检索结果-南通市图书馆

作者：王志刚泸州医学院

学位级别：硕士

目的：本实验研究在前期实验的基础上,通过在不同浓度蔗糖下对不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株不同基因型菌株的粘附能力进行实验研究,分析不同浓度蔗糖对不同基因型菌株在粘附能力上是否存在影响,探讨其在致龋过程中发挥的作... 详细信息

目的：本实验研究在前期实验的基础上,通过在不同浓度蔗糖下对不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株不同基因型菌株的粘附能力进行实验研究,分析不同浓度蔗糖对不同基因型菌株在粘附能力上是否存在影响,探讨其在致龋过程中发挥的作用以及通过检测儿童口腔中变异链球菌的基因型来预测儿童龋敏感性的可能性。进一步,为完善龋危险性预测方法提供有力的理论和实验依据。方法：在前期实验获得的具有不同基因核型的高龋,龋失补指数(decayed,missing,filled teeth index,dmft)≥6;中龋,6＞dmft≥4;无龋,dmft=0;从共111株变异链球菌中选取45株(包括23种基因型)作为实验菌株,分别接种于牛心脑浸液(Brain Heart Infusion,BHI)平板中,37℃厌氧(80％N2、10％H2、10％CO2)培养复苏48h,取典型菌落转种于BHI液体培养基之中,370C厌氧(80％N2、10％H2、10％CO2)培养,增菌18h,涂片检查以及生化鉴定为纯培养后,分别接种100μl于3ml含不同浓度蔗糖(0、0.5%、1%、4%(w/v))的BHI液体培养基,37℃厌氧培养18h后,最后,用紫外分光光度计对实验样本进行吸光度的测定。结果：在无蔗糖存在的情况下,不同龋敏感儿童口腔中变异链球菌临床分离株粘附比存在差异,高龋组＞中龋组＞无龋组,且差异具有统计学意义(p＜0.05)。在同一龋敏感儿童口腔中不同基因型变异链球菌临床分离株粘附比也存在差异,基因型越多,粘附比越大,统计分析差异具有显著性(p＜0.05)。在不同蔗糖浓度下,不同龋敏感儿童口腔中变异链球菌临床分离株粘附比存在差异,4%组＞1%组＞0.5%组,即粘附比随蔗糖浓度升高而增高,差异具有统计学意义(p＜0.05)。同一蔗糖浓度下,不同龋敏感儿童口腔中不同基因型变异链球菌临床分离株粘附比也是存在差异的,基因型越多,粘附比越大,统计分析差异具有显著性(p＜0.05)。结论：不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株粘附能力存在差异,龋敏感性越高,基因型越多,粘附能力越强。蔗糖对不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离菌株粘附能力具有明显的影响作用,蔗糖浓度越高,粘附能力越强。同一蔗糖浓度下,龋敏感性越高,基因型越多的菌株,粘附能力越强,且明显大于无蔗糖组。

关键词：龋齿蔗糖变异链球菌基因型粘附能力

不同药物用于年轻恒牙活髓切断临床疗效的系统评价

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不同药物用于年轻恒牙活髓切断临床疗效的系统评价

作者：李菲菲西南医科大学

学位级别：硕士

目的:年轻恒牙的牙根发育依赖于根管中有活力的正常牙髓,所以为避免由于创伤性或医源性导致意外露髓的年轻恒牙牙根停止发育,应尽可能的保存活髓。而活髓切断术则是临床常用保存活髓的方法之一。本研究系统回顾不同药物用于年轻恒牙活... 详细信息

