检索结果-南通市图书馆

作者：狄元冉河南农业大学

学位级别：硕士

Hepcidin是一种富含半胱氨酸的小分子多肽,有一定的抑菌活性,同时具有调节机体铁代谢的功能,其潜在的医用价值成为近年来研究的一个热点。但通过化学合成或从组织中提取获得Hepcidin的成本相当高且不容易操作,因此,利用生物学技术,采用... 详细信息

Hepcidin是一种富含半胱氨酸的小分子多肽,有一定的抑菌活性,同时具有调节机体铁代谢的功能,其潜在的医用价值成为近年来研究的一个热点。但通过化学合成或从组织中提取获得Hepcidin的成本相当高且不容易操作,因此,利用生物学技术,采用微生物发酵手段在体外获得大量Hepcidin小肽成为当前的一个首选方法。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)是目前应用最广泛的外源蛋白表达系统之·,具有易于操作培养、生长速度快、表达量高、可以对外源基因进行正确的翻译后加工与修饰、糖基化程度低、表达菌株稳定、可进行高密度发酵等优点。本试验根据毕赤酵母对密码子的偏好性,在不改变Hepcidin氨基酸序列的前提下,对其基因序列进行改造,并与真核表达载体pGAPZaA连接,转化DH5a感受态细胞,在含25μg/mL Zeocin抗生素的低盐LB平板初步筛选出阳性转化子,经PCR检测,EcoR Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切鉴定及DNA测序,证实插入片段的DNA序列与设计的猪Hepcidin基因序列完全一致。将线性化的重组质粒经电击导入毕赤酵母X-33中,采用含100μg/mL Zeocin抗生素的YPD培养基筛选阳性转化子,并通过提取酵母基因组进行PCR检测。用含不同浓度Zeocin的YPD培养基筛选高拷贝重组酵母菌。将重组酵母扩大培养,离心收集上清液,Tricine-SDS-PAGE电泳检测结果显示,在2.76kDa处有目的条带,表明Hepcidin在毕赤酵母中成功表达。采用液相生长抑制法测定重组蛋白的生物活性,结果显示,重组蛋白对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的均有明显的抑制作用。为今后Hepcidin在兽药、饲料添加剂方面的应用及其在铁代谢调节方面的研究奠定了基础。

关键词：猪 Hepcidin 毕赤酵母基因表达

微生态制剂和脂蛋白对仔猪生产性能的影响及作用机理研究

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微生态制剂和脂蛋白对仔猪生产性能的影响及作用机理研究

作者：李小飞河南农业大学

学位级别：硕士

本试验在饲料中添加微生态制剂(主导菌为乳酸菌),以及用脂蛋白替代鱼粉,研究其对哺乳仔猪和断奶仔猪的影响。在哺乳仔猪的试验中,一是选取产期和窝仔数相近、胎次相同的25窝初生仔猪(长×大)共计250头,随机平均分成5组,每组5窝。其中每... 详细信息

