛应用于生产实践提供理论依据。主要结果如下:1.不同浓度反式-2-己烯醛对菌株L3、LR均有一定抑菌效果,其抑制作用存在剂量效应,其中8.5μL/mL处理后对L3、LR的抑菌圈直径最大,其次为5.5 μL/mL、10.5 μL/mL、2.5 μL/mL、1.5 μL/mL 处理,分别为:15.93 mm 和 15.86 mm;13.81 mm和14.45 mm;13.42 mm 和 13.65 mm;13.27 mm和13.83 mm;12.42 mm和13.21 mm。2.不同浓度反式-2-己烯醛均可诱导植株产生挥发物,其中1.0 μL/mL反式-2-己烯醛处理的诱导抗性效果最佳,分别为未处理(CK1)、30%乙醇(CK2)的4倍、3.86倍,其次分别为8.5 μL/mL和17.0 μL/mL反式-2-己烯醛处理,分别为CK1、CK2的2倍、1.70倍和1.70倍、1.42倍。3.用1.0 μL/mL反式-2-己烯醛诱导葡萄嫩枝扦插苗,测定其醛类、芳香族和萜烯类挥发物含量。结果表明:醛类物质含量显著高于未诱导植株,尤其是反式-2-己烯醛含量显著高于未诱导;诱导的芳香族类物质在12 h时含量最高,水杨酸甲酯在6和72 h时含量最高;诱导的萜烯类物质在72 h时含量最高,1-石竹烯6 h时含量最高。这些挥发性物质均与植株抗病机制密切相关,能提高植株对病原菌侵染的防御响应,增强植株抗病能力。4.用1.0 μL/mL反式-2-己烯醛诱导葡萄嫩枝扦插苗,测定代谢物含量,有机酸类物质含量(除0h)显著高于未诱导植株,尤其乙酸在6h含量最高,乳酸含量均低于未诱导植株;醇类物质含量(除0h)均显著高于未诱导,尤其乙二醇;脂肪酸类物质含量均显著高于未诱导,尤其甲酰胺含量比对照增加了 3.3倍。植物抵御病原菌的侵染能力与这些代谢物的累积密切相关。

关键词：葡萄根癌病抑菌效果反式-2-己烯醛挥发性物质代谢物质

新梨7号梨组培快繁体系建立及微嫁接技术的研究

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新梨7号梨组培快繁体系建立及微嫁接技术的研究

作者：田海青河北农业大学

学位级别：硕士

本试验以新梨7号梨为试材，分别对外植体消毒的药剂和处理时间、初代培养和增殖培养的培养基以及组培苗不定根的诱导等进行了研究，初步建立了新梨7号梨的组培快繁体系。进一步利用新梨7号梨和杜梨的继代苗，对瓶内微嫁接技术进行了研... 详细信息

本试验以新梨7号梨为试材，分别对外植体消毒的药剂和处理时间、初代培养和增殖培养的培养基以及组培苗不定根的诱导等进行了研究，初步建立了新梨7号梨的组培快繁体系。进一步利用新梨7号梨和杜梨的继代苗，对瓶内微嫁接技术进行了研究，并获得了新梨7号/杜梨生根苗。主要研究结果如下： 1．外植体选择，于春季采未萌发的新梨7号梨一年生枝进行室内清水催芽，温度（25±2）℃，自然光照，待芽萌发、第3片新叶展开时，剪取幼梢作为外植体接种，成活率可达100%，并且褐化率和污染率都很低。田间采取的外植体用NAClO(5%)与HgCl2(0.1%)1:1，消毒7min，无菌水冲洗5次进行表面消毒处理，效果较好。 2．培养基1/2MS+6-BA0.75mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖35g/L较适宜作为新梨7号梨初代培养的诱导培养基，新芽诱导率可达5.59。 3．1/2MS基本培养基有利于新梨7号芽的分化，而MS基本培养基则促进新梨7号已分化芽的生长。附加6-BA2.0mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖35g/L交替使用，较适合新梨7号梨的继代增殖培养。 4．长度大于1.5cm的新梨7号单根嫩梢，在1/2MS+IBA2.5mg/L+蔗糖20g/L的培养基上暗培养一周左右，进行光培养，接种30d后生根率可达75%。 5．采用劈接方式，以新梨7号梨继代苗为接穗，杜梨继代苗为砧木，进行瓶内微嫁接，将砧穗用锡箔纸固定后，接种于生根培养基中，成活率可达75%，生根率达56%。

关键词：新梨7号杜梨外植体增殖培养微嫁接

不同激素种类和配比对杜梨组培继代苗愈伤组织发生及状态的影响

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不同激素种类和配比对杜梨组培继代苗愈伤组织发生及状态的影响

