检索结果-南通市图书馆

作者：朱碧文仲恺农业工程学院

学位级别：硕士

禽蛋人工孵化利用自动控制技术和仿生物学原理为胚胎发育提供适宜的环境,从而得到大量优质雏苗。鸭蛋孵化技术及所用孵化机套用了鸡用机器,使孵化率相对要低。其主要原因是因为鸭蛋体积、重量大,应用鸡蛋孵化技术时影响胚胎发育和成活... 详细信息

禽蛋人工孵化利用自动控制技术和仿生物学原理为胚胎发育提供适宜的环境,从而得到大量优质雏苗。鸭蛋孵化技术及所用孵化机套用了鸡用机器,使孵化率相对要低。其主要原因是因为鸭蛋体积、重量大,应用鸡蛋孵化技术时影响胚胎发育和成活率。本研究参考采用加大翻蛋角度提高鹅种蛋孵化率的最新研究进展,研究在不同的孵化阶段调整翻蛋角度,以进一步提高鸭种蛋的孵化性能。初步研究表明,增大翻蛋角度能提高鸭胚孵化率、提升鸭苗品质,但孵化后期过大的翻蛋角度会导致后期死胚率相对较高。然而其内在机制尚不清楚,且高品质鸭苗的后续生长性能也无证可循,从而影响变角度翻蛋技术的推广应用。本文旨在探究75°-60°“变角度”翻蛋技术对促进鸭胚胎发育、提高孵化性能和加速鸭苗生长的机理,丰富对禽蛋孵化过程中翻蛋作用的认识,为优化孵化工艺提供理论依据,从而有利于鸭种蛋变角度孵化新技术的全面推广应用。同时该技术能有效提高樱桃谷鸭生产利润5-15%。实验一:变角度翻蛋促进鸭种蛋孵化性能及其分子机制研究孵化过程中翻蛋对提高鸭胚的孵化性能和雏鸭的品质起着重要作用。本试验旨在通过增大孵化过程中翻蛋角度来改善鸭胚发育,并阐明相关的调控分子机制。在6批次连续孵化试验中,每批试验将4224枚鸭蛋分为4组,分别放置在结构相同、翻蛋角度分别为45°、75°和75°-60°(变角度)的商业孵化机内(75°翻蛋组为2辆蛋车)。结果表明,75°-60°“变角度”翻蛋孵化降低了15胚龄后的后期胚胎死亡率,促进了胚胎生长发育,提高了种蛋孵化率和雏鸭品质。与45°翻蛋组比较,75°-60°翻蛋组下丘脑生长激素释放激素(促生长激素)、肝脏生长激素受体m RNA在25、28胚龄时表达显著上调;类胰岛素样生长因子-1m RNA在28胚龄时表达亦明显上调,而75°-60°翻蛋组垂体生长激素m RNA在25、28胚龄时与其他两组比较均无显著差异。实验二:变角度翻蛋对孵化后肉鸭生长的影响及其相关机制探讨孵化过程中变角度翻蛋促进鸭胚胎和肌肉发育。本试验以45°、75°和75°-60°翻蛋角度下蛋孵化出的216只雄性樱桃谷鸭为研究对象,通过血浆激素水平和促生长基因m RNA表达水平对其生长性能进行了评价。结果表明,在22日龄前,75°-60°翻蛋组肉鸭体重显著均大于45°翻蛋组,腿肌和胸肌重量均显著大于45°翻蛋组。此外,75°-60°翻蛋组下丘脑生长激素释放激素(促生长激素)、肝脏类胰岛素样生长因子-1和生长激素受体基因m RNA表达在孵化后1日龄、22日龄和43日龄均明显上调。垂体生长激素m RNA在1日龄、22日龄和43日龄各组间的表达均无显著差异。由此可见,75°-60°翻蛋组翻蛋通过上调生长轴促生长激素、类胰岛素样生长因子-1和生长激素受体基因m RNA表达和激素分泌,改善雏鸭品质和生长性能。22日龄时,75°-60°翻蛋组总胆固醇含量显著高于45°翻蛋组和75°翻蛋组,提高育成期肉鸭的重量和质量。综上所述,75°-60°翻蛋组孵化阶段能有效促进胚胎发育,提高健雏率和孵化率;肉鸭生长阶段能促进肉鸭体重的增长以及胸肌,腿肌的生长,改善肉鸭品质。

关键词：鸭翻蛋角度孵化生长生长轴激素

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鹅卵泡发育和产蛋的免疫调控技术研究

鹅卵泡发育和产蛋的免疫调控技术研究

作者：杨鹏霞南京农业大学

学位级别：硕士

禽类的卵泡发育过程受到下丘脑-垂体-性腺轴内分泌激素和卵巢局部旁分泌和自分泌因子的共同调控,主要包括原始卵泡的募集、等级前卵泡选择以及等级卵泡的发育和成熟。FSH和LH是家禽卵泡发育的主要中枢性调控因子,而局部调控因子TGF-β... 详细信息

