检索结果-南通市图书馆

作者：周明昊浙江大学

学位级别：硕士

他克莫司(tacrolimus,FK506,商品名Prograf)属于大环内酯类免疫抑制剂。最早由日本藤泽药品工业公司探索研究所于1984年自日本筑波山土壤中分离的筑波链霉菌(Streptomyces tssukibaensis)NO9993的发酵液中提取,并于1993年正式上市。其... 详细信息

他克莫司(tacrolimus,FK506,商品名Prograf)属于大环内酯类免疫抑制剂。最早由日本藤泽药品工业公司探索研究所于1984年自日本筑波山土壤中分离的筑波链霉菌(Streptomyces tssukibaensis)NO9993的发酵液中提取,并于1993年正式上市。其药效是环孢素A的50～100倍,临床上可有效预防各种器官移植后急性排斥反应的发生,并能逆转难治性排斥,市场应用前景广阔。国内企业在成功研制其原料药的基础上,陆续研制成功其胶囊剂与软膏剂。目前,他克莫司及其制剂尚未被国内外权威药典收载。为确保临床用药安全有效,我们对他克莫司原料及其胶囊剂、软膏剂进行了全面的质量研究。目的:建立他克莫司及其胶囊剂、软膏剂的质量控制方法。方法:采用液相色谱等现代及传统分析技术对他克莫司及其胶囊剂、软膏剂进行质量研究,重点考察他克莫司原料药的互变异构现象和含量测定,胶囊剂的溶出度和含量均匀度,软膏剂的提取方法等。采用十八烷基硅烷键合硅胶柱(Shim-packVP-ODS柱,150mm×4.6mm,5μm),检测波长为210nm,流动相为异丙醇-乙腈-磷酸溶液(pH值为3.5)(35:2:63),流速为1ml/min,柱温为50℃。结果:他克莫司在水溶液中有互变异构现象。以流动相为溶剂,常温条件下,6小时左右他克莫司与异构体Ⅰ、Ⅱ达到互变平衡;以28%乙腈为溶剂、70℃水浴处理10分钟,室温放置约2小时,他克莫司与异构体Ⅰ、Ⅱ即达到互变平衡;当进样体积为50μl时,浓度在4.56～456μg/ml范围,他克莫司峰面积与浓度呈良好线性关系,相关系数为1.0000,n=7;胶囊剂照溶出度测定法(中国药典2005年版二部附录X C第三法),以100ml水为溶出介质,转速为每分钟50转,依法操作,分别在5、10、20、30、45、60分钟取样,测定溶出均一性,结果仿制品与原研药溶出性能一致,溶出性良好;软膏剂以28%乙腈为溶剂、70℃水浴提取10分钟,冰浴10分钟,滤膜(0.45μm)过滤,续滤液室温放置1.5小时,取100μl进样测定,结果辅料对他克莫司含量测定无干扰,他克莫司与相邻峰之间的分离度良好。回收率平均值为100.2%,相对标准偏差为1.5%(n=9)。结论:上述方法简便实用、准确、重现性好,适用于产品的质量控制。

关键词：他克莫司胶囊软膏高效液相色谱法互变异构溶出度含量测定

人CYP2E1野生型及CYP2E1*2、CYP2E1*3和CYP2E1*4突变体重组酶的表达及其代谢活性研究

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人CYP2E1野生型及CYP2E1*2、CYP2E1*3和CYP2E1*4突变体重组酶的表...

作者：路珂浙江大学

学位级别：硕士

本课题通过使用杆状病毒-昆虫表达系统异源表达了人CYP2E1野生型蛋白及CYP2E12、CYP2E13和CYP2E14三个有氨基酸变化的突变体蛋白。为药物Ⅰ相代谢的研究提供了单一性的酶源,同时也将CYP2E1野生型蛋白与突变体之间的代谢动力学参数进行... 详细信息