本试验在饲料中添加微生态制剂(主导菌为乳酸菌),以及用脂蛋白替代鱼粉,研究其对哺乳仔猪和断奶仔猪的影响。在哺乳仔猪的试验中,一是选取产期和窝仔数相近、胎次相同的25窝初生仔猪(长×大)共计250头,随机平均分成5组,每组5窝。其中每组的处理分别为:(1)基础日粮(无抗生素,对照组);(2)基础日粮+0.05%微生态制剂;(3)基础日粮+0.1%微生态制剂;(4)基础日粮+0.2%微生态制剂;(5)基础日粮+80ppm金霉素。结果显示:第5组的日增重高于第3组4.40%,料肉比低于第3组18.36%。其中,第3组的日增重比对照组高1.99倍,料肉比(2.56:1)比对照组低18.21%(P＞0.05)。各个组的微生物数量差异不显著。二是采用单因子试验设计,10窝共计100头7日龄大×长二元哺乳仔猪随机平均分为2组,每一窝为一重复。对照组含有5%的乳清粉和2%的鱼粉,处理组采用7%的脂蛋白代替鱼粉和乳清粉,借以研究脂化蛋白对哺乳仔猪生产性能的影响,其中哺乳仔猪28天断奶。试验分两个阶段,7-28日龄为第一阶段,28-35日龄为第二阶段,全程共计28天。结果表明:(1)整个试验阶段,对照一组仔猪日增重比处理一组增加了31.87%(P＞0.05),(2)在第二阶段,处理组的饲料转化效率小于零,仔猪体重下降,而对照组饲料转化效率均大于零,仔猪体重增加。在断奶仔猪的试验中,一是选用150头35日龄断奶仔猪随机分为5组,每组3个重复,每个重复10头仔猪,每个处理组分别为:(1)基础日粮(无抗生素);(2)基础日粮(无抗生素)+0.025%微生态制剂;(3)基础日粮(无抗生素)+0.05%微生态制剂;(4)基础日粮(无抗生素)+0.10%微生态制剂;(5)基础日粮(无抗生素)+80ppm金霉素。试验时间从35日龄至60日龄结束。之后从中选取32头71日龄的仔猪,随机分为两组,对照组为添加有抗生素的饲料,购自市场,试验组添加0.05%的微生态制剂。试验时间从71日龄至100日龄结束。在仔猪脂蛋白的试验中,采用单因子试验设计,选取100头35日龄大×长生长仔猪随机平均分为2组,每10头为一重复。对照组含有2%的鱼粉,处理组采用2%的脂蛋白代替鱼粉,试验从35日龄至60日龄结束,用于研究脂蛋白对生长仔猪的生产性能的研究。结果如下:(1)在35日龄至60日龄试验中,第3组的料肉比(1.84:1)最低,低于对照组8.91%,低于第5组29.50%(P＞0.05);3组和第4组的死亡率同为0%,低于其它的三个组(P＜0.05);第3组盲肠内容物的大肠杆菌数显著少于对照组的数量(P＜0.05);第3组的小肠厚度(775.00um)显著低于其它两组(P＜0.05);第3组的大肠厚度低于对照组41.37%,隐窝深度高于对照组60.19%,绒毛高度低于对照组58.54%(P＜0.05);第3组盲肠隐窝深度低于对照组16.26%,(P＜0.05)。其它的肠道指标,差异不显著。第3组的谷草转氨酶指标高于对照组4.15倍(P＜0.05),乳酸脱氢酶比对照组和第5组高5.76倍和8.71倍(P＜0.05);第3组的IgA指标比对照组高60.06%(P＞0.05);第3组和第5组的胃内容物淀粉酶活指标比对照组高1.98倍和2.13倍,对照组大肠内容物的淀粉酶指标高于第5组23.10%(P＜0.05)。其它的指标差异不显著;第3组胃肠道内容物的蛋白酶活高于对照组(P＞0.05),其它的指标差异不显著。(2)在71日龄至100日龄试验中,试验组的料肉比低于对照组16.31%,日增重高于对照组9.49%(P＞0.05)试验组的乳酸菌数量显著高于对照组(P＜0.05)。(3)在仔猪脂蛋白的试验中,试验组料肉比低于对照组31.03%(P＜0.05);试验组腹泻率(0.40%)低于对照组腹泻率(2.53%),死亡率高于对照组19.20%(P＞0.05)。综合结果显示:微生态制剂具有促进哺乳仔猪生长的作用,本试验中以添加0.1%的促生长效果最好。另外,添加微生态制剂的处理组,消化道的乳酸菌数量高于其他处理组。用7%的脂蛋白代替2%鱼粉和5%乳清粉,对于哺乳仔猪的促生长效果不明显微生态制剂可以提高断奶仔猪的生长性能,降低断奶仔猪的死亡率,降低小肠的厚度,促进肝脏的蛋白质代谢速度,部分地提高体液免疫;但对于消化道的pH值没有太大的影响。脂蛋白完全可以代替2%鱼粉,用于断奶仔猪的生产上

