检索结果-南通市图书馆

作者：王丽平郑州大学

学位级别：硕士

目的:近年来,我国前列腺癌发病率有明显增加的趋势,积极开展有关国人前列腺癌发生、发展的分子机制及干预防治研究具有重要意义。目前,前列腺癌的治疗主要是粒子植入等局部治疗和手术、放疗、化疗等局限性前列腺癌根治性治疗,并且根据... 详细信息

目的:近年来,我国前列腺癌发病率有明显增加的趋势,积极开展有关国人前列腺癌发生、发展的分子机制及干预防治研究具有重要意义。目前,前列腺癌的治疗主要是粒子植入等局部治疗和手术、放疗、化疗等局限性前列腺癌根治性治疗,并且根据癌症的分期和患者的状态采取不同的综合治疗方法。由于前列腺癌的异质性,患者能选择的治疗方案十分有限,这就要求我们对前列腺癌的分子特征做进一步的研究,来明确药物的作用靶点,并且寻求天然植物药物来减少患者治疗中的毒副作用。叶黄素作为一种天然植物化学物进入了人们的视线。它广泛存在于含有较多叶绿素的植物体中,是类胡萝卜素的一种。目前已发现叶黄素具有抗氧化,增强机体免疫功能,预防和减少癌症发生和发展等多种生物学功能。本课题以人前列腺癌PC3细胞为研究对象,旨在探究叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的作用机制,为前列腺癌预防及治疗提供新的理论依据。方法:1.采用CCK-8法检测叶黄素对PC3细胞活力的影响;2.倒置显微镜下观察叶黄素药物处理后,PC3细胞形态的变化情况;3.细胞划痕实验观察叶黄素对PC3细胞迁移的影响;***实验检测叶黄素对PC3细胞侵袭的影响;5.运用流式细胞术检测叶黄素对PC3细胞周期分布的影响;6.运用流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测叶黄素对PC3细胞凋亡的影响;7.采用RT-PCR技术检测叶黄素处理的PC3细胞内Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的水平变化;8.采用Western blot技术检测叶黄素处理的PC3细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达情况;结果:***8法结果显示,不同浓度(20,40,80,120,160μg/ml)叶黄素作用PC3细胞24 h,48 h,72 h后,叶黄素显著抑制PC3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。2.细胞形态学观察结果显示随着叶黄素浓度的增加,24 h后细胞形态发生显著变化,有明显凋亡的趋势。3.划痕实验结果表明,叶黄素组与对照组比较均可抑制PC3细胞的迁移,并且具有剂量依赖性,160μg/ml组有非常显著性差异(P﹤0.01)。***实验显示,叶黄素组细胞穿过聚碳酸酯膜的数量少于对照组,并且具有剂量依赖性,160μg/ml组有非常显著性差异(P﹤0.01)。5.流式细胞术结果表明,不同浓度叶黄素作用于PC3细胞48 h后,可以将细胞生长周期阻滞在G0/G1期。6.流式细胞术结果表明,叶黄素作用于PC3细胞48 h后,随着浓度提高,细胞凋亡率明显增高,当浓度为120μg/ml时,凋亡率最高可达36.1%。***-PCR实验结果显示,叶黄素可在转录水平上下调Bcl-2 mRNA的水平和上调Bax mRNA的水平,并且呈剂量依赖性。*** blot实验结果显示,叶黄素可以使抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,促凋亡蛋白Bax表达上升,并且呈剂量依赖性。结论:叶黄素能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖并促进其凋亡,其发挥抗肿瘤作用的机制可能与阻滞细胞周期,抑制细胞迁移侵袭,调节凋亡相关蛋白表达和影响基因水平有关。

关键词：叶黄素前列腺癌增殖凋亡 Bax Bcl-2

双歧杆菌对应激大鼠肠道菌群及促肾上腺皮质激素释放激素的影响

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双歧杆菌对应激大鼠肠道菌群及促肾上腺皮质激素释放激素的影响

作者：冀建伟郑州大学

学位级别：硕士

研究背景和目的益生菌是人类肠道的原籍菌,在维持宿主胃肠正常生理功能中发挥重要作用。Zairian M等研究证实益生菌能够提高应激大鼠肠道屏障功能、阻断细菌移位。在种类繁多的益生菌中,双歧杆菌作为人类肠道最早出现的益生菌极具研究... 详细信息