本课题通过使用杆状病毒-昆虫表达系统异源表达了人CYP2E1野生型蛋白及CYP2E12、CYP2E13和CYP2E14三个有氨基酸变化的突变体蛋白。为药物Ⅰ相代谢的研究提供了单一性的酶源,同时也将CYP2E1野生型蛋白与突变体之间的代谢动力学参数进行对比。目的表达CYP2E1野生型蛋白及CYP2E12、CYP2E13和CYP2E14三个突变体蛋白,比较它们之间的代谢动力学差异,同时为药物Ⅰ相代谢的研究提供单一性的酶源。方法以人肝组织RNA为模板进行RT-PCR扩增反应,获得CYP2E1基因的cDNA序列,然后通过定点突变获得三个突变体的cDNA序列。将这些基因分别连接至pGEM-T载体上并进行DNA测序,选取正确序列的CYP2E1野生型及三个突变型基因,与pFastBac质粒连接,得到的重组质粒转化入大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,经过转座作用,产生重组粘粒DNA(Bacmid-CYP2Els)。该重组粘粒转染Sf9细胞后,即产生重组杆状病毒。将构建好的CYP2E1病毒,与本实验室已构建好的CYPOR、CYPb5病毒一起加入Sf9细胞中共表达这三种蛋白以获得有代谢活性的重组酶。通过测定共表达方法中三种病毒间不同的比例、不同的细胞感染复数值,以及不同的表达时间等条件下的活性,选取最佳表达条件。以氯唑沙宗和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素作为底物,分别检测重组酶的活性,并比较CYP2E1野生型与突变体之间的代谢动力学参数。结果对构建各CYP2E1s重组病毒的每个步骤的鉴定,表明本实验成功构建了含有正确目的基因序列的各重组CYP2E1s病毒。将各重组CYP2E1s病毒分别感染Sf9细胞,通过RT-PCR实验表明目的基因在mRNA水平上有表达;通过western blot实验表明目的蛋白在蛋白水平有表达。以氯唑沙宗和7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素为底物,分别对重组酶的代谢活性进行检测,表明构建的CYP2E1野生型及CYP2E12、CYP2E13和CYP2E14突变体重组酶都有代谢活性,它们对氯唑沙宗的代谢动力学参数K分别为72.4、40.83、37.16和32.66μmol·L,V分别为0.402、0.374、0.356和0.354μmol·min·gprotein;对7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素的代谢动力学参数K分别为35.3、10.6、19.2和14.22μmol·L,V分别为0.023、0.034、0.036和0.033μmol·min·gprotein。结论CYP2E1野生型与CYP2E12、CYP2E13和CYP2E14突变体重组酶的代谢活性无明显差别,但三个突变体对底物的亲和性比野生型高。本实验所构建的重组酶可用于体外药物代谢研究。

关键词： CYP2E1 突变体杆状病毒表达系统氯唑沙宗 7-甲氧基-4-三氟甲基香豆素活性鉴定

中药指纹图谱及其在中药质量控制和体外吸收代谢研究中的应用

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中药指纹图谱及其在中药质量控制和体外吸收代谢研究中的应用

作者：徐亚萍浙江大学

学位级别：硕士

中药作为中华民族科学、文化和历史的伟大宝库,是我国在自然科学领域最具有优势、最有特色、最有希望的学科之一。一般来说中药的质量控制大致上有两种取向,一种是模仿化学合成药物的质量控制模式,即以已知的某一单一活性成分或有效成... 详细信息

中药作为中华民族科学、文化和历史的伟大宝库,是我国在自然科学领域最具有优势、最有特色、最有希望的学科之一。一般来说中药的质量控制大致上有两种取向,一种是模仿化学合成药物的质量控制模式,即以已知的某一单一活性成分或有效成分为控制质量的指标,给以定性和定量的分析,借以判断药品是否“合格”。这种模式已经沿用了半个多世纪,只是分析手段的更新和测定指标的更迭。当然中药的作用却不是多种成分活性的简单相加,尤其是复方制剂更是如此,因为中医理论强调辨证论治,随证加减,强调因人、因时、因地而异,而且常常是从整体上发挥作用,具有明显的非线性和不确定性特点。因此模仿西药质量控制的模式解决中药质量控制问题越来越显露出它的不足,因为不可能用线性分析的思维和手段解决非线性性质的问题。而需要用综合的、宏观的、非线性的分析观念来适应。在现阶段指纹图谱就是适应这一特点的另一种质量控制模式,它从色谱(或波谱)的指纹图谱的整体特征来综合地鉴别真伪,加上一定的量化参数还可以大致评价中药产品质量的稳定性和一致性。据此判断原料、半成品、成品的质量相关性、一致性和稳定性。应用到原料药材的筛选、生产工艺的优化、成品质量的稳定考察、市场商品的质量监控,所表达的质量信息远比测试单一成分要丰富的多。美国FDA及WHO对植物药允许以指纹图谱判断上市产品批间样品质量的一致性,是出于在植物药的有效成分不明,没有具体的检测目标的情况下的权宜之计,是一种“让步”政策。所

关键词：银杏叶四方篙指纹图谱 Caco-2 代谢诱导

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人CYP2B6的体外表达及活性鉴定

人CYP2B6的体外表达及活性鉴定

作者：吕青浙江大学

学位级别：硕士

细胞色素P450同工酶属于血红蛋白超家族,是参与催化众多外源物和内源物生物转化反应的重要酶系,主要存在于肝脏中。细胞色素P450酶系催化致癌物、环境污染物以及药物的代谢,使这些化合物亲水性或极性增加,促进排泄,防止毒性物质在体内... 详细信息