作者：李本波河北农业大学

学位级别：硕士

本研究以河北农业大学园艺学院梨工程技术中心组培快繁中心培养的梨砧木品种杜梨试管苗为试材,对单一激素不同浓度及不同激素组合配比对杜梨愈伤组织的诱导作用及组培苗的生长发育的影响,以及不同的愈伤组织类型及大小与组培苗生长发育... 详细信息

本研究以河北农业大学园艺学院梨工程技术中心组培快繁中心培养的梨砧木品种杜梨试管苗为试材,对单一激素不同浓度及不同激素组合配比对杜梨愈伤组织的诱导作用及组培苗的生长发育的影响,以及不同的愈伤组织类型及大小与组培苗生长发育之间的关系进行了系统研究,成功得出了最适宜杜梨继代苗生长发育及愈伤组织诱导的激素配比,以及添加不同的外源激素后对杜梨愈伤组织中内源激素含量的影响主要研究结果如下:1)在对杜梨继代苗进行愈伤组织的诱导中,单一激素不同浓度及不同激素组合配比对于其诱导作用有显著的差异,其中合适浓度的NAA和6-BA的组合既能诱导出适宜的愈伤组织又能保证组培苗的旺盛生长,当NAA浓度在0.1～0.5 mg/L, 6-BA浓度在0.5～2.0 mg/L时,得到的愈伤组织及组培苗的生长状况均较好。2)虽然NAA和2,4-D的组合处理的组培苗生长势很弱,甚至有一部份枯死,但是其诱导出的愈伤组织却比其他处理诱导出的愈伤组织都要大很多,这与添加外源激素后愈伤组织中内源激素的含量变化有关。3)添加单一NAA时,干物质的平均含量为0.5295g;单一添加6-BA时,干物质的平均含量为0.7978g;单一添加2,4-D时,干物质的平均含量为0.5606g;2,4-D与NAA混合使用时,干物质的平均含量为0.1108g;NAA与6-BA混合使用时,干物质的平均含量为0.1796g。虽然含量有所不同,但是同一激素不同浓度处理之间没有明显的变化;两种外源激素配合使用时,组培苗的干物质量会比单一添加外源激素时减少。4)单一添加外源激素时,愈伤组织内源GA、ABA、IAA、ZT都得到显著的提高,最高值分别为142.74ng/g、55.36 ng/g、24.34 ng/g、22.16 ng/g;而添加两种激素时,愈伤组织内源GA、ABA、IAA、ZT发生不同的变化,其外在表现为愈伤组织生长表现出很大的差异。5)外源激素和内源激素在杜梨愈伤组织培养中有着较强的相互作用,添加不同的单一外源激素后,均表现出促进杜梨内源激素的合成,使其内源激素总体水平提高,同时还可以引起激素间的比值发生变化;但不同外源激素对杜梨愈伤组织内源激素影响存在一定的差异,在某种内源激素含量或不同内源激素比值方面远远偏离不添加外源激素的愈伤组织的激素分布状态。

关键词：杜梨愈伤组织培养内源激素外源激素组培苗生长

多年继代保存苹果组培苗繁殖特性及遗传稳定性研究

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多年继代保存苹果组培苗繁殖特性及遗传稳定性研究

作者：刘颖河北农业大学

学位级别：硕士

继代保存多年后苹果组培苗的生长繁殖特性和遗传稳定性的研究对苹果种质离体保存适宜年限的确定具有重要意义。本试验对不同年限接种的‘金冠’、‘乔纳金’、‘嘎啦’、‘富士’茎尖组培苗分别进行了继代增殖、不定根诱导和离体叶片不... 详细信息

