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作者：彭炜沈阳药科大学

学位级别：硕士

绿脓杆菌蛋白酶Ⅳ(Ps-Ⅳ)是假单胞菌属绿脓杆菌分泌的一种胞外蛋白酶和致病因子,能特异性水解赖氨酸羧基末端所形成的肽键,而对其他肽键无水解能力,属于赖氨酸特异性蛋白水解酶。能降解许多重要的生物活性蛋白,如纤维蛋白原、纤溶酶原... 详细信息

绿脓杆菌蛋白酶Ⅳ(Ps-Ⅳ)是假单胞菌属绿脓杆菌分泌的一种胞外蛋白酶和致病因子,能特异性水解赖氨酸羧基末端所形成的肽键,而对其他肽键无水解能力,属于赖氨酸特异性蛋白水解酶。能降解许多重要的生物活性蛋白,如纤维蛋白原、纤溶酶原、补体蛋白C3、补体蛋白Clq和免疫球蛋白G等。本文主要通过将实验获得的Ps-Ⅳ成熟肽基因克隆至合适的表达载体,以获得其活性表达。首先以绿脓杆菌CMCC(B)10104菌株为考察对象,对其培养液进行赖氨酸特异性蛋白水解酶活性分析,结果表明绿脓杆菌CMCC(B)10104可能分泌蛋白酶Ⅳ。实验提取了绿脓杆菌CMCC(B)10104基因组DNA,以文献报道的其它绿脓杆菌菌株分泌的Ps-Ⅳ基因序列为基础合成引物,PCR扩增得到Ps-Ⅳ成熟肽基因,克隆至载体pGM-T中进行测序,结果表明,与其它不同来源的Ps-Ⅳ基因序列具有很高同源性。将Ps-Ⅳ克隆至载体pET-28a中,构建质粒pET-28a-Tag(his)-Ps-Ⅳ,通过质粒测序验证,证明Ps-Ⅳ基因序列无突变,插入位点正确。运用*** BL21对pET-28a-Tag(his)-Ps-Ⅳ进行表达,SDS-PAGE结果表明重组蛋白得到表达,但主要以包涵体形式存在。将Tag(his)-Ps-Ⅳ重新克隆至表达载体pNJUTRX中,构建质粒pNJUTRX-Tag(his)-Ps-Ⅳ,通过质粒测序验证,证明Ps-Ⅳ基因序列无突变,插入位点正确。运用*** BL21对pNJUTRX-Tag(his)-Ps-Ⅳ进行表达,SDS-PAGE结果表明重组蛋白得到表达,可溶性表达不低于50%。通过正交试验对表达条件进行初步考察,结果表明,加入IPTG后培养时间对可溶性重组蛋白表达量有较大影响,而IPTG终浓度和培养温度无明显影响。利用金属螯合层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等方法,从表达系统pNJUTRX-Tag(his)-Ps-Ⅳ/*** BL21的表达产物中纯化得到电泳纯Ps-Ⅳ。酶活测定表明得到的Ps-Ⅳ具有赖氨酸特异性蛋白水解酶活性,1L发酵液得到Ps-Ⅳ蛋白0.12毫克,为0.25个酶活单位。

关键词：绿脓杆菌蛋白酶IV 赖氨酸特异性蛋白水解酶基因组DNA 表达分离纯化

基于多核技术的三轴一体化陀螺数字测控电路研究

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基于多核技术的三轴一体化陀螺数字测控电路研究

作者：严杰清华大学

学位级别：硕士

本文首次介绍了一种基于SOPC多核技术的三轴一体化MEMS陀螺数字测控系统。系统通过进行驱动频率闭环、驱动幅度闭环控制,使三只陀螺驱动轴稳定地工作在各自谐振点上且幅度稳定,同时对陀螺敏感轴信号进行解调,实时输出三轴同步的角速度... 详细信息