目的:年轻恒牙的牙根发育依赖于根管中有活力的正常牙髓,所以为避免由于创伤性或医源性导致意外露髓的年轻恒牙牙根停止发育,应尽可能的保存活髓。而活髓切断术则是临床常用保存活髓的方法之一。本研究系统回顾不同药物用于年轻恒牙活髓切断的临床随机对照试验,用Meta分析的方法比较不同药物用于年轻恒牙活髓切断的临床疗效,以期指导临床。方法:计算机与手工相结合进行检索,外文数据库有:Pubmed,Cochrane图书馆,EMBASE数据库,EBSCO英文科技期刊数据库,中文数据库有:知网(CNKI),中国生物医学文献数据库(CBM),维普期刊数据库(VIP)和万方数据库,搜集关于年轻恒牙活髓切断临床疗效观察的文献,仅限中文和英文,检索时间均为各数据库建库至2017年3月,并对纳入文献进行筛选。本次研究纳入的文献均为临床随机对照试验研究,同期比较两种或多种药物药物用于年轻恒牙活髓切断的临床疗效。用RevMan5.3软件对纳入的文献进行Meta分析。结果:1、初步检出关于年轻恒牙活髓切断的临床试验文献1407篇,其中Pubmed数据库114篇,Cochrane图书馆257篇,EMBASE数据库202篇,EBSCO英文科技期刊数据库225篇,CNKI数据库183篇,CBM数据库138篇,VIP数据库134篇和万方数据库154篇,经过阅读标题、摘要及全文等一系列筛选流程,最终纳入20篇文献。2、按干预措施中使用药物不同分为4组进行分析,第一组试验组为MTA,对照组为粉剂型氢氧化钙,即单组分的氢氧化钙,第二组试验组为MTA,对照组为Dycal糊剂,第三组试验为Vitapex糊剂,对照组为单组分的氢氧化钙,第四组试验为MTA,对照组为瑞邦齿泰。3、Meta分析结果:第一组MTA与单组分的氢氧化钙用于年轻恒牙活髓切断的临床疗效比较,MTA的临床疗效明显较单组分的氢氧化钙的好,并且具有显著性差异OR=3.00,95%CI(1.57,5.70),合并效应量的检验Z=3.34,P=0.0008;第二组中MTA的临床疗效明显较Dycal糊剂的要好,并且具有显著性差异OR=3.30,95%CI(1.95,5.57),合并效应量的检验Z=4.46,P<0.00001;第三组中Vitapex糊剂的临床疗效明显较单组分的氢氧化钙的要好,并且具有显著性差异OR=3.63,95%CI(2.16,6.10),合并效应量的检验Z=4.85,P<0.00001;前三组都采用随机效应模型对各组研究进行敏感性分析,结果均与固定效应模型结果相同。第四组MTA与瑞邦齿泰用于年轻恒牙活髓切断的临床疗效比较,因纳入文献较少,故无足够临床证据证明孰优孰劣。结论:1、年轻恒牙活髓切断的RCT研究质量普遍不高,并且各研究纳入标准等不能完全统一化以及临床疗效评价指标较单一,使得各研究结论的可信度不佳。因此在未来的临床研究中需要制定统一的纳入排除标准以及更加详细的临床疗效评价指标,并增加有关年轻恒牙活髓切断的多中心、高质量的临床RCT。2、本次研究Meta分析结果显示:(1)在年轻恒牙活髓切断治疗中MTA的成功率显著高于粉剂型氢氧化钙和Dycal糊剂;(2)在年轻恒牙活髓切断治疗中Vitapex糊剂的成功率显著高于粉剂型氢氧化钙;(3)尚无足够临床证据证明MTA与瑞邦齿泰用于年轻恒牙活髓切断的疗效孰优孰劣,仍需高质量的临床RCT进一步研究。

关键词：年轻恒牙活髓切断 Meta分析

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下颌第一前磨牙根管构型的应用研究

下颌第一前磨牙根管构型的应用研究

作者：喻洁四川医科大学

学位级别：硕士

目的:1.本研究通过循证医学方法,对所有下颌第一前磨牙根管构型的研究进行系统评价,了解世界范围内根管发生的概况,合并不同研究间的根管构型的发生率,分析不同人种对根管变异的影响。2.应用锥形束CT(Cone beam CT)探讨泸州地区下颌第... 详细信息

目的:1.本研究通过循证医学方法,对所有下颌第一前磨牙根管构型的研究进行系统评价,了解世界范围内根管发生的概况,合并不同研究间的根管构型的发生率,分析不同人种对根管变异的影响。2.应用锥形束CT(Cone beam CT)探讨泸州地区下颌第一前磨牙根管形态,根管对称性以及性别对根管变异的影响,为本地区的口腔临床工作做出指导和为今后更完善的系统评价提供基础数据。方法:本研究包括两个部分。第一部分:1.制定检索式,计算机检索Medline(1950-2014)、EMBASE(1950-2014)等外文数据库以及中国生物医学文献数据库(CBM)、中国期刊全文数据库(CNKI)等中文数据库并手工检索相关会议论文和未发表的灰色文献等,初步获得与研究相关的文献。2.严格按照纳入排除标准筛选文献,由两名经过专业培训的研究者对文献按照澳大利亚乔安娜循证护理中心(Joanna briggs institute,JBI)的偏倚风险评价标准进行质量评价,未按文献质量高低剔除文献。3.采用Revman5.3软件在随机效应模型下对各型根管发生率进行Meta分析,并按照人种分类进行亚组分析。第二部分:选取2012年6月至2013年12月来我院就诊并拍摄CBCT的436例患者总共872颗下颌第一前磨牙的扫描信息,记录性别,分析其根管数目、对称性以及根管构型比例在性别间的差异。结果:第一部分:1.本研究中共纳入文献23篇,来自8个不同的国家,样本共7475例。2.Ⅰ型根管的合并发生率是73%(95%CI68%,78%),Ⅱ 型根管的合并发生率是 3.85%(95%CI2.91%,6.54%),Ⅲ型根管的合并发生率是2.91%(95%CI1.96%,3.85%),Ⅳ型根管的合并发生率是2.91%(95%CI1.96%,5.66%),V型根管的合并发生率是12.3%(95%CI9.09%,15.25%),Ⅵ型根管的合并发生率是 0.99%(95%CI0,1.96%),Ⅶ型根管的合并发生率是0.99%(95%CI 0,1.96%),Ⅷ型根管的合并发生率是0.99%(95%CI 0,1.96%),以上各组的亚组分析均无统计学差异(p>0.1)。Ⅸ型根管的合并发生率是 5.66%(95%CI0.99%,32.0%),other 组合并发生率是1.96%(95%CI0.99%,2.91%),亚组间分析有统计学差异(p0.05)。结论:1.已有的研究结果显示下颌第一前磨牙根管变异度高,但尚不能说明人种间根管构型发生率有显著性差异。2.研究中应尽可能全面收集证据。3.观察性研究系统评价应进一步完善。4.泸州地区下颌第一前磨牙根管系统复杂,CBCT分析的泸州地区下颌第一前磨牙根管系统数据,为根管治疗提供了理论依据。