继代保存多年后苹果组培苗的生长繁殖特性和遗传稳定性的研究对苹果种质离体保存适宜年限的确定具有重要意义。本试验对不同年限接种的‘金冠’、‘乔纳金’、‘嘎啦’、‘富士’茎尖组培苗分别进行了继代增殖、不定根诱导和离体叶片不定芽再生能力研究和内源激素的分析,并从形态特征、核DNA含量、细胞学特性及分子标记AFLP分析等方面评价了其遗传稳定性。主要研究结果如下:1.外植体接种初期3～4年以内,即继代次数为24或40代时,‘富士’、‘金冠’、‘乔纳金’的新梢增殖能力较低,‘嘠啦’生根率较低,‘金冠’、‘富士’、‘嘠啦’离体叶片再生率较低,随着培养时间延长,继代次数增加,以上品种的继代增殖效率、生根能力及离体叶片再生能力均稳定在较高水平。长期继代保存的苹果品种茎尖组培苗(‘富士’已保存25年,‘金冠’、‘乔纳金’19年,‘嘠啦’10年)仍保持其器官再生能力。2.随继代次数的增加,试管苗中ABA和ZR含量呈下降趋势,反映了试管苗芽分化和不定根生长。继代初期,GA含量较高。随保存时间的延长,IAA/ZR比值稳定在较高水平,使苹果组培苗保持稳定的增值和生根能力。3.‘乔纳金’、‘金冠’、‘嘎啦’不同继代次数组培苗移栽,移栽成活率均较高;移栽初期,株高和叶面积均无显著差异,叶片数有差异,代数少的组培苗叶片数少。移栽后期,株高、叶面积、叶片数均无差异。说明3个品种组培苗遗传稳定性未发生变化。4.不同继代次数组培苗在细胞核DNA含量或细胞倍性上均没有差别,遗传性保持稳定。利用流式细胞仪测定了‘乔纳金’、‘嘎啦’、‘富士’苹果组培苗细胞核DNA含量,不同倍性品种间细胞核DNA含量差异显著。‘嘎啦’、‘富士’二倍体细胞核DNA含量平均为2.27 pg,‘乔纳金’三倍体细胞核DNA含量平均为3.13 pg。5.对‘金冠’、‘乔纳金’‘嘎啦’、‘富士’4个苹果品种组培苗进行根尖染色体制片,均未观察到染色体数目、形态等变异。6.用10对引物对,对‘乔纳金’、‘金冠’、‘富士’和‘嘎啦’四个品种的组培苗DNA样品进行了AFLP分析。引物对E-AAC/M-GAC、E-ATC/M-CCG、E-CTA/M-AGG、E-TAA/M-CTG可以区分四个品种,区分率为100%,共扩增出430条清晰可辨的AFLP带,同一品种不同继代次数间DNA样品的指纹图谱未发现特异性条带。证明在所检测的范围内继代培养未对苹果茎尖组培苗碱基序列产生影响,DNA水平上未发生变异,具有高度的遗传稳定性。

关键词：苹果继代培养次数繁殖能力遗传变异 AFLP

转基因苹果对微生物群落数量及植株花粉育性影响研究

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转基因苹果对微生物群落数量及植株花粉育性影响研究

作者：王倩倩河北农业大学

学位级别：硕士

随着转基因作物的商品化和种植种类、面积的的不断增加，以及人类安全意识的提高，转基因作物的生态安全问题也越来越引起人们的关注。本试验选用继代保存13年的转CpTI基因苹果组培苗和定植8年的田间转基因植株，研究外源基因在受体植... 详细信息

随着转基因作物的商品化和种植种类、面积的的不断增加，以及人类安全意识的提高，转基因作物的生态安全问题也越来越引起人们的关注。本试验选用继代保存13年的转CpTI基因苹果组培苗和定植8年的田间转基因植株，研究外源基因在受体植株根系的稳定遗传性;分析外源基因在土壤残留情况;分析外源基因在土壤可培养微生物存在情况;研究转基因植株对根际微生物的影响;本实验室研究发现转基因苹果花粉离体萌发率和花粉生活力都显著低于非转基因苹果，本试验通过显微观察转基因苹果花粉形成过程，探索导致以上现象的原因。主要研究结果如下：1对继代培养13年的嘎拉、王林、富士共129株转CpTI基因苹果组培苗的根系进行PCR检测，结果表明：129株组培苗的根系均扩增出了CpTI特异基因片断，说明外源CpTI基因在转基因苹果组培苗根系形成过程中，没有发生丢失。2对定植田间8年的8个株系的转CpTI基因苹果的根际土、根围土、表层土进行PCR检测，结果表明：转基因苹果根际土和根围土全部检测到了CpTI基因;转基因苹果的表层土的2个株系检测到了外源CpTI基因，说明外源CpTI基因在转基因植株根系土壤存在残留。3培养检测到外源基因的表层土、根围土、根际土的微生物，得到262株细菌、189株放线菌和146株真菌，对其进行PCR检测，所有可培养细菌、放线菌和真菌均没有检测到外源CpTI基因。4用无菌蛭石：草炭（1：1）的基质，加入微生物菌肥，统计栽种30d、60d和90d的转基因苹果（嘎拉、王林、富士）根际土细菌、放线菌和真菌的数量，结果表明：30d时，转基因苹果根际土细菌、真菌数量显著高于对照;60d时，转基因苹果根际土真菌数量显著高于对照，转基因王林细菌数量显著低于对照;90d时，转基因富士真菌数量显著高于对照，转基因苹果细菌数量与对照差异不显著;转基因苹果根际土放线菌数量与对照差异均不显著。5三月中旬至四月上旬，每隔3d采集转基因苹果的花蕾（花芽），采用石蜡切片法，显微观察花粉形成过程，结果表明：在花药发育初期，造孢细胞与花粉囊壁部分分离，导致花粉发育中营养缺乏，是后期花粉离体萌发率、生活力较低的原因。