禽类的卵泡发育过程受到下丘脑-垂体-性腺轴内分泌激素和卵巢局部旁分泌和自分泌因子的共同调控,主要包括原始卵泡的募集、等级前卵泡选择以及等级卵泡的发育和成熟。FSH和LH是家禽卵泡发育的主要中枢性调控因子,而局部调控因子TGF-β通过自/旁分泌形式影响卵泡颗粒细胞增殖分化,与FSH协同调节卵泡发育。ACT、INH和FST(Activin,ACT、Inhibin,INH和Follistatin,FST)通过在垂体水平影响FSH的分泌和在卵泡水平影响颗粒细胞的增殖和分化两方面调节卵泡发育。恰当调控这些因子的分泌或生物学活性,可增强家禽的卵泡发育潜力,从而影响或提高母禽的产蛋性能。本研究分别选用不同类型的鹅种(就巢鹅和非就巢鹅)为研究对象,首先运用原核表达技术成功获得AMH、INHβB、INHα和FST重组蛋白,然后通过主动免疫方法诱导鹅体内产生相应的抗体,观察这些卵巢局部生长对卵泡发育和产蛋的影响,以期为提高鹅的产蛋性能提供技术支持。试验一本试验首先通过原核表达技术成功获得AMH、AMH-INHβB和AMHFST融合蛋白,然后选择同批次、正在就巢的狮头鹅120只,随机分成4组,每组30只(公鹅5只,母鹅25只),分别主动免疫BSA、AMH、AMH-INHβB和AMH-FST融合蛋白各1 mg。首次免疫当天记为试验第1天。此后,分别于第21、42天各加强免疫一次。本试验观察了一个产蛋-就巢周期内的产蛋和种蛋受精情况。结果显示,主动免疫AMH-FST和AMH融合蛋白能够有限地提高狮头鹅母鹅的产蛋量;主动免疫AMH-INHβB、AMH-FST能够显著提高种蛋的受精率和孵化率。试验二本试验首先通过原核表达技术成功获得INHα亚基重组蛋白,然后选取60只同批次、即将开产的浙东白鹅(165日龄),随机分为2组,每组30只,试验组每只鹅免疫INHα亚基重组蛋白1 mg,对照组每只鹅免疫BSA 1 mg。首次免疫当天记为试验第1天。此后,分别于第21、42和63天各加强免疫一次。本试验在第一个产蛋-就巢周期内观察了产蛋和就巢情况以及血浆孕酮浓度变化,在第二个产蛋-就巢周期内检测了卵泡发育情况和等级卵泡颗粒层孕酮合成、卵黄沉积和细胞凋亡等相关基因的表达量变化。结果显示,免疫INHα亚基降低浙东白鹅的产蛋量和血浆孕酮水平,延迟就巢发生,增加等级前卵泡数量,下调等级卵泡颗粒层中LHR m RNA表达量,上调OCLN和Fox O3 m RNA表达量。结果表明,INHα亚基在促进鹅等级卵泡颗粒层孕酮合成、卵黄沉积和细胞增殖方面发挥着重要作用,也表明免疫INHα亚基不利于家禽卵巢等级卵泡发育。试验三本试验首先通过原核表达技术成功获得FST重组蛋白,然后选取64只同批次、产蛋后期的扬州鹅,随机分为2组,每组32只,试验组每只鹅免疫FST重组蛋白1 mg,对照组每只鹅免疫BSA 1 mg。首次免疫当天记为试验第1天。此后,于第21天加强免疫一次。本试验观察了产蛋和卵泡发育情况,并检测了不同等级卵泡颗粒层孕酮合成、卵黄沉积和Smad信号通路等相关基因的表达量变化。结果显示,主动免疫FST增强等级前卵泡发育潜力,提高产蛋量。此外,主动免疫FST上调等级前卵泡颗粒层LHR、STAR、VLDLR、Smad3和Smad4基因的m RNA表达量。结果表明,FST通过降低卵泡对激活素的敏感性限制鹅等级前卵泡的发育,且该作用是通过调控Smad3信号通路影响等级前卵泡中孕酮合成和卵黄沉积来实现的。综上所述,主动免疫INHα亚基尽管促进等级前卵泡发育,但是抑制等级卵泡发育和成熟;而主动免疫FST不仅促进等级前卵泡发育,而且不影响等级卵泡发育和成熟。因此,本研究提出可以通过联合免疫INHα-AMH或者FST-AMH融合蛋白方法,首先中和INHα或者FST的生物活性使得大白卵泡持续发育成小黄卵泡,然后中和AMH的生物活性使得这些小黄卵泡入选等级卵泡发育并排卵,从而提高鹅的产蛋性能,增加种鹅生产者的经济效益。

