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作者：袁晔苏州大学

学位级别：硕士

目的了解在铁蓄积骨质疏松小鼠模型中,造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)指标变化及其与骨代谢指标变化的相关性,初步探讨骨质疏松范畴“铁蓄积”对造血系统影响。方法6周C57雄性小鼠分对照组、实验组,实验组用枸橼酸铁铵(Ferr... 详细信息

目的了解在铁蓄积骨质疏松小鼠模型中,造血干细胞(Hematopoietic stem cells,HSCs)指标变化及其与骨代谢指标变化的相关性,初步探讨骨质疏松范畴“铁蓄积”对造血系统影响。方法6周C57雄性小鼠分对照组、实验组,实验组用枸橼酸铁铵(Ferric Ammonium Citrate,FAC)0.1g/kg干预8周,两组均检测:FER(Ferritin,血清铁蛋白)、PINP(Procollagen type I N-terminal propeptide,I型前胶原氨基末端肽)、CTX(Carboxy-terminal telopeptides,破骨标志物),外周血血常规,股骨远端骨小梁三维形态重建和空间结构参数,HSCs占骨髓细胞比例、HSCs细胞集落形成能力,统计分析两组实验数据。结果实验组骨髓HSCs占骨髓比例(4.01%±0.63%)相比于对照组(2.61%±0.43%)显著升高(P<0.05),实验组HSCs细胞集落形成(47个/皿)相比于对照组(142个/皿)显著增多;实验组血清铁蛋白(13.27±0.72μg/L)相比于对照组(4.14±0.96μg/L)显著升高、实验组P1NP(4.62±0.76ng/ml)相比于对照组(8.23±0.66ng/ml)显著降低、实验组CTX(123.54±1.63ng/ml)相比于对照组(83.36±1.89ng/ml)显著升高(P<0.05);实验组组外周血血小板(1380±103*10/L)相比于对照组(1023±83*10/L)显著升高(P<0.05);实验组micro-CT检测的骨密度(50.41±10.27 mg/mm)相比对照组(104.68±8.56 mg/mm)显著下降、实验组骨小梁空间结构参数(bone volume/tissue volume,BV/TV;骨体积分数:10.18%±1.76%;trabecula thickness,***骨小梁厚度:0.057±0.012mm;trabecula number,Tb.N骨小梁数目:1.02±0.21N/mm)相比于对照组(BV/TV:19.92%±1.92%;***:0.098±0.008mm;Tb.N:1.45±0.13N/mm)显著下降(P<0.05)。结论在铁蓄积影响的骨质疏松模型中,铁蓄积不仅对骨代谢指标有显著影响,也对HSCs有显著影响。

关键词：铁蓄积骨质疏松造血干细胞

绝经后女性髋部不同部位与骨密度及骨质内金属元素含量的相关性研究

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绝经后女性髋部不同部位与骨密度及骨质内金属元素含量的相关性研...

作者：李渊苏州大学

学位级别：硕士

目的:探讨女性绝经后髋部骨折患者不同部位金属元素(Ca,Fe,Mg,Zn,Cu,Mn)含量与髋部相应部位骨密度的变化趋势之间的关系。方法:2012年1月-2017年9月,收集82例股骨颈骨折行髋关节置换术的绝经后女性患者资料,患者入院后第二天留空腹血清... 详细信息

目的:探讨女性绝经后髋部骨折患者不同部位金属元素(Ca,Fe,Mg,Zn,Cu,Mn)含量与髋部相应部位骨密度的变化趋势之间的关系。方法:2012年1月-2017年9月,收集82例股骨颈骨折行髋关节置换术的绝经后女性患者资料,患者入院后第二天留空腹血清标本测定常规血液,生化指标及骨代谢指标;术后一周行髋部和腰椎骨密度(DXA)检测;对行髋关节置换术后留取的股骨头及股骨粗隆骨组织各行骨质金属元素(Ca,Fe,Mg,Zn,Cu,Mn)含量检测(ICP-MS)。将相关数据进行统计学分析。结果:髋部不同部位骨密度存在差异,具有统计学意义(P<0.001);髋部不同部位骨质内金属元素(钙、镁、铁、锌)含量存在差异(P<0.05);多元逐步回归分析提示年龄、骨钙、BMI、骨铁、ALP、骨镁能进入股骨颈骨密度回归模型(R2=0.478),年龄、骨钙、骨铁、BMI、骨镁、β-CTX能进入大粗隆骨密度回归模型(R2=0.526);控制年龄、BMI等混杂因素后的偏相关分析发现骨钙、骨镁与骨密度成正相关,骨铁与骨密度成负相关。结论:髋部脆性骨折患者中骨密度受到年龄、BMI、骨组织金属元素及部分骨代谢指标的影响。并且骨铁增加,骨钙、骨镁减少是骨量减少的独立危险因素。骨铁增加与骨量降低显著相关,骨钙、骨镁下降与骨量降低显著相关。该研究证实了铁蓄积与骨质疏松相关性的研究观点。

关键词：髋部骨折骨密度金属元素

红细胞生成素（EPO）与甲泼尼龙（MPSS）联合应用对损伤星形胶质细胞影响的研究

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红细胞生成素（EPO）与甲泼尼龙（MPSS）联合应用对损伤星形胶质...