关键词：微生态制剂脂蛋白仔猪生产性能胃肠道结构胃肠道微生物区系

微生物制剂对肉鸡生长性能及排泄物无害化处理的研究

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微生物制剂对肉鸡生长性能及排泄物无害化处理的研究

作者：路文华河南农业大学

学位级别：硕士

本试验旨在研究微生态制剂对肉鸡生长性能和肠道菌群结构的影响。将200只1 d健康的雌性AA肉仔鸡按体重分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复10只鸡。以基础日粮为对照组(A组),其余B、C和D组分别在基础日粮中添加0.02%、0.04%和0.06%的... 详细信息

本试验旨在研究微生态制剂对肉鸡生长性能和肠道菌群结构的影响。将200只1 d健康的雌性AA肉仔鸡按体重分为4个处理,每个处理5个重复,每个重复10只鸡。以基础日粮为对照组(A组),其余B、C和D组分别在基础日粮中添加0.02%、0.04%和0.06%的微生态制剂。研究微生态制剂对肉鸡生长性能、消化道酶活、血清生化指标和微生物区系等方面的影响。另外,选取干酪乳杆菌、产朊假丝酵母菌、粪肠球菌和枯草芽孢杆菌进行单因素试验和响应面回归设计,研制出复合微生物制剂,并研究其在降低鸡排泄物中大肠杆菌数量和吲哚含量的作用。主要结果如下:(1)微生物制剂对肉鸡生产性能的影响:在肉鸡饲养前期,添加微生物制剂能够显著降低肉鸡的死亡率,而对日增重无显著性影响,以B组钙和D组磷的代谢率最高。在肉鸡饲养后期,微生物制剂可显著地提高肉鸡的日增重(P0.05);添加复合微生物制剂组和不添加复合微生物制剂组吲哚含量差异不显著(P>0.05);但是添加复合微生物制剂组有降低鸡粪中大肠杆菌数和吲哚含量的趋势。(6)复合微生物制剂对鸡排泄物中微生物区系的影响:PCR-DGGE(变性梯度凝胶电泳)的研究结果表明,添加复合微生物制剂组图谱条带数少于不添加组,但是添加复合微生物制剂的四组中浓度深的条带要多于不添加组,并且添加复合微生物制剂组的微生物相似性系数较不添加组的微生物相似性系数高,且比较稳定。

关键词：微生物制剂肉鸡生产性能微生物区系排泄物微生物发酵

日粮中添加不同形式硒源对肉仔鸡作用效果的研究

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日粮中添加不同形式硒源对肉仔鸡作用效果的研究

作者：孟凡成河南农业大学

学位级别：硕士

本研究共分为四个试验,分别研究了饲料中添加不同形式的硒源对AA肉鸡生长性能、屠宰性能、肉品质、饲料消化率、肠道微生物、血.清生化指标和抗氧化能力的影响。主要结果如下：试验一,不同硒源对肉鸡生长性能的影响：选取1日龄体重接近... 详细信息