细胞色素P450同工酶属于血红蛋白超家族,是参与催化众多外源物和内源物生物转化反应的重要酶系,主要存在于肝脏中。细胞色素P450酶系催化致癌物、环境污染物以及药物的代谢,使这些化合物亲水性或极性增加,促进排泄,防止毒性物质在体内累积。其中CYP1、2、3族负责大多数外源物的代谢,具有广泛的底物特异性。细胞色素P450 2B6,简称CYP2B6,是研究相对较少的同工酶,主要原因是一方面该酶在人肝中的mRNA水平和蛋白质含量比较低,另一方面是缺乏合适的探针工具。随着高灵敏度和选择性的免疫检测方法的应用,人们在人肝中检测到CYP2B6较高的表达水平。近年来CYP2B6引起了更多的关注,越来越多的数据表明CYP2B6参与催化许多重要临床药物的代谢。其中安非他酮是CYP2B6的特异性药物,可作为酶活性测定的探针底物。体外表达CYP2B6重组酶对研究该酶在药物代谢中的作用具有重要意义。近年来杆状病毒介导的昆虫表达系统得到了广泛地应用,本课题通过该系统表达CYP2B6重组酶,并进行活性鉴定。 ***2B6基因的克隆根据基因库CYP2B6的cDNA序列设计引物,通过RT-PCR扩增得到CYP2B6的cDNA基因片段,cDNA片段与pGEM-T载体连接,重组质粒进行DNA测序。通过定点突变方法获得野生型基因序列,经测序的CYP2B6基因片段亚克隆到穿梭载体pFastBac载体上,该载体能够与Bacmid发生特定位点的转座重组。连接后的重组质粒CYP2B6-pFastBac转化到含有Bacmid的大肠杆菌DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白筛选获得含有CYP2B6基因片段的重组粘粒,该重组粘粒通过脂质体法转染昆虫细胞,从而获得重组杆状病毒。 ***2B6同工酶与CYPOR的共表达

关键词：细胞色素P450 克隆表达 CYP2B6杆状病毒 Sf9细胞安非他酮

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BYZX体外吸收、代谢及药物相互作用研究

BYZX体外吸收、代谢及药物相互作用研究

作者：夏宗玲浙江大学

学位级别：硕士

阿尔茨海默症(简称AD)又称老年痴呆症,是一种不可逆的、渐进性的脑功能障碍,临床表现为记忆障碍,智力减退并伴有其他认知功能损害。AD的病因以及药物防治是一个非常复杂的疑难问题,目前使用的治疗方法是用药物干扰病情的进展。迄今为止... 详细信息