研究背景和目的益生菌是人类肠道的原籍菌,在维持宿主胃肠正常生理功能中发挥重要作用。Zairian M等研究证实益生菌能够提高应激大鼠肠道屏障功能、阻断细菌移位。在种类繁多的益生菌中,双歧杆菌作为人类肠道最早出现的益生菌极具研究价值。它不仅能够调节肠道菌群失调,而且能够显著改善肠易激综合症(IBS)和炎症性肠病(IBD)患者的相关症状。益生菌所独有的生物学特点和肠道黏膜免疫反应的特异性,使肠道益生菌疗法作为治疗胃肠道疾病的一种新疗法,日益受到重视。思密达(蒙脱石散)是一种粘膜屏障剂,临床上常用来治疗腹泻。尽管大量的数据显示益生菌能够调节肠道免疫、阻断病原菌粘附提高粘膜屏障功能,但其在应激所导致的胃肠道疾病中的治疗作用研究较少。目前尚未见到长双歧杆菌对应激大鼠肠道功能的调节作用的报道。在本实验中我们拟以避水试验模拟环境和心理压力,观察在应激条件下大鼠肠道生理生化指标的变化,通过长双歧杆菌、思密达进行干预,观察二者对应激条件下大鼠肠道功能的调节作用,以及二者有无协同治疗作用,从而为临床诊断和治疗提供实验依据。方法雌性清洁级SD大鼠50只随机分为5组：正常对照组、压力试验组、双歧杆菌干预组、思密达干预组、双歧杆菌+思密达共同干预组。采用WAS (water avoidance stress)避水试验构建大鼠应激模型,应激试验为7d。1.应激试验结束后,以三糖为探针,留取大鼠24h尿液,衍生化毛细管气相色谱法(CCGC)测定大鼠尿液中两种糖的浓度,以三氯蔗糖/甘露醇(S/M)评价大鼠肠道通透性;2.取大鼠新鲜粪便,用选择性培养基平皿计数法检测大鼠粪便菌群中几种代表性菌种的数量;3.取肠系膜淋巴结(MLN)培养后测定细菌移位率;4.通过从屈氏韧带下至回盲部全部小肠的病理切片,观察肠粘膜的损伤情况;5.用酶联免疫法(ELISA)测定大鼠血清中促肾上腺皮质激素释放激素(CRF)和促肾上腺皮质激素(ACTH)的含量。结果1.与正常对照组相比,压力试验组大鼠粪便中以大肠杆菌为代表的条件致病菌数量增多(7.078±0.229 vs 7.347±0.277,P<0.05),24h尿液中甘露醇量升高(4.718%±0.399% vs 5.097%±0.453%,P<0.05),MLN细菌移位率升高(10%vs 40%,P<0.05);血清CRF (267.0±32.3 vs 300.8±34.3, pg·mL-1, P<0.05), ACTH浓度升高(5.68±0.799 vs 6.79±0.651, pg·mL-1, P<0.05)。2.与压力试验组相比,双歧杆菌干预组表现为大肠杆菌数量显著下降(7.347±0.277 vs 7.044±0.281,P<0.05),类杆菌数量显著下降(9.485±0.306 vs9.075±0.393,P<0.05),MLN细菌移位率下降(40% vs 10%,P<0.05),ACTH水平下降(6.79±0.651 vs 5.92±0.477, pg·mL-1,P<0.05);思密达组大肠杆菌数量显著下降(7.347±0.277 vs 7.054±0.302,P<0.05),MLN细菌移位率显著下降(40% vs 20%,P<0.05)。3.长双歧杆菌与思密达共同干预后,与长双歧杆菌、思密达单独干预组相比在肠道菌群及血清CRF的调节上无显著差异。结论1.在慢性应激条件下,大鼠肠道出现了以条件致病菌增多为特征的肠道菌群紊乱,MLN细菌移位率升高,肠道通透性升高,血清CRF升高,说明大鼠肠道屏障功能受损,神经内分泌处于应激状态。2.长双歧杆菌和思密达干预后,条件致病菌数量显著下降,血清CRF或ACTH均有显著下降,MLN细菌移位率显著下降,说明长双歧杆菌与思密达均能够部分缓解慢性应激所导致的肠道功能紊乱。3.长双歧杆菌和思密达二者在治疗应激所导致的肠道功能紊乱中无协同作用。4. CCGC测定应激大鼠肠道通透性,方法专属性高,灵敏度高,降低了实验成本。

关键词：益生菌应激肠道通透性 CRF 肠道菌群

叶黄素经由p38MAPK途径诱导人结肠癌HT29细胞抗氧化酶高表达的机制研究

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叶黄素经由p38MAPK途径诱导人结肠癌HT29细胞抗氧化酶高表达的机...

作者：吴凤秀郑州大学

学位级别：硕士

目的:结肠癌是一种较为常见的消化道恶性肿瘤,目前在我国的发病率已经位于各大肿瘤发生率的第四位,消化道肿瘤发生率的第三位。其发病极其隐蔽,相当多的患者在确诊时已经是中晚期。但是,目前针对结肠癌治疗的手段十分单一,主要依靠手术... 详细信息