本研究共分为四个试验,分别研究了饲料中添加不同形式的硒源对AA肉鸡生长性能、屠宰性能、肉品质、饲料消化率、肠道微生物、血.清生化指标和抗氧化能力的影响。主要结果如下：试验一,不同硒源对肉鸡生长性能的影响：选取1日龄体重接近的健康AA肉仔鸡9.6万只,随机分为对照组和试验组,每个组设3个重复,每个重复16000只。对照组：基础日粮+0.3 mg/kg亚硒酸钠;试验组：基础日粮+0.3 mg/kg赛乐硒(有机硒),试验期为6周。试验结果表明,试验组肉仔鸡的出栏体重均显著高于对照组(P0.05);有机硒较无机硒能显著提高肌肉的红度,显著降低肌肉的滴水损失。与对照组相比,试验组胸肌和腿肌的红色色度分别提高13.98%(P0.05)。这说明有机硒在降低肌红蛋白氧化,稳定肉的颜色和降低滴水损失方面要显著优于无机硒。试验三,不同硒源对肉鸡营养物质代谢率和肠道微生物区系的影响：饲养试验结束后,每组选取6只鸡(公母各半,体重大体相当)进行代谢试验,研究不同硒源对肉鸡营养物质代谢率和肠道微生物区系的影响。结果表明,饲料中添加不同硒源对肉鸡营养物质代谢率无显著影响(P>0.05)。与对照组相比,试验组中肉鸡小肠中的微生物总数和大肠杆菌数分别提高31.13%(P0.05)。另外,试验组小肠、盲肠和直肠中的乳酸菌数量稍低于对照组(P>0.05)。这说明在抑制大肠杆菌生长促进有益菌生长方面,有机硒无明显的优势。试验四,不同硒源对肉鸡血清中相关生化指标的影响：在屠宰试验的实施过程中,对每组6只鸡(公母各半,体重大体相当)进行颈静脉取血,做血清学分析。结果表明,在饲料中添加不同硒源,对肉鸡血清生化指标有一定的影响(P0.05)。这说明在增强机体抗氧化能力方面,有机硒显著优于无机硒。综合结果表明,在肉鸡日粮中添加有机硒能显著提高肉鸡的生长性能,明显改善肌肉品质和增强机体的抗氧化能力：在屠宰性能、养分代谢率和血清生化指标方面,有机硒和无机硒之间无显著差别;在抑制大肠杆菌生长和促进有益菌生长方面,无机硒优于有机硒。

关键词：肉鸡有机硒无机硒生长性能肉品质肠道微生物区系血清生化指标

植酸酶基因在pIAβ8和pGAPZαA两种载体中的表达及酶学特性分析

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植酸酶基因在pIAβ8和pGAPZαA两种载体中的表达及酶学特性分析

作者：冯华河南农业大学

学位级别：硕士

本研究旨在测定无花果曲霉植酸酶的酶学特性,克隆出无花果曲霉植酸酶的基因,构建原核和真核重组表达载体,比较两种重组表达载体在大肠杆菌中表达分泌的植酸酶酶活,从而选择最佳表达载体,为进一步生产转基因植酸酶奠定基础。无花果曲霉... 详细信息

本研究旨在测定无花果曲霉植酸酶的酶学特性,克隆出无花果曲霉植酸酶的基因,构建原核和真核重组表达载体,比较两种重组表达载体在大肠杆菌中表达分泌的植酸酶酶活,从而选择最佳表达载体,为进一步生产转基因植酸酶奠定基础。无花果曲霉采用麸皮固体培养基发酵,利用生理盐水浸提植酸酶,通过离心、盐析、透析、层析纯化回收无花果曲霉植酸酶并测定其酶学特性。结果表明,其最适pH为2.5和5.5,最适合温度为50℃,该特性对于其作为饲料添加剂,被单胃动物利用降解植物性饲料中的植酸非常有利。本试验成功提取了无花果曲霉的基因组DNA,设计引物,利用PCR扩增出植酸酶的基因片段(1.4Kb),纯化回收目的基因,并克隆到克隆载体PUCm-T中。经PCR检测,XbaⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定及DNA测序,证实插入片段的DNA序列与Genebank中已公布的植酸酶(Ref AY013315)成熟肽目标序列同源性达99.53%,克隆序列编码蛋白与目的序列的同源性为99.63%,且完整保留了酸性磷酸酶的活性中心编码蛋白序列。本次克隆的植酸酶基因序列已在Genebank上注册(***206311)。将植酸酶基因从克隆重组表达载体上双酶切下来,与双酶切过的原核表达载体pIAβ8相连接。经PCR检测、酶切鉴定及表达的植酸酶活性测定,验证了植酸酶基因完整准确地插入原核表达载体中。同样地成功构建了pGAPZαA-phyA重组表达载体。通过两种重组表达载体分别在大肠杆菌中表达的植酸酶酶活比较,可得出pIAβ8-phyA重组表达载体可分泌表达胞内植酸酶(9.04 U/ml,P＜0.05);而pGAPZαA-phyA重组表达载体可分泌表达胞外植酸酶(8.04 U/ml,P＜0.05)。SDS-PAGE电泳检测出两种植酸酶基因重组表达载体分别在大肠杆菌中可表达植酸酶蛋白,在54.61 KDa处均有亮带,且与商品植酸酶的位置相当。