作者：王昌超苏州大学

学位级别：硕士

第一部分大鼠星形胶质细胞的培养及鉴定目的采用新生大鼠大脑皮质制作原代星形胶质细胞,传代培养,并进行星形胶质细胞鉴定和细胞纯度测定方法使用出生后3天内的SD乳鼠(图1)大脑皮质制成细胞悬液后,按100 /L个细胞接种于已用0.01%多聚... 详细信息

第一部分大鼠星形胶质细胞的培养及鉴定目的采用新生大鼠大脑皮质制作原代星形胶质细胞,传代培养,并进行星形胶质细胞鉴定和细胞纯度测定方法使用出生后3天内的SD乳鼠(图1)大脑皮质制成细胞悬液后,按100 /L个细胞接种于已用0.01%多聚左旋赖氨酸包被好的底面积为75 cm培养瓶中,放置于培养箱(图2)中(5% CO,37℃)培养,采用含15%的胎牛血清的DMEM/F12培养基培养7-10 d,通过差速贴壁和不同速度的摇床(图3)及逐渐传代纯化星形胶质细胞,观察细胞形态的变化,通过GFAP免疫荧光染色鉴定星形胶质细胞,通过对比GFAP阳性细胞与DAPI染色细胞核测定细胞纯度。结果使用差速贴壁法与摇床技术相结合可获得高纯度星形胶质细胞,并传代纯化,细胞的形态逐渐发生变化,培养的细胞GFAP染色呈阳性,显示正常星形胶质细胞胞体多呈三角形,胞膜光滑,边界清晰,胞突较长(图19、20),荧光染色显示GFAP阳性细胞占总细胞数比例在95%以上(图11、12)。结论通过新生乳鼠大脑皮质制作原代星形胶质细胞,使用差速贴壁法与摇床技术培养后可获得高纯度的星形胶质细胞。第二部分大鼠星形胶质细胞缺营养损伤模型制作目的制作理想的大鼠星形胶质细胞的损伤模型,观察形态变化,检测细胞损伤前后统计学差异性方法纯化后的星形胶质细胞,采用PBS缓冲液代替培养基模拟脊髓缺血损伤模型(缺营养),缺营养3小时后更换正常培养基恢复营养。⑴、倒置显微镜(图4)观察细胞缺营养前后形态变化;⑵、MTT(图5)检测星形胶质细胞增殖活性;⑶、PCR(图6)检测星形胶质细胞AQP4 mRNA表达。结果⑴、缺营养3小时后部分细胞胞体变小,胞突变短,个别细胞脱落,呈圆形。恢复营养后细胞胞体变大,胞突变长并相互交错,基本恢复缺营前形态,仍然可见少数死亡细胞漂浮在贴壁细胞层面上;⑵、MTT示:损伤后星形胶质细胞增殖活性降低,恢复培养基后细胞增殖活性升高,差异有统计学意义;⑶、PCR检测示:星形胶质细胞损伤后AQP4表达降低,恢复培养基后AQP4表达升高,差异有显著统计学意义。结论通过上述方法模拟脊髓缺血损伤,原代星形胶质细胞缺营养后可耐受一定的损伤,恢复营养后可基本恢复至损伤前的形态,MTT、PCR检测星形胶质细胞损伤前后差异有显著统计学意义。第三部分EPO对星形胶质细胞的AQP4 mRNA表达的作用目的研究EPO (Erythropoietin)对体外培养原代星形胶质细胞缺营养3 h后aquaporin4 (AQP4) mRNA表达的作用。方法采用出生三天内的SD大鼠大脑皮层制成单细胞悬液后,应用含15%胎牛血清的DMEM/F12培养,通过差速贴壁、摇床和传代纯化星形胶质细胞,GFAP免疫荧光鉴定细胞,通过PBS缓冲液代替培养基模拟缺营养模型3小时后即刻应用促EPO(10 u/l)然后按照加入药物0.5 h、1 h、1.5 h、2 h、3 h、6 h、12 h、18 h收集细胞。PCR技术测定细胞AQP4 mRNA表达的变化。结果星形胶质细胞缺营养三小时AQP4表达降低;EPO作用0.5 h后细胞AQP4 mRNA表达较正常生理盐水对照组明显升高(图14、15)。结论EPO作用0.5 h后对损伤的星形胶质细胞AQP4 mRNA表达有显著作用。第四部分EPO与MPSS联合应用对体外培养星形胶质细胞AQP4 mRNA表达的研究目的EPO与MPSS(Methylprednisolone)联合应用对体外培养星形胶质细胞的作用,并探讨其对脊髓缺血水肿损伤的作用机制。方法体外培养的星形胶质细胞传至第三代,免疫荧光显微镜鉴定细胞种类,在PBS液中作用3 h后,建立星形胶质细胞缺营养损伤的实验模型;给予DMEM/F12培养基加15%胎牛血清恢复营养,然后按生理盐水对照组、MPSS (10 ug/ml)组、EPO(10 u/ml)组、MPSS (10 ug/ml)和EPO (10 ug/ml)组、EPO (5 ug/ml)和MPSS (5 ug/ml)组的剂量干预,干预后分别于0.5 h、1 h、1.5 h、2 h收集细胞;观察:⑴、光镜观察不同干预组合对星形胶质细胞形态影响;⑵、应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞活性;⑶、使用RT-PCR检测星形胶质细胞AQP4 mRNA表达水平的变化。结果⑴、缺营养可抑制星形胶质细胞增殖,恢复培养基后细胞形态均有恢复;⑵、单独应用EPO对细胞增殖恢复无统计学意义,单独MPSS对损伤细胞增殖恢复有统计学意义;⑶、EPO和MPSS联合应用对细胞增殖恢复有明显统计学意义;⑷、生理盐水对照组对细胞增殖无明显作用;⑸、半量EPO和半量MPSS联合应用对细胞增殖恢复有统计学意义;⑹、单独EPO和单独MPSS均促进损伤细胞AQP4 mRNA