目的:结肠癌是一种较为常见的消化道恶性肿瘤,目前在我国的发病率已经位于各大肿瘤发生率的第四位,消化道肿瘤发生率的第三位。其发病极其隐蔽,相当多的患者在确诊时已经是中晚期。但是,目前针对结肠癌治疗的手段十分单一,主要依靠手术切除治疗,再以放化疗药物辅助治疗。而治疗结果并不十分理想,行结肠切除术后5年患者存活率仅有50%,并伴极高的转移和复发风险。各种放化疗药物的多次使用不仅给患者的心理造成了极大的痛苦,也给机体带来了不可修复的永久性损伤。因此,寻找天然有效的植物源化合物,用于药物预防和治疗结肠癌,减小放、化疗的不良反应,辅助提高患者生存率,具有十分重要的理论和现实意义。叶黄素,一种天然植物黄体素,作为一种抗氧化的植物化合物,可以帮助机体猝灭单线态氧,清除活性氧自由基,阻止其对生物膜的侵害,延缓机体衰老,并且能够对抗氧化应激、炎症和血管生成,对包括皮肤癌、胃癌、前列腺癌、食管癌和乳腺癌等多种癌症均有抑制作用,对肿瘤的预防具有重要实用意义。本实验旨在探究叶黄素通过调节人结肠癌HT29细胞抗氧化酶的高表达抑制肿瘤发生发展的作用机制,为结肠癌的预防及治疗提供新的理论依据。方法:***-8法检测并绘制HT29细胞连续8 d生长曲线;2.不同剂量叶黄素对HT29细胞增殖抑制作用的影响。采用CCK-8法检测终浓度分别为40、80、120、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞24、48、72 h后细胞的增殖情况;3.不同剂量叶黄素对HT29细胞周期的影响。流式细胞仪检测终浓度分别为40、80、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞48 h后细胞周期的变化情况;4.不同剂量叶黄素对HT29细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的影响。终浓度分别为40、80、120、160 mg·L-1的叶黄素作用于HT29细胞48 h后,分别采用RT-q PCR技术和Western blot技术检测细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化情况;5.抑制p38MAPK通路探究叶黄素对HT29细胞中Nrf2/ARE通路下游HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化。p38MAPK抑制剂SB203580作用于HT29细胞1 h,加入叶黄素48 h后,分别采用RT-q PCR技术和Western blot技术检测细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的变化情况。结果:***-8法检测结果表明:叶黄素显著抑制HT29细胞的增殖,并存在时间-效应和剂量-效应关系(P<0.01)。2.流式细胞仪检测结果表明:不同剂量叶黄素处理HT29细胞48 h后,HT29细胞周期受到明显阻滞,处于G0/G1期的细胞数量显著增加,S期比例显著下调,表明叶黄素可以将细胞生长阻断在G0/G1期。***-q PCR技术和Western blot技术检测结果显示:不同剂量叶黄素处理HT29细胞48 h后,细胞中抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比显著上调,且具有剂量-效应关系(P<0.05),说明叶黄素可以同时在m RNA转录水平和蛋白表达水平上调HO-1、NQO1、SOD2基因的表达。***-q PCR技术和Western blot技术检测结果显示:叶黄素联合p38MAPK抑制剂SB203580作用HT29细胞48 h后,SB203580加叶黄素组HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平较单独叶黄素组明显下调(P<0.05),表明抑制剂SB203580显著抑制叶黄素对细胞中HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白表达水平的上调作用。结论:叶黄素对HT29细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能是通过阻滞HT29细胞周期,并作用于p38MAPK通路,在基因转录水平和蛋白表达水平介导Nrf2/ARE通路并激活其下游抗氧化酶HO-1、NQO1、SOD2 m RNA和蛋白的高表达,介以对抗肿瘤细胞内的氧化应激状态,抑制肿瘤的发生发展。

关键词：叶黄素结肠癌细胞增殖抗氧化酶 p38

叶黄素基于Nrf-2/ARE信号途径对人结肠癌HT29细胞增殖抑制作用的研究

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叶黄素基于Nrf-2/ARE信号途径对人结肠癌HT29细胞增殖抑制作用的...

作者：刘志方郑州大学

学位级别：硕士

目的:结肠癌是常见的一种威胁人类健康和生命的消化系统恶性肿瘤,具有比较高的发病率和死亡率。目前全世界新增的结肠癌患者超过百万人,其死亡率在各种恶性肿瘤中排名第三位。结肠癌的发病是多种因素共同作用的结果,并且发病速度快、隐... 详细信息

目的:结肠癌是常见的一种威胁人类健康和生命的消化系统恶性肿瘤,具有比较高的发病率和死亡率。目前全世界新增的结肠癌患者超过百万人,其死亡率在各种恶性肿瘤中排名第三位。结肠癌的发病是多种因素共同作用的结果,并且发病速度快、隐匿性高,患者的生存周期非常短。结肠癌已经成为严重威胁病人生命的一种恶性肿瘤。目前关于结肠癌的治疗手段十分单一,主要是切除、化疗和放疗,且效果十分不理想,病人的复发率高。化学疗法常常使用5FU、丝裂霉素和甲环亚硝脲,但是临床效果尚不十分理想。故进一步地寻求有效的能够干预阻断人结肠癌发生和发展的天然植物药物具有重要的理论及实用意义。叶黄素(Lutein)是一类广泛存在于各种瓜果蔬菜中的含氧类胡萝卜素,是一种天然的抗氧化的植物化学物。叶黄素具有防治视网膜病变、色素变性、保护视力、延缓动脉硬化以及抗肿瘤等许多的生理功能。本实验室早期的实验研究已经证明了达到一定的浓度之后的叶黄素可明显抑制肝癌细胞、胃癌细胞、乳腺癌细胞以及食管癌细胞的增殖。本实验宗旨在于研究探索叶黄素对人结肠癌HT29细胞增殖的抑制作用以及探索其可能存在的分子作用机制。方法:本次实验采用CCK8方法检测绘制人结肠癌HT29细胞连续8 d的生长曲线;在培养HT29细胞的96孔培养板中加入不同浓度的叶黄素,然后分别培养24 h,48 h,72 h后,采用CCK8法检测不同浓度的叶黄素对人结肠癌HT29细胞的抑制增殖作用的影响;倒置显微镜下观察并拍照记录叶黄素对人结肠癌HT29细胞在形态学上的影响;应用流式细胞仪检测叶黄素对人结肠癌HT29细胞周期分布的影响;用不同浓度的叶黄素作用于人结肠癌HT29细胞48 h后,采用RT-PCR技术检测人结肠癌HT29细胞中Nrf-2和HO-1的m RNA的表达水平的变化情况;采用Western blot技术检测人结肠癌HT29细胞内Nrf-2和HO-1的蛋白的表达水平的变化情况。结果:CCK8法检测的最终结果显示,叶黄素能够显著地抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,并且存在着时间依赖性和剂量依赖性(P<0.01)。80 mg·L-1的叶黄素作用人结肠癌HT29细胞24、48、72 h后,抑制率分别为24.92%、45.11%、53.68%。当用160 mg·L-1的叶黄素作用人结肠癌HT29细胞24、48、72 h后,抑制率分别为30.91%、58.51%、78.09%。利用流式细胞仪检测人结肠癌HT29细胞周期的结果表明:不同浓度的叶黄素处理人结肠癌HT29细胞48h后,人结肠癌HT29细胞的细胞周期发生明显阻滞,G0/G1期的细胞数量显著增加,这说明叶黄素可以阻滞人结肠癌HT29细胞生长在G0/G1期。采用RT-PCR技术检测后的结果显示,人结肠癌HT29细胞经过不同浓度的叶黄素处理后,细胞中的Nrf-2和HO-1的m RNA的表达水平随着叶黄素的浓度的增加明显上调,且具有剂量依赖性(P<0.01),说明叶黄素可以诱导Nrf-2和HO-1基因的m RNA的转录表达。采用Western blot技术检测的结果显示,不同浓度的叶黄素作用于人结肠癌HT29细胞48h后,细胞中的Nrf-2和HO-1的蛋白的表达水平与未经叶黄素处理的对照组相比明显上调,且具有剂量依赖性(P<0.01)。结论:叶黄素能够有效的显著的抑制人结肠癌HT29细胞的增殖,其可能存在的分子作用机制与阻滞细胞周期,上调Nrf-2/ARE信号途径中Nrf-2和HO-1的m RNA的表达水平,上调Nrf-2和HO-1的蛋白表达水平有关。