关键词：下颌第一前磨牙牙髓腔循证医学系统评价锥形束CT

不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株葡糖基转移酶活性的实验研究

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不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株葡糖基转移酶活性的...

作者：施俊泸州医学院

学位级别：硕士

目的：乳牙龋是儿童口腔中的常见病和多发病,而龋病的发生主要与变异链球菌有关。变异链球菌产生的葡糖基转移酶能利用蔗糖产生葡聚糖,在口腔细菌粘附和牙菌斑形成过程中起着非常重要的作用,被认为是致龋菌最主要的致龋因子之一。本课... 详细信息

目的：乳牙龋是儿童口腔中的常见病和多发病,而龋病的发生主要与变异链球菌有关。变异链球菌产生的葡糖基转移酶能利用蔗糖产生葡聚糖,在口腔细菌粘附和牙菌斑形成过程中起着非常重要的作用,被认为是致龋菌最主要的致龋因子之一。本课题在前期实验的基础上,从葡糖基转移酶活性方面,探讨不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离株不同基因型菌株在不同pH条件下的葡糖基转移酶活性的差异,分析其毒力因子在致龋过程中所起的作用,从而为完善乳牙龋危险性预测方法及乳牙龋的预防提供有力的理论和实验依据。方法：以前期实验获得的具有不同基因核型的高龋,龋失补指数(decayed,missing, filled teeth index, dmft)≥6、中龋,6>dmft≥4,无龋,dmft=0共111株变异链球菌中选取66株(包括23种基因型)为实验菌株,于牛心脑浸液(Brain Heart Infusion, BHI)平板复苏,取典型菌落接种于胰蛋白酶水解物-酵母-L-半胱氨酸(Trypticase yeast L-cystine, TYC)培养基增菌24h,涂片检查为纯培养并生化鉴定后,配制相同浓度的(A540nm=1.0)各变异链球菌临床分离株菌悬液,按菌液与TYC液体培养基1：10(v/v)的比例接种细菌,加入不同pH值(以0.5为间隔,pH5.0-7.0)的含0.25%葡萄糖和0.05% Tween 80的TYC培养基中,37℃厌氧(80%N2,10%H2,10%C02)培养18h,将细菌培养物离心(3300 r/min)20min。在上清液中加入固体硫酸铵达60%饱和度,4℃冰箱放置过夜,离心(10000r/min)30min收集沉淀。将沉淀物溶于含0.01%NaNO3的0.01mol/L磷酸盐缓冲液(pH 6.4),置入透析袋(分子量100000)中,于相同磷酸盐缓冲液透析48h,此即为粗酶制剂。粗酶制剂2.0ml加0.1ml 0.5mol/L磷酸盐缓冲液,0.1ml 0.5mol/L蔗糖缓冲液,0.4ml重蒸水37℃孵育1h,加0.24mol/L HCL终止反应。再加2.5ml重蒸水混匀,离心(2000 r/min)5min,以葡萄糖为标准,上清液中的还原糖用Neson-Somogyi法测定。以空白组调零,于波长620nm处读取吸光度值A。酶的活力单位定为标准条件下(37℃反应1h),每分钟从蔗糖释放1μmol/L还原糖所需的酶。结果：在pH中性条件下,高龋、中龋和无龋儿童口腔变异链球菌同一基因型菌株葡糖基转移酶活性存在差异：高龋组>中龋组>无龋组,且差异具有统计学意义(P0.05)。在pH5.0-7.0下,不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型菌株葡糖基转移酶活性也存在差异：基因型越多的菌株葡糖基转移酶活性越高,但随着pH值的降低,酶活性逐渐越低;当pH5.5时,酶活性普遍降低,但源于高龋儿童携带基因型数目越多的菌株葡糖基转移酶仍具有较高活性。结论：中性条件下,不同龋敏感儿童口腔变异链球菌不同基因型临床分离菌株葡糖基转移酶活性是存在差异的,龋敏感性越高,葡糖基转移酶活性越高,即葡糖基转移酶的活性与变异链球菌的致龋力密切相关。不同龋敏感儿童口腔变异链球菌临床分离菌株葡糖基转移酶活性与培养条件有关,pH值越低,葡糖基转移酶活性越低。在不同pH条件下,携带基因型越多的菌株葡糖基转移酶活性越高,高龋儿童龋病的发生与变异链球菌的基因型有一定的相关性。