关键词：鹅抑制素卵泡抑素主动免疫卵泡发育产蛋量

鹅种蛋高效孵化技术及生长激素分泌的分子调控机制研究

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鹅种蛋高效孵化技术及生长激素分泌的分子调控机制研究

作者：赵兴飞吉林农业大学

学位级别：硕士

一般鹅种蛋在自然孵化条件下的受精蛋孵化率高,但是孵化效率低,难以满足规模化养鹅业的鹅苗需求。简单的沿用鸡用孵化机孵化鹅蛋,往往造成本就有限的鹅蛋孵化出的雏鹅更少。因此,如何将有限的鹅蛋孵化出更多、更健壮的雏鹅,便成为当今... 详细信息

一般鹅种蛋在自然孵化条件下的受精蛋孵化率高,但是孵化效率低,难以满足规模化养鹅业的鹅苗需求。简单的沿用鸡用孵化机孵化鹅蛋,往往造成本就有限的鹅蛋孵化出的雏鹅更少。因此,如何将有限的鹅蛋孵化出更多、更健壮的雏鹅,便成为当今养鹅业亟待解决的难题。试验1:通过观察鹅种蛋自然孵化与鸡用孵化机的区别,提出了大角度翻蛋的孵化策略,发现大角度翻蛋策略显著提高受精鹅蛋的孵化率。进一步研究发现,在孵化的19-28天之间,60°组比70°组的死胚率低两个百分点。因此,设计了“变角度”翻蛋策略的试验,即在孵化的0-18天,将前后翻蛋角度设定为70°(翻蛋角度为140°),孵化的19-28天前后翻蛋角度调整到60°(翻蛋角度为120°)。发现,虽然变角度翻蛋策略在统计学上看差异不显著,但是孵化的两种鹅蛋的受精蛋孵化率都是最高,霍杂鹅蛋最高可达91.76%,远远高于常规孵化机翻蛋角度的(前后翻蛋角度设定为45°-50°)受精蛋孵化率的85%。此外,发现三花与霍杂(霍尔多巴吉鹅与泰州鹅杂交)鹅蛋的最佳翻蛋角度有差异。三花鹅蛋的最佳的前后翻蛋角度为60°,受精蛋孵化率为86.31%;霍杂鹅蛋的最优的前后翻蛋角度为70°,受精蛋孵化率高达90.56%。进一步发现,大角度翻蛋影响的是18-29天的死亡率。在三花鹅蛋孵化中,大角度组(70°组)比小角度组(50°组)18-29天的死亡率低2.18%;霍杂鹅蛋孵化中,大角度组(70°组)比小角度组(50°组)18-29天的死亡率低2.19%。且出生雏鹅体重也与翻蛋角度有关。翻蛋角度越大,雏鹅出生体重越大。其中50°组为108.26±9.77 g;60°组为109.37±9.89 g;70°组为111.38±8.29 g;变角度组为110.63±10.48 g。检测27E(27胚龄)胚胎及出生后1D(1日龄)雏鹅的生长相关关键激素发现,大角度组与生长相关的关键激素T3、GH和IGF1都显著高于小角度组。试验2:基于试验1大角度组的雏鹅出生体重变大以及血液中生长相关激素升高的试验结果,设计了验证大角度翻蛋通过影响T3分泌,从而影响雏鹅生长相关激素分泌的试验。通过腹腔注射不同浓度的T3发现,注射12 h后,在32.5-130μg/kg剂量组的雏鹅血液中的GH,相较于对照组有极显著的提高。进一步观察注射后不同时间GH的浓度变化发现,在腹腔注射65μg/kg T3后8 h,血液中的GH相对于对照组显著上升。这也表明大角度翻蛋极有可能通过影响胚胎体内的甲状腺激素的浓度来调控鹅胚后期及雏鹅的生长。此外,对下丘脑中生长相关的关键基因进行定量分析发现,腹腔注射T3后,下丘脑的THRB和Raldh1有显著升高外,GHRH、RARB以及RXRA的表达无显著差异。这些数据说明,T3可能不通过下丘脑GHRH通路调控鹅胚胎的体重生长来影响雏鹅的体重。试验3:为了进一步阐明T3调控GH的具体信号通路调控机制,基于试验2雏鹅注射T3后GH浓度变化的结果,选择T3注射后2 h和8 h的雏鹅下丘脑组织进行了转录组测序。结果显示,T3注射后,差异基因中转甲状腺素蛋白(TTR)基因表达最高,这一结果提示,高浓度T3下调下丘脑细胞TTR的表达生成,以调节T3生理稳态,同时影响血液以及脑脊液视黄醇的浓度。T3注射后,对仅存在于8 h的差异基因进行富集分析,结果显示,差异基因显著富集于视黄醇-RA的代谢途径。这也提示,视黄醇-RA的代谢途径响应了T3的改变,这也说明视黄醇-RA的代谢途径可能是T3调控生长的中间途径。