关键词：星形胶质细胞细胞培养技术荧光免疫测定细胞计数脊髓缺血细胞增殖细胞形状红细胞生成素脊髓损伤甲泼尼龙水通道蛋白-4

促红细胞生成素硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及相关蛋白表达的研究

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促红细胞生成素硬膜外途径干预大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡及相关...

作者：陈淑强苏州大学

学位级别：硕士

促红细胞生成素(EPO)是一种分子量约34 kd,含唾液酸的酸性糖蛋白。EPO以往一直被认为仅在肾脏分泌,是一种作用于骨髓造血细胞,促进红系祖细胞增生、分化、最终成熟的内分泌激素。目前发现,除肾脏外,肝、肺、脾、胎盘、生殖器官等多个组... 详细信息

促红细胞生成素(EPO)是一种分子量约34 kd,含唾液酸的酸性糖蛋白。EPO以往一直被认为仅在肾脏分泌,是一种作用于骨髓造血细胞,促进红系祖细胞增生、分化、最终成熟的内分泌激素。目前发现,除肾脏外,肝、肺、脾、胎盘、生殖器官等多个组织器官有EPO分泌,中枢神经系统(CNS)中也存在EPO及EPO受体(EpoR)基因的广泛表达;EPO除了对红细胞生成至关重要外,是具有抗炎和免疫调节作用的多功能营养因子和神经保护因子,对CNS的发育起重要的调节作用并对CNS损伤有很好的神经保护作用,因此受到广泛关注。本研究拟在大鼠急性脊髓损伤后不同时间应用促红细胞生成素硬膜外途径给药干预,探讨其对神经运动功能的保护作用,观察脊髓损伤继发性病理改变与神经细胞凋亡及其相关蛋白的关系,以进一步研究其神经保护作用的机制。本实验共分为以下三个部分:第一部分促红细胞生成素硬膜外干预大鼠脊髓损伤后神经功能的恢复研究目的在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察比较大鼠神经功能恢复情况,并探讨其对脊髓神经功能的保护作用。方法将48只体重(270±10) g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1h、6h、24h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射,n=18),实验组(1h、6h、24h组分别给与5000iu/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18)。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度,以及神经功能恢复情况;比较分析两组的差别。结果与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1小时,6小时及24小时实验组神经运动功能有改善;斜板角度及BBB评分均明显提高,差别有显著性意义(p<0.05)。结论早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害具有保护作用,能明显改善脊髓损伤后的临床功能表现。第二部分促红细胞生成素硬膜外途径干预大鼠急性脊髓损伤后细胞调亡表达的实验研究目的在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察并探讨其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡的影响。方法将48只体重(270±10) g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1h、6h、24h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射,n=18),实验组(1h、6h、24h组分别给与5000iu/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18)。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;HE染色法观察组织学改变,并采用TUNEL标记法检测脊髓神经细胞凋亡数。结果与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1小时,6小时及24小时实验组神经运动功能有改善;HE染色EPO干预组组织学破坏改变明显较对照组轻;并且EPO干预组脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降,差异有显著性(P < 0.05);结论早期应用外源性EPO对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害具有保护作用,此种保护作用与EPO能够抑制神经细胞凋亡有关。第三部分促红细胞生成素硬膜外干预大鼠脊髓损伤后细胞凋亡相关蛋白与凋亡表达关系的研究目的在大鼠急性脊髓损伤后不同时间硬膜外腔注射促红细胞生成素,观察其对脊髓神经功能的保护作用以及对脊髓神经细胞凋亡抑制作用的可能机制。方法将48只体重(270±10) g成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常组(n=6),假手术组(仅切除椎板,n=6),对照组(1h、6h、24h组分别给与等量生理盐水硬膜外注射,n=18),实验组(1h、6h、24h组分别给与5000iu/kg-bw的rhEPO硬膜外注射,n=18)。按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型,通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;分别采用TUNEL法及免疫组化法检测脊髓神经细胞凋亡指数和Caspase-3,fas-fasl死亡蛋白的表达。光镜下观察统计分析结果。结果与对照组相比,脊髓损伤后促红细胞生成素1小时,6小时及24小时干预的实验组神经运动功能均有改善,脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降(P < 0.05);实验组中,fas-fasl死亡蛋白较对照组表达减少。两组中神经细胞调亡数与Caspase-3、fas-fasl死亡蛋白表达细胞数呈线性正相关(p<0.01),相关系数分别为r = 0.941 (Caspase-3)和r=0.929(fas-fasl)。结论早期应用外源性EPO