关键词：龋齿乳牙变异链球菌基因型不同pH值葡糖基转移酶

HtrA对乳牙变异链球菌高毒力株gbpC表达的影响

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HtrA对乳牙变异链球菌高毒力株gbpC表达的影响

作者：王望西南医科大学

学位级别：硕士

目的:在体外非应激条件下,通过研究乳牙变异链球菌(streptococcus mutans,***)高温需要A蛋白(high temperature requirement serine proteinase A,HtrA)基因缺陷株和HtrA高毒力株的葡聚糖结合蛋白C(glucan-binding protein C,gbpC)表达能力的差异,探讨HtrA基因对gbpC表达的影响,获得有关HtrA对乳牙变异链球菌致龋性影响机制的实验证据。方法:实验对象为前期课题组筛选的HtrA高毒力株和构建的高致龋性HtrA基因缺陷株。1、将上述两组***菌株进行细菌复苏,配置MS固体培养基,平板划线后放入厌氧培养箱,37℃培养48h。挑选单克隆菌落接种于脑心浸液肉汤(Brain Heart Infusion Broth,BHI)培养基增菌,至指数期第12h,进行细菌革兰染色及生化鉴定;2、将上述两菌株进行增菌,采用酶标仪比浊法分别测量两菌株在非应激环境下培养至1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h、9h、10h、11h、12h、13h、14h、15h、16h的OD值并根据测量结果绘制细菌生长曲线;3、分别选取相同浓度、相同体积上述两菌株指数期菌液,使用RNA提取试剂盒裂解细菌菌体并收集其RNA,分别测量两组细菌RNA浓度并根据试剂盒说明将RNA逆转录为c DNA,以实时荧光定量核酸扩增检测系统(Real-time Quantitative PCR Detecting System,RT-q PCR)法检测两菌株gbpC基因的表达情况。计算扩增效率及基因的相对表达量,观察两菌株gbpC基因表达情况。4、分别将相同浓度、相同体积上述两菌株指数期菌液高速离心收集菌体,超声破碎后使用N-乙酰胞壁质酶(N-acetylmuramidase)溶解菌体并提取细菌胞壁蛋白,以蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测gbpC蛋白表达量,观察两组***菌株gbpC蛋白表达情况。结果:1、上述两组***菌株生长形成的菌落形态、细菌生化鉴定及革兰氏染色镜检,菌落形态均呈现深蓝色嵌顿、质地稍硬,表面粗糙,边缘不齐;生化鉴定结果显示空白对照组不发酵生化试剂,试剂均不变色;而两组实验菌株均可分解甘露醇、山梨醇、密二糖、棉子糖,使指示剂变为黄色;水解七叶苷,使指示剂产生黑色沉淀。但其不水解精氨酸;革兰染色镜检显示细菌菌体呈椭圆形,成对、成链状或短链状排列,革兰氏染色为紫色阳性,两组***菌株生物学性状均与UA159标准株相同,变异链球菌HtrA基因对其生物学性状、遗传特性影响较小。2、上述两组***菌株在体外非应激环境下,第0-4h处于生长适应期,第4-8h处于对数期;第8-12h,细菌增殖速度开始变缓;至第12h进入稳定期。两组***菌株的生长曲线趋势基本一致。但在4h后细菌增殖的各个阶段,HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的细菌浓度(以OD值计算),两组间的差异有统计学意义(p<0.05);3、RT-q PCR结果表明,HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC基因扩增效率。以β-actin为内参基因计算基因相对表达量,结果为:HtrA高毒力株1.782±0.011;HtrA基因缺陷株1.203±0.008,其差异具有统计学意义(p<0.05)。这说明HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC基因相对表达量。4、Western Blot结果表明,HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC蛋白灰度值。以β-actin为内参基因计算蛋白相对表达量,结果为:HtrA高毒力株0.494±0.023;HtrA基因缺陷株0.303±0.014,其差异具有统计学意义(p<0.05)。这说明HtrA高毒力株相对HtrA基因缺陷株具有更高的gbpC蛋白相对表达量。结论:乳牙变异链球菌gbpC的表达会受到HtrA的影响。HtrA基因可能是乳牙变异链球菌高致龋性的重要因素之一。本实验为HtrA基因影响乳牙变异链球菌的毒力和致龋性提供了一定的理论基础,可以成为未来龋病防治的新方向。