本文首次介绍了一种基于SOPC多核技术的三轴一体化MEMS陀螺数字测控系统。系统通过进行驱动频率闭环、驱动幅度闭环控制,使三只陀螺驱动轴稳定地工作在各自谐振点上且幅度稳定,同时对陀螺敏感轴信号进行解调,实时输出三轴同步的角速度信息。本文采用SOPC多核协调同步、多总线控制、并行计算、数字闭环控制等技术,构建了单片FPGA内集成多个计算内核的三轴实时并行计算系统,与传统的FPGA+DSP数字控制系统相比显示出小体积、低功耗、低成本、完全可重构、高并行处理能力等优势,同时为今后系统ASIC化打下基础,具有很好的应用前景。论文首先对国内外MEMS陀螺数字化的发展情况、SOPC多核技术的发展情况进行了概述。在此基础上,论文对多核数字化系统的主要方案和相关技术进行了分析对比,确定了研究的总体方案,即采用单FPGA为硬件基础,搭建可编程片上系统,完成三轴一体化MEMS陀螺的驱动、检测、数据传输。随后提出了课题研究的关键问题。在确定总体方案的基础上,论文提出了在FPGA片内嵌入三个MicroBlaze软核的硬件方案,并以此为核心通过FSL总线挂接编写的数字正弦波发生器IP CORE;通过OPB总线挂接中断控制器、ADC、DAC、RS422串口以及EEPROM等外设驱动IP CORE;通过OPB总线挂接通用寄存器实现三轴数据实时同步。本系统将许多片外硬件转移至片内用VHDL语言实现,大大减小了系统体积,增加了系统设计的灵活度。论文的软件算法部分主要包括最小均方误差解调(LMSD)、数字滤波器设计、闭环控制。论文在这一部分中首先分析了64位乘法运算的计算精度,介绍了算法的原理及其实现方法,详细讨论了三个控制环路的作用及其对陀螺性能的影响,最后制定串口数据传输协议并由上位机软件显示x、y、z三轴实时输出。最后,给出了采用本论文方案的数字电路对微机械陀螺进行性能测试的结果。测试主要围绕三轴数据的同步性、陀螺的零偏稳定性进行。测试结果表明,三轴精确同步,所设计的数字系统在-40℃到+85℃范围内正常工作,满足工业级的使用要求。

关键词：微机械陀螺仪片上系统多核协调同步数字三轴集成

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基于黄粉虫的细菌检测条件的建立与优化

基于黄粉虫的细菌检测条件的建立与优化

作者：李晓燕沈阳药科大学

学位级别：硕士

酚氧化酶原激活系统是昆虫体内重要的先天性免疫机制之一。本实验以黄粉虫为实验模型,建立并优化了细菌诱导的黄粉虫血淋巴中酚氧化酶原的激活及酚氧化酶活力测定条件。以肽聚糖作为诱导因子,采用正交实验考察温度、pH、激活剂、预反应... 详细信息

酚氧化酶原激活系统是昆虫体内重要的先天性免疫机制之一。本实验以黄粉虫为实验模型,建立并优化了细菌诱导的黄粉虫血淋巴中酚氧化酶原的激活及酚氧化酶活力测定条件。以肽聚糖作为诱导因子,采用正交实验考察温度、pH、激活剂、预反应时间等因素的影响,建立体外血淋巴酚氧化酶原激活及活性测定的最佳条件如下：反应温度30℃,激活剂加入量5μl,反应pH值为8,预反应时间5分钟,其中温度和反应pH值对检测结果影响显著。大肠杆菌(革兰氏阴性菌)和金黄色葡萄球菌(革兰氏阳性菌)完整菌株可体外激活血淋巴酚氧化酶原激活系统,但所需浓度较高、检测时间较长、灵敏度较低。选用以上菌株经物理学、生物学、化学方法处理后检测其对酚氧化酶原激活系统的影响情况,筛选其最佳处理方法为优化的化学方法。利用最佳方法处理后的十种菌株中有八种菌株在菌落数为101数量级范围内,利用血淋巴酚氧化酶原激活系统可稳定检出,定量分析结果显示,不同种类的菌株,存在着反应出现时间,反应灵敏度,反应现象显著性等方面的差异。

关键词：黄粉虫酚氧化酶原激活系统细菌检测

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济南市非国有博物馆调查与研究

济南市非国有博物馆调查与研究

作者：胡素娟西北师范大学

学位级别：硕士

该论文以济南市的37家非国有博物馆为研究对象,通过调查了解济南市非国有博物馆的发展现状,在阐述济南市非国有博物馆兴起与发展背景的基础上,对于发展中存在的问题进行梳理,并提出相应对策和建议。国家对于非国有博物馆的政策性扶持逐... 详细信息