关键词：植酸酶基因表达大肠杆菌 pGAPZαA质粒 pIAβ8质粒

玉米赤霉烯酮生物脱毒剂的研制及对肥育猪生产性能和解毒效果的研究

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玉米赤霉烯酮生物脱毒剂的研制及对肥育猪生产性能和解毒效果的研...

作者：刘超齐河南农业大学

学位级别：硕士

玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是一种类雌激素作用的真菌毒素,广泛存在于各种粮食作物中,母猪受其危害最大。本文通过研究得到高效降解ZEN的益生菌与酶制剂组合,制成生物脱霉剂,添加到饲料中饲喂肥育猪,研究育肥猪的生产性能及脱毒... 详细信息

玉米赤霉烯酮（Zearalenone,ZEN）是一种类雌激素作用的真菌毒素,广泛存在于各种粮食作物中,母猪受其危害最大。本文通过研究得到高效降解ZEN的益生菌与酶制剂组合,制成生物脱霉剂,添加到饲料中饲喂肥育猪,研究育肥猪的生产性能及脱毒效果。试验分为三部分。第一部分是体外筛选具有降解ZEN作用的益生菌,并对其进行组合。将试验室保存的益生菌接种到相应培养基中,同时加入ZEN,与菌株共同培养24 h,用酶联免疫试剂盒检测液体中ZEN含量,计算降解率。结果表明枯草芽孢杆菌K3、枯草芽孢杆菌K4和产朊假丝酵母的降解率分别为91.73%、92.07%和76.68%。对去除ZEN活性组分分布进行探究发现,芽孢杆菌起作用的组分分布在发酵上清液中。产朊假丝酵母活性组分在发酵上清液和菌体细胞内都有分布。在不同的时间段检测ZEN的降解率,发现枯草芽孢杆菌和产朊假丝酵母在16 h时,降解率分别达到95.04%和79.75%（P＜0.05）,并且与之后的时间段差异不显著（P＞0.05）。研究还发现,枯草芽孢杆菌K3、枯草芽孢杆菌K4和产朊假丝酵母在YPD培养基中培养的活菌数比LB培养基中多,因此,将YPD培养基作为三者复合降解ZEN的共同培养基,培养16 h。三者复合降解ZEN采用正交试验方案,分为9个处理,每个处理3个重复,16 h后测ZEN降解率。结果显示,枯草芽孢杆菌K3、枯草芽孢杆菌K4和产朊假丝酵母三者之间的配比为2:2:1,降解率达到92.21%（P＜0.05）。第二部分是将复合益生菌与米曲霉的粗酶液进行配伍降解ZEN,结果表明复合益生菌与米曲霉粗酶液配比为2:1时,降解率最高,达到95.15%（P＜0.05）。将芽孢杆菌、产朊假丝酵母和米曲霉进行扩大培养,制成干粉,按照试验得到的配比,混合制备生物脱霉剂。第三部分是进行生物脱霉剂对生长肥育猪脱毒效果的研究。试验选择120头体重在34 Kg左右的健康猪,随机分为5组,每组3个重复,每个重复8头猪（公母各半）,进行为期60天的饲养试验。A组日粮中含有86.16μg/Kg ZEN,B组含有ZEN 300μg/kg,C含有ZEN 300μg/Kg和0.5 Kg/t的生物脱霉剂,D含有ZEN 300μg/Kg和1.0 Kg/t的生物脱霉剂,E含有ZEN 300μg/Kg和1.5 Kg/t的生物脱霉剂。饲养试验结束后,根据阴户红肿情况和生长性能等指标,分别从A组、B组和D组中选择3头母猪进行屠宰试验。试验结果表明,随着时间的延长,A组阴户面积基本无变化,B组和试验组阴户面积明显增大,且B组阴户面积最大。15 d后,各组阴户面积基本无明显变化。添加生物脱霉剂组猪的粪便中淀粉酶的活性显著高于B组（P＜0.05）,而蛋白酶活性无显著差异。粪便中的大肠杆菌数虽然各组无显著差异（P＞0.05）,但随着生物脱霉剂量的增加,大肠杆菌数有减少的趋势。C、D和E组猪粪便中微生物相似系数高达50%,而A组和B组皆低于50%;D组大肠内容物中微生物的相似系数高于A组和B组,说明D组猪肠道的微生物区系相对稳定。各组猪在日增重,采食量和饲料转化率、粗蛋白质、粗脂肪、钙和磷的表观消化率上差异不显著（P＞0.05）。在心脏、肝脏、脾脏、肾脏和子宫指数方面各组差异不显著（P＞0.05）,但B组的子宫指数要高于A组和D组。在肝脏、子宫、背最长肌和血清中没有检测到ZEN的残留。B组血清中葡萄糖含量显著地高于E组（P＜0.05）,其它血清指标在各处理组之间差异不显著（P＞0.05）。B组空肠内容物中ZEN残留量最高,显著地高于A和D组（P＜0.05）。B组大肠内容物中ZEN的残留量略高于D组（P＞0.05）,但均显著地高于A组（P＜0.05）。对卵巢组织中的雌激素受体基因ERαmRNA表达量分析发现,A、B和D组之间差异不显著（P＞0.05）。本文通过研究获得一种在体外高效降解ZEN的生物脱霉剂,经饲养试验验证,该制剂可以缓解青年母猪的阴户红肿,维持肠道微生物区系稳定,并减轻ZEN对动物的危害。