阿尔茨海默症(简称AD)又称老年痴呆症,是一种不可逆的、渐进性的脑功能障碍,临床表现为记忆障碍,智力减退并伴有其他认知功能损害。AD的病因以及药物防治是一个非常复杂的疑难问题,目前使用的治疗方法是用药物干扰病情的进展。迄今为止用于AD症治疗的药物有很多,但都因副作用及毒性等原因不如人意。 BYZX为茚酮类化合物,它是在第二代AD治疗药物多奈哌齐的基础上通过结构修饰合成的新化合物,是用于治疗阿尔茨海默病的胆碱酯酶(AchE)抑制剂,能够增加大脑乙酰胆碱含量,可有效的治疗早、中期老年性痴呆。在研究过程中,了解BYZX的体外吸收、代谢情况,预测其可能存在的药物相互作用,对此化合物作为候选药物的开发前景预测,及其临床用药安全性具有重要意义。本文通过对BYZX的体外吸收、代谢及其药物相互作用研究,获得BYZX与P-糖蛋白相互作用关系,体外代谢途径和药物相互作用信息,从而为探讨其作为新药的研发前景、与其他药物合用时的安全性、合理性提供实验基础。 ***与P-糖蛋白相互作用研究目的:建立Bcap37及Bcap37/MDR1细胞内测定BYZX的RP-HPLC法,通过药物在两种细胞中的积聚试验,考察BYZX是否为P-糖蛋白的底物。另外以罗丹明123为底物,考察BYZX是否是P-糖蛋白的抑制剂。方法:将生长良好的Bcap37及Bcap37/MDR1细胞种于24孔板中,待细胞贴壁后,弃去上清液,加入含BYZX的完全培养基,孵育一定时间后,弃去上清液,用冰冷的PBS液洗去细胞外层药物,破碎细胞后加入内标溶液,用二氯甲烷提取挥干,流动相溶解后进样分析,用BCA蛋白测定试剂盒检测每孔总蛋白量。以每孔测得的BYZX量除以总蛋白量来表示其在细胞内的积聚量,比较BYZX在Bcap37及Bcap37/MDR1细胞内积聚的差异,从而确定BYZX是否是P-糖蛋白的底物。采用的色谱条件为DiamonsilC(迪马公司)(250mm×4.6mm i.d.,5μm)色谱柱,乙腈-10mmol·LKHPO(含TEA 0.8%,用磷酸调pH=4.0)(25:75,v/v)为流动相,检测波长为325nm,流速为1.0mL·min,柱温为25℃,进样量为20μL。在判断BYZX是否为P-糖蛋白抑制剂的实验中,加入含罗丹明123培养基后,继续加入不同浓度的BYZX,孵育一定时间后,弃去上清液,用冰冷的PBS液清洗后,破碎细胞,测定荧光强度。结果:BYZX在0.1μmol·L～20μmol·L范围内呈良好的线性关系,在高、中、低不同浓度下测得BYZX平均绝对回收率为86.07%～90.49%(n=5),平均相对回收率为91.83%～98.51%(n=5),平均方法回收率为97.10%～117.10%(n=5),日内精密度为1.16%～5.09%,日间精密度为2.38%～6.81%,定量限为0.1μmol·L(RSD＜5%,n:5),检测限为0.026μmol·L(S/N=3)。比较了BYZX在Bcap37及Bcap37/MDR1细胞内不同时间下的积聚量,结果无明显差异(P＞0.05)。罗丹明123在0.01～0.4μmol·L范围内成良好的线性关系,在高、中、低不同浓度下测得的罗丹明123的平均绝对回收率为98.60%,平均方法回收率为103.40%,日内精密度为2.47%～5.27%,日间精密度为5.63%～6.92%。实验结果显示不同浓度的BYZX对罗丹明123的外排没有明显的抑制作用(P＞0.05)。结论:实验结果显示BYZX与P-糖蛋白没有明显的相互作用,不会被P-糖蛋白外排到细胞外而影响其吸收。 ***在人体肝微粒体中的代谢研究目的:研究用于治疗阿尔茨海默病新化合物BYZX的体外代谢,并对代谢产物进行结构鉴定,确定代谢途径。方法:将BYZX与人肝微粒体进行体外共孵育,孵育一定时间后用冰冷的含内标的乙腈终止反应,沉淀蛋白后取上清液进样分析,测定孵育液中BYZX的剩余量及其代谢产物的量,并采用Finnigan LCQ Deca XP离子阱质谱进行代谢产物结构确定。HPLC的色谱条件为:以DiamonsilC为色谱柱(迪马公司)(250mm×4.6mm i.d.,5μm),乙腈-10mmol·LKHPO(含TEA 0.8%,用磷酸调pH=4.0)(28:72,v/v)为流动相,检测波长为325nm,流速为0.8mL·min,柱温为室温,进样量为20μL。结果:BYZX在5.07μmol·L～101.37μmol·L范围内呈良好的线性关系,日间及目内精密度均小于5%(n=5),检测限为0.73μmol·L(S/N=3),定量限为2.49μmol·L(RSD＜7%,n=5),在高、中、低不同浓度下测得BYZX平均绝对回收率为106.2%～116.4%(n=5),平均

关键词： BYZX 高效液相色谱法 LC-MS-MS 人肝微粒体 P-糖蛋白代谢性相互

人UGT1A6重组酶的表达与化合物葡醛酸结合研究

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人UGT1A6重组酶的表达与化合物葡醛酸结合研究

作者：郑水莲浙江大学

学位级别：硕士

尿苷二磷酸葡醛酸转移酶(uridine 5'diphosphate glucuronosyltransferases,UGTs)是一类Ⅱ相代谢酶,能催化葡醛酸与其底物结合。该过程是机体的重要排泄途径之一。过去,药物代谢评价常用组织微粒体进行研究,但组织微粒体中酶系复杂,且UG... 详细信息