关键词：鹅蛋孵化翻蛋角度胚胎发育甲状腺激素生长激素

立体多层笼养肉鸭舍夏冬季环境参数与生产性能的比较研究

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立体多层笼养肉鸭舍夏冬季环境参数与生产性能的比较研究

作者：李明阳南京农业大学

学位级别：硕士

为了提高土地利用效率和缓解养殖对环境造成的压力,肉鸭行业开发了立体多层笼养肉鸭模式进行规模化和高密度养鸭。前期调查研究和试验表明,多层笼养鸭舍内各项环境因子在不同季节有较大差异,可能影响舍内不同空间区域肉鸭的生长性能,从... 详细信息

为了提高土地利用效率和缓解养殖对环境造成的压力,肉鸭行业开发了立体多层笼养肉鸭模式进行规模化和高密度养鸭。前期调查研究和试验表明,多层笼养鸭舍内各项环境因子在不同季节有较大差异,可能影响舍内不同空间区域肉鸭的生长性能,从而影响生产性能和经济效益。本研究旨在监测立体多层笼养肉鸭舍夏季和冬季环境参数的变化状况,分析不同季节鸭舍内环境参数的分布特点以及对生产性能的影响,为调控优化肉鸭不同季节的生长环境提供理论依据。分别于2018年6-7月（夏季）和11-12月（冬季）,在山东新泰的试验鸭舍内不同位置（前、中、后、上、下、南、北）布置7个监测点,监测舍内温度、湿度、风速和空气粉尘、细菌、NH3和CO2浓度等环境因子的变化。所完成的结果如下:夏季舍内空气粉尘、细菌、NH3、CO2和水汽浓度沿鸭舍纵向不断升高且差异显著（P＜0.05）,而温度在中部最高,呈凸型变化趋势。夏季各层之间NH3、CO2浓度从上到下逐渐升高且差异显著（P＜0.05）,中层温度显著高于上下层（P＜0.05）。此外,夏季南部的细菌浓度显著大于北部（P＜0.05）,其余环境因子在南北侧之间没有显著差异（P＞0.05）。鸭舍在冬季采用侧向小窗进风的通风方式,各环境因子在舍内纵轴方面呈现中间显著高于两端的变化趋势（P＜0.05）。在各层鸭笼之间,冬季中层的空气NH3、CO2浓度显著高于上、下层（P＜0.05）,而下层的温度和空气细菌浓度则显著高于上层和中层（P＜0.05）,其余各项环境因子在不同层间差异不显著（P＞0.05）。冬季舍内南北两侧横向区域,南侧PM10和大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及总细菌浓度显著高于北侧（P＜0.05）,这提示鸭舍南侧内环境条件比北侧要差。夏季舍内温度、水汽浓度和风速均显著高于冬季（P＜0.05）,而粉尘、细菌、NH3和CO2浓度则显著低于冬季（P＜0.05）。在夏季和冬季,试验鸭舍内不同区域的粉尘浓度与气载菌浓度为显著正相关关系,风速与NH3、CO2浓度显著负相关。对舍内通风气流场进行模拟分析,揭示夏季纵向通风时舍内各处风速较为稳定,在上中下三层鸭笼间风速从上到下逐渐减小。冬季采用侧窗通风时以及排风机开启不对称,均造成舍内气流场分布不均匀和较多通风死角。在肉鸭生产性能方面,夏季平均体重在进风口区域显著高于出风口区域（P＜0.05）,各层之间以及南北两侧体重差异不显著;而冬季在鸭舍中部肉鸭体重显著高于前后部,下层体重显著低于上层和中层,北侧体重显著高于南侧,这与舍内环境因子变化规律相吻合。冬季肉鸭体重与NH3、CO2、水汽浓度以及温度显著负相关,说明这些环境因子在冬季污染严重,在空间范畴显著影响肉鸭生长性能。分析多层笼养鸭舍养殖的20批肉鸭生产性能和经济效益数据,结果揭示夏季肉鸭出栏日龄比冬季延长2天以上,这与夏季热应激降低采食量有关。冬季成活率比夏季低1.99个百分点,这与冬季鸭舍通风不足、有害气体与病菌浓度较高有关。料肉比、单只用药费用在夏冬季之间无显著差异。结论:当前采用的肉鸭多层立体笼养舍的环境控制技术,主要表现为夏季降温不足无法有效避免热应激和促进鸭子生长性能,其次是通风纵轴方向空气质量差异所造成的鸭子生产性能不均匀。冬季舍内通风换气量小且存在死角,造成局部如下层笼的空气污染程度较高,降低了肉鸭的健康和成活率。今后需要采用更为精准的通风降温措施,以降低夏季热应激并提高通风末端的空气质量,提高鸭子生长性能和均匀度;冬季则要进一步调整进风小窗实现精准定位通风,消除通风死角降低舍内有害气体和有害菌浓度,提高鸭子健康和成活率。