关键词：变异链球菌生长曲线高温需要蛋白酶A 葡聚糖结合蛋白C

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氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖的影响

氢氧化钙对人根尖牙乳头干细胞增殖的影响

作者：谢茹西南医科大学

学位级别：硕士

目的:人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)是牙根发育及再生过程中的重要种子细胞。本研究运用酶消化法结合组织块贴壁法从人年轻恒牙根尖部的牙乳头组织将其进行分离培养,并对其进行干细胞特性鉴定,进而检测不同... 详细信息

目的:人根尖牙乳头干细胞(stem cells from apical papilla,SCAP)是牙根发育及再生过程中的重要种子细胞。本研究运用酶消化法结合组织块贴壁法从人年轻恒牙根尖部的牙乳头组织将其进行分离培养,并对其进行干细胞特性鉴定,进而检测不同浓度氢氧化钙(calcium hydroxide,CH)对其增殖的影响,为临床上应用CH提供实验依据。方法:收集正畸治疗需要拔除的完整健康的前磨牙及阻生的第三磨牙,钝性分离根尖部牙乳头组织,运用酶消化法结合组织块贴壁法从人年轻恒牙根尖部的牙乳头组织里培养出人原代SCAP,并用有限稀释单克隆获得纯化的SCAP,龙胆紫染色检测细胞克隆形成情况,MTT法检测细胞在第1、3、5、7、9d的OD值并将结果绘制成生长曲线;运用流式细胞术检测SCAP表面特异性标志物STRO-1、CD146、CD90、CD45的表达以判断其是否为间充质干细胞;运用矿化诱导液及成脂诱导液分别在体外培养SCAP,矿化培养2w和4w后分别行ALP染色和茜素红染色,成脂培养3个循环后行油红-O染色,以证实其多向分化潜能。取冻存的第4代SCAP,复苏传代计数后接种于96孔板,饥饿24h后更换为含0.1%、0.5%、1%、5%、10%、15%CH浸提原液的α-MEM完全培养基培养,每组设6个复孔,重复3次。在第1、3、5、7、9d分别停止对SCAP的培养,用MTT法检测其OD值。结果:1、运用酶消化法结合组织块贴壁法培养从人年轻恒牙根尖部分离下来的牙乳头组织,3d后在倒置显微镜下能够见到贴壁的组织块周围有短梭形样细胞长出,体积较小,形态比较均一,并且环绕组织块表现为放射样生长;对原代SCAP进行有限稀释法单克隆纯化,收集传代后的细胞形态特征基本一致,较小,呈短梭形,胞体比较饱满,生长能力强,表现为成纤维样细胞的形态特点;SCAP克隆形成实验有明显的细胞集落形成,克隆形成率为20.96%;将MTT法所得结果绘图后得到呈“S”形的SCAP生长曲线图;流式细胞仪分析检测得到所分离培养出的SCAP表达STRO-1、CD146和CD90,比率分别是15.69%、54.06%、99.93%,不表达CD45;SCAP在矿化诱导液体外诱导2w后,ALP染色见胞浆呈蓝紫色,诱导4w时,茜素红染色见红色矿化结节形成;成脂诱导液体外诱导3个循环,油红-O染色见红色脂滴;各组细胞在第1,3d测得的OD值均无明显差异(P>0.05);到第5d时,浓度低于5%的实验组测得的OD值略有下降,对SCAP的增殖有轻微的抑制作用,与对照组比较,差异没有显著性(P>0.05),但高于10%的实验组测得的OD值明显低于对照组,对SCAP的增殖有明显的抑制作用,差异有显著性(P<0.05)。到第7d和9d时,各实验组测得的OD值明显低于对照组,表现出明显抑制SCAP的增殖,差异具有显著性(P<0.05)。结论:1、本实验成功分离和鉴定了人SCAP,并证实其拥有干细胞的表型特点和体外多向分化的能力,能够作为生物组织工程领域内研究生物性牙根再生的种子细胞,为牙髓血管再生术提供了细胞来源。2、CH对人SCAP增殖的影响表现为抑制作用,随着时间延长以及浓度的增高其抑制作用增强。

关键词：人根尖牙乳头干细胞氢氧化钙培养鉴定增殖

三种镍钛机动根管扩锉器械对根管玷污层及根尖封闭能力的比较研究

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三种镍钛机动根管扩锉器械对根管玷污层及根尖封闭能力的比较研究