尿苷二磷酸葡醛酸转移酶(uridine 5'diphosphate glucuronosyltransferases,UGTs)是一类Ⅱ相代谢酶,能催化葡醛酸与其底物结合。该过程是机体的重要排泄途径之一。过去,药物代谢评价常用组织微粒体进行研究,但组织微粒体中酶系复杂,且UGT酶系属于超基因家族酶,各同工酶的底物特异性存在着交叉重叠。由于缺乏各同工酶的特异性抑制剂,所以鉴定各UGT同工酶的底物比较复杂。目前,人们已开始广泛采用体外克隆并表达人体药物代谢酶来进行药物代谢研究,且大多数UGT同工酶已通过不同表达方式在体外获得表达。例如本实验室已在CHO、CHL、V79等哺乳动物细胞中成功表达人UGT1A3、1A9。近来,利用杆状病毒-昆虫表达系统表达外源基因的技术也得到广泛地应用,本课题通过该系统来表达人UGT1亚族成员之一UGT1A6酶,并用该重组酶对一些化合物进行葡醛酸结合研究。在明确基因构成的情况下获得由特定基因所表达的UGT同工酶可以保证酶的单一性,因此能针对性地进行其代谢功能研究,了解化合物Ⅱ相葡醛酸化情况,预测所研究的化合物可能带来的体内葡醛酸化程度及化合物之间的相互作用。 1 UGT1A6基因的克隆与重组病毒的构建采用RT-PCR技术从人肝组织中扩增出UGT1A6基因的cDNA,通过克隆载体pGEM-T扩增后,经HindⅢ/XhoⅠ双酶切得到带粘性末端的UGT1A6基因片段与表达载体pcDNA3.1(+)定向连接,亚克隆后经BSP TI/XhoⅠ双酶切处理,电

关键词：尿苷二磷酸葡醛酸转移酶葡醛酸结合反应基因表达 UGT1A6 草地夜蛾卵巢细胞杆状病毒 UGT1A6重组酶 4-硝基酚活性鉴定高效液相色谱

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鸡肝散提取物在大鼠体内的药代动力学研究

鸡肝散提取物在大鼠体内的药代动力学研究

作者：应景艳浙江大学

学位级别：硕士

鸡肝散(Elsholtzia blanda benth)又称四棱蒿、白香薷或四方蒿等,为唇形科香薷属多年生草本植物,产于云南西南部至东南部温热地区、贵州东南部、广西的西部及四川等地。资源十分丰富,其叶、花或全草均可入药。其药性味苦辛、凉,具有清... 详细信息

鸡肝散(Elsholtzia blanda benth)又称四棱蒿、白香薷或四方蒿等,为唇形科香薷属多年生草本植物,产于云南西南部至东南部温热地区、贵州东南部、广西的西部及四川等地。资源十分丰富,其叶、花或全草均可入药。其药性味苦辛、凉,具有清热解毒、止血镇痛等功效,哈尼族民间将其用于治疗眼疾病及呼吸道感染,其疗效甚佳。现今研究表明其具有治疗肾炎、肝炎、痢疾、急性胃肠炎、牙痛、创伤出血等症。除此之外还具有抗胸痹症等抗心血管疾病的功效。鸡肝散化学成分复杂多样,提取分离后,根据理化性质和光谱分析,确定这些化合物为木犀草素,木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷,木犀草素-5-O-β-D-葡萄糖苷,5-羟基-7,8-二甲氧基黄酮和5-羟基-6,7-二甲氧基黄酮等。鸡肝散提取物中黄酮类化合物的药理活性显著,已有较多文献报道,但是对于提取物中黄酮类化合物吸收、分布、代谢和排泄的研究,即药物ADME过程则未见报道。药物ADME揭示了机体对药物的处置规律,以及这些处置对药物疗效和毒性的影响,因此研究鸡肝散的体内药代动力学具有重要的临床意义。