该论文以济南市的37家非国有博物馆为研究对象,通过调查了解济南市非国有博物馆的发展现状,在阐述济南市非国有博物馆兴起与发展背景的基础上,对于发展中存在的问题进行梳理,并提出相应对策和建议。国家对于非国有博物馆的政策性扶持逐渐加强以及山东和济南的优秀历史文化都为济南市非国有博物馆的产生和发展提供了基础。在对其发展现状进行整理分析的过程中发现济南市非国有博物馆普遍存在的问题,如藏品真伪难辨、管理粗疏、归属不明的问题以及缺乏专业性人才、资金不足和监管不足的问题。其中最根本的还是资金问题,资金问题解决了,其余问题也会得到很大程度的改善。针对这些问题,提出了四点建议,其中扩展资金来源途径和探索多渠道合作之路对于解决资金问题比较有参考价值,完善制度建设对于解决藏品的管理和监管不足的问题都有一定的帮助,而发展博物馆集群则有利于济南市非国有博物馆的可持续性发展。

关键词：济南市非国有博物馆调查

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致泻性大肠埃希菌流行状况及耐药性研究

致泻性大肠埃希菌流行状况及耐药性研究

作者：余涛浙江工业大学

学位级别：硕士

目的：对杭州地区不同来源的致泻性大肠埃希菌(Diarrheagenic Escherichia coli, DEC)的流行分布状况、毒力基因、耐药性及耐药基因进行研究。方法：收集人、动物和水环境分离的大肠埃希菌(Escherichia coli, ***)共790株。采用基质辅... 详细信息

目的：对杭州地区不同来源的致泻性大肠埃希菌(Diarrheagenic Escherichia coli, DEC)的流行分布状况、毒力基因、耐药性及耐药基因进行研究。方法：收集人、动物和水环境分离的大肠埃希菌(Escherichia coli, ***)共790株。采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行菌株鉴定;多重聚合酶链反应(multiplex Polymerase Chain Reaction, mPCR)扩增毒力基因(bfpB、escV、astA、stx1、stx2、pic、elt、estlb、 estla、invE和aggR),筛选致泻性大肠埃希菌;纸片扩散法和全自动细菌鉴定仪和药敏系统进行药敏试验PCR检测耐药菌株的耐药基因;多位点序列分析、系统发育分型和脉冲场凝胶电泳进行分子分型及其同源性分析。结果：790株***(急腹症患者269株、住院患者66株、儿童患者103株、健康体检者106株、农场猪68株、宠物狗85株和水环境93株)中分离到19株肠致病性大肠埃希菌(Enteropathogenic ***, EPEC).11株肠产毒素性大肠埃希菌(Enterotoxigenic ***, ETEC).85株肠粘附性大肠埃希菌(Enteroaggregative E. coli,EAEC),分离率分别为2.4%、1.4%、10.8%,未分离到肠出血性大肠埃希菌(Enterohemorrhagic ***, EHEC)和肠侵袭性大肠埃希菌(Enteroinvasive ***, EIEC)。EAEC、EPEC和ETEC菌株对头孢菌素类抗生素耐药率均高于18%,喹喏酮类抗生素耐药率均高于9%,EAEC菌株中对亚胺培南的耐药率为2.4%。耐药基因检测结果显示,19株EPEC菌株中,1株携带blaCTX-M-123基因,2株携带blaCTX-M-14基因,对喹诺酮类耐药的2株菌株中,1株菌株同时携带qnrS1、oqxAB和qepA耐药基因,另一株有aac(6’)-Ib-Cr基因;11株ETEC菌株携带blaCTX-M-55和blaCTX-M-14基因各1株,其中有1株菌株携带喹诺酮耐药基因qnrS1;85株EAEC中有25株携带blaCTX-M-14基因,19株携带blaTEM基因,15株菌株含有质粒介导的喹诺酮耐药基因oqxAB,其中2株菌株同时携带qnrS2、oqxAB和aac(6’)-Ib-cr基因,同时,分离到的2株EAEC菌株携带blaKPC-2基因。EPEC毒力基因结果显示bfpB检出率为5.3%(1/19),escV为100%(19/19)。ETEC菌株中,elt检出率为45.5%(5/11)基因,estlb基因为54.5%(6/11),未检测到estla基因。EAEC菌株中,astA最为常见,占89.4%(76/85)。MLST和系统发育分型结果显示,EPEC菌株中,ST10-A为最常见的型别,在人和宠物中均检测到;ETEC中,CC10-A型最为常见,占到36.4%;EAEC中,发现57个不同的ST型,其中,CC10和ST38为最多,占到22.4%(19/85),A和D型占72.9%(62/85)。在EPEC和ETEC菌株中,PFGE结果显示菌株间无同源性,EAEC中,不同来源的住院患者和儿童门诊分离样本中各有2株细菌具有同源性,为同一克隆株。结论：1.在杭州地区流行的致泻性大肠埃希菌主要为EAEC、EPEC和ETEC,其中EAEC是检出最多的肠道致泻性大肠埃希菌,分布在人、动物和环境中,CC10和ST38型是检出最多的型别,EPEC和ETEC菌株主要分布在急腹症患者中,其中非典型EPEC是EPEC中分离最多的菌株,为94.7%,ST10型是最常见的型别。2、致泻性大肠埃希菌对临床常用抗生素有一定的耐药性。国内首次发现对碳青霉烯类抗生素耐药的产blaKPC-2的EAEC菌株;国内首次发现携带4种喹诺酮耐药基因qnrS1、oqxA、oqxB和qepA的EPEC菌株。3. astA是EAEC中最常见的毒力基因,elt和estIb是ETEC最常见的毒力基因,escV在EPEC中检出最多。