关键词：急性脊髓损伤促红细胞生成素硬膜外腔注射斜板试验 BBB评分急性脊髓损伤促红细胞生成素凋亡硬膜外腔注射脊髓损伤促红细胞生成素凋亡 Caspase-3 FasL 硬膜外腔注射

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两种手术入路治疗距骨颈骨折的临床疗效观察

两种手术入路治疗距骨颈骨折的临床疗效观察

作者：赵伟华苏州大学

学位级别：硕士

一、研究目的回顾性观察比较两种手术入路(单侧前内侧切口入路和双侧切口入路)治疗距骨颈骨折的临床疗效。二、研究方法2006年6月至2013年9月,共36例距骨颈骨折患者在常州市中医院就诊,其中随访资料完整的手术患者31例,分别采用了单侧... 详细信息

一、研究目的回顾性观察比较两种手术入路(单侧前内侧切口入路和双侧切口入路)治疗距骨颈骨折的临床疗效。二、研究方法2006年6月至2013年9月,共36例距骨颈骨折患者在常州市中医院就诊,其中随访资料完整的手术患者31例,分别采用了单侧前内侧切口入路和双侧切口入路。根据其手术入路分成两组:单切口组(15例)、双切口组(16例)。运用统计学方法计算并比较两组患者术后一年骨折的愈合率、创伤性关节炎和距骨缺血性坏死的发生率、Hawkins疗效评定优良率、VAS评分及AOFAS踝-后足评分。三、研究结果术后一年31例患者总体骨折愈合率为77.42%,其中单切口组为93.33%,双切口组为62.50%。两组患者在骨折愈合率方面有统计学差异(P0.05)。31例患者术后一年Hawkins疗效评定总体优良率为61.29%,其中单切口组为51.33%,双切口组为68.75%,两组患者的优良率无统计学差异(P>0.05)。术后一年,单切口组VAS评分为6.04±0.75,AOFAS评分为42.84±10.16;双切口组VAS评分为为3.28±0.42,AOFAS评分为61.24±11.8;单切口组VAS评分高于双切口组,AOFAS评分低于双切口组,差异有统计学意义(P>0.05)。四、研究结论单侧前内切口入路治疗距骨颈骨折术后一年的骨折愈合率高于双侧切口入路,而创伤性关节炎的发生率较双侧切口入路高。单侧前内切口入路和双侧切口入路治疗距骨颈骨折术后一年AVN的发生率及Hawkins疗效评定优良率无明显差异,而单侧前内切口入路术后一年的VAS评分略高于双侧切口入路,术后一年的AOFAS评分略低于双侧切口组。两种手术入路各有优缺点,应根据术前资料及术中所见灵活选择。

关键词：距骨颈骨折前内侧切口入路双侧切口入路

“铁蓄积”在绝经后骨质疏松症（Ⅰ型）中作用机制的相关研究

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“铁蓄积”在绝经后骨质疏松症（Ⅰ型）中作用机制的相关研究

作者：王啸苏州大学

学位级别：硕士

第一部分“铁蓄积”对去势前后小鼠骨代谢的影响及相关机制目的:观察雌激素的有无对铁蓄积小鼠骨量、骨转换指标及氧化应激的影响。方法:建立高铁小鼠模型,将小鼠随机分为对照组（con组）、高铁组（F组）、去势组（OVX组）、高铁去势组... 详细信息