目的建立RP-HPLC法测定大鼠生物样品中鸡肝散药效成分——木犀草素的含量,定量测定木犀草素在大鼠体内的药-时曲线,组织分布以及排泄率,同时定性检测大鼠血浆、尿、胆汁及粪便中的代谢物的情况,研究鸡肝散提取物在SD大鼠中的药代动力学行为,了解其ADME的情况。方法1)吸收:①取24只雄性SD大鼠,每个时间点4只,采用HPLC法测定给药后0.17、0.5、1、2、4、6 h时,SD大鼠血浆、胃肠道组织中游离木犀草素和总的木犀草素的含量,以获得胃肠道对于木犀草素苷及苷元的吸收情况。②取12只SD大鼠,雌雄各半,灌胃给予鸡肝散提取物后,于0.17、0.33、0.5、0.67、0.83、1、2、3、4、5、6、7、8 h由尾静脉取血,血浆样品经酸水解、三氯乙酸沉淀蛋白、乙酸乙酯提取处理后,用RP-HPLC法测定血药浓度,获得药-时曲线及药动学参数。2)分布:取24只雄性SD大鼠,每个时间点4只,测定给药后0.17、0.5、1、2、4、6 h时,SD大鼠各组织中水解后木犀草素的含量,确定这些组织中的分布情况。3)代谢:取6只雄性SD大鼠,给药后,其中3只大鼠收集4～6 h尿样及0～24 h粪样,另外3只收集2～4 h胆汁样品,运用UPLC-MS、UPLC-MS/MS和UPLC-PDA这三种手段,确定鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷在大鼠体内的代谢产物,分析其代谢途径。4)排泄:取10只雄性SD大鼠,给药后,于不同时间段采集尿样、粪便及胆汁,经处理后,以木犀草素为目标物,分别测定其在不同时间段尿样、粪便及胆汁中的浓度,确定木犀草素在大鼠体内的排泄率及排泄途径。结果1)吸收:①鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷在肠道中迅速水解成木犀草素而被吸收,在胃肠道组织中主要以苷元木犀草素形式存在。②木犀草素在SD大鼠体内的药动学行为符合开放二室模型,木犀草素在给药后1h处达到峰值。经大鼠性别和测定时间两因素方差分析,提示不同性别大鼠的血药浓度间的差别具有统计学意义。2)分布:木犀草素经吸收后快速分布至各组织,其中代谢比较旺盛的肝、肾组织中木犀草素的含量较心、肺组织中高;肾、心、肺这三个组织中的木犀草素含量均为1 h时达最大,这与血药浓度达峰时间相似;而在肝组织中,药物分布迅速,0.17 h已达高峰;在其它组织中因检测灵敏度问题而未被检出。3)代谢:大鼠尿液中所检测到的代谢物主要为木犀草素单葡醛酸结合物、甲基化的木犀草素单葡醛酸结合物、甲基化的木犀草素硫酸结合物、木犀草素硫酸结合物、甲基化的木犀草素以及木犀草素。在胆汁中,代谢物则主要为木犀草素硫酸结合物、甲基化的木犀草素单葡醛酸结合物以及木犀草素的葡醛酸硫酸结合物。在粪便中,则只检测到了木犀草素。上述代谢物均为木犀草素苷元的二相代谢物,在所有组织,血液中均未检测到原形药物木犀草素苷。由此,判断鸡肝散提取物中主要成分木犀草素苷主要是经胃肠道水解以后,以苷元木犀草素形式吸收入大鼠体内,二相代谢是木犀草素在大鼠体内的主要代谢途径。4)排泄:木犀草素以二相结合物的形式由肾经尿排出体外,而胆汁中的二相结合物排入肠道后,在肠道菌群的水解作用下,形成木犀草素,最后通过粪便排出体外。总累积排泄率为37.6%,其中尿中为11.1%,粪便中为26.5%。结论建立的生物样本中木犀草素含量测定方法具有灵敏、准确、专属性强等特点,可用于鸡肝散药效成分木犀草素的体内药动学研究。药动学研究表明鸡肝散提取物中主要成份木犀草素苷在肠道内先水解成木犀草素,随后迅速吸收、分布至主要组织,二相结合反应是其主要代谢途径,