关键词：致泻性大肠埃希菌分型流行状况毒力基因耐药机制

用于Muse细胞长期体外培养聚合物基质的筛选与制备研究

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用于Muse细胞长期体外培养聚合物基质的筛选与制备研究

作者：李秀亚常州大学

学位级别：硕士

应激耐受多系分化细胞(Multilineage differentiating stress enduring cells,简称Muse细胞)是来源于皮肤与骨髓的新型干细胞,该细胞具有多能性、低端粒酶活性以及非致瘤性,是一种功能全面且安全性极高的细胞,有广泛应用于临床医疗的潜... 详细信息

应激耐受多系分化细胞(Multilineage differentiating stress enduring cells,简称Muse细胞)是来源于皮肤与骨髓的新型干细胞,该细胞具有多能性、低端粒酶活性以及非致瘤性,是一种功能全面且安全性极高的细胞,有广泛应用于临床医疗的潜力。但直接从组织中提取的Muse细胞数量很少,且其培养方法繁杂,增殖速度很慢,很难获得临床应用所需要的细胞数量,这是目前Muse细胞临床应用面临的主要挑战。本文利用1,6-己二醇二丙炔酸酯与胺化合物的氨基发生加成反应,以1,6-己二醇二丙炔酸酯为连接物通过点击化学的方法将蛋白质固定在胺化合物改性玻璃片上,用该原理,通过喷墨打印进行蛋白点样和现场混合,制备成蛋白微点阵列芯片,利用高通量筛选方法,选出适合Muse细胞黏附的最佳蛋白质组合,用常规方法在蛋白基材上进行Muse细胞的培养传代,考察Muse细胞在蛋白质基质上进行长期生长并保持干性的可能性。为完成上述工作,先研究确定了以1,6-己二醇二丙炔酸酯为交联剂时蛋白质形成稳定凝胶的最佳反应条件为60℃,1.5h;用茚三酮指示剂检测胺化合物对玻璃片的改性,用紫外分光光度计对蛋白改性玻璃片进行测试,结果表明聚乙烯亚胺(PEI)改性玻璃片能够较成功的将蛋白固定在玻璃片表面;X射线光电子能谱(XPS)分析表明蛋白质改性玻璃片上存在蛋白的代表性元素。并用高通量筛选出的两种蛋白质组合(牛血纤维蛋白原/明胶和牛血清白蛋白/明胶,比例均为7/17)通过物理吸附的方法包被在盖玻片上用于Muse细胞的培养,用CCK-8试剂检测细胞的增殖情况,通过免疫荧光染色分析细胞的干性情况,结果表明牛血纤维蛋白原/明胶培养基至少能支持Muse细胞扩增3代,并且能维持较好的干细胞特性。除了天然高分子,合成高分子也能对Muse细胞的体外扩增产生影响。用筛选出的甲基丙烯酸羟乙酯/甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵以及N,N-二乙基-2-丙烯酰胺/甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵为共聚单体,以N,N-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂,采用紫外光引发聚合制备丙烯酸酯/丙烯酰胺聚合物膜。经过Muse细胞在两种聚合物膜上的培养,发现Muse细胞在生长时会渐渐嵌入膜中,其中甲基丙烯酸羟乙酯/甲基丙烯酰氧乙基三甲基氯化铵聚合物膜粗糙度大,溶胀性能好,有利于Muse细胞的粘附与扩增。