关键词：生物脱霉剂玉米赤霉烯酮肥育猪生产性能肠道微生物区系

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中草药饲料添加剂对哺乳母猪生产性能的影响

中草药饲料添加剂对哺乳母猪生产性能的影响

作者：张元中河南农业大学

学位级别：硕士

本研究共分为三个试验,分别研究了饲料中添加不同剂量的中草药制剂对哺乳母猪生产性能、饲料消化率、肠道微生物和血清生化指标的影响。主要结果如下:试验一,中草药饲料添加剂对哺乳母猪生产性能的影响:选取体重接近的健康泌乳母猪25头... 详细信息

本研究共分为三个试验,分别研究了饲料中添加不同剂量的中草药制剂对哺乳母猪生产性能、饲料消化率、肠道微生物和血清生化指标的影响。主要结果如下:试验一,中草药饲料添加剂对哺乳母猪生产性能的影响:选取体重接近的健康泌乳母猪25头,分为对照组、中草药低剂量添加组、中剂量组、高剂量组和微生态制剂组,每个组设5个重复,每个重复1头。对照组:基础日粮+次粉,低剂量组:基础日粮+0.25%中草药添加剂,中剂量组:基础日粮+0.50%中草药添加剂,高剂量组:基础日粮+0.75%中草药添加剂,微生态制剂组:基础日粮+0.1%微生态制剂,试验期为28天。试验结果表明,低剂量组仔猪的断奶窝重均显著高于对照组(P0.05)和14.34%( P>0.05)。这说明中草药饲料添加剂能提高母猪和仔猪生产性能。试验二,中草药饲料添加剂对哺乳母猪营养物质消化率的影响:饲养试验结束前进行代谢试验,研究不同剂量中草药饲料添加剂对哺乳母猪营养物质代谢率的影响。结果表明,饲料中添加中草药制剂对母猪营养物质代谢率有显著影响(P<0.05)。与对照组相比,试验组中粗蛋白、粗脂肪、钙和磷的消化率分别提高了16.69%、12.78%、15.86%和12.13%( P<0.05)。这说明在草药饲料添加剂在提高饲料消化率方面有明显的优势。试验三,中草药饲料添加剂对哺乳母猪肠道微生物区系和血清生化指标的影响:采用常规微生物学分析方法对试验组和对照组猪粪便中的总菌数、大肠杆菌数和乳酸菌数进行计数;颈静脉取血做血清学分析。结果表明,与对照组相比,中草药低剂量和中剂量添加剂组中大肠杆菌数量分别降低了46.15%和64.96%( P<0.05),低剂量组中乳酸菌数提高了75.18%。试验组中总蛋白和球蛋白含量分别提高了21.53%和36.30%,低剂量组总胆红素的含量降低了71.11%,差异显著(P<0.05);其他血清生化指标组间差异均不显著。这说明中草药添加剂可以抑制大肠杆菌生长和促进有益菌生长,同时可以提高机体免疫力。综合结果表明,在哺乳母猪日粮中添加中草药制剂能显著提高母猪的生产性能和营养物质消化率,具有抑制大肠杆菌、促进有益菌生长和提高机体免疫力的作用。