关键词：反相高效液相色谱质谱法鸡肝散提取物(EEB) 木犀草素药动学

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三七、淫羊藿提取物和片剂的质量研究

三七、淫羊藿提取物和片剂的质量研究

作者：王翰华浙江大学

学位级别：硕士

中药作为中华民族科学、文化和历史的伟大宝库,是我国在自然科学领域最具有优势、最有特色、最有希望的学科之一。三七、淫羊藿是我国传统中药,通过现代药理实验研究表明,淫羊藿和三七配伍使用,对防治阿尔茨海默病(AD)有积极意义。本次... 详细信息

中药作为中华民族科学、文化和历史的伟大宝库,是我国在自然科学领域最具有优势、最有特色、最有希望的学科之一。三七、淫羊藿是我国传统中药,通过现代药理实验研究表明,淫羊藿和三七配伍使用,对防治阿尔茨海默病(AD)有积极意义。本次研究的片剂在此指导下研制,为了配合药物的研究开发,本文按照中药新五类的申报要求,对三七、淫羊藿提取物和片剂的质量进行了研究。一、三七、淫羊藿提取物的质量研究目的对三七、淫羊藿提取物的质量进行全面研究。方法1)选用AgilentExtend-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm),乙腈-水为流动相,梯度洗脱,检测波长203nm,进样量10μL,流速:1.0mL·min,测定三七提取物中三七皂苷R、人参皂苷Rg、人参皂苷Re和人参皂苷Rb含量;采用香兰素比色法,人参皂苷Re为对照,550nm波长,测定三七提取物中总皂苷含量:参考《中国药典》有关规定,对三七提取物的水分、炽灼残渣、重金属、砷盐进行了检查;选用硅胶G薄层板,三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(32:1:16:4)为展开剂,点样1μL,对三七提取物进行了鉴别;采用标准溶液加入法,Agilent HP-INNOWAX(30m×0.32mm,0.25μm)毛细管色谱柱,FID检测器,测定了三七提取物中7种有机溶剂残留量;用确定的含量测定方法,考察三七提取物的影响因素。2)选用Agilent SB-C18色谱柱(250×4.6mm,5μm),乙腈-水(26:74)为流动相,检测波长270nm,进样量10μL,流速:1.0mL·min,测定淫羊藿提取物中淫羊藿苷含量;采用紫外法,淫羊藿苷为对照,270nm波长,测定淫羊藿提取物中总黄酮含量;参考《中国药典》有关规定,对淫羊藿提取物的水分、炽灼残渣、重金属、砷盐进行了检查;选用硅胶H薄层板,乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)为展开剂,点样10μL,对淫羊藿提取物进行了鉴别;用确定的含量测定方法,考察淫羊藿提取物的影响因素。结果1)4种皂苷含量测定中,在考察的浓度范围内呈现良好的线性关系(三七皂苷R r=0.9997,人参皂苷Rgr=0.9999,人参皂苷Re r=0.9997和人参皂苷Rb r=0.9999),不同浓度的回收率95.29%～104.5%,日内精密度RSD均＜4.4%,日间精密度RSD均＜6.8%。总皂苷含量测定中,对照品质量范围为0.0678～0.21696mg时,吸光度和质量呈现良好的线性关系,线性方程为Y=4.1135X-0.0127,相关系数r=0.9993,不同浓度的回收率96.88%～101.8%,日内、日间精密度RSD均＜5.0%。三批三七提取物的水分含量为3.236%,4.501%,3.266%,炽灼残渣所得残渣为0.2262%,0.2696%,0.2409%,重金属均＜10ppm,砷盐均＜3.3ppm。薄层鉴别中,提取物中几种皂苷得到了很好的分离。残留溶剂测定中,在考察的浓度范围内呈现良好的线性关系(乙醇r=0.9994,正己烷r=0.9982,苯r=0.9999,甲苯r=0.9991,二甲苯r=0.9994,苯乙烯r=0.9997和二乙烯苯r=0.9932),回收率81.74%～111.2%,日内、日间精密度RSD均小于10.0%。三七提取物经高温试验(40℃和60℃)、高湿度试验(RH75±5%和RH90±5%)和强光照射试验(4500±5001x)下放置10天,发现高温对提取物的外观、含量影响不大,但在高湿度下提取物吸湿性较明显,在强光下提取物含量有所下降,提示提取物需避光、干燥保存。2)淫羊藿苷含量测定中,在0.0208～0.208mg·mL浓度范围内峰面积和浓度呈现良好的线性关系,线性方程为Y=12085X-24.245,相关系数r=0.9998,不同浓度的回收率96.22%～101.0%,日内、日间精密度RSD均＜2.0%。总黄酮含量测定中,在0.00208～0.0208mg·mL浓度范围内吸光度和浓度呈现良好的线性关系,线性方程为Y=34.876X+0.0083,相关系数r=0.9996,不同浓度的回收率95.81%～97.70%,日内、日间精密度RSD均＜2.0%。三批淫羊藿提取物的水分含量为4.438%,4.428%,4.423%,炽灼残渣所得残渣为1.266%,1.330%,1.282%,重金属均＜10ppm,砷盐均＜2ppm。薄层鉴别中,提取物中几种黄酮得到了很好分离。淫羊藿提取物经高温试验(60℃)、高湿度试验(RH75±5%和RH90±5%)和强光照射试验(4500±5001x)下放置10天,发现高温和强光对提取物的外观、含量影响不大,在高湿度下,提取物性状发生改变,提示提取物需密闭、干燥保存。结论建立的各种方法可用于考察三七、淫羊藿提取物的

关键词：三七淫羊藿提取物片剂质量研究

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银杏黄酮的体外Ⅱ相代谢及其药物相互作用

银杏黄酮的体外Ⅱ相代谢及其药物相互作用

作者：诸敏浙江大学

学位级别：硕士

银杏黄酮是一种广泛存在于自然界的植物和日常饮食中的黄酮类化合物，它具有多种生理活性，是极好的天然抗氧剂，能清除生物体内过剩的自由基，阻止体内脂质过氧化，改善神经调节作用，提高机体的免疫力，抑制细胞凋亡，抗肿瘤、抗衰老... 详细信息