第一部分“铁蓄积”对去势前后小鼠骨代谢的影响及相关机制目的:观察雌激素的有无对铁蓄积小鼠骨量、骨转换指标及氧化应激的影响。方法:建立高铁小鼠模型,将小鼠随机分为对照组（con组）、高铁组（F组）、去势组（OVX组）、高铁去势组（F+OVX组）。con组及OVX组注射生理盐水,余两组注射枸橼酸铁胺（FAC）,8周后检测小鼠体重,对肝脏及股骨远端行普鲁士蓝铁染色,ELISA检测血清Fer、ALP、osteocalcin、CTX、TRAP-5b、MDA、SOD;股骨远端Micro-CT三维分析,提取各组小鼠股骨骨髓细胞进行破骨细胞培养,抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞分化。结果:各组小鼠体重无明显差异。F组及F+OVX组血清铁蛋白含量明显升高（P＜0.05）,且肝脏及股骨远端铁染色着色明显。ELISA结果示:未去势（雌激素存在）的F组与con组相比,CTX、TRAP-5b、MDA、SOD组间无明显统计学差异（P均＞0.05）,F组ALP及osteocalcin表达量较con组明显降低（P均＜0.05）;而去势的两组相比,铁剂干预后,MDA、TRAP-5b、CTX明显升高（P均＞0.05）,SOD、ALP、osteocalcin则降低（P均＞0.05）。Micro-CT分析表明:雌激素存在时,对照组与铁干预组骨密度及相关指标无明显差异（P＞0.05）;雌激素缺乏时,与OVX组比较,F+OVX组骨量下降更为严重（P＜0.05）。TRAP染色显示去势前各组小鼠破骨细胞数无明显差异（P＞0.05）;而去势后,F+OVX组破骨细胞数明显高于OVX组（P＜0.05）。结论:未去势时（有雌激素）,FAC对骨量、骨吸收影响甚微;去势后（无雌激素）,FAC能显著增强破骨活性,使骨量下降。雌激素与铁对骨代谢的该种拮抗作用与骨形成无关,而仅与骨吸收相关。第二部分铁与雌二醇的联合作用对成骨细胞、破骨细胞生物活性的影响及相关机制目的:研究成骨细胞、破骨细胞在铁与雌二醇的共同干预下,各自生物活性指标变化,并探讨NF-κB通路在其中的作用。方法:1、成骨细胞选取小鼠颅骨原代细胞,分为对照组,FAC组、E2组、FAC+E2组,各组用相应的10μM枸橼酸铁胺（FAC）及10n M雌二醇（E2）干预,3d后行碱性磷酸酶（ALP）染色,10d后取培养基上清检测ALP活性;荧光定量PCR（q-PCR）检测成骨相关基因差异。2、破骨细胞选取细胞系RAW264.7,分组同成骨细胞,以50μM FAC及10n M E2干预,TRAP染色及噬骨陷窝实验检测破骨细胞分化差异,q-PCR检测破骨相关基因差异;荧光酶标仪检测成骨细胞及破骨细胞活性氧水平。提取破骨细胞胞浆及胞核蛋白,Western-Blot检测NF-κB通路相关蛋白表达量的差异。结果:1、成骨细胞ALP检测结果示,无论有无雌二醇,FAC均能抑制成骨细胞ALP活性,基因水平上,FAC显著下调SP7、Runx2基因表达水平（P均＜0.05）,该下调作用与雌激素无关。2、破骨细胞TRAP染色结果示:FAC能显著增加TRAP染色阳性细胞数（P＜0.05）,而当雌二醇存在时,该作用被抑制。噬骨陷窝实验结果与之一致。q-PCR结果:无雌二醇干预时,铁剂能显著上调MMP9、Acp5、Ctsk、Calcr基因表达水平（P均＜0.05）,雌二醇存在时,两组基因表达无明显统计学差异（P均＞0.05）。活性氧ROS检测结果:在成骨细胞及破骨细胞中,FAC均能增加ROS活性（P均＜0.05）,而雌二醇则能下调活性氧水平（P均＜0.05）。蛋白水平上,FAC使胞核蛋白p50、p65、胞浆蛋白p IκBα表达量显著增加,并下调胞核蛋白pp65、胞浆蛋白p50、IκBα表达水平（P均＜0.05）。结论:雌二醇与铁在骨代谢中的拮抗作用可能仅与骨吸收过程相关,而与骨形成无关。仅当雌二醇不存在时,铁才能通过上调ROS,进而促进破骨细胞分化,该作用可能与NF-κB信号通路相关。

关键词：铁蓄积雌激素氧化应激去卵巢高铁环境 NF-κB信号通路活性氧雌二醇

铁调素对成骨细胞内钙离子及铁离子转运机理的相关研究

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铁调素对成骨细胞内钙离子及铁离子转运机理的相关研究

作者：张鹏苏州大学

学位级别：硕士

骨质疏松主要原因是骨代谢异常。而在骨代谢异常众多影响因素中,近几年关于铁代谢与骨代谢的研究非常令人鼓舞和欣喜。铁调素(Hepcidin)是2001年Park等人首次从人尿中分离出这一多肽,21世纪后对铁调素的认识有了突破性的进展:多项研究... 详细信息