关键词：立体多层笼养鸭舍空气环境因子季节鸭生产性能经济效益

西藏小型猪Leptin及其受体基因重组融合蛋白的制备

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西藏小型猪Leptin及其受体基因重组融合蛋白的制备

作者：吴丽红南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化,肥胖在全世界呈流行趋势。肥胖既是一种独立的疾病,又是糖尿病、脂肪肝、高血压等疾病的诱发因素。研究肥胖成因、控制和治疗肥胖症方法已刻不容缓。建立理想的肥胖症动物模型是研... 详细信息

研究背景随着人们生活水平的提高和饮食结构的变化,肥胖在全世界呈流行趋势。肥胖既是一种独立的疾病,又是糖尿病、脂肪肝、高血压等疾病的诱发因素。研究肥胖成因、控制和治疗肥胖症方法已刻不容缓。建立理想的肥胖症动物模型是研发相关药物及肥胖机制研究的基础。目前,常用的肥胖综合症动物模型基本上都是用啮齿类动物,具体方法有：高脂高糖高蛋白饮食法、电解法、谷氨酸钠、金硫葡萄糖法。另外还有肥胖大鼠和糖尿病等遗传性动物模型。美国科学家研究发现瘦素（leptin）及瘦素受体（OBR）功能异常、leptin抵抗是导致肥胖的主要原因之一。因此,leptin及其受体功能研究为肥胖症动物模型建立提供了思路。小型猪物质代谢形式、各器官形态和生理功能与人有很多相似性、体型小、易于操作,是制作代谢性疾病的理想模型动物。西藏小型猪是新型的实验动物,是体型最小、体重最轻的猪种之一,具有皮下脂肪沉积少的特点。因而西藏小型猪适宜用于制作肥胖综合症动物模型。研究目的和意义本研究克隆leptin及其受体基因,原核表达制备leptin成熟肽和OBR重组融合蛋白,为进一步建立肥胖症西藏小型猪模型和探寻预防控制肥胖方法提供材料和基础。传统的造模方法不能很好模拟人类肥胖的发生过程,且基本局限于啮齿类动物和极端的造模方法。目前,leptin及其受体重组融合蛋白免疫法主要应用于调控动物生产和育肥,而尚未见有利用瘦素及其受体重组融合蛋白免疫法建立肥胖症模型、预防控制肥胖的报道。因此利用瘦素、瘦素受体重组融合蛋白免疫法建立人类肥胖症西藏小型猪模型、探寻控制预防肥胖的方法具有特别意义。研究方法和结果本文研究的主要内容分三个部分。第一章西藏小型猪leptin及其受体基因的克隆根据西藏小型猪leptin基因序列（GenBank号：GQ240885.1）和猪OBR基因序列（GenBank号：AF092422.1）设计特异性引物。以西藏小型猪皮下脂肪组织的总RNA为模板,通过RT-PCR法扩增出leptin的cDNA片段。另以西藏小型猪肝脏组织的总RNA为模板,通过RT-PCR法扩增出OBR基因ECD（胞外区）、ICD（胞内区）的cDNA片段,然后利用重叠PCR法将OBR基因ECD、ICD连接起来,得到OBR基因的全cDNA序列。纯化后,leptin及OBR基因的cDNA片段连接到pMD18-T载体,转入***5α感受态细胞后进行PCR鉴定和测序分析,并将测序正确的转化菌进行保种。西藏小型猪OBR基因测序后与GenBank上报道的不同猪种及其它物种作同源性比较及亲缘进化树分析。结果表明,扩增获得的leptin基因序列长度为504bp, OBR基因序列长度为3498bp;leptin的cDNA测序结果经过DNA Star生物软件与Genbank（登陆号：GQ240885.1）上公布的序列进行对比分析,发现一处无义突变,可用于下一步表达载体的构建;西藏小型猪OBR基因与Genbank上报道的猪及其它物种相应的核苷酸序列作同源性比较分析,结果为：与野猪及广西巴马小型猪的亲缘性最高（99.6%）,其次奶牛（91.1%）,再次犬（90.0%）,人类为88.3%。第二章西藏小型猪leptin成熟肽及其受体ECD片段原核表达载体的构建以leptin及OBR基因转化阳性菌为模板,另设计四对带有BamHⅠ和HindⅢ酶切位点的特异性引物,利用套式PCR的方法分别扩增leptin成熟肽（64～504bp）和OBR基因ECD近信号肽区（322～969bp）、LBD区（1072～1641bp）及近跨膜区（1705～2364bp）相应的cDNA片段。扩增片段纯化后,连接到pMD18-T载体中。阳性重组质粒分别加入限制性内切酶BamHⅠ、HindⅢ进行定向酶切,将酶切获得的四个目的片段分别定向连接到pRSETA载体。构建好的四个表达载体转化到*** BL21 （DE3）感受态细胞中,然后抽提重组质粒进行PCR、双酶切（BamHⅠ、HindⅢ）鉴定,对于鉴定为阳性的重组质粒送往上海英骏生物技术公司测序,以保证插入目的基因后重组质粒的阅读框架正确。结果显示,本实验成功克隆leptin成熟肽和OBR基因ECD近信号肽区、LBD及近跨膜区相应的cDNA片段。重组质粒鉴定结果显示PCR、双酶切得到的片段与leptin成熟肽和OBR基因ECD近信号肽区、LBD、近跨膜区cDNA序列片段及载体pRSETA的理论分子量相符。测序结果经过DNA Star生物软件分析,插入目的基因后重组质粒的阅读框架正确。说明目的基因的cDNA序列已经成功插入到pRSETA载体中,成功构建了leptin成熟肽和OBR基因ECD近信号肽区、LB