银杏黄酮是一种广泛存在于自然界的植物和日常饮食中的黄酮类化合物，它具有多种生理活性，是极好的天然抗氧剂，能清除生物体内过剩的自由基，阻止体内脂质过氧化，改善神经调节作用，提高机体的免疫力，抑制细胞凋亡，抗肿瘤、抗衰老等，在临床上是治疗和预防心脑血管疾病的首选天然药物，一般需要患者长期服药，而在此期间又可能因其他疾病或疗效原因，需要同时服用多种药物，这就大大提高了药物相互作用的可能性。而药物代谢的主要场所是肝脏，肝脏进行生物转化则依赖于微粒体中的多种酶系，其中最重要的是细胞色素P450混合功能氧化酶系统。CYP3A4亚族是参与药物代谢最多的一族酶系，约占全部药物酶的50％，而银杏黄酮苷元槲皮素和山萘酚可抑制CYP3A、1A等酶，因此，极有可能与合用药物发生代谢性相互作用。如能获得银杏黄酮在体内的代谢情况及其与常用药物的相互作用的信息，这将对临床合理用药和预防不良反应的发生起重要的指导意义。银杏黄酮与葡萄糖醛酸的结合反应是人体内的重要代谢途径之一，本文选择葡萄糖醛酸结合反应作为体外代谢研究的方法，采用鼠肝细胞微粒体为载体，建立了银杏黄酮体外孵育液中代谢和含量测定的方法，研究了银杏黄酮在鼠肝微粒体中的二相代谢，考察了银杏黄酮与一些常用药物体外相互作用，根据测得的代谢率变化程度、IC50、Ki值等参数，预测药物代谢性相互作用发生的风险程度。浙江大学硕士学位论文药学院药物分析专业诸敏一、微粒体中银杏黄酮含量测定方法的建立及其二相代谢反应目的:建立微粒体中银杏黄酮的含量测定方法，获得银杏黄酮体外葡醛酸反应的酶动力学参数。方法:以p一蔡黄酮诱导的鼠肝微粒体为酶原，未经任何处理的鼠肝微粒体为对照酶原;按银杏叶片剂的含量测定项下方法进行水解，所得水解溶液作为银杏黄酮的来源。取微粒体适量，加银杏黄酮的水解液适量，加 pH7.5磷酸盐缓冲液稀释，使微粒体蛋白质浓度为0.5叭，银杏黄酮的终浓度为 0.2一sm留L。加UDPGA溶液20闪(终浓度为1留L)启动反应。在25℃下预孵育一定时间后，加6%HC10;***终止反应，加入适量桑色素甲醇溶液作为内标，用乙醚2.8ml和丙酮0.2ml的混合溶液提取，HPLC法测定剩余底物浓度。结果: 孵育液中银杏黄酮普元懈皮素、三蔡酚、异鼠李素三组分在0.2m留L范围内线性良好，定量限为***留L(RsD

关键词：银杏黄酮,槲皮素,山萘酚,异鼠李素,微粒体,硝苯地平,普罗帕酮,地非三唑,依普黄酮,西米替丁,相互作用

鸡肝散提取物在体内外的吸收代谢及其制剂的质量控制方法研究

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鸡肝散提取物在体内外的吸收代谢及其制剂的质量控制方法研究

作者：麻佳蕾浙江大学

学位级别：硕士

鸡肝散Elsholtzia blanda(Benth.)Benth。又名四方蒿、滇香薷、四棱蒿等。主要产于我国西南部温暖地区,分布于云南省南部和东南部,贵州和广西等地也有分布,资源丰富。鸡肝散为哈尼族民族药,其叶、花或全草均可入药,用于治疗感冒、痢疾... 详细信息

鸡肝散Elsholtzia blanda(Benth.)Benth。又名四方蒿、滇香薷、四棱蒿等。主要产于我国西南部温暖地区,分布于云南省南部和东南部,贵州和广西等地也有分布,资源丰富。鸡肝散为哈尼族民族药,其叶、花或全草均可入药,用于治疗感冒、痢疾、肝炎等病症。鸡肝散提取物中的主要成分为黄酮类化合物,经实验研究鸡肝散总黄酮对实验性心肌缺血具有良好的保护作用,除了对胸痹症有明显的改善作用之外,还显示良好的抗缺血性心律失常的作用。鸡肝散提取物中黄酮类化合物的药理活性显著,已有较多文献报道,但是对于提取物中黄酮类化合物吸收、分布、代谢和排泄的药物动力学研究,即药物ADME过程则未见报道。因此获得鸡肝散提取物体内外吸收、代谢动力学等性质,将有助于阐明其体内的作用机制,指导剂型改革和制剂的质量控制。作为中药制剂,鸡肝散制剂是一个多组分的复杂体系,质量控制的方法较单一化学药而言难度大,且没有有效的质量标准。如果忽略化学成分群的整体性,只考察1～2种主要成分来表征中药质量,则违背了中医药学的整体理念和思维体系,并且很多植物药的活性成分也并不一定是含量较高的成分,仅仅测定某一主成分并不能真正达到对中药质量进行控制的目的。根据本实验室先前的研究,鸡肝散提取物在小肠上皮细胞模型Caco-2细胞中的吸收转运实验表明,提取物中主要成分黄酮苷以被动扩散和主动转运方式透过Caco-2细胞单层,呈

关键词：鸡肝散木犀草素吸收胃肠道质量控制