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安宫牛黄方剂对十一氢巯基十二硼化钠透过血脑屏障的影响

安宫牛黄方剂对十一氢巯基十二硼化钠透过血脑屏障的影响

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作者：李素亚河北北方学院

学位级别：硕士

胶质瘤是颅内常见肿瘤,约占颅内肿瘤的46%,而现有的治疗方法都不甚满意。硼中子俘获疗法(BNCT)对肿瘤细胞的高选择性杀伤和对周围正常细胞的低损伤的特点使之理论上成为了一种理想的胶质瘤治疗方法,近年来也备受医学界关注。十一氢巯基... 详细信息

胶质瘤是颅内常见肿瘤,约占颅内肿瘤的46%,而现有的治疗方法都不甚满意。硼中子俘获疗法(BNCT)对肿瘤细胞的高选择性杀伤和对周围正常细胞的低损伤的特点使之理论上成为了一种理想的胶质瘤治疗方法,近年来也备受医学界关注。十一氢巯基十二硼化钠(Na2B12H11SH,BSH)是BNCT治疗中常用的一种硼携带剂,具有很好的肿瘤细胞聚积的特点,但是不能透过血脑屏障。近年来,中药在血脑屏障的开放方面所起的作用及效果越来越引起人们的关注,安宫牛黄方剂属于芳香开窍类的中药,所以本研究的目的之一就是安宫牛黄方剂对血脑屏障的开放作用及对BSH的促透作用,以求硼携带剂在肿瘤内聚积到理想的浓度,使BNCT的治疗具有更好的效果。甘露醇是临床上常用的开放血脑屏障的药物,所以本研究的第二个目的是比较安宫牛黄方剂与甘露醇促进十一氢巯基十二硼化钠透过血脑屏障的效果。实验首先考察BSH在小鼠体内的组织浓度分布,BSH以176mg·kg-1的剂量小鼠尾静脉注射给药,1h后取血、脑、肝和肾组织。浓硝酸消解、过滤后,采用ICP-AES法检测溶液中硼元素的浓度。结果发现BSH在脑内的含量极低,难以直接透过血脑屏障。所以实验采用安宫牛黄方剂开放血脑屏障并研究其对BSH透过血脑屏障的影响。实验中采用伊文氏蓝染色法和荧光显微镜法评价安宫牛黄方剂对血脑屏障的开放作用。(1)伊文氏蓝染色法昆中明小鼠36只,随机分为0.125g·kg-1·d-1,0.25g·kg-1·d-1,0.50g·kg-1·d-1,0.75g·kg-1·d-1四个方剂给药剂量组,对照组灌胃同体积液体石蜡油,空白组在相同的环境条件下正常饲养,各组均于每日的9：00～10：00灌胃给药,连续4d。于末次给药后30min,除空白组外的各组小鼠尾静脉注射2%伊文氏蓝溶液0.05mL,1h后肉眼观察脑组织蓝染情况。(2)荧光显微镜法：昆明小鼠20只,实验组以0.25g·kg-1·d-1的方剂剂量于每日的9：00～10：00灌胃给药,连续4d;对照组灌胃同体积液体石蜡油溶液,每日的9：00-10：00灌胃给药,连续4d。于末次给药后30min尾静脉注射2%伊文氏蓝溶液0.05mL,1h后处死,取脑组织做快速冰冻切片,于荧光显微镜下观察并计算光斑数。安宫牛黄方剂对BSH的促透性实验分为量效关系效应实验和时间效应关系实验两部分。量效实验：36只昆明小鼠被随机分为6个组,0.125g·kg-1·d-1,0.25g·kg-1·d-1,0.50g·kg-1·d-1,0.75g·kg-1·d-1四个方剂给药剂量组,对照组灌胃同体积液体石蜡油,空白组相同环境下正常饲养,各组均于每日的9：00-10：00灌胃给药,连续4d,末次给药后30min,尾静脉注射给药BSH0.2mL,1h后取脑,浓硝酸消解、过滤后,采用ICP-AES法检测溶液中硼元素的浓度。时效关系实验：昆明小鼠48只,实验组以0.25g·kg-1·d-1的方剂剂量小鼠灌胃给药,对照组灌胃同等体积的石蜡油溶液,连续4d,末次给药后30min,尾静脉注射给药BSH0.2mL,于BSH给药后1,3,6,12h取脑。浓硝酸消解、过滤后,采用ICP-AES法检测溶液中硼元素的浓度。安宫牛黄方剂与甘露醇促进十一氢巯基十二硼化钠透过血脑屏障的比较研究中72只昆明小鼠随机分为安宫牛黄方剂组,甘露醇组,对照组。安宫牛黄组小鼠以0.25g·kg-1·d-1的剂量灌胃给药,甘露醇组小鼠尾静脉给药0.1mL,对照组灌胃同等体积的石蜡油溶液,连续4d,末次给药后30min,小鼠尾静脉注射BSH0.2mL。各组于BSH给药后1,3,6,12h取鼠脑。用浓硝酸消解、过滤后,采用ICP-AES法检测溶液中硼元素的浓度。在血脑屏障开放作用的研究中发现：(1)当方剂的给药剂量为0.75g·kg-1·d-1时,小鼠会发生严重中毒反应,0.50g·kg-1·d-1给药时部分小鼠会发生轻微中毒反应。(2)在伊文氏蓝染色中发现,0.25g·kg-1·d-1和0.50g·kg-1·d-1剂量组小鼠的大脑皮层染色程度较0.125g·kg-1·d-1和0.75g·kg-1·d-1两个剂量组小鼠的蓝染程度深,对照组小鼠的大脑皮层也有淡淡的蓝染的现象,肉眼观察四个给药组小鼠的大脑皮层蓝染程度与对照组相比较存在明显差异。(3)在荧光显微镜下观察到：对照组仅偶见红斑,实验组可见大量卵圆形红斑,实验组与对照组的光斑平均数为75.65±7.58,28.55±3.67,差异显著(P<0.05)。安宫牛黄方剂对BSH的促透性实验的研究结果显示,在量效关系实验中0.125g·kg-1·d-1,0.25g·kg-1·d-1,0.50g·kg-1·d-1,0.75g·kg-1·d-1,空白组,

关键词：血脑屏障十一氢巯基十二硼化钠(BSH) 甘露醇安宫牛黄方剂伊文氏蓝硼中子俘获疗法

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