关键词：叶黄素结肠癌细胞增殖 Nrf-2 HO-1

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SN油田回注水达标技术研究

SN油田回注水达标技术研究

作者：赵红梅中国石油大学（北京）

学位级别：硕士

由于油田滚动开发,使得污水的水量与水质变化较大,导致了建站时筛选的水处理药剂的针对性与工艺设计的适应性变差,造成了处理后的水质油含量、悬浮物、细菌等多项指标不达标,难以满足油田注水的需要。为解决SN油田注入水质不达标的问题... 详细信息

由于油田滚动开发,使得污水的水量与水质变化较大,导致了建站时筛选的水处理药剂的针对性与工艺设计的适应性变差,造成了处理后的水质油含量、悬浮物、细菌等多项指标不达标,难以满足油田注水的需要。为解决SN油田注入水质不达标的问题,对它的采出水水质状况与工艺现状进行了全面的调查分析,并在现有的“离子调整旋流反应技术”的基础上,筛选评价出适合SN油田采出水处理的新型水处理药剂,进行了电解盐杀菌试验研究,以及对整个工艺进行了优化,为实现污水处理回注从出站到井口全面达标奠定基础。研究成果如下:(1)SN油田污水水质矿化度在560-6100mg/L之间;Mg含量低,Ca与HCO含量中等;采出水处理系统垢样主要成分是碳酸钙。采出水处理工艺存在接收罐、反应罐、斜板沉降罐和过滤器的处理能力不足、药剂管理与加药设施不能实现按需加药、污泥浓缩设施沉降时间不足以及已建自控仪表可靠性降低等问题。(2)选择的新型水处理药剂投加方案为:助沉剂(KL-5)100mg/L,净水剂(KW-03)100mg/L,助凝剂(KW-01)2.0mg/L,缓蚀剂为(KL-0308)80mg/L,阻垢剂(KL-502)30mg/L。净化后污水悬浮物和含油均低于10mg/L,阻垢率能够达到90%以上,失钙率降至1%以下。电解盐杀菌与污泥脱水试验方案为:电解杀菌装置的有效氯投加量为50mg/L。(3)对SN油田污水处理系统的工艺进行了优化。

关键词：油田污水水处理药剂沉降装置

叶黄素对人胃癌及乳腺癌细胞增殖抑制作用及机制研究

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叶黄素对人胃癌及乳腺癌细胞增殖抑制作用及机制研究

作者：刘蕾郑州大学

学位级别：硕士

背景和目的目前,天然植物化学物的生物学效应研究已成为功能食品行业和医药领域研究的热门,人们试图从各种植物中寻找生物活性物质,来缓解并解决各种疾病问题。叶黄素是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果及某些藻类生物中的类胡萝卜素,具... 详细信息