关键词：西藏小型猪 leptin OBR 原核表达重组融合蛋白

重组猪抑制素抗原的高密度发酵与纯化工艺研究

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重组猪抑制素抗原的高密度发酵与纯化工艺研究

作者：翟颖超南京师范大学

学位级别：硕士

抑制素(INH)是一种主要由雄性动物睾丸支持细胞和雌性动物卵巢颗粒细胞分泌的糖蛋白激素,对动物生殖机能具有重要调节作用。本研究从工业化大规模生产的成本和安全性的角度出发,用低成本的乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导抑制素的表达。并... 详细信息

抑制素(INH)是一种主要由雄性动物睾丸支持细胞和雌性动物卵巢颗粒细胞分泌的糖蛋白激素,对动物生殖机能具有重要调节作用。本研究从工业化大规模生产的成本和安全性的角度出发,用低成本的乳糖代替IPTG作为诱导剂诱导抑制素的表达。并对下游纯化技术进行了初步的探索。首先,使用20L发酵罐,采用分批补料的方式利用重组大肠杆菌发酵生产重组猪INH蛋白,优化发酵工艺,探究高密度发酵下大量表达重组蛋白的方法。在研究重组大肠杆菌BL21(DE3)的生长特性之后,对发酵的条件进行了优化。首先对发酵的培养基进行了选择和优化,分别比较了 TB培养基、M9培养基和组合培养基对大肠杆菌BL21(DE3)生长状况的影响,描绘出了大肠杆菌的生长曲线。结果表明,用TB培养基培养大肠杆菌后菌体OD600最高达到23,较后两者培养后菌体OD6D0大。而且TB培养基培养后菌体干重为10.72 g/L,同样比其他两个培养基发酵结果理想。因此选择TB培养基进行发酵更加适合。不少研究者在研究诱导剂诱导大肠杆菌表达目的产物时,都以IPTG作为诱导物,虽然IPTG作为诱导剂的诱导效果被研究者所肯定,但由于其价格昂贵且具有一定的毒性,因此只能在实验室小规模的使用,无法大规模工业化生产。乳糖是一种二糖,也可以作为诱导剂诱导大肠杆菌表达重组蛋白,与此同时,还能够作为碳源被大肠杆菌所利用。更重要的是,乳糖价格便宜且无毒,能够大规模制备重组蛋白,因此弥补了 IPTG的缺失。一些文献报道了乳糖替代IPTG作为诱导剂诱导大肠杆菌表达重组蛋白,但是大部分是在摇瓶条件下进行的。由于摇瓶实验不能对溶氧、pH值等条件进行控制,所以探索出的乳糖诱导大肠杆菌表达重组蛋白的条件不能适用于发酵罐中。要想得到乳糖在发酵罐中的诱导状况,需重新探索其各种诱导条件。为此我们研究了乳糖在诱导大肠杆菌表达重组抑制素的最佳诱导条件,包括乳糖诱导浓度以及诱导时间。实验表明,乳糖浓度为10g/L时,菌体密度和干重达到最高,其OD600值为36,菌体干重为20.04g/L。研究发现在一定浓度范围内,随着乳糖浓度的升高,菌体密度也随之升高,然而当乳糖浓度高于10g/L时,菌体密度以及干重均开始下降,因此乳糖诱导最佳浓度为10g/L。随之,我们又研究了乳糖诱导的最佳时间,结果发现诱导开始时,随着乳糖诱导时间的延长,抑制素表达量增加;当诱导时间大约为9小时时,抑制素表达量最大,表达量为57.54%;诱导时间超过9h后,表达量下降。所以乳糖诱导9h时,放料收样为最佳。大肠杆菌BL21(DE3)表达的重组蛋白以包涵体的形式存在。在进行蛋白纯化前,要对包涵体进行洗涤、溶解、复性处理。结果发现,用6mol/L和4mol/L的尿素洗涤包涵体时,上清液中的杂蛋白几乎相同,考虑到尿素对后续实验的影响,我们选择了 4mol/L尿素洗涤包涵体。而且研究发现用8mol/L尿素就能很好的溶解包涵体,使包涵体的溶解率达到80.9%。我们进一步摸索出了显著减少复性蛋白聚体形成的联合聚集抑制剂(50mM Tris-HCl、0.4M L-Arg、0.5%β-巯基乙醇、2%Tween-20)复性缓冲液体系,对直接稀释复性方法进行了改进,即利用分次流加稀释的方法,使复性率提高了 24倍。最后,针对复性好的蛋白,探索比较了分离纯化的方法,制定了一条高效简捷的分离纯化方法:等电点纯化法。经过纯化后的蛋白的最终纯度达到85%以上。综上所述,通过对发酵条件的优化,乳糖诱导的大肠杆菌表达重组抑制素蛋白的表达量可达到57.54%,由于乳糖作为诱导剂大大减低了成本,因此可以大规模用于工业生产,从而推动畜牧业的发展。