作者：白佳立泸州医学院

学位级别：硕士

目的:牙髓病和根尖周炎是口腔常见疾病之一,危害人类口腔健康。引起牙髓炎和根尖周病的原因很多,其中细菌感染是导致牙髓病和根尖周病的主要因素。当病变发展到牙髓、根尖时,采用有效完善的根管治疗是治疗牙髓炎和根尖周疾病的首选方法... 详细信息

目的:牙髓病和根尖周炎是口腔常见疾病之一,危害人类口腔健康。引起牙髓炎和根尖周病的原因很多,其中细菌感染是导致牙髓病和根尖周病的主要因素。当病变发展到牙髓、根尖时,采用有效完善的根管治疗是治疗牙髓炎和根尖周疾病的首选方法。其中根管预备(root canal preparation)的作用是彻底清除根管内炎症牙髓和坏死组织,扩大成型根管并对根管进行适当的消毒,为严密充填根管提供基础。现代口腔医学认为根管预备是在彻底清除根管内感染的同时将根管预备为一个连续锥度的漏斗状态是根管充填,这是决定根管治疗成败的关键因素之一。任何根管预备器械在预备的过程中均会在根管内侧壁产生根管壁碎屑及牙本质玷污层,这些根管壁碎屑及牙本质玷污层紧紧附着于根管内壁,在根管预备的过程中被根管预备器械推挤至根尖孔区部分或完全堵塞根尖孔区,造成了根尖1/3充填不严密或根尖孔区完全未充填,造成根尖区域的二次感染,影响根管充填的密闭性从而增加了根管感染的概率。这些因素影响根管充填材料和根管壁密合的因素,可能会由于引起根尖充填不密合而导致根尖微渗漏的出现,从而影响充填效果。本实验通过研究三种镍钛机动扩锉器械在根管治疗过程中根管预备效果,比较三种扩锉器械的根管预备能力和根尖封闭能力,从而得知不同的扩锉器械对根管壁和牙本质玷污层的清理程度,这是比较根管根管扩锉器械在根管预备中根管清洁程度和根尖微渗漏的程度的关键从而推断出三种根管扩锉器械的工作效率的差异和最佳适应情况,从而为选择根管预备器械及根管充填材料提供实验依据。方法:选取60颗因正畸原因拔除的上颌第一、二前磨牙,样本牙体均完整、无实质性病变并且根尖孔已完整形成且根尖区域无各种病损,根管弯曲弧度高于25°,编号,将其随机分为三组:即:P(Protaper)组,M(Mtwo)组和K(K3)组。三组均通过出产商推荐的根管预备方法预备根管。采用随机抽样的方法将每组牙齿样本分成两个小组,一小组用于三种机用镍钛扩锉器械根管清洁能力比较研究:将样本用慢速手机从牙颈部截断,保留每例样本的全牙根;继而,自牙根发育线处顺牙根弯曲的假想平面用慢速机头金刚砂磨头打磨一纵向窝沟,但并不与根管穿通;然后,使用骨锤及骨凿按照纵窝沟方向轻轻将全牙根一分为二;这样可避免由慢机切割的牙体碎屑产生,避免根管被人为污染。将样本固定于2.5%戊二醛磷酸处理液(pH7.3)中48小时;继而分别使用75%,85%,95%,100%乙醇梯度脱水,将样本放于真空干燥机中临界点干燥。通过扫描电镜观察离体牙不同根管器械预备后根管壁碎屑及牙本质玷污层的分布并通过评价标准评分。评分完成后利用Kruskal-Wallis检验方法进行检验。当统计结果在P0.05);而在根管中1/3及根尖1/3处,P组及M组无明显统计学差别;而K组对比这两组均存在统计学差异(P0.05)。结论:ProTaper,Mtwo,K3预备根管后,根管玷污层及根管冠1/3的清理效果无显著性差异,而对根管中1/3及尖1/3碎屑的清理效果,ProTaper、Mtwo优于K3。三组镍钛机动扩锉器械预备后,根尖封闭性无明显差异。

关键词：扫描电镜机动镍钛扩锉器械根管治疗根管预备根管清洁度根管微渗漏

BMP-2通过ERK信号通路对人成骨样细胞骨形成影响的研究

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BMP-2通过ERK信号通路对人成骨样细胞骨形成影响的研究