背景和目的目前,天然植物化学物的生物学效应研究已成为功能食品行业和医药领域研究的热门,人们试图从各种植物中寻找生物活性物质,来缓解并解决各种疾病问题。叶黄素是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果及某些藻类生物中的类胡萝卜素,具有毒性小、来源广等优点。随着人们对叶黄素物理化学性质和生物活性研究的深入,叶黄素已越来越引起医药研究者的重视。国外大量的流行病学证据表明,叶黄素在预防视黄斑退化、阻断肿瘤、心血管疾病的发生与发展和增强机体免疫力等方面都有着广泛的生物学活性。但对人胃癌及乳腺癌细胞的生长抑制作用的系统研究尚未见报道。本实验旨在研究叶黄素对胃癌细胞SGC-7901及乳腺癌细胞MCF-7增值抑制作用并初步探讨其作用机制。方法叶黄素对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用研究:用MTT法检测不同浓度叶黄素对人胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制作用;倒置显微镜观察药物作用后SGC-7901细胞形态学的改变;采用流式细胞仪检测SGC-7901细胞的凋亡及其细胞周期的阻滞情况;采用紫外分光光度法检测SGC-7901 caspase-3活性。叶黄素对人胃癌细胞MCF-7增殖的抑制作用:台盼蓝染色法检测叶黄素对MCF-7增殖的影响;倒置显微镜观察药物作用后MCF-7细胞形态学的改变:彗星试验检测叶黄素作用后MCF-7细胞DNA损伤情况;细胞凋亡DNA-ladder法检测叶黄素诱导MCF-7细胞凋亡;紫外分光光度法检测MCF-7 caspase-3活性。结果MTT检测结果显示,叶黄素处理SGC-7901,能够抑制细胞的增殖,并呈现一定的剂量和时间依赖性,其中80、60mg/L叶黄素作用96h后细胞增殖率分别下降至62.73±4.12%和53.61±1.98%。细胞形态观察结果显示,叶黄素组与DMSO对照组比较SGC-7901细胞密度下降,部分细胞体积缩小,胞浆胞核浓缩,多数细胞变性,随时间的增长,细胞毒性改变越明显。流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,叶黄素诱导SGC-7901细胞凋亡随作用时间的延长而增强,160mg/L叶黄素作用于SGC-7901细胞48h后,早期凋亡率为16.95%,凋亡率为8.72%:作用72h后,早期凋亡率为4.93%,凋亡率增至36.90%。从细胞周期各时相分布来看,经叶黄素作用SGC-7901后,G/G期细胞比例明显减少,而S期细胞比例明显增多,G/M期细胞分布比例变化不明显。紫外分光光度法检测caspase-3活性,叶黄素能够提高SGC-7901 caspase-3活性,18h时达到峰值,48h后仍高于对应的对照组细胞。台盼蓝据染试验结果显示,叶黄素能够抑制MCF-7增殖,其抑制作用呈一定的时间和剂量依赖性。细胞形态观察结果同SGC-7901。叶黄素作用48h后单细胞电泳显示,叶黄素组细胞呈现彗星状电泳图,说明叶黄素可造成MCF-7 DNA损伤。细胞凋亡DNA-ladder结果显示,叶黄素作用MCF-730h后,提取DNA电泳,呈现梯状条带,说明叶黄素可诱导MCF-7凋亡。紫外分光光度法检测caspase-3活性,显示叶黄素可提高MCF-7凋亡蛋白caspase-3活性,诱导细胞凋亡。结论叶黄素可以抑制胃癌细胞SGC-7901增殖,其机制可能为提高caspase-3活性,阻止细胞周期于S期,诱导细胞凋亡而发挥作用;叶黄素可以抑制乳腺癌细胞MCF-7增殖,其机制可能为,损伤DNA,提高caspase-3活性,诱导细胞凋亡。

关键词：叶黄素 SGC-7901 MCF-7 生长抑制细胞凋亡

白桦脂酸衍生物的合成及体外抗肿瘤活性的初步探究

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白桦脂酸衍生物的合成及体外抗肿瘤活性的初步探究

作者：叶淑柯郑州大学

学位级别：硕士

目的:癌症是现阶段在全球范围内发病率和死亡率都处于较高水平的一类疾病,它的发生和发展严重危害着人类的生命健康。据报道,在全球范围内每年至少有一千万以上的人身患癌症,其发病率和死亡率也在呈逐年上升的趋势。目前临床上治疗癌症... 详细信息