关键词：哺乳母猪中草药生产性能肠道微生物区系血清生化指标

康氏木霉纤维素酶CBHⅠ基因克隆及在毕赤酵母中的表达

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康氏木霉纤维素酶CBHⅠ基因克隆及在毕赤酵母中的表达

作者：卢敏河南农业大学

学位级别：硕士

纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种有机化合物，占植物干重的1/3/2，是世界总量最大的可再生资源，合理地开发与利用纤维素资源对于缓解能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。利用微生物及其产生的纤维素酶... 详细信息

纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种有机化合物，占植物干重的1/3/2，是世界总量最大的可再生资源，合理地开发与利用纤维素资源对于缓解能源危机、粮食短缺、环境污染等问题具有十分重要的意义。利用微生物及其产生的纤维素酶来分解纤维素是一种有效且无污染的方法。纤维素酶是降解纤维素的高活性生物催化剂，广泛用于饲料、环保、食品、酿酒、纺织、造纸等领域。但天然的微生物生产纤维素酶存在酶产量低、活性低、受到葡萄糖等产物的反馈抑制等许多问题，这些问题极大地影响了纤维素酶的工业化生产。应用基因工程技术来获得高活力、高产量的纤维素酶资源越来越受到人们的重视。纤维素外切酶是纤维素水解酶系中唯一可以作用于结晶纤维素的酶组分，对纤维素的降解有着重要的作用。本实验从纤维素酶高产菌康氏木霉(Trichoderma koningii)的染色体DNA中扩增得到外切葡聚糖酶CBHⅠ基因，构建重组表达质粒pGAPZαA-CBHⅠ并通过高压电击手段转入到毕赤酵母(Pichia pastoris)X-33中，实现了CBHⅠ基因在毕赤酵母中的表达。主要内容包括以下：采用PCR技术扩增得到CBHⅠ基因，与克隆载体PMD19-T连接后转入大肠杆菌DH5α，测序及序列比对结果显示该DNA序列全长1626bp，与Genbank已公布的Trichoderma viride(FJ871063.1)的同源性达到99.63%，推测其编码的蛋白质含497个氨基酸，分子量约为52.29kDa，蛋白质等电点pI=4.28。将CBHⅠ基因与表达载体pGAPZαA连接后，通过过渡宿主大肠杆菌再转化到毕赤酵母X-33中，将经过鉴定的重组酵母茵株接种于YPD液体培养基，定时取样进行纤维素酶活性测定与SDS-PAGE蛋白电泳检测，并对其产酶性质进行分析。结果显示：重组酵母菌发酵培养液羧甲基纤维素酶活力最高达到1.1798U/mL，微晶纤维素酶活力最高达到0.1276U/mL，SDS-PAGE蛋白电泳显示表达蛋白的分子量约为53kDa。结果表明康氏木霉纤维素酶CBHⅠ基因在毕赤酵母中成功表达。该重组酶最适反应温度为450℃，最适反应pH为4.5.0。