骨质疏松主要原因是骨代谢异常。而在骨代谢异常众多影响因素中,近几年关于铁代谢与骨代谢的研究非常令人鼓舞和欣喜。铁调素(Hepcidin)是2001年Park等人首次从人尿中分离出这一多肽,21世纪后对铁调素的认识有了突破性的进展:多项研究认为铁调素可以作为“激素样物质”调节铁代谢。本项目主要研究细胞外铁调素干预成骨细胞(hFOB 1.19)内钙离子转运情况,在细胞水平以铁离子、钙离子为载体探究“铁调素”、“铁代谢”、“骨代谢”三者的相互关系,为最终运用铁调素干预甚至治疗骨质疏松提供实验依据。本研究将成骨细胞分别于不同高浓度铁离子、低浓度铁离子、铁调素环境中培养,在各实验时间段分别检测各组细胞内钙离子浓度变化,进而研究成骨细胞胞内钙离子转运与胞外铁调素、铁离子影响的关系。因此,本研究主要分为以下三个部分:第一部分:铁离子对成骨细胞内钙离子转运的影响目的研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对人成骨细胞(hFOB 1.19)内Ca2+转运的影响。方法将成骨细胞34℃培养3-4天后(细胞密度90%)用胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板上,空白组加入双蒸水,实验组加入不同浓度的DFO和FAC,分别于干预后2小时用激光共聚焦扫描显微镜检测。结果利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着hFOB 1.19外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为200～300 umol/L),Ca2+向细胞内的转运量增加;而随着hFOB 1.19外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为50～100 umol/L),Ca2+向细胞内的转运呈降低趋势。结论hFOB 1.19外Fe3+浓度的减少可以增加细胞内的Ca2+,而胞外Fe3+浓度增加则减少细胞内的Ca2+。第二部分:时间因素在铁离子对成骨细胞内钙离子转运影响中的作用目的研究细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对人成骨细胞(hFOB 1.19)内Ca2+转运的影响是否具有时间相关性。方法将成骨细胞34℃培养3-4天后(细胞密度90%)用胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板上,空白组加入双蒸水,实验组加入不同浓度的DFO和FAC,分别于干预后2小时和48小时用激光共聚焦扫描显微镜检测。结果利用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察发现,随着hFOB 1.19外Fe3+浓度的减少(DFO终浓度为200～300 umol/L),Ca2+向细胞内的转运增加并且干预时间越长,细胞内Ca2+含量增加越多;而随着hFOB 1.19外Fe3+浓度的增加(FAC终浓度为50～100 umol/L),Ca2+向细胞内的转运呈降低趋势并且干预时间越长,细胞内Ca2+含量减少越多。结论hFOB 1.19外Fe3+浓度的减少可以增加细胞内的Ca2+,而胞外Fe3+浓度增加则减少细胞内的Ca2+。细胞外铁离子(Fe3+)浓度变化对细胞内Ca2+转运的影响存在时间相关性。第三部分:铁调素对成骨细胞(hFOB 1.19)内钙离子转运影响的初步研究目的研究铁调素(Hepcidin)对人成骨细胞(hFOB 1.19)内Ca2+转运的影响。方法成骨细胞34℃培养3～4天至细胞密度为90%,胰蛋白酶消化后分种于12孔培养板。空白组加双蒸水;实验组加不同浓度Hepcidin(双蒸水配制):H1组(终浓度为10 nM/L)和H2组(终浓度为50 nM/L)。干预24h后用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)检测。结果空白组成骨细胞内钙离子荧光强度为56.38±36.47;H1组成骨细胞内钙离子荧光强度为68.01±32.90;H2组成骨细胞内钙离子荧光强度为154.06±55.62。(P<0.05)结论细胞外Hepcidin可促进成骨细胞内Ca2+增加。

关键词：铁离子钙离子人成骨细胞(hFOB 1.19) 激光共聚焦扫描显微镜铁离子钙离子人成骨细胞(hFOB 1.19) 激光共聚焦扫描显微镜铁调素钙离子铁离子人成骨细胞(hFOB 1.19) 激光共聚焦扫描显微镜

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骨密度相关危险因素的临床调查分析

骨密度相关危险因素的临床调查分析

作者：徐君翔苏州大学

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目的老年人脆性骨折的发生率逐年增加，已经是世界范围内一个不可忽视的问题。骨密度的降低是导致脆性骨折发生的主要原因之一，因此通过临床流行病学的调查和数据的分析了解影响骨密度的相关危险因素，为提早进行临床干预、预防骨折的... 详细信息