作者：刘欣鑫泸州医学院

学位级别：硕士

目的:探讨骨形态发生蛋白-2(bone morphogeneticproteins-2,BMP-2)通过细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinaseS,ERK)信号通路在对人成骨样细胞增殖、周期和分化等方面的影响。观察BMP-2是否通过ERK信号通路参与了对人成骨样细胞的生物学作用。为进一步研究骨形态发生蛋白-2(BMP-2)与细胞信号通路(ERK)之间在细胞生物学效应做铺垫。方法:对人成骨样细胞细胞株给予ERK信号通路阻断剂PD98059处理后,使用BMP-2对人成骨样细胞进行诱导。采用噻唑蓝比色法(MTT)使用外源性MTT将人成骨样细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜(Formazan)并沉积在细胞中,使用二甲基亚砜(DMSO)溶解细胞中的甲臜,用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值(OD值),来判断活细胞数量,以此对各组间的细胞增殖情况进行研究;使用流式细胞周期检测法,通过测定细胞中的DNA量,将细胞周期按照DNA的量分为G0/G1期、S期及G2/M期,并统计细胞周期各个时相所占比例和凋亡细胞百分比,从而分析其对细胞周期的影响。结果:本实验通过体外培养人成骨样细胞,使用BMP-2对人成骨样细胞进行诱导,分组实验中采用特异性阻断剂PD98059阻断ERK信号通路。MTT结果表明将ERK信号通路阻断后,BMP-2对人成骨样细胞的增殖作用明显降低;流式细胞周期检测显示BMP-2通过ERK信号通路参与了对人成骨样细胞周期的调控。结论:将ERK信号通路的阻断后,BMP-2促进人成骨样细胞增殖的作用明显减弱且参与BMP-2通过ERK信号通路参与了对人成骨样细胞周期的调控;BMP-2通过ERK信号通路对人成骨样细胞增殖及细胞周期调控发挥作用。

关键词： ERK信号通路骨形态发生蛋白-2 增殖周期

HtrA对乳牙变异链球菌生长调控的初步研究

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HtrA对乳牙变异链球菌生长调控的初步研究

作者：黄萍泸州医学院

学位级别：硕士

目的:对比研究乳牙变异链球菌HtrA缺陷株与HtrA高毒力株在非应激和应激环境下生长情况的差异,初步探讨HtrA对乳牙变异链球菌生长能力的调控作用,获得有关HtrA对儿童变异链球菌致龋性的调控作用的实验证据。方法:1.实验对象为前期筛选并... 详细信息

目的:对比研究乳牙变异链球菌HtrA缺陷株与HtrA高毒力株在非应激和应激环境下生长情况的差异,初步探讨HtrA对乳牙变异链球菌生长能力的调控作用,获得有关HtrA对儿童变异链球菌致龋性的调控作用的实验证据。方法:1.实验对象为前期筛选并鉴定的乳牙变异链球菌HtrA高毒力株和构建的乳牙变异链球菌HtrA缺陷株,对菌株进行复苏鉴定后采用比浊法测量乳牙变异链球菌HtrA高毒力株和HtrA缺陷株分别在非应激及应激环境下(酸性、高渗、氧化应激)培养1.5h、3h、4h、6h、8h、10h、12h、24h的OD600值并绘制生长曲线。***法测量两菌株在非应激和应激环境下(酸性、高渗、氧化应激)下稳定期(t=12h)的OD510,比较乳牙变链菌HtrA缺陷株与HtrA高毒力株稳定期活菌生长情况。结果:1.乳牙变异链球菌HtrA高毒力株与HtrA缺陷株两菌株所形成的菌落、革兰氏染色镜检及细菌生化鉴定发现均符合变异链球菌标准生物学性状相符合。2.在非应激环境下,两菌株的生长趋势基本一致,0-1.5h及1.5h-3.0h内两菌株生长平缓为迟缓期;3-6h生长快速为对数时间;6-8h菌株生长开始变缓,10h基本均进入稳定期。不同菌株的生长OD600有差异(P0.05)。4.在非应激、酸性、氧化环境下,乳牙变链菌HtrA缺陷株稳定期的活菌数OD510均低于乳牙变链菌HtrA高毒力株稳定期的活菌数OD510;而在高渗环境下,两菌株稳定期的活菌数OD510无差异。(P>0.05)。结论:HtrA基因可在一定程度上影响乳牙变异链球菌非应激环境以及应激环境(酸性应激和氧化应激)下的细菌生长能力,但是对乳牙变异链球菌高渗应激的生长能力影响不大。

关键词： HtrA基因乳牙变异链球菌非应激环境应激环境生长曲线生长能力

黄芩苷对人根尖牙乳头干细胞增殖及成骨分化的影响

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黄芩苷对人根尖牙乳头干细胞增殖及成骨分化的影响

作者：蔡雪西南医科大学

学位级别：硕士

目的:临床上牙根尚未发育形成的年轻恒牙发生牙髓坏死和根尖周炎为常见多发性疾病之一,由于年轻恒牙的牙根未完全闭合,若不及时治疗将导致患牙的牙根吸收、松动,甚至脱落。目前常用治疗手段多为根尖诱导术和根尖屏障术,但该治疗会导致... 详细信息