关键词：蛋白芯片高通量筛选丙烯酸酯/丙烯酰胺共聚物点击化学 Muse细胞细胞培养

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兰州市农会研究（1942-1949）

兰州市农会研究（1942-1949）

作者：郭芸秀西北师范大学

学位级别：硕士

兰州市农会的成立源于国民党基层控制意图下的农会重建。南京国民政府建立后,为了消除中共在广大农村地区的影响、将乡村基层纳入国民政府的控制之下,国民党颁布一系列有关农民运动和农会组织的条例、法令、方案,倡导以“重建乡村秩序... 详细信息

兰州市农会的成立源于国民党基层控制意图下的农会重建。南京国民政府建立后,为了消除中共在广大农村地区的影响、将乡村基层纳入国民政府的控制之下,国民党颁布一系列有关农民运动和农会组织的条例、法令、方案,倡导以“重建乡村秩序、推动政令实施,挽救经济颓势、推动农业发展”为宗旨重建农会组织。随着抗战局势的变化,西北成为大后方,兰州作为国际贸易和军事物资转运的必经之地,成为西北地区的交通中心和物资转运站,其经济、军事地位日益提升。鉴于兰州地位的重要,以及开放西北和抗战的需要,1941年7月兰州设市。根据国民政府有关农会的规定,并出于推动农业发展的现实需要,在各乡镇农会相继成立的基础上,兰州市农会于1942年12月24日成立。兰州市农会领导下辖各区农会工作,并在区农会的基础上划分小组,以加强对兰州基层的管理与控制。兰州市农会的组织结构由会员和职员两部分组成,农会会员是兰州市农会的主体,实行强制入会与限制退会;职员分为理事和监事,自会员中选举产生,由会员内非公职人员担任。兰州市农会的内部机构主要由理事会和监事会构成。由理事组织的理事会是兰州市农会开展会务、处理工作的中枢,理事长是理事会的核心。理事会下设三股,每股设主任、副主任各一人。由监事组织的监事会则更多是为监督兰州市农会的运行而设立。兰州市农会的运行跨越抗日战争时期与解放战争时期,前期以“实行抗战建国纲领,加强国家总动员力量”为旗号,后期转以“协助政府关于国防及生产等政令之实施”为工作重点。农会组织目标的变化,反映出国民党基层控制意图的加强。兰州市农会成立后,在兰州市政府的指导下领导着其下各区农会和小组,在经费困难的情况下开展了一系列活动:协助办理农业贷款,以发展农民经济;举办会员训练,以增进农民智识;开办农民福利社,以改善农民生活;设置示范农田,以图谋农业之发展,取得了一些成绩,对兰州乡村经济的发展有一定裨益。但在实际工作中,始终受限于人力与财力的不足,兰州市农会各项事业的推进步履艰难。最终,随着兰州解放,国民政府主导的农会组织瓦解。

关键词：国民政府兰州农会农业贷款

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清末甘肃省级教育行政研究

清末甘肃省级教育行政研究

作者：孙亦贤西北师范大学

学位级别：硕士

清末国力危殆,清政府推行新政以挽救统治。在此背景下,教育行政体制发生重大变革,中央设立学部,各省裁撤学政设立提学使司,全国范围内自上而下的教育行政体系始见雏形。清末甘肃教育改革是全国大背景下的一个缩影,而以提学使司为核心的... 详细信息