关键词： CBHⅠ基因毕赤酵母克隆和表达

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几种抗应激添加剂对育肥猪生产性能的影响

几种抗应激添加剂对育肥猪生产性能的影响

作者：薛小波河南农业大学

学位级别：硕士

本研究根据育肥猪在夏天的生活特性,设计了γ-氨基丁酸、巴氯酚、VC和微生态制剂四种抗热应激添加剂,测定其对育肥猪抗热应激的效果,目的是寻找一种绿色环保的抗热应激添加剂。本试验设置7个组,随机选择112头36.5±2.5公斤的育肥猪,要... 详细信息

本研究根据育肥猪在夏天的生活特性,设计了γ-氨基丁酸、巴氯酚、VC和微生态制剂四种抗热应激添加剂,测定其对育肥猪抗热应激的效果,目的是寻找一种绿色环保的抗热应激添加剂。本试验设置7个组,随机选择112头36.5±2.5公斤的育肥猪,要求公母各半,每组16头,处理组1为γ-氨基丁酸40g/T;处理组2为γ-氨基丁酸80g/T;处理组3为γ-氨基丁酸40g/T和巴氯酚10g/T;处理组4为巴氯酚10g/T;处理组5为γ-氨基丁酸40g/T、巴氯酚10g/T和Vc100g/T;处理组6为微生态制剂500g/T;处理组7为对照组。饲养试验为62天。结果表明,生产效果最好的是处理组5(γ-氨基丁酸、巴氯酚和Vc组合)和6(微生态制剂),这两种添加剂可提高猪的生产性能和抗热应激能力(P0.05),对猪的血清生化指标无明显影响(P>0.05)。

关键词：育肥猪热应激 γ-氨基丁酸巴氯酚微生态制剂

高效玉米秸秆生物饲料的研制及其在育肥猪生产中的应用研究

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高效玉米秸秆生物饲料的研制及其在育肥猪生产中的应用研究

作者：郭红伟河南农业大学

学位级别：硕士

农作物秸秆是一种巨大的潜在饲料资源，而且分布广泛、种类多的特点。现在，玉米秸秆在饲粮中应用有限，特别在单胃动物中未被普及应用。主要是因为玉米秸秆中含有大量的木质纤维素，单胃动物对其消化利用率低消化吸收。在本实验中首先... 详细信息

农作物秸秆是一种巨大的潜在饲料资源，而且分布广泛、种类多的特点。现在，玉米秸秆在饲粮中应用有限，特别在单胃动物中未被普及应用。主要是因为玉米秸秆中含有大量的木质纤维素，单胃动物对其消化利用率低消化吸收。在本实验中首先从自然界分离筛选得到优异的木纤维素酶高产菌株，同时对玉米秸秆进行了理化处理的探索，开创了玉米秸秆先理化处理后微生物发酵的高效生物秸秆的处理工艺，并且利用猪的饲养试验对其应用效果进行评定，为秸秆资源的综合利用奠定了基础。本研究主要包括如下四部分内容：试验一：从腐烂的树枝和土壤中采集样品，以秸秆为唯一碳源富集培养后，采用PDA–愈创木酚法进行菌株的初筛，筛选出木质素酶高产菌株5株，然后在以玉米秸秆为主要碳源的玉米粉固态发酵培养基中进行复筛。结果表明，第5号菌株在玉米秸秆粉固态发酵培养基中发酵5d后，木质素的降解率为最高为34.95%，同时粗纤维的降解率为20.00%，显著高于其它菌株（P0.05);以10%生物秸秆的能量平衡组的日増重和经济

关键词：玉米秸秆蒸汽爆破 NaOH预处理米曲霉发酵肥育猪生产性能