目的:临床上牙根尚未发育形成的年轻恒牙发生牙髓坏死和根尖周炎为常见多发性疾病之一,由于年轻恒牙的牙根未完全闭合,若不及时治疗将导致患牙的牙根吸收、松动,甚至脱落。目前常用治疗手段多为根尖诱导术和根尖屏障术,但该治疗会导致牙根发育不足、冠根比例不协调等问题。近几年来,有学者研究表明人根尖乳头干细胞(Stem cells from apical papilla,SCAP)在根部牙本质的形成以及牙根硬组织的再生发育过程中发挥重要作用,是修复根尖组织缺损的理想种子细胞。同时黄芩苷(Baicalin)也被证实是一类具有良好的消炎抑菌及促进细胞增殖和成骨分化作用的中药。因此,本研究旨在通过分析中药黄芩苷对人根尖乳头干细胞生物学特性的影响入手,初步探讨了不同浓度的黄芩苷药物联合人根尖乳头干细胞治疗年轻恒牙牙髓坏死和根尖周炎等疾病的可行性。方法:1、运用酶消化法从人牙根未发育完全的根尖牙乳头组织分离出SCAP,采用单克隆法获得纯化的SCAP,传代后获得稳定生长状态旺盛的细胞。应用流式细胞仪检测生长活力良好的第三代SCAP表面抗原STRO-1、CD146、CD90、CD45的表达量。经体外诱导分化SCAP14天、21天,利用碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)染色、茜素红染色、油红O染色,以证实获取细胞是否具备多向分化的潜能。2、选取第三代生长活力旺盛的SCAP,传代后计数接种于96孔板,隔天更换0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L不同黄芩苷浓度的DMEM完全培养基培养,运用MTT法检测第1、3、5、7、9天不同药物浓度的黄芩苷对SCAP增殖的影响。3、选取第三代生长活力旺盛的SCAP,分为普通培养基组(DMEM)和成骨诱导培养基组(ODM),根据黄芩苷的不同浓度将实验组分为5个浓度实验亚组,依次为0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、50μmol/L、100μmol/L,运用ALP染色法和ALP定量检测法研究不同药物浓度的黄芩苷对SCAP培养7天、14天早期成骨分化的影响;采用茜素红染色法和定量探究不同浓度黄芩苷对SCAP培养21天后成骨矿化的影响。结果:1、分离下来的根尖乳头组织块在培养瓶内培养5天后,倒置显微镜下可见细胞从组织块边缘游离爬出,同时观察到获取细胞呈长梭形;流式细胞仪检测得到所分离培养出的SCAP表达STRO-1、CD90和CD146,比率分别是14.73%,65.45%和61.63%,表达CD45比率为0.19%,呈阴性;SCAP在成骨诱导液体外诱导分化14天,ALP染色见细胞呈蓝紫色,SCAP在体外诱导分化21天时,茜素红染色见红色矿化结节形成;SCAP在成脂诱导液体外诱导21天后,油红-O染色见细胞胞浆呈红色脂滴形成。2、MTT检测结果显示,对照组和实验组中的各浓度细胞在第1天测得的OD值无明显差异(p>0.05);自第3天起,黄芩苷药物浓度为50μmol/L、100μmol/L的实验组测得OD值均显著低于对照组(p>0.05),表明含50μmol/L、100μmol/L黄芩苷药物浓度抑制SCAP的增殖活性;到第7天,黄芩苷药物浓度为20μmol/L的实验组与对照组比较,所测得OD值显著高于对照组(p<0.05),表明20μmol/L的黄芩苷浓度组对SCAP的增殖起促进作用。3、ALP定量结果显示,ODM组诱导分化第14天时,20μmol/L浓度组的ALP活性明显高于对照组(p<0.05),100μmol/L浓度组的ALP活性明显低于对照组(p<0.05);DMEM组诱导14天后,20μmol/L浓度组的ALP活性明显高于对照组(p<0.05);4、茜素红定量显示,ODM组中100μmol/L实验组的OD值明显低于对照组(p<0.05)。结论:1、本实验通过改良酶消化法成功分离人根尖乳头干细胞,并通过单克隆法、流式细胞术及体外诱导成骨、成脂验证SCAP具有多向分化的潜能。2、高浓度组的黄芩苷药物对SCAP的增殖表现抑制作用,低浓度组的黄芩苷药物对SCAP的增殖表现促进作用,其中以20μmol/L黄芩苷浓度组最为明显。3、20μmol/L黄芩苷药物浓度组可促进SCAP早期成骨分化,100μmol/L黄芩苷浓度组对S C A P的早、晚期成骨分化均为抑制作用。

关键词：人根尖乳头干细胞黄芩苷增殖成骨分化