关键词：高密度发酵抑制素乳糖诱导包涵体

饲养密度对肉鹅生长性能、生理指标和血清代谢组学的影响研究

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饲养密度对肉鹅生长性能、生理指标和血清代谢组学的影响研究

作者：刘洪洋吉林农业大学

学位级别：硕士

本文旨在研究饲养密度对肉鹅生长性能和血清指标的影响。试验选取20日龄健康三花肉鹅840只,随机分为4组,分别为M2组(2只/m)、M3组(3只/m)、M4组(4只/m)和M5组(5只/m),每组6个重复。试验期自20日龄开始,至70日龄结束。本文共分三部分,第... 详细信息

本文旨在研究饲养密度对肉鹅生长性能和血清指标的影响。试验选取20日龄健康三花肉鹅840只,随机分为4组,分别为M2组(2只/m)、M3组(3只/m)、M4组(4只/m)和M5组(5只/m),每组6个重复。试验期自20日龄开始,至70日龄结束。本文共分三部分,第一部分为文献综述。(第二部分):饲养密度对肉鹅生长性能、血清指标和相关基因表达的影响。结果显示:1)M5组肉鹅的羽毛损伤程度及僵鹅发生比例均显著高于M2组(P0.05);3)M2组肉鹅50和70日龄的平均体重均显著高于M5组(P0.05);5)与M2组相比,70日龄时M4和M5组SOD水平显著降低(P0.05)。(第三部分):饲养密度对肉鹅血清代谢组学的影响。结果显示:上调的缬氨酸、乙酰磷酸、L-谷酰胺、焦谷氨酸、乳酸、柠檬酸、龙胆酸、分支酸和乳清酸以及下调的尿酸、硬脂酸、胆碱磷酸、黄嘌呤、溶血磷脂酰胆碱可能与肉鹅饲养密度密切相关。试验结果表明,较高的饲养密度影响肉鹅生长性能,造成羽毛损伤,并且,高密度养殖更容易导致肉鹅机体出现氧化应激损伤和代谢紊乱等。

关键词：肉鹅饲养密度生长性能血清指标血清代谢组学

鸡催乳素和抑制素α亚基片段重组质粒的构建及其表达、蛋白纯化和鉴定

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鸡催乳素和抑制素α亚基片段重组质粒的构建及其表达、蛋白纯化和...

作者：刘颖东北农业大学

学位级别：硕士

主动免疫催乳素和抑制素可以通过不同的机制影响雌禽的繁殖活动并提高产蛋和繁殖性能，因此在制备抑制禽类就巢的基因工程抗原或疫苗的研究中，选择的思路之一是利用禽类催乳素和抑制素。亚基片段编码基因序列重组为融合基因，以制备同... 详细信息

主动免疫催乳素和抑制素可以通过不同的机制影响雌禽的繁殖活动并提高产蛋和繁殖性能，因此在制备抑制禽类就巢的基因工程抗原或疫苗的研究中，选择的思路之一是利用禽类催乳素和抑制素。亚基片段编码基因序列重组为融合基因，以制备同时包含这两种激素片段的融合蛋白。通过PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡催乳素成熟肽cDNA克隆到载体pRSET A的BglⅡ和EcoRⅠ两克隆位点之间，获得重组质粒pPRL-RSET。家鸡抑制素α亚基片段经扩增后分别被克隆入质粒pRSET A和pPRL-RSET的NheⅠ和XhoI两克隆位点之间，构建成重组质粒pINB-RSET和pINB-PRL。以上重组质粒的构建正确性分别由各特定引物组合扩增的PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒pPRL-RSET和pINB-PRL在转化大肠杆菌BL21(DE3)株后经IPTG诱导后所表达的产物经SDS-PAGE显示分别与所预期的重组蛋白分子量大小相符，两种融合蛋白均是不溶性的，主要以包涵体的形式存在。当0.D在0.6-0.8之间，IPTG终浓度为0.01mmol／L时，诱导2小时pINB-PRL可获得最大的表达量;加入IPTG至终浓度为0.005mmol／L时，诱导4小时pPRL-RSET可获得最大的表达量。质粒pPRL-RSET和pINB-PRL的表达产物和用Ni-NTA凝胶纯化的两重组蛋白产物都与抗鸡催乳素抗体产生特异的免疫印迹，并且表达菌裂解液和相应的纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。以上结果说明成功完成了家鸡催乳素和抑制素α亚基片段重组质粒的构建、蛋白表达和纯化及鉴定工作。