目的:癌症是现阶段在全球范围内发病率和死亡率都处于较高水平的一类疾病,它的发生和发展严重危害着人类的生命健康。据报道,在全球范围内每年至少有一千万以上的人身患癌症,其发病率和死亡率也在呈逐年上升的趋势。目前临床上治疗癌症的主要方法还是通过化疗、放疗等,铂类、烷化剂和抗代谢类化学药物在治疗癌症的同时,也会给机体的正常细胞带来严重且不可逆的伤害,严重影响了癌症的治疗效果,也给患者带来很大的痛苦。因此,研发新型的、有效的且选择性良好的抗肿瘤药物,降低药物的毒副作用,对于临床癌症患者的治疗是刻不容缓的。白桦脂酸是一种存在于自然界多种植物中的五环三萜酸,具有十分广泛的生物学活性,如抗炎、抗疟疾、抗HIV等,近年来,大量的实验研究表明白桦脂酸在抗肿瘤方面也具有良好的药理活性。但是由于其水溶性较差,生物利用度不高,且在治疗癌症时对机体的正常细胞也有所伤害,选择性较差,治疗效果不是特别理想,因此,我们尝试在白桦脂酸的结构基础上进行改造得到新的白桦脂酸衍生物,有望提高其水溶性和生物利用度,降低毒副作用,为临床开发新的抗肿瘤药物提供实验依据。本研究设计并合成白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2,体外检测两个化合物的抗肿瘤活性,对其抗肿瘤作用机制做初步探讨。方法:1.白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2的设计与合成2.采用MTT法检测化合物zx-1和zx-2对多种癌细胞的抑制作用,设置对照组和空白组。3.在倒置显微镜下观察经化合物zx-1和zx-2作用后,非小细胞肺癌A549细胞的生长状态和形态发生的变化,并拍照。4.通过细胞划痕实验检测化合物zx-1和zx-2对A549细胞迁移的影响,在显微镜下观察,取样并拍照。5.运用流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测经化合物zx-1和zx-2作用后,A549细胞凋亡率的变化,用流式细胞仪检测细胞凋亡率。6.运用流式细胞术(PI单染法)检测经化合物zx-1和zx-2作用后,A549细胞周期分布的发生的改变,用流式细胞仪检测细胞的周期分布。*** blot方法检测化合物zx-2作用后的A549细胞中的P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3几种蛋白表达的影响。结果:1.合成并得到编号为zx-1和zx-2的白桦脂酸核苷衍生物。***法检测结果表明,不同浓度的化合物zx-1和zx-2分别作用于非小细胞肺癌(A549)细胞、胃腺癌(SGC-7901)细胞、肝癌(LUC-7721)细胞、乳腺癌(MCF-7)细胞48 h后,对细胞均产生不同程度的抑制作用,其抑制作用具有明显的剂量依赖性。3.通过显微镜下的细胞形态学观察可发现,化合物zx-1和zx-2作用于A549细胞24 h后,细胞的形态发生明显的变化,主要表现为细胞体积变小变圆,边缘模糊化,细胞质发生皱缩,呈现明显的凋亡趋势。4.通过细胞划痕实验,在显微镜下观察可发现,化合物zx-1和zx-2作用后的A549细胞与对照组相比,划痕面积明显增大,细胞向划痕区域迁移的能力显著降低,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05)说明两化合物均可抑制A549细胞的迁移。5.流式细胞术检测结果显示,在化合物zx-1和zx-2作用于48 h后,A549细胞的凋亡率均出现明显的提高,且随着浓度提高,细胞的凋亡率也随之增加,呈现明显的剂量依赖性。由检测结果也可知道,同等浓度条件下,化合物zx-2诱导A549细胞凋亡的作用比zx-1显著。6.流式细胞术检测结果显示,在化合物zx-1和zx-2作用于48h后,A549细胞的细胞周期分布发生了明显的变化,化合物zx-1作用于A549细胞后,可将细胞分裂阻滞于G0/G1期;经化合物zx-2处理后,A549细胞的细胞分裂被阻滞于将S期,且其作用均呈现出明显的剂量依赖性。*** blot实验结果表明,化合物zx-2作用于A549细胞48 h后,细胞内P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3几种蛋白的表达均发生了变化。与对照组相比较,zx-2可以促进Bax和Caspase-3蛋白的表达,同时下调Bcl-2和P53蛋白的表达,并且均呈现剂量依赖性。结论:白桦脂酸衍生物zx-1和zx-2能够抑制多种肿瘤细胞的生长和增殖,能够诱导非小细胞肺癌A549细胞凋亡坏死,调节细胞周期,抑制细胞的迁移,化合物zx-2能够促进Bax和Caspase-3蛋白的表达,下调Bcl-2和P53蛋白的表达,这些可能与化合物zx-1和zx-2发挥抗肿瘤作用的机制有关。

关键词：白桦脂酸衍生物非小细胞肺癌A549细胞细胞周期凋亡 Western blot

新型地塞米松纳米药物的构建及抗骨关节炎作用初步研究

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新型地塞米松纳米药物的构建及抗骨关节炎作用初步研究

作者：李鑫鑫郑州大学

学位级别：硕士

目的:骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种常见的致残性高的慢性炎症。巨噬细胞是单核巨噬细胞系统的主要组成部分,在免疫系统的炎症和宿主防御中起着核心作用。巨噬细胞极化在关节炎症微环境中起关键作用,是OA治疗的治疗靶点。在此研究... 详细信息