目的老年人脆性骨折的发生率逐年增加，已经是世界范围内一个不可忽视的问题。骨密度的降低是导致脆性骨折发生的主要原因之一，因此通过临床流行病学的调查和数据的分析了解影响骨密度的相关危险因素，为提早进行临床干预、预防骨折的发生提供一定的参考。第一部分：传统观点认为：肥胖与骨质疏松是两种相反的疾病，BMI是骨密度一种保护性因素，但也有观点不支持;但是最近的关于肥胖和骨质疏松的流行病学研究提出了不同的观点，激起对这一传统观点的讨论。本研究对相同条件下的一组人群，比较不同BMI分组水平间，BMI与骨密度的关系的差异;同时探讨“躯干脂肪比例”在这些差异中的可能作用，旨在细化深入了解“肥胖与骨质疏松的关系”。第二部分：高血压与骨质疏松症是中老年女性常见的慢性病，相互影响观点各异，本研究是在一定样本数据中：了解中老年女性高血压，以及4种常用抗高血压药物使用与骨密度的关系。方法第一部分：采用人群横断面研究方法，连续收集18226例在2008年至2013年间在本院体检中心进行骨密度检测的体检者的数据，骨密度以及脂肪率的检测使用的是DEXA（LUNAR DPX-NT），检测的数据为：腰椎正位和左侧股骨颈的骨密度值，躯干脂肪率;分组：18226例按男女性别分两大组，各大组再按年龄分大于50岁组、小于50岁组;分别对这四组人群进行分析，继续按两个条件分组，①、每组人群按WHO的标准根据BMI分成“BMI低下”、“BMI正常”、“BMI超重”;比较不同BMI分组间骨密度均值、骨密度异常率、BMI和骨密度的相关性、躯干脂肪率和骨密度的相关性的差异②、每组人群按BMI数值（29.1）分7组;比较相邻BMI分组间骨密度均值、骨密度异常率的差异。第二部分：采用横断面人群研究方法，问卷调查形式收集了1961名符合要求的女性的一般情况（身高、体重、年龄等）、慢性病用药史、生活习惯等数据资料，并进行了血压的测量，运用超声骨密度仪（型号：SAHARA）检测了足跟部位骨密度。运用LSD检验及协方差比较各组骨密度均值的差异，卡方检验和logistic回归比较各组间骨质疏松发生率的差异。结果第一部分：在所有人群中，BMI和骨密度呈正相关（与股骨颈骨密度的相关系数为0.31，与腰椎骨密度的相关系数为0.16），躯干脂肪率与骨密度呈负相关（与股骨颈骨密度的相关系数为-0.23，与腰椎骨密度的相关系数为-0.24）①、男性、女性大于50岁组，BMI超重组的骨密度均值高于BMI体重正常组和BMI体重低下组，异常骨密度（T<-1.0）的比例也低于BMI体重正常组和BMI体重低下组。BMI超重组中BMI和腰椎/股骨颈骨密度呈弱的正相关，相关系数明显小于BMI正常和BMI低下组。当BMI超过27kg/m2后，随BMI上升，腰椎/股骨颈骨密度均值没有显著的增加。躯干脂肪率与腰椎/股骨颈骨密度呈显著负相关，两者的负相关性在BMI超重组中最显著。②、男性、女性小于50岁组，BMI超重组的骨密度均值高于BMI体重正常组和BMI体重低下组，但是女性的腰椎/股骨颈骨密度异常率以及男性的腰椎骨密度异常率在“BMI超重组”是较BMI正常组显著增加的。BMI和股骨颈骨密度呈正相关，与腰椎骨密度的相关性弱。躯干脂肪率与腰椎骨密度呈负相关，与股骨颈骨密度没有相关性。第二部分：高血压组的骨密度均值要显著低于非高血压组，高血压组的平均年龄也显著高于非高血压组。控制年龄、BMI、绝经、钙质摄入、浓茶饮用等因素后，高血压组的骨密度均值较非高血压组低0.016g/cm(CI-0.027—-0.005,p=0.005)，其中没有使用降高血压药物的高血压组女性的骨密度均值较非高血压组低0.040g/cm(p<0.001,CI-0.059--0.020);在控制了年龄、患高血压、其他高血压药物使用以及其他危险因素后，服用ACEI/ARB类药物和噻嗪样利尿剂的研究对象比对照组的骨密度均值分别高0.044g/cm（p<0.00195%CI0.011—0.039），0.034g/cm（p=0.001,95%CI0.014—0.053）;服用钙通道拮抗剂对骨密度均值无显著影响（p=0.80195%CI-0.015—0.019）;而服用β受体抑制剂的骨密度均值较对照组低0.024g/cm（p=0.03995%CI-0.047—-0.001）。结论第一部分：对于超重或肥胖的老年男性、女性，BMI不是腰椎和股骨颈骨密度的保护性因素。过多的躯干脂肪可能是导致这一现象的其中一个原因。BMI和骨密度之间的关系没有性别上的差异。第二部分：中老年女性高血压与骨密度降低有关;使用ACEI/ARB类药物或噻嗪样利尿剂的中老年女性存在骨密度增加的现象，使用β受

关键词：骨质疏松骨密度高血压肥胖 BMI 降压药物

甲磺酸去铁胺对“Ⅰ型铁蓄积骨质疏松症”干预及部分机制的实验观察

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甲磺酸去铁胺对“Ⅰ型铁蓄积骨质疏松症”干预及部分机制的实验观...

作者：汪升苏州大学

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第一部分甲磺酸去铁胺对小鼠“Ⅰ型铁蓄积骨质疏松症”干预后骨量变化目的:本研究旨在探讨铁螯合剂甲磺酸去铁胺(DFO)对去势后枸橼酸铁铵(FAC)干预的雌性小鼠(模拟“I型铁蓄积骨质疏松症小鼠模型”)骨量的影响,为“I型铁蓄积骨质疏松症... 详细信息

第一部分甲磺酸去铁胺对小鼠“Ⅰ型铁蓄积骨质疏松症”干预后骨量变化目的:本研究旨在探讨铁螯合剂甲磺酸去铁胺(DFO)对去势后枸橼酸铁铵(FAC)干预的雌性小鼠(模拟“I型铁蓄积骨质疏松症小鼠模型”)骨量的影响,为“I型铁蓄积骨质疏松症”探索新的治疗方案。方法:选取2月龄C57BL/6雌性小鼠24只,随机分为去势(OVX)组、去势+铁剂干预组(OVX+Fe组)、去势+铁剂+去铁胺组(OVX+Fe+DFO组)。三组均行双侧卵巢切除术,后两组在去势后一周采用0.12g/kg/w的枸橼酸铁铵干预6周,干预方法为腹腔注射,每周干预三次,OVX组采用同样方式和频次的生理盐水干预。随后OVX+Fe+DFO组采用4000mg/kg/w的DFO干预2周,干预方法为腹腔注射,一日两次,其他两组给予同样方式和频次的生理盐水干预。干预结束后处死小鼠,在处死小鼠的前10天及前3天给小鼠腹腔注射钙黄绿素。处死小鼠后分离双侧小鼠股骨,HE染色及微计算机断层扫描技术(Micro-CT)观察股骨远端微结构,钙黄绿素标记骨形成速率,普鲁士蓝染色观察股骨局部铁蓄积,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测骨组织骨保护素(OPG)、核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测小鼠血清铁蛋白、OPG和RANKL水平。结果:血清铁蛋白水平方面,OVX+Fe组(408.90±17.20μg/ml)明显高于OVX组(87.53±3.73μg/ml)和OVX+Fe+DFO组(162.30±10.58μg/ml)(P<0.05)。普鲁士蓝染色显示股骨铁蓄积OVX组