清末国力危殆,清政府推行新政以挽救统治。在此背景下,教育行政体制发生重大变革,中央设立学部,各省裁撤学政设立提学使司,全国范围内自上而下的教育行政体系始见雏形。清末甘肃教育改革是全国大背景下的一个缩影,而以提学使司为核心的甘肃省级教育行政在这一时期既发挥了承上启下的作用,也面临着不容小觑的困境。甘肃提学使司设立后,遵循学部章程进行机构设置,执行学部政令并履行管理全省各类学堂、监督一应学务、筹措管理教育经费的基本职能。但由于经济、人才、会等客观因素制约,身负统筹全省教育重任的领导者又始终处在新旧矛盾的挣扎之中,甘肃教育行政的转型的过程可谓举步维艰。除此以外,作为清末教育改革的重要环节,甘肃教育行政改革同样从一个角度映射出近代甘肃教育发展的曲折性与复杂性。

关键词：清末甘肃教育行政提学使司

包载茶多酚的可降解聚合物纳米微球的制备及其对人脂肪干细胞性能的影响研究

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包载茶多酚的可降解聚合物纳米微球的制备及其对人脂肪干细胞性能...

作者：宗丹常州大学

学位级别：硕士

人脂肪干细胞(hASCs)是一种从人脂肪组织中分离出来的干细胞。与其他成体干细胞一样具备自我更新能力与多向分化潜能,是一种非常理想的组织工程的种子细胞,因此对其体外增殖的研究具有重要的意义。本文将茶多酚加入培养基培养hASCs,通... 详细信息

人脂肪干细胞(hASCs)是一种从人脂肪组织中分离出来的干细胞。与其他成体干细胞一样具备自我更新能力与多向分化潜能,是一种非常理想的组织工程的种子细胞,因此对其体外增殖的研究具有重要的意义。本文将茶多酚加入培养基培养hASCs,通过细胞活性检测对用不同浓度(0μg/mL-50μg/mL,梯度为10μg/mL)的茶多酚培养基培养的hASCs的体外增殖进行分析,并且利用DAPI对hASCs细胞核染色,筛选出最佳浓度的茶多酚培养基即10μg/mL。用含10μg/mL茶多酚的培养基培养hASCs,通过荧光显微镜及酶标仪对hASCs进行观测并且绘制细胞生长曲线;用免疫荧光法检测茶多酚长期培养的hASCs的多能性转录因子Sox2的表达情况;通过流式细胞仪对含茶多酚的培养基长期培养的hASCs的6种表面抗原进行分析;然后进行诱导分化实验,对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行成骨和成软骨诱导;最后对用含茶多酚的培养基长期培养的hASCs进行长期传代。结果表明10μg/mL茶多酚培养基对hASCs的体外增殖起到促进作用,对hASCs向成骨细胞的分化有促进作用,并且对hASCs的多能性没有影响。并且含10μg/mL茶多酚的培养基用于干细胞体外长期培养时具有延缓hASCs的老化的潜力。由于茶多酚在胃肠系统内不易被有效吸收,易与蛋白结合。因此,制备了一种具有良好生物相容性的p H响应性纳米水凝胶来解决茶多酚的生物利用率低的问题。以聚乙二醇(Mw1000)为引发剂,引发ε-己内酯和L-丙交酯开环聚合,制备聚(己内酯-co-丙交酯)-PEG共聚物二醇(PCLA),再用甲基丙烯酸酐封端得到PCLA预聚物单体(PCLAMA)。用FTIR,H-NMR,GPC等对合成产物的组成和结构进行了表征。以PCLAMA为大分子交联剂,N-乙烯基吡咯烷酮、丙烯酸为共聚单体,紫外引发聚合制备水凝胶纳米球,并对其溶胀、降解、药物释放、细胞毒性等进行了分析。结果表明水凝胶纳米球的溶胀率随着pH的增加而变大,其中一种水凝胶纳米球包载茶多酚的载药量超过57%,释放132 h的累计释放率达到30%,与人脂肪干细胞共培养48 h后细胞存活率高于94%,并且成功进入细胞,因此PCLAMA-AP具有将茶多酚直接递送入细胞后进行缓释的潜力,有可能极大的提高茶多酚的生物利用效率。

关键词：茶多酚人脂肪干细胞纳米水凝胶微球药物缓释生物可降解

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太行实业公司研究

太行实业公司研究

作者：赵国强西北师范大学

学位级别：硕士