目的:骨关节炎(Osteoarthritis,OA)是一种常见的致残性高的慢性炎症。巨噬细胞是单核巨噬细胞系统的主要组成部分,在免疫系统的炎症和宿主防御中起着核心作用。巨噬细胞极化在关节炎症微环境中起关键作用,是OA治疗的治疗靶点。在此研究中,我们构建了一种自组装的硼酸稳定的活性氧响应性地塞米松纳米颗粒,通过调节巨噬细胞复极化来治疗骨关节炎,也为其他炎症治疗提供依据。方法:通过有机溶剂介导自组装的方法制备纳米药物DEX@PPNP;动态光散射仪(DLS)检测纳米药物DEX@PPNP的粒径、透射电镜(TEM)检测其外貌、磷酸盐缓冲溶液以及超纯水中检测稳定性;分析型高效液相色谱(HPLC)检测DEX@PPNPP中DEX的包封率和载药率、不同微环境中检测DEX@PPNP的药物释放;不同浓度HO溶液检测DEX@PPNP的ROS响应性。培养RAW 264.7细胞(小鼠巨噬细胞),进行细胞毒性实验,NO试剂盒检测DEX@PPNP的NO的清除作用;流式细胞仪和光学显微镜检测DEX@PPNP清除ROS能力;共聚焦显微镜(CLSM)拍摄免疫荧光检测IL-6、IL-10水平;q RT-PCR检测DEX@PPNP处理或未处理LPS激活的RAW 264.7细胞中M1型巨噬细胞标志物CD80和M2型标志物Arg-1的m RNA的表达水平。构建MIA(碘乙酸钠)关节炎模型,连续检测36天内的体重、关节周长、关节指数和运动学评分;分别在第6、26、36天以Ga-NOTA-RRGD2(Ga-RGD)为探针进行Micro-PET影像学检测;第36天进行Micro-CT检测小鼠骨关节变化;H&E和番红O染色被用以评价其治疗作用及安全性;ELISA检测相关炎性因子IL-6、TNF-α、IL-10水平。结果:通过有机溶剂介导的自组装的方法制备了DEX@PPNP;DLS测得DEX@PPNP的平均粒径190 nm,Zeta电位为-20.3±0.665 m V,TEM发现其具有类似“饭团”的外貌,具有很好的稳定性,48小时内粒径未发生明显变化,DEX@PPNP中DEX的载药率和包封率分别为11.2%和12.9%;体外模拟关节炎微环境,DEX@PPNP在8小时内能释放约85%的DEX显著多于正常关节环境中的释放量;在不同浓度HO溶液中DEX@PPNP粒径逐渐增大,表现出良好的ROS响应性;体外细胞实验中,DEX@PPNP对未刺激的巨噬细胞几乎无毒性作用;并在同等浓度下DEX@PPNP能显著清除LPS刺激后巨噬细胞分泌的NO(p<0.001);并且DEX@PPNP还表现出优良的ROS清除能力;同时,给予DEX@PPNP后细胞内的IL-6荧光信号明显减少,而IL-10的荧光信号显著增加;q RT-PCR检测DEX@PPNP处理后激活的RAW264.7细胞中M1型巨噬细胞标志物CD80 m RNA表达水平显著降低、M2型标志物Arg-1的m RNA的表达水平明显升高。这提示DEX@PPNP处理后激活后的RAW 264.7巨噬细胞成功由M1型复极到M2型。体内实验中,36天的连续治疗内,DEX@PPNP组小鼠体重无明显变化,并且关节周长和各项指数评分趋于正常。Micro-PET显像结果也显示DEX@PPNP处理的小鼠在第26天和36天的OA关节Ga-RGD摄取连续下降,36天时摄取达0.88%ID/g远低于OA组的1.4%ID/g(p<0.001)。Micro-CT结果显示DEX@PPNP组的骨密度以及骨小梁数量与正常组相似。关节部位H&E染色以及番红O染色显示DEX@PPNP组关节面完整、骨破坏明显减少。ELISA测定结果显示经DEX@PPNP处理后IL-6、TNF-α水平明显低于模型组(p<0.001)。相反,经治疗后IL-10水平明显升高(p<0.001)。同时DEX@PPNP各脏器H&E染色未显示出毒性。这说明DEX@PPNP在体内能通过有效的使M1型巨噬细胞复极从而发挥安全有效的关节炎治疗作用。结论:本文成功制备了一种新型纳米材料DEX@PPNP,此材料具有良好的ROS响应性以及清除ROS的能力,同时还能有效地使M1型巨噬细胞复极化在体内、外产生抗炎作用,为氧化应激相关炎症提供新的策略。

关键词：多酚纳米粒巨噬细胞骨关节炎 ROS响应性纳米药物

多粘菌素E单用和联合用药对鲍曼不动杆菌和大肠杆菌的体内外抗菌活性研究

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多粘菌素E单用和联合用药对鲍曼不动杆菌和大肠杆菌的体内外抗菌...

作者：王亚乐郑州大学

学位级别：硕士

目的:根据当前革兰氏阴性菌的耐药现状以及有限的治疗药物选择,探讨临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和生物膜形成能力,系统评价多粘菌素E单用和联合用药对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性,并初步建立小鼠上行性尿路感染(urinary tract infecti... 详细信息