关键词：铁蓄积甲磺酸去铁胺绝经后骨质疏松症 RANKL/RANK/OPG轴原代成骨细胞活性氧 Wnt通路

绝经后股骨颈骨折股骨头骨铁及二价金属元素含量与骨密度相关性研究

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绝经后股骨颈骨折股骨头骨铁及二价金属元素含量与骨密度相关性研...

作者：张伟苏州大学

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第一部分绝经后股骨颈骨折股骨头骨铁含量与骨密度相关性分析目的：分析、探讨绝经后股骨颈骨折女性股骨头骨铁含量随年龄的变化以及和骨密度的相关性。方法：收集2010年6月至2013年3月本院骨科符合入组条件的共156例股骨颈骨折女性... 详细信息

第一部分绝经后股骨颈骨折股骨头骨铁含量与骨密度相关性分析目的：分析、探讨绝经后股骨颈骨折女性股骨头骨铁含量随年龄的变化以及和骨密度的相关性。方法：收集2010年6月至2013年3月本院骨科符合入组条件的共156例股骨颈骨折女性患者资料，年龄562岁，平均(72.40±8.97)岁;按10岁一年龄段分组，共分为5组(小于60岁组、610岁组、710岁组、810岁组、大于91岁);患者入院后第2天留取空腹血清标本测定血清铁代谢和骨代谢等指标;髋关节置换术后留取股骨头组织，使用电感耦合等离子体质谱分析仪(ICP-MS)检测骨铁含量，普鲁士蓝法行骨铁染色;术后行髋部和腰椎骨密度(DXA)检测;各检测指标进行统计学分析。结果：Ⅰ型原胶原氨基端延长肽(PⅠNP)、Ⅰ型胶原C端肽β降解产物(β-CTX)、髋部和L1-4骨密度、骨铁和血清铁蛋白在各年龄组间存在统计学差异(P均200μ g/L者占64.1%。多元回归结果显示，年龄、血清铁蛋白、骨铁含量与股骨颈骨密度呈负相关。控制年龄、身高、体重、BMI等因素后，骨铁和血清铁蛋白仍与髋部骨密度呈负相关，与腰椎骨密度则无明显相关性。结论：在股骨颈骨折的绝经后女性中，血清铁蛋白和骨铁含量均随年龄增加而升高，两者可能是绝经后髋部骨密度降低的危险因素。铁蓄积与骨质疏松的发生存在相关性。第二部分股骨头二价金属元素含量与骨密度相关性研究目的：分析绝经后股骨颈骨折股骨头骨中二价金属元素(钙、镁、锌、铁、铜、锰)含量，对应血清指标和骨密度的相关性。方法：收集本院骨科2010年6月至2013年3月骨组织库156例股骨头标本(股骨头置换术后留取)，将156例患者资料按5岁年龄段分为8组(小于61岁、61-65岁、66-70岁、71-75岁、76-80岁、81-85岁、86-90岁、大于90岁)。使用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)检测股骨头松质骨二价金属元素(钙、镁、锌、铁、铜、锰)含量，同时收集对应患者血清指标、骨密度数据(髋部和L1-4)。微量元素含量、血清指标与骨密度行多元线性回归分析，Pearson相关分析各元素间可能存在相互作用，Ki系数分析某一元素在骨中的相对组分。结果：髋部和L1-4骨密度随年龄增加而下降，各年龄组骨密度均属于骨量减低或骨质疏松。各元素中，钙、镁、锌、铜、锰随年龄增加而下降，铁随年龄增加而升高;相应血清指标中，血钙、血镁组间无统计学差异，血清铁蛋白随年龄组而增加。多元线性回归分析结果提示，年龄、骨钙、骨镁能进入多个部位骨密度模型，血清铁蛋白、骨锰和骨铁能进入股骨颈骨密度回归模型(R2=0.565)。各元素中，钙含量与锌、镁、铜、锰呈正相关，与铁呈负相关;铁/钙的摩尔比值Ki系数随年龄增加而升高，并存在统计学差异(P<0.01)。结论：股骨头矿物元素间可能存在的相互作用是造成骨铁随年龄增加，其他元素随年龄减少的原因之一。铁蓄积和其他矿物元素流失是髋部骨密度下降的危险因素。在骨质疏松骨折研究领域，矿物元素间的相互作用和变化趋势，尤其与其他元素变化相反的“铁蓄积”现象应受到重视。

关键词：绝经后女性股骨颈骨折血清铁蛋白骨铁含量骨密度脆性骨折二价金属元素