关键词：家鸡催乳素抑制素α亚基片段重组质粒融合蛋白

不同光照因素调控扬州鹅生长、肉品质及机制研究

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不同光照因素调控扬州鹅生长、肉品质及机制研究

作者：任奕会南京农业大学

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本团队前期研究16小时光照时长(16 L:8 D)的单色白光、红光、绿光和蓝光对扬州鹅生长性能的影响,结果发现绿光处理组在出栏时体重高达4 kg,可以有效促进鹅生长发育,且改善肉质等。但延长光照时长会不会进一步提高肉鹅生长性能尚不明确,... 详细信息

本团队前期研究16小时光照时长(16 L:8 D)的单色白光、红光、绿光和蓝光对扬州鹅生长性能的影响,结果发现绿光处理组在出栏时体重高达4 kg,可以有效促进鹅生长发育,且改善肉质等。但延长光照时长会不会进一步提高肉鹅生长性能尚不明确,因此本试验研究了单色绿光和白光及不同光照时长调控扬州鹅生长、肉品质及其作用机制。旨在探讨单色绿光和白光及光照时长对肉鹅生长性能、生长调控机制和肉品质的影响,期获得更优的光照方案,为我国商品肉鹅集约化养殖技术提供可靠的光照参数。本试验选用同批次出雏、健康且平均体重相近的1日龄扬州鹅720只,试验期75天,采用2×2双因素交叉设计,将720只雏鹅随机分为4组:对照组白光16 L:8D、试验组白光22 L:2 D、试验组绿光16 L:8 D和试验组绿光22 L:2 D,公母各占1/2,每组6个重复,每个重复30只鹅。试验结果如下:1、单色绿光、白光以及不同光照时长对扬州鹅生长性能及相关血液生化指标的影响:75日龄时,22小时处理组中,绿光组平均活体重高达4.133kg,显著高于白光22小时处理组3.856 kg(P0.05);试验期,光照处理对各组的饲料转化率无影响(P>0.05),但绿光22小时处理组饲料转化率最低为2.63,其次为绿光16小时处理组2.66,因此,绿光处理可以提高饲料转化率;在各个阶段,绿光16小时处理组血液中GH、IGF-1浓度均显著高于白光16小时处理组(P0.05);75日龄,绿光16小时组胸肌IGF-1R m RNA表达量显著高于白光22小时处理组(P0.05);两个绿光组胸肌Myo G m RNA的表达量高于白光16小时处理组,且差异显著(P0.05);绿光22小时处理组胸肉蛋白含量最高,高达19.367,其次为白光16小时处理组、白光22小时处理组和绿光6小时处理组,分别为19.22、19.00和18.57,但差异不显著(P>0.05),白光处理组脂肪含量高于绿光处理组,且差异显著(P<0.05),22小时处理组的鸟苷酸含量高于白光16小时处理组,差异显著(P<0.05),绿光处理组鸟苷酸含量高于白光处理组,差异极显著(P<0.01);绿光22小时光照处理组蛋氨酸含量较其他三个处理组含量高,差异显著(P<0.05),绿光处理组高于白光处理组,差异极显著(P<0.01),22小时处理组含量高于16小时处理组,差异极显著(P<0.01)。结论:1.绿光作用于下丘脑光感受器调控GHRH的分泌,GHRH促进垂体GH释放从而上调GH m RNA的表达,上调的GH促进肝脏的IGF-1的分泌,从而促进肝脏发育。肝脏和血液中GH、IGF-1的水平上调后促进骨骼肌卫星细胞的增殖和分化,这是绿光导致肉鹅肌肉生长加速的直接原因。22小时处理较16小时处理组上述生长发育相关因子的表达均有上调作用,从而增加75日龄出栏平均活体重和提高饲料转化率。2.22小时绿光处理,降低胸肉蒸煮损失,提高肉质嫩度,提高胸肌鸟苷酸、蛋氨酸含量,从而增加肉质风味和鲜味。

关键词：鹅单色绿光生长性能肉品质基因表达

不同日粮纤维和蛋白水平对雏鹅痛风发生、肠道屏障功能及生长性能的影响

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不同日粮纤维和蛋白水平对雏鹅痛风发生、肠道屏障功能及生长性能...

作者：黄远丕仲恺农业工程学院

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