目的:根据当前革兰氏阴性菌的耐药现状以及有限的治疗药物选择,探讨临床分离鲍曼不动杆菌的耐药性和生物膜形成能力,系统评价多粘菌素E单用和联合用药对鲍曼不动杆菌的体外抗菌活性,并初步建立小鼠上行性尿路感染(urinary tract infection,UTI)模型以评估多粘菌素 E 甲磺酸钠(colistimethate sodium,CMS)静脉给药的体内抗菌作用。方法:(1)根据微量肉汤稀释法测定多粘菌素E、舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南的MICs,并使用水晶球软件进行蒙特卡洛模拟分析,计算CMS在特定给药方案下对某一特定MIC值的达标概率(probability of target attainment,PTA)。(2)采用聚合酶链反应检测碳青霉烯类耐药基因blaoxA-23;棋盘法和时间杀菌实验用于评估由多粘菌素E、舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南两两结合组成的七个药物组合的体外协同抗菌活性;半定量结晶紫染色法用于评估鲍曼不动杆菌的生物膜形成能力以及抗菌药物组合对生物膜的抑制作用;采用红细胞裂解实验检测最佳抗菌药物组合的细胞毒性。(3)采用微量肉汤稀释法测定多粘菌素E对尿路致病性大肠杆菌(urinary tract pathogenic Escherichia coli,UPEC)的药物敏感性,通过单纯膀胱内注射UPEC菌悬液的方法初步建立上行性尿路感染模型,并根据细菌负荷量的测定和组织病理学检查结果评估CMS静脉内给药对抗UTI的功效。结果:(1)在106株鲍曼不动杆菌中,共有104株(98.1%)对多粘菌素E敏感,对舒巴坦、美罗培南、亚胺培南和多尼培南的耐药率分别达到了 81.2%、79.3%、77.4%和79.3%;蒙特卡洛模拟结果显示,当MIC90%);当MIC≥1μg/ml时,即使最大的给药剂量(300 mg CBA/day)也不能取得满意的效果。(2)测试的25株鲍曼不动杆菌均携带碳青霉烯酶耐药基因blaoxA-23;多粘菌素E与多尼培南组合在棋盘实验中对60%(15/25)的菌株显示出协同作用,具有最高的协同作用率,且没有表现出拮抗作用和细胞毒性;在时间杀灭实验中,多粘菌素E单药治疗在体外对敏感菌株表现出快速的杀菌作用,但随后出现再生长现象,基于多粘菌素E的组合能够抑制或减缓细菌的再生长;生物膜抑制实验结果显示84%的鲍曼不动杆菌能够形成生物膜,且基于多粘菌素E的抗菌药物组合对生物膜表现出最强的抑制作用。(3)体内研究结果表明静脉内施用CMS不仅能够减少小鼠尿液、膀胱和肾脏组织匀浆中的细菌浓度,而且能够降低感染组织的炎症程度并保持其结构的完整性。结论:体外高敏感性以及体内显著的抗菌活性表明CMS静脉给药将是治疗由多药耐药革兰氏阴性菌引起的尿路感染的一种有效策略,同时更加深入的体外研究数据支持多粘菌素E和多尼培南组合用于多重耐药革兰氏阴性菌引起的严重感染,尤其当多粘菌素E的MIC≥1 μg/ml时。

关键词：多粘菌素E 抗菌活性尿路感染多药耐药革兰氏阴性菌

桑橙异黄酮对肿瘤细胞增殖抑制作用的实验研究

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桑橙异黄酮对肿瘤细胞增殖抑制作用的实验研究

作者：黄领领郑州大学

学位级别：硕士

目的:异黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一类化合物,许多异黄酮类化合物己被实验证实具有一定的抗肿瘤和预防肿瘤的活性,而且安全低毒。大量的研究表明,诱导癌细胞凋亡是黄酮类化合物抗肿瘤的机理之一。本实验将通过体外研究从细胞增... 详细信息

目的:异黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一类化合物,许多异黄酮类化合物己被实验证实具有一定的抗肿瘤和预防肿瘤的活性,而且安全低毒。大量的研究表明,诱导癌细胞凋亡是黄酮类化合物抗肿瘤的机理之一。本实验将通过体外研究从细胞增殖抑制方面探讨从桑橙(Osage Orange)中分离得到的桑橙异黄酮异黄酮Pomiferin(结构见图1)对MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞增殖抑制的影响,并从中筛选出药物的最佳浓度,然后进一步研究Pomiferin对肿瘤细胞周期、细胞凋亡、凋亡抑制因子和促凋亡因子等几个方面的影响。期望为Pomiferin在肿瘤防治方面的作用提供新的线索和途径。方法:四甲基偶氮唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测不同浓度的Pomiferin(1.5 mg/L,3 mg/L,6 mg/L,12 mg/L,24mg/L)对MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞的增殖抑制作用,筛选出Pomiferin抑制肿瘤细胞增殖的最佳浓度;流式细胞仪检测Pomiferin对细胞周期的影响以及诱导细胞凋亡的结果;RT-PCR法检测Pomiferin作用肿瘤细胞后Survivin、Bax和bcl-2三个与凋亡相关的基因在mRNA表达的情况;免疫细胞化学法检测Pomiferin作用后凋亡抑制因子Survivin蛋白表达强度的改变。结果:Pomiferin对MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞均存在抑制作用,Pomiferin抑制肿瘤细胞增长的最佳有效浓度范围为6～12mg/L;细胞周期检测显示10mg/L的Pomiferin作用24h,48h后将MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞周期阻滞在G/M期;凋亡检测显示10mg/L Pomiferin作用于MCF-7乳腺癌24h后,细胞早期凋亡率为25.14%,晚期凋亡率为24.12%,10mg/L Pomiferin作用于SKOV-3卵巢癌24h后,细胞早期凋亡率为38.12%,晚期凋亡率为46.78%;RT-PCR检测细胞凋亡抑制因子和促凋亡因子的mRNA表达,结果显示10mg/L Pomiferin作用于MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞后,Bax的mRNA水平表达没有发生明显变化,而bcl-2和Survivin在mRNA水平的表达明显降低,且Bax/Bcl-2比值显著下降;免疫细胞化学法检测显示,10mg/L Pomiferin作用细胞后Survivin蛋白的表达减弱。结论:Pomiferin可明显抑制MCF-7乳腺癌和SKOV-3卵巢癌细胞的增殖;并将其细胞周期阻滞在G/M期,Pomiferin作用后两种细胞均出现明显的早期凋亡和晚期凋亡;Pomiferin能明显下调Survivin mRNA的表达,且使Bax/Bcl-2比值显著下降;Pomiferin能显著下调凋亡抑制因子Survivin蛋白的表达。Pomiferin可能的作用机制为通过将肿瘤细胞周期阻滞于G/M期,诱导凋亡抑制因子的下调来实现对肿瘤细胞的增殖抑制。

关键词：桑橙异黄酮细胞周期细胞凋亡凋亡基因