关键词：苹果 CpTI基因根系土壤微生物花粉育性

根系分区灌水对苹果生长及生理特性的影响和节水效应分析

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根系分区灌水对苹果生长及生理特性的影响和节水效应分析

作者：张卿河北农业大学

学位级别：硕士

本文研究了新型的节水灌溉技术—根系分区灌水条件下苹果树体生长状况、生理变化及水分利用效率，试验以三年生分根盆栽皇家嘎拉(Malus domestica *** Gala)苹果为试材，由四个长宽均为20cm高36cm的塑料花盆捆绑构成一个复合盆，根系均... 详细信息

本文研究了新型的节水灌溉技术—根系分区灌水条件下苹果树体生长状况、生理变化及水分利用效率，试验以三年生分根盆栽皇家嘎拉(Malus domestica *** Gala)苹果为试材，由四个长宽均为20cm高36cm的塑料花盆捆绑构成一个复合盆，根系均匀分布在四个盆中，设计了四种灌水方式：(1)全根系灌水，每次对四个盆均灌水;(2)3／4根系灌水，每次对其中三个瓮灌水;(3)2／4根系灌水，每次对其中两个盆灌水;(4)1／4根系灌水，每次只对其中一个盆灌水;三种灌水量，即每次每盆灌水500mL、每次每盆灌水750mL、每次每盆灌水1000mL。研究各个处理对苹果叶片水势(LWP)、净光合速率(Pn)、气孔导度(Gs)、新梢生长、根系及叶片中ABA含量、干周、根系生长量及水分利用率的影响。主要研究结果如下：1．不同灌水方式处理土壤水势表现不同，其中4／4、3／4、2／4灌水方式处理土壤水势依次升高，即灌水面积愈大，土壤水势愈低，植株所受土壤水分胁迫愈强。在每盆灌水量相同情况下，1／4根系体积与全根系灌水处理黎明前叶水势及中午叶水势差异显著，2／4与3／4根系体积灌水处理的差异不显著，与全根系灌水处理相比，差异不显著;1／4根系体积灌水处理的叶水势一直处于最低值，全根系灌水处理的一直处于最大值。同一灌水方式下三种灌水量之间中午叶水势差异不显著，而黎明前500mL灌水量处理的叶水势显著低于1000mL灌水量处理。2．根系分区灌水对气孔导度和净光合速率影响显著。相同灌水量下，1／4根系体积灌水处理的气孔导度和净光合速率一直处于最低值，全根系灌水处理的一直处于最大值，1／4根系体积与全根系灌水处理的气孔导度和净光合速率差异显著，2／4与3／4根系体积灌水处理的差异不显著，与全根系灌水处理相比差异不显著。同一灌水方式下，不同灌水量间气孔导度和净光合速率值差异不显著，大小顺序为：1000mL＞750mL＞500mL。3．相同灌水量下，1／4、2／4、3／4根系体积灌水处理均不同程度抑制了春秋梢的生长，且根系干旱的体积愈大，抑制作用愈显著。1／4根系体积灌水严重抑制了新梢的生长，不能满足新梢生长需要;2／4、3／4根系体积灌水中，500mL灌水量处理严重抑制新梢生长;全根系灌水中，新梢长势旺盛，随灌水量增加新梢生长量增大。4．相同灌水量下，根系干旱区域越大，根系及叶片中ABA含量越大，即1／4＞2／4＞3／4＞全根系，1／4根系体积灌水处理的ABA含量与全根系灌水间差异显著，1／4、2／4及3／4灌水的处理间差异不显著。同一灌水方式中，随着灌水量的增大，根系及叶片中ABA含量减少，1／4、2／4根系体积灌水中，三种灌水量之间差异不显著;3／4和全根系灌水中，500mL和750mL灌水量间差异不显著，500mL灌水量和1000mL灌水量处理间差异显著。5．相同灌水量下，不同灌水方式对基部主干的增粗影响显著。1／4灌水方式显著抑制了主干增长;而相同灌水方式下，三种灌水量对基部主干的增粗影响显著，500ml灌水量显著抑制了主干增长。6．相同灌水量下随根系灌溉体积减少，根系生长量也相应减少，1／4灌水方式显著抑制了根系生物产量的形成;同一灌水方式中，植株根系生长量随灌水量减少而减少，500mL与1000mL灌水量对植株根系生物产量影响差异显著。7．从减少耗水量和不对干物质产生较大影响角度考虑，水分利用效率以控制2／4根系体积、75％灌水量处理的为适宜，干物质量仅下降26.2％而耗水量减少64.0％，水分利用效率为CK的2.1倍，节水效果明显。

关键词：苹果根系分